Name: Gavaging Adult Zebrafisch (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-08-11T14:00:00.000+00:00
Duration: 3 min 9 s
Description: Lernen Sie die orale Gavage bei adulten Zebrafischen für präzise Lösungsverabreichung. Diese Methode ermöglicht Studien zu oral-fäkal übertragenen Krankheitserregern mit hoher Genauigkeit.

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Die Rockefeller University Vergleichende Bioscience Center geliefert Unterstützung für dieses Projekt. Wir danken Janelle Monnas für technische Unterstützung.

1. Vorbereiten des Betäubungsmittel-Lösung <ol><li> Bereiten Sie eine Lösung von 150 mg / L von MS-222 in System Wasser entweder aus einer Stammlösung oder aus der Pulverform. </li><li> Überprüfen Sie den pH-Wert mit einem pH-Meter. </li><li> Puffer mit Natriumbicarbonat wie nötig, bis der pH-Wert zwischen 7-7,5. </li><li> Bereiten Sie einen Behälter des Systems Wasser frei von MS-222 für die Fische zu erholen in. die Recovery-Zeit ist in der Regel weniger als 1 min. </li></ol> 2. Vorbereiten des Gavage Vorrichtung <ol><li> Schneiden Sie die klaren 22-G Implantation Schlauch an ein wenig mehr als ungefähre Länge von der Mündung bis zur Darm-Glühlampe der Fische. Zunächst empfehlen wir anesthetizing einen Fisch für jede neue Gruppe genutzt, um die bestmögliche Schätzung der Länge brauchte. </li><li> Stecken Sie das abgeschnittene klare Implantation Schlauch auf der ½-Zoll 22-G-Nadel bis es sicher ist und es besteht keine Gefahr des Abnehmens. Wenn ein 22 ½-C Nadel nicht verfügbar ist, schneiden eine längere Nadel Approximately dass Länge. </li><li> Wenn Sie fertig sind, sollte der Katheter-Implantation Schlauch etwa 1 cm von der Spitze der Nadel, oder kürzer, wenn die Fische kleiner sind verlängern. </li><li> Bringen Sie die 22-G-Nadel-Hub zu einem 1-cc luerlok Spritze. </li></ol> 3. Vorbereitung für Gavage <ol><li> Schneiden Sie eine Nut in einem Schwamm mit einem Skalpell. </li><li> Genießen Sie den Schwamm in Wasser-System frei von MS-222. </li><li> Setzen Sie den angefeuchteten Schwamm auf einer ebenen Fläche. </li><li> Erarbeiten die geeigneten 5 ul Lösung für eine Magensonde in den 22-G-Katheter-Schlauch und einer 1-ml-Spritze. </li></ol> 4. Anästhesie und Gavage <ol><li> Schnell die Fische mindestens 24 Stunden vor dem Eingriff. </li><li> Den Fisch in der MS-222-Lösung, bis es seine Aufrichtungsreflexes verliert und nicht zu einer Schwanzflosse Prise reagieren, sondern unterhält opercular Bewegung. Dies dauert in der Regel ca. 2-3 min. </li><li> Entfernen Sie den Fisch aus der Narkose Lösung und legen Sie sie indie Nut in der Schwamm mit dem Kopf ein wenig vor dem Schwamm, aber die Kiemen der Schwamm bedeckt. </li><li> Bewegen Sie den Schwamm in eine vertikale Position. </li><li> Öffnen Sie den Zebrafisch Mund mit der 22-G-Katheter-Schlauch. </li><li> Schieben Sie den Schlauch, bis die Spitze ist an den Kiemen (ca. 1 cm oder die Länge der Schläuche). Die Implantation Schläuche sollten nicht gezwungen werden. Widerstand schlägt die Röhre kann das Drücken der Kiemenbogens oder Herz. </li><li> Wenn es Widerstand gibt, vorsichtig zurückziehen, neu und versuchen Sie es erneut. </li><li> Injizieren Sie das Material langsam. </li><li> Während Injektion, stellen Sie sicher, dass die Lösung nicht über die Kiemen oder den Mund verlassen. </li><li> Entfernen Sie den Fisch aus dem Schwamm und Ort in den Schmutzwassertank. </li><li> Wiederherstellung tritt typischerweise in weniger als 1 min und wird durch die Fische schwimmen aufrecht und Erhalt des Gleichgewichts angegeben. </li><li> Überwachen Sie Fisch für Aufstoßen durch Visualisierung der Fisch aktiv vertreiben m gezeigtaterial aus seinem Mund, oder ohne opercular Bewegung. </li><li> Fische können wieder zu ihrem regulären Tank zurückgegeben werden, sobald sie sich erholt haben. </li></ol>

<ol><li>Royes, J. -A. B., Chapman, F. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRoyes%2C+J-AB+%22Preparing+Your+Own+Fish+Feeds%22">Preparing Your Own Fish Feeds</a>. , Department of Fisheries and Aquatic Sciences, Florida Cooperative Extension Service, Insitute of Food and Agricultural Sciences, University of Florida. (2009).</li>
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</ol>

Die Autoren erklären, dass sie keine finanziellen Interessen haben.

Bedeutung Diese Technik ist eine Verbesserung und bietet mehrere Vorteile gegenüber den beiden zuvor beschriebenen Techniken für gavaging erwachsenen Zebrafisch. Zunächst ermöglicht die Verwendung eines Schwamms, um die Fische zurückzuhalten einer Person, das Verfahren durchzuführen, wie in einem zuvor beschriebenen Technik, die zwei Personen gegenüber. 7 Zweitens ist Katheterimplantation Schlauch flexibler als Venenkatheter, die helfen können, minimiert die durch Trauma zu einer Per...

Aktuelle Methoden zur Verabreichung von Verbindungen oral Zebrafisch umfassen Verabreichung von Verbindungen top-Beschichtung auf Futtermittel, gemischt in Gelatine Diäten 1. bioencapsulated in Salzlösunggarnele 2, gemischt mit Lipid verkapselten Diäten 3, Wachs Spray Perlen 4 und über Gluten-basierte Ernährung. 5 Einschränkungen der diese Methoden der oralen Verabreichung umfassen hohe Auslaugraten und unvollständiger oder unvorhersehbare Verbindung Verbrauch für die einzelnen Fische. Diese Variablen sind problematisch, weil im Bereich der Infektionskrankheiten Studien, wohl wissend, die infektiöse Dosis verabreicht, um den Fisch kann entscheidend sein für das Studium Erfolg. Auch hat früheren Arbeiten gezeigt, dass bestimmte Verbindungen in Wasser Bäder verabreicht toxisch Läsion führen zu Kiemen, bevor die intestinale Wirkungen, die unter Studie sein kann auftreten Zebrafisch. 6 Gavage ist ein Standard-Verfahren in anderen Labor Tierarten verwendet werden, um präzise Mengen eines Produktes mit ak verwaltennown Konzentration für das Studium in der biomedizinischen und pharmazeutischen Forschung. Erst vor kurzem haben Methoden zur gavaging Zebrafisch wurde in der Literatur beschrieben. Eine Technik beschrieben ist ein Zwei-Personen-Verfahren unter Verwendung einer 24-G Katheterhülle an einem 2-20 ul Pipette bis 5 ul Lösung zu liefern. 7 Das beschriebene Verfahren hatte eine Sterblichkeitsrate von 8,7% und 39% auf dem ersten und zweiten Studie sind; die meisten der Sterblichkeit wurde trächtige Weibchen zugeschrieben. Die zweite Sonde beschriebene Technik verwendet stumpfen Sonde Spritzen bis 5 ul Lösung Medakas (Oryzias latipes). 8 Informationen zu Sterblichkeit wurde nicht zur Verfügung gestellt und den genauen Prozess der Durchführung der Magensonde wurde nicht beschrieben verwalten. Nach Angaben der kanadischen Rates über Animal Care und dem Labor Zebrafisch, bis zu 1% des Fisches Körpergewicht kann über eine Magensonde verabreicht werden. 9,10 Unser Ziel war es, eine reproduzierbare, sichere und effiziente Methode der Bereitstellung von genauen Volumina von com entwickelnPfund oral erwachsenen Zebrafisch von beiden Geschlechtern und in allen Phasen der Reproduktion. Dieses Verfahren anwendbar wäre für jede Studie, in der genaue oraler Gabe einer Verbindung erforderlich ist.

<table><tbody><tr><td colspan="4">Ausrüstung</td></tr><tr><td>A Schwamm</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1 cc Luer-Lock-Spritze</td><td>Becton Dickinson Co</td><td></td><td></td></tr><tr><td>22-G Micro-Renathane Implantationsschlauch (geschnitten)</td><td>Braintree Scientific, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1 22-G-Nadel (bei Bedarf schneiden)</td><td>Becton Dickinson Co</td><td></td><td></td></tr><tr><td>pH-Messgerät</td><td>Hanna-Sonde</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1 Skalpellklinge</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td colspan="4">[header]</td></tr><tr><td colspan="4">Reagenz/Material</td></tr><tr><td>MS-222 (Finquel)</td><td>Argent Laboratories</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

gavaging adult zebrafisch

Gavaging Adult Zebrafish

Der Zebrafisch ist zu einem wichtigen in vivo-Modell in der biomedizinischen Forschung. Effektive Methoden müssen entwickelt und verwendet werden, um Verbindungen oder Mittel in Lösungen für die wissenschaftliche Forschung zu liefern. Aktuelle Methoden zur Verabreichung von Verbindungen oral erwachsenen Zebrafisch sind ungenau wegen Variabilität in freiwilligen Verbrauch von den Fischen. Eine Magensonde Verfahren wurde entwickelt, um präzise Mengen von Infektionserregern zu liefern für das Studium in der biomedizinischen Forschung Zebrafisch. Adult Zebrafisch über 6 Monate alt waren betäubt mit 150 mg / l gepuffert MS-222 und eine Sonde mit 5 ul-Lösung mit flexiblen Katheter-Implantation Schlauch an einem Schnitt 22-G-Nadel Spitze. Der Schlauch wurde in die Mundhöhle des Zebrafisch abgesenkt, bis die Spitze des Schlauches verlängert an den Kiemen (etwa 1 cm). Die Lösung wurde anschließend langsam in den Darmtrakt injiziert. Diese Methode wirksam war 88% der Zeit, mit Fisch erholt ereignislos. DieseVerfahren ist auch effizient, wie eine Person 20-30 Fisch in einer Stunde eine Magensonde. Diese Methode kann verwendet werden, um genau zu verwalten Agenten für Infektionskrankheiten Untersuchungen oder aus Untersuchungen von anderen Verbindungen in erwachsenen Zebrafisch werden.

Beide Geschlechter von Fischen, darunter trächtige Weibchen wurden erfolgreich eine Sonde (Abbildung 1). Eine erfolgreiche Vorgang dauert weniger als eine Minute ohne Flüssigkeit gesehen Verlassen der Kiemen oder den Mund. Der Schlauch tritt leicht, ohne Gewalt, ohne Blut auf Katheterentfernung gesehen. Das Verfahren ist schnell, erfordert etwa 10 min auf 3 bis 4 Fisch Magensonde, mit einem Durchschnitt von 30-45 sec pro Fisch. Zebrafisch sollte nicht mit mehr als 5 ul jeder...

Die zunehmende Verwendung von Zebrafisch als Tiermodell erfordert die Entwicklung effektiver Methoden für die Lieferung von bekannten Mengen von Verbindungen und Lösungen. Die Magensonde unten beschriebene Verfahren ermöglicht die orale Verabreichung von genauen Volumina der Lösung zuverlässig, sicher und effizient zu erwachsenen Zebrafisch.

Gavaging Adult Zebrafisch

The zebrafish has become an important in vivo model in biomedical research. Effective methods must be developed and utilized to deliver compounds or ...

Das übergeordnete Ziel dieses Videos ist es, eine Technik zur Eingabe bei adulten Zebrabärblingen zu demonstrieren. Wir haben diese Technik entwickelt, um pathogene Organismen zu untersuchen, die über den orofazalen Weg übertragen werden. Sie kann verwendet werden, um eine exakte Menge an Lösung zu verabreichen.Zur Untersuchung erwachsener Zebrafische. Der gesamte Prozess umfasst vier Schritte. Der erste Schritt besteht darin, die Gavage-Avorrichtung vorzubereiten.Der zweite Schritt ist, den Fisch mit 150 Milligramm pro Liter gepuffertem MS 222 zu anästhesieren. Der dritte Schritt besteht darin, den Fisch mittels Magensonde mit Ihrer Lösung zu behandeln. Und der letzte Schritt ist die Wiederherstellung des Fisches und die Überwachung auf unerwünschte Wirkungen.Um die Gavage-Vorrichtung herzustellen, schneiden Sie den Implantationsschlauch mit 22 Gauge auf die geeignete Länge für den Fisch zu, befestigen Sie ihn an der 22-Gauge-Nadel und verbinden Sie ihn mit der 1-ml-Luer-Lock-Spritze. Wenn Ihre Lösung bereit ist, kann sie in die Vorrichtung aufgezogen werden. Zur Verabreichung an den Zebrafisch sollte ein Schwamm mit einer Klinge oder einer Schere eingeschnitten werden, sodass der Fisch beim Einlegen in den Schwamm sicher fixiert wird.Der Schwamm sollte vorab mit Systemwasser durchtränkt werden, um ihn feucht zu halten. Ein Rekonvaleszenzbecken, bestehend aus Systemwasser ohne Anästhetikum, sollte ebenfalls vorbereitet werden, um die Fische nach Abschluss des Eingriffs darin unterzubringen. Fasten Sie die Fische mindestens 24 Stunden vor dem Eingriff.Überführen Sie den Fisch mithilfe eines Netzes in den MS 22-Anästhesietank. Sobald der Fisch betäubt ist, was sich durch das Fehlen einer Reaktion auf einen Schwanzflossentest zeigt, nehmen Sie ihn aus der Anästhesielösung und legen ihn in den Schwamm, sodass der Kopf leicht aus dem Schwamm herausragt, die Kiemen jedoch bedeckt sind. Bringen Sie den Schwamm in eine vertikale Position und öffnen Sie mit dem Implantationsrohr 22 Gauge den Mund des Zebrabärblings.Führen Sie den Schlauch vorsichtig ein, bis die Spitze die Höhe des Herzens überschritten hat. Die Länge variiert je nach Größe des Fisches, und falls ein Widerstand spürbar ist, ziehen Sie den Schlauch leicht zurück, positionieren Sie ihn neu und versuchen Sie es erneut. Es sollte nicht notwendig sein, den Schlauch gewaltsam in den Darm des Zebrabarens vorzuschieben.Sobald sich die Sonde an der richtigen Position befindet, die Lösung injizieren und die Tubing entfernen. Den Fisch freisetzen, indem er vom Schwamm gelöst wird, und ihn in den Wiederherstellungstank geben. Bei korrekter Durchführung sollte sich die Tubing mühelos in den Darm des Zebrafisches schieben lassen.Es wird keine Lösung beobachtet, die über die Kiemen oder den Mund austritt. Am Ende des Schlauchs oder aus den Kiemen des Fisches wird kein Blut sichtbar sein. Das häufigste Problem ist die Flüssigkeitsaustritt über den Mund oder die Kiemen, was darauf hinweist, dass der Schlauch nicht tief genug in den Fisch eingeführt wurde.Dieses Verfahren weist eine Gesamterfolgsrate von 88 % auf. Bei korrekter Durchführung sollten nicht mehr als fünf µL Flüssigkeit verabreicht werden, da eine höhere Menge die Erfolgsrate des Verfahrens erheblich verringert. Als wir versuchten, 10 µL Lösung zu verabreichen, sank die Gesamterfolgsrate auf 50 %. In diesem Video haben wir gezeigt, wie man adulte Zebrafische gavieren kann. Dieses Verfahren kann verwendet werden, um genau definierte Mengen an Lösungen an Zebrafische zu verabreichen.Die Vorteile dieser Technik im Vergleich zu früher beschriebenen Techniken bestehen darin, dass sie flexibleres Material verwendet und schwangere Weibchen effektiver per Magensonde gefüttert werden können. Vielen Dank fürs Zuschauen und viel Erfolg bei Ihrer Arbeit.

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