Eine Vorgehensweise, um die Wirkung von Längerer Essen Beschränkung Heroin suche in abstinent Ratten untersucht

Ein Verfahren, das eine Demonstration von robusten Vergrößerung von Drogen sucht in Essen-Ratten ermöglicht beschränkt beschrieben. Nach Heroin Selbstverwaltung Ausbildung, Ratten gehen durch eine Zeit der Abstinenz, in einer drogenfreien Umgebung, in der sie leicht Nahrung beschränkt. Drogensucht wird dann in dem Medikament-assoziierten Umgebung getestet.

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, die Auswirkungen von Umweltmanipulationen zu untersuchen, wie z. B. chronische Nahrungseinschränkung auf den Rückfall in die Heroinsuche in Laborpackungen unter Entzugsbedingungen. Dies wird erreicht, indem zunächst ein intravenöser Katheter in die Halsvene der Ratte eingeführt wird, um nach einer Erholungsphase eine Selbstverabreichung von Heroin zu ermöglichen. Ratten werden darauf trainiert, sich Heroin über einen Zeitraum von 10 Tagen in operanten Konditionierungskammern selbst zu verabreichen.

Der nächste Schritt des Verfahrens ist die Abstinenzphase, in der Ratten in die Tierhaltung transportiert werden und einer Zeit lang nur eingeschränkten oder uneingeschränkten Zugang zu Futter haben. Schließlich werden die Ratten in die operanten Konditionierungskammern zurückgebracht, um sich einem Heroin-Suchtest zu unterziehen, bei dem die Reaktionen auf den heroinbeeinträchtigten Hebel zu einer Aktivierung eines Signals, Lichts und Tonus führen, wenn kein Heroin verabreicht wird. Letztendlich zeigen chronisch nahrungseingeschränkte Ratten mit einer Vorgeschichte von Heroin eine robuste Zunahme der Heroinsuche unter Entzugsbedingungen, was auf eine erneute Exposition gegenüber der Drogenkonsumumgebung und drogenassoziierten Hinweisen zurückzuführen ist.

Der Hauptvorteil dieser Technik gegenüber bestehenden Methoden, wie z.B. dem Wiedereinsetzungsverfahren, besteht darin, dass es keine explizite operante Extinktion gibt, die beim Menschen nicht beobachtet wird. Darüber hinaus ermöglicht die Verwendung von chronischen versus akuten Manipulationen eine größere Konstruktvalidität in Bezug auf den menschlichen Zustand. Diese Methode kann helfen, Schlüsselfragen im Bereich der Drogenabhängigkeit zu beantworten, wie z. B. die gemeinsamen neurologischen Mechanismen, die dem Verhalten bei der Drogen- und Nahrungssuche zugrunde liegen.

Katheter werden in loser Schüttung hergestellt und im Autoklaven sterilisiert, um sie über einen langen Zeitraum zu verwenden. Um einen Katheter zu konstruieren, schneidet man zunächst einen elastischen Schlauch in 12 Zentimeter lange Stücke. Verwenden Sie einen Zahnstocher oder eine 18-Gauge-Nadel, um einen kleinen Tropfen Silikon drei Zentimeter von der Spitze entfernt um den Katheter zu platzieren.

Lassen Sie das Silikon vor dem Autoklavieren 24 Stunden trocknen Biegen Sie den langen Schlauch der Five-up-Kanüle, der vor dem Autoklavieren als Verbindungsstück im rechten Winkel zum Kunststoffsockel dient. Um die Katheter am Tag der Operation zusammenzusetzen, schieben Sie die lange Seite des Scholastikschlauchs über das gebogene Metallrohr der Fünf-up-Kanüle etwa auf halbem Weg zum Kunststoffsockel. Verbinden Sie das Fünf-up-Rohr über einen Tigon-Schlauch und eine gemischte 22-Gauge-Nadel mit einer Ein-Milliliter-Spritze, die mit steriler Kochsalzlösung gefüllt ist.

Spülen Sie Kochsalzlösung durch den Katheter, um einen ungehinderten Fluss zu gewährleisten. Zu Beginn betäuben Sie das Tier vor der Rasur und reinigen Sie den Bereich an der rechten Schulter und am Kopf mit Alkohol und einem chirurgischen Peeling. Nach dem Auftragen des Gels auf die Augen, um ein Austrocknen zu verhindern, werden Penicillin und Kochsalzlösung injiziert, um vor Infektionen und Austrocknung zu schützen.

Verwenden Sie Standardtechniken, um die Vena jugularis externa freizulegen, sobald sie vom umgebenden Gewebe isoliert ist. Führen Sie eine gebogene Pinzette unter die Vene ein, um sie angehoben und leicht gedehnt zu halten. Machen Sie einen kleinen V-förmigen Schnitt an der Vene und halten Sie den Schnitt offen.

Mit einem Gefäßdilatator schieben Sie die drei Zentimeter kurze Spitze des Katheters in die Vene in Richtung Herz, bis sich der Silikontropfen an der Schnittstelle befindet. Binden Sie den Katheter mit drei Nähten an die Vene, eine davon so weit wie möglich verhätschelt. Einer gerade rostral zum Silikontropfen und der dritte so weit wie möglich rostral

Führen Sie Kochsalzlösung durch den Katheter, um sicherzustellen, dass sie verstopft bleibt und die Nähte nicht zu eng sind. Legen Sie dann die Ratte mit der Bauchseite nach unten. Schneiden Sie den Kopf ein und führen Sie ein Blutstillmittel ein, um die Haut vom darunter liegenden Gewebe zu trennen und eine subkutane Tasche zu schaffen.

Führen Sie das Blutstillbad unter der Haut zu der Öffnung an den Schultern, in die der Katheter eingeführt wurde. Brechen Sie das Bindegewebe durch und klemmen Sie den Katheter an der rostralsten Stelle unterhalb der Basis der fünf nach oben fest. Lösen Sie die fünf nach oben und fädeln Sie das lange Ende des Katheters unter die Haut und aus dem Schnitt oben am Kopf heraus.

Schneiden Sie den Katheter mit einer Schere unter der Stelle, an der der Hämostat festgeklemmt wurde, und befestigen Sie das lange Ende des Fünfers wieder nach oben. Ziehen Sie den Katheter entlang des Metallschafts des Fünfers bis zum Kunststoffsockel hindurch und führen Sie Kochsalzlösung durch, um einen freien Fluss zu gewährleisten. Nachdem Sie die Wunden mit Nähten verschlossen haben, legen Sie die Ratte in ein stereotaktisches Gerät.

Sobald der freiliegende Schädel sauber und trocken ist, bohren Sie mit einem manuellen Bohrer vier bis fünf Löcher in die Oberfläche. Setze dann Maschinenschrauben in die Löcher ein, die als Gerüst für die Kopfkappe dienen. Platzieren Sie den Five-Up-Konnektor zwischen den Schrauben und stecken Sie die überschüssige Länge des Katheters in die zuvor angefertigte Unterhauttasche.

Zum Schluss verwenden Sie Zahnzement, um die fünf bis zur Oberseite des Schädels zu befestigen. Nehmen Sie die Ratte aus dem stereotaktischen Apparat, nachdem der Zement vollständig getrocknet ist, und überwachen Sie, bis er sich vollständig erholt hat. Die Ratten werden einzeln in operanten Konditionierungskammern untergebracht.

Untergebracht in schalldämpfenden Räumen, die mit einem Lüfter ausgestattet sind. Zwei versenkbare Hebel sind neun Zentimeter über dem Boden der rechten Seitenwand angebracht, über jedem Hebel befindet sich ein Queuelicht. Über dem aktiven Hebel befindet sich ein Tonmodul und oben mittig an der linken Seitenwand befindet sich ein rotes Hauslicht.

Futter und Wasser gibt es im libitum. Die Medikamentenpumpe wird über einen Flüssigkeitswirbel und einen mit einer Metallfeder geschützten Tigon-Schlauch am Katheter befestigt. Die Selbstverabreichung von Heroin wird nach der Genesung von der Operation und einer 24-stündigen Gewöhnungsphase eingeleitet.

Spülen Sie den Katheter zunächst mit einer Heparin-Gentamycin-Lösung. Verbinden Sie als Nächstes den Five-Up-Stecker mit dem Tigon-Rohr und befestigen Sie die Metallfeder. Beginnen Sie jede Sitzung zu Beginn der Dunkelphase mit dem Ausfahren der aktiven und inaktiven Hebel sowie der Beleuchtung des Hauslichts und der Aktivierung des Q-Lichttonkomplexes.

30 Sekunden lang dürfen sich die Ratten 10 Tage lang in drei dreistündigen Sitzungen im Abstand von drei Stunden selbst Heroin verabreichen. Reaktionen auf den aktiven Hebel führen zur Aktivierung der Medikamentenpumpe und zum Beginn einer 22. Timeout-Periode, in der das Hauslicht ausgeschaltet und der Q-Lichttonkomplex über dem aktiven Hebel aktiviert wird. Inaktive Hebelreaktionen werden aufgezeichnet, haben aber keine programmierbaren Konsequenzen.

Nach dem Selbstverabreichungstraining nehmen Sie die Ratten aus den operanten Konditionierungskammern und bringen sie einzeln in der Tieranlage mit uneingeschränktem Zugang zu Futter und Wasser unter. Reduzieren Sie für einen Tag der Medikamentenauswaschung am nächsten Tag die Nahrungsmenge für die Gruppe mit eingeschränkter Nahrung, um die Abstinenzphase zu beginnen, während Sie den uneingeschränkten Zugang zu Nahrung in der gesättigten Gruppe beibehalten. Führen Sie den Drogensuchtest am Morgen der Abstinenz durch.

Tag 14: Bringen Sie die Ratten zurück in die operanten Konditionierungskammern und befestigen Sie sie an der Metallfeder. Erlauben Sie eine ein- oder dreistündige Sitzung, in der aktive und inaktive Hebelreaktionen die gleichen Konsequenzen wie beim Selbstverabreichungstraining haben, unter Ausschluss der Verfügbarkeit des Medikaments. Diese Ergebnisse zeigen, dass das Körpergewicht während des gesamten Heroins stabil bleibt.

Während der Abstinenz erhöhen Ratten mit uneingeschränktem Zugang zu Futter ihr Körpergewicht, während Ratten, die nur wenig Nahrung haben, ihr Körpergewicht um etwa 10 bis 15 % verringern. Wie hier zu sehen ist, nahmen die Infusionen und aktiven Hebelreaktionen während der Trainingstage zu, während die inaktiven Hebelreaktionen dies nicht taten. Nach der Abstinenzphase nahm die aktive Hebelreaktion bei den futterbeschränkten Ratten im Vergleich zu den gesättigten Ratten signifikant zu. Während die Reaktion des inaktiven Hebels minimal und zwischen den Gruppen vergleichbar ist, folgt dieses Verfahren.

Andere Methoden wie intrakranielle Injektionen, Mikrodialyse, Western Blotting und immunhistochemische Techniken können verwendet werden, um spezifische neurochemische und pharmakologische Systeme anzugreifen. Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein klares Verständnis davon haben, wie Sie einen intravenösen Katheter chirurgisch in die Halsvene der Ratte implantieren und wie Sie ein Heroin-Selbstverabreichungsverfahren in Standard-operanten Konditionierungskammern durchführen.