Name: Kultivierung und Pflege Clostridium difficile In einer anaeroben Umgebung (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-09-14T21:25:00.000+00:00
Duration: 11 min 13 s
Description: Lernen Sie die Isolierung, Kultivierung und Lagerung von Clostridium difficile in anaeroben Bedingungen. Diese Methoden ermöglichen die Gewinnung von Glycerin-Stämmen und Sporen für Forschungszwecke.

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Wir möchten Coy Laboratories für die freundliche Bereitstellung von Bildern der anaeroben Kammer danken. Diese Arbeit wurde vom National Institutes of Health Zuschuss DK087763 (SMM) und einem STEP / HHMI Lehrplanentwicklung Fellowship (ANE) unterstützt.

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<li>Doan, N., Contreras, A., Flynn, J., Morrison, J., Slots, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proficiencies+of+three+anaerobic+culture+systems+for+recovering+periodontal+pathogenic+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Proficiencies of three anaerobic culture systems for recovering periodontal pathogenic bacteria.</a> J. Clin. Microbiol. 37, 171-174 (1999).</li>
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<li>George, W. L., Sutter, V. L., Citron, D., Finegold, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+and+differential+medium+for+isolation+of+Clostridium+difficile%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Selective and differential medium for isolation of Clostridium difficile.</a> J. Clin. Microbiol. 9, 214-219 (1979).</li>
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<li>Bliss, D. Z., Johnson, S., Clabots, C. R., Savik, K., Gerding, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+cycloserine-cefoxitin-fructose+agar+%28CCFA%29+and+taurocholate-CCFA+for+recovery+of+Clostridium+difficile+during+surveillance+of+hospitalized+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Diagn.+Microbiol.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Comparison of cycloserine-cefoxitin-fructose agar (CCFA) and taurocholate-CCFA for recovery of Clostridium difficile during surveillance of hospitalized patients.</a> Diagn. Microbiol. Infect. Dis. 29, 1-4 (1997).</li>
<li>Marler, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+five+cultural+procedures+for+isolation+of+Clostridium+difficile+from+stools%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Comparison of five cultural procedures for isolation of Clostridium difficile from stools.</a> J. Clin. Microbiol. 30, 514-516 (1992).</li>
<li>Sorg, J. A., Dineen, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laboratory+maintenance+of+Clostridium+difficile%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Protoc.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Laboratory maintenance of Clostridium difficile.</a> Curr. Protoc. Microbiol. Chapter 9, Unit 9A 1(2009).</li>
<li>Bouillaut, L., McBride, S. M., Sorg, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+manipulation+of+Clostridium+difficile%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Protoc.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Genetic manipulation of Clostridium difficile.</a> Curr. Protoc. Microbiol. Chapter 9, Unit 9A 2(2011).</li>
<li>Lemee, L., Pons, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multilocus+sequence+typing+for+Clostridium+difficile%5BTitle%5D)+AND+%22Methods.+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Multilocus sequence typing for Clostridium difficile.</a> Methods. Mol. Biol. 646, 77-90 (2010).</li>
<li>Shanholtzer, C. J., Peterson, L. R., Olson, M. N., Gerding, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prospective+study+of+gram-stained+stool+smears+in+diagnosis+of+Clostridium+difficile+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Prospective study of gram-stained stool smears in diagnosis of Clostridium difficile colitis.</a> J. Clin. Microbiol. 17, 906-908 (1983).</li>
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<li>Putnam, E. E., Nock, A. M., Lawley, T. D., Shen, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SpoIVA+and+SipL+are+Clostridium+difficile+spore+morphogenetic+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">SpoIVA and SipL are Clostridium difficile spore morphogenetic proteins.</a> J. Bacteriol. , (2013).</li>
<li>Burns, D. A., Minton, N. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sporulation+studies+in+Clostridium+difficile%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Microbiol.+Methods%22%5BJournal%5D)">Sporulation studies in Clostridium difficile.</a> J. Microbiol. Methods. 87, 133-138 (2011).</li>
<li>Perez, J., Springthorpe, V. S., Sattar, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clospore%3A+a+liquid+medium+for+producing+high+titers+of+semi-purified+spores+of+Clostridium+difficile%5BTitle%5D)+AND+%22J.+AOAC+Int%22%5BJournal%5D)">Clospore: a liquid medium for producing high titers of semi-purified spores of Clostridium difficile.</a> J. AOAC Int. 94, 618-626 (2011).</li>
<li>Sorg, J. A., Sonenshein, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibiting+the+initiation+of+Clostridium+difficile+spore+germination+using+analogs+of+chenodeoxycholic+acid%2C+a+bile+acid%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">Inhibiting the initiation of Clostridium difficile spore germination using analogs of chenodeoxycholic acid, a bile acid.</a> J. Bacteriol. 192, 4983-4990 (2010).</li>
<li>O'Connor, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Construction+and+analysis+of+chromosomal+Clostridium+difficile+mutants%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Construction and analysis of chromosomal Clostridium difficile mutants.</a> Mol. Microbiol. 61, 1335-1351 (2006).</li>
<li>Buggy, B. P., Wilson, K. H., Fekety, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+methods+for+recovery+of+Clostridium+difficile+from+an+environmental+surface%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Comparison of methods for recovery of Clostridium difficile from an environmental surface.</a> J. Clin. Microbiol. 18, 348-352 (1983).</li>
<li>Koch, C. J., Kruuv, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+release+of+oxygen+from+polystyrene+Petri+dishes%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Radiol%22%5BJournal%5D)">The release of oxygen from polystyrene Petri dishes.</a> Br. J. Radiol. 45, 787-788 (1972).</li>
<li>Ethapa, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+factors+modulate+biofilm+formation+by+the+anaerobic+pathogen+Clostridium+difficile%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">Multiple factors modulate biofilm formation by the anaerobic pathogen Clostridium difficile.</a> J. Bacteriol. , (2012).</li>
<li>Speers, A. M., Cologgi, D. L., Reguera, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anaerobic+cell+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Protoc.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Anaerobic cell culture.</a> Curr. Protoc. Microbiol. Appendix 4, Appendix 4F(2009).</li>
<li>Lyras, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toxin+B+is+essential+for+virulence+of+Clostridium+difficile%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Toxin B is essential for virulence of Clostridium difficile.</a> Nature. 458, 1176-1179 (2009).</li>
</ol>

Keine Interessenskonflikte erklärt.

Die hier beschriebenen Methoden ermöglichen eine einfache und schnelle Wiederherstellung von C difficile aus einer Vielzahl von Stuhlproben, einschließlich Menschen, Mäuse und Hamster, sowie die Langzeitlagerung von C difficile Glycerin oder Sporen Aktien. C difficile kann eine schwierige Organismus zu kultivieren, aber sorgfältige Wartung einer anaeroben Umgebung und die Anwendung aseptischer Techniken können für robustes Wachstum und eine Verringerung der Verschmutzung bieten. <p class="...

Clostridium difficile ist ein gram-positives, sporenbildendes Bakterium, das ein obligat anaerobe und eine potenziell tödliche Magen-Darm-Erreger von Mensch und Tier ist. Ursprünglich im Jahre 1935 beschrieben, als Kommen Organismus in Stuhlproben von Neugeborenen 1, C. gefunden difficile wurde später gezeigt, dass der Erreger der Pseudomembrankolik mit Antibiotika-Behandlung 2 zugeordnet werden. C difficile-Infektionen (CDI) in der Regel durch Antibiotika-Behandlung, die in der Störung der normalen Darmflora führt, die Schaffung einer Nische für C voraus difficile zu gedeihen 2. C difficile als ruhende Sporen fäkal-oralen Weg übertragen und anschließend keimt innerhalb des Magen-Darm-Trakt, wodurch vegetativen Zellen fähig ist, mehrere Toxine und verursachen schwere Krankheit und Colitis 3. CDI sind oft resistent gegen herkömmliche Behandlungen und diese inInfektionen werden häufig wiederkehrende 4. Als Ergebnis sind CDI für bis zu 4,8 Milliarden Kosten im Gesundheitswesen in den USA 07.05 $ verantwortlich. C. difficile ist sehr empfindlich auf geringe Mengen an Sauerstoff in der Umgebung. Für C. difficile in der Umwelt verbleiben und effizient von Host zu Host übertragen werden kann, ist die Bildung einer metabolisch inaktiven Sporen kritischen 8. Da der Labor Wartung und Manipulation von C. difficile erfordert einen kontrollierten anaeroben Umgebung, diese Techniken erfordern den Einsatz einer anaeroben Kammer. Verwendung von anaeroben Kammern hat in erhöhte Gewinnung und Isolierung von obligaten Anaerobiern 9-11 geführt und hat eine Reihe von molekularen Techniken, um in einer anaeroben Atmosphäre durchgeführt werden dürfen. Zusätzlich zu C. difficile, die anaerobe Kammer Gebrauch und die Wartung hier beschriebenen geltenzu anderen obligat anaerobe Bakterien wie Clostridien anderen Spezies (zB C. perfringens), andere Magen-Darm-Arten (z. B. Bacteroides 12) und parodontalen Krankheitserreger (zB Peptostreptococcus Art 13).

<table><tbody><tr><td>Proteose Pepton Nr. 2</td><td>BD</td><td>212120</td><td></td></tr><tr><td>Na2HPO4</td><td>Fisher</td><td>S373</td><td></td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>Fisher</td><td>BP362</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Fisher</td><td>S27</td><td></td></tr><tr><td>MgSO4 (wasserfrei)</td><td>Fisher</td><td>M65</td><td></td></tr><tr><td>á'...-Fruktose</td><td>Fisher</td><td>L96</td><td></td></tr><tr><td>Natriumtaurocholat</td><td>Sigma</td><td>T4009</td><td></td></tr><tr><td>á'...-Cycloserin</td><td>Sigma</td><td>C6880</td><td></td></tr><tr><td>Cefoxitin</td><td>Fluka</td><td>C4786</td><td></td></tr><tr><td>Gehirn Herz Infusionsmedium</td><td>BD</td><td>237300</td><td></td></tr><tr><td>Proteose Pepton</td><td>BD</td><td>211684</td><td></td></tr><tr><td>(NH4)2SO4</td><td>Sigma</td><td>A5132</td><td></td></tr><tr><td>Tris-Base</td><td>Fisher</td><td>BP152</td><td></td></tr><tr><td>Agar</td><td>BD</td><td>214010</td><td></td></tr><tr><td>L-Cystein</td><td>Sigma</td><td>C7755</td><td></td></tr><tr><td>BactoPepton</td><td>BD</td><td>211684</td><td></td></tr><tr><td>Kolumbianisches Schafblut-Agar</td><td>Fisher</td><td>L21928</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Fisher</td><td>S27</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Fisher</td><td>P217</td><td></td></tr><tr><td>Glycerin</td><td>Fisher</td><td>BP2291</td><td></td></tr><tr><td>Sterile Impfösen</td><td>Fisher</td><td>22363596</td><td></td></tr><tr><td>Sterile Tupfer</td><td>Fisher</td><td>1495990</td><td></td></tr><tr><td>Coy Vinyl Anaerobe Kammer und Zubehör</td><td>Coy Laboratory Products, Inc</td><td>kundenspezifisch</td><td>Diese Artikel werden pro Laborbedarf</td></tr><tr> individuell bestellt<td colspan="4">Materials<</td></tr><tr>td colspan="4">TCCFA agar Proteose Pepton Nr. 2 (Difco) 40 g Na2HPO4 5 g KH2PO4 1 g NaCl 2 g MgSO4 (wasserfrei) 0,1 g Fruktose 6 g Agar 20 g Mit entionisiertem Wasser auf 1 L bringen und bei 121 μg autoklavieren; C für 20 min sterilisieren. Nach dem Autoklavieren zugeben: 10 ml 10% (w/v) Natriumtaurocholat, filtersterilisiert (in Wasser auflösen; Endkonzentration 0,1%) 25 ml 10 mg/ml á'...-Cycloserin, filtersterilisiert (in Wasser auflösen; Endkonzentration, 250 &mu; g/ml) 1,6 ml von 10 mg/ml Cefoxitin, filtriert sterilisiert (in Wasser auflösen; Endkonzentration, 16 &mu; g/ml) BHIS Medium Gehirn Herz Infusion 37 g Hefeextrakt 5 g Für Platten 15 g Agar zugeben. Mit entionisiertem Wasser auf 1 L bringen und bei 121 °C autoklavieren; C für 20 min zum Sterilisieren. Optional (nach dem Autoklavieren hinzufügen): 3 ml 10 % (w/v) L-Cystein (in Wasser auflösen; Endkonzentration 0,03 %) 10 ml 10 % (w/v) Natriumtaurocholat (in Wasser auflösen; Endkonzentration 0,1 %) SMC Sporulation Medium BactoPepton 90 g Protease Pepton 5 g (NH4)2SO4 1 g Tris-Base 1,5 g Agar 15 g Mit entionisiertem Wasser auf 1 L bringen und bei 121 μg autoklavieren; C für 20 min sterilisieren. Optional (nach dem Autoklavieren hinzufügen): 3 ml 10% (w/v) L-Cystein (in Wasser auflösen; Endkonzentration 0,03%) 70:30 Medium BactoPepton 63 g Protease Pepton 3,5 g Gehirn Herz Infusion 11,1 g Hefeextrakt 1,5 g (NH4)2SO4 0,7 g Tris-Basis 1,06 g Für Platten 15 g Agar hinzufügen. Mit entionisiertem Wasser auf 1 L bringen und bei 121 °C autoklavieren; C für 20 min sterilisieren. Nach dem Autoklavieren 3 ml 10 % (w/v) L-Cystein (Endkonzentration 0,03 %) hinzufügen. Blood agar Die Verwendung von vorgefertigten anaeroben Agarplatten aus Columbia-Schafsblut (Fisher Scientific, L21928)35 wird empfohlen. 1X Phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS) NaCl 8,01 g KCl 0,2 g Na2HPO4 1,44 g KH2PO4 0,27 g Mit entionisiertem Wasser auf 1 l bringen und den pH-Wert mit HCl auf 7,4 einstellen. Vor Gebrauch sterilisieren.</td></tr></tbody></table>

kultivierung und pflege<em&gt; clostridium difficile</em&gt; in einer anaeroben umgebung

Culturing and Maintaining Clostridium difficile in an Anaerobic Environment

Clostridium difficile ist ein Gram-positive, anaerobe, sporenbild Bakterium, das vor allem für Antibiotika-assoziierten Diarrhoe (AAD) verantwortlich ist und der eine bedeutende nosokomiale Erreger. C difficile ist notorisch schwierig zu isolieren und zu kultivieren und ist extrem empfindlich, auch geringe Mengen an Sauerstoff in der Umgebung. Hier sind Verfahren zur Isolierung von C. difficile aus Stuhlproben und anschließend Kultivierung C. difficile zur Herstellung von Glycerin-Stammlösungen für die Langzeitlagerung dargestellt. Techniken zur Herstellung und Auflisten Sporenvorräte im Labor für eine Vielzahl von Anwendungen, einschließlich Mikroskopie abwärts und Tierstudien werden ebenfalls beschrieben. Diese Techniken erfordern eine anaerobe Kammer, die eine konsistente anaerobe Umgebung zu angemessenen Bedingungen für eine optimale C gewährleisten hält difficile Wachstum. Wir stellen Protokolle zum Übertragen von Materialien in und aus der Kammer ohne Camit erheblichen Sauerstoffkontamination zusammen mit Vorschlägen für die regelmäßige Wartung erforderlich, um die entsprechenden anaeroben Umgebung für die effiziente und konsequente C aufrecht difficile Anbau.

Ein Beispiel C difficile auf BHIS und Columbia anaerobe Schafblut-Agar-Medien gezüchtet in Fig. 2 zu sehen ist. C. difficile bildet unregelmäßige Kolonien, die flach sind und einen Boden-Glas-Optik, die auf beiden Medien ist evident. Hier wird ein Erythromycin-sensitive klinischen Isolat von C. difficile, 630E 30 wird auf BHIS Agar, einer angereicherten, nicht-selektives Medium für 24 Stunden bei 37 ° C (2A) gewachsen. Kolonien auf Columbia anaerobe...

Clostridium difficile ist ein pathogenes Bakterium, das eine strikte Anaerobier ist und bewirkt, dass Antibiotika-assoziierten Diarrhoe (AAD). Hier, Methoden zur Isolierung, Kultivierung und Pflege von C. difficile vegetativen Zellen und Sporen werden beschrieben. Diese Techniken erfordern eine anaerobe Kammer, die regelmäßige Wartung erfordert, um den richtigen Bedingungen sorgen für optimale C. difficile Anbau.

Kultivierung und Pflege<em&gt; Clostridium difficile</em&gt; In einer anaeroben Umgebung

Clostridium  difficile is a Gram-positive, anaerobic, sporogenic bacterium  that is primarily responsible for antibiotic associated diarrhea (AAD) and is ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, C. difficile aus Stuhlproben zu isolieren, um C. difficile anzuzüchten, Glycerin-Stammlösungen für die Langzeitlagerung herzustellen und Sporenvorräte für eine Vielzahl nachgeschalteter Anwendungen vorzubereiten und zu quantifizieren. Dies wird erreicht, indem C. difficile zunächst durch Ausplattieren auf einem selektiven Medium aus Stuhlproben isoliert wird. Der zweite Schritt besteht darin, C. difficile in flüssigem Medium zu kultivieren und langfristig C. difficile-Stämme in Glycerin zu lagern.Anschließend wird C difficile aus gefrorenen Glycerinbeständen gewonnen und auf Agarplatten ausgestrichen. Im letzten Schritt werden C difficile-Sporenbestände hergestellt und abschließend anhand dieser Protokolle gezählt. C difficile kann auf verschiedenen Medien kultiviert werden, um seine Identität zu überprüfen und zu bestätigen, und lässt sich erfolgreich kultivieren und aufrechterhalten.Diese Glycerin-St&auml;mme und Kulturen k&ouml;nnen f&uuml;r zahlreiche nachgeschaltete Anwendungen verwendet werden, einschlie&szlig;lich Tierversuchen und weiteren molekularbiologischen Untersuchungen. Der Hauptvorteil der Verwendung einer Vinyl-anaeroben Kammer zu

culturing-maintaining-clostridium-difficile-an-anaerobic

Research

Forschung

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie und Infektion

Quelle: Li, J., et. al., Entwicklung eines Larven-Zebrafisch-Infektionsmodells für Clostridioides difficile. J. Vis. Exp. (2020)Dieses Video zeigt die Isolierung und Kultivierung von Clostridioides difficile Bakterien aus dem Darm von Zebrafischlarven. Der infizierte Darm wird präpariert, homogenisiert und in selektiven anaeroben Medien inkubiert, die Antibiotika enthalten. Diese Bedingungen unterdrücken konkurrierende Mikroben und fördern das Wachstum lebensfähiger Zellen.

Isolierung und Kultivierung von Clostridioides difficile Bakterien aus dem Zebrafischdarm der Larve

Quelle: Anwar, Z., et al. Anreicherung und Nachweis von Clostridium perfringens-Toxinotypen in Lebensmitteleinzelhandelsproben. J. Vis. Exp. (2019).In diesem Video werden sulfitreduzierende Bakterien in einem sulfithaltigen Agarmedium kultiviert, wo sie anaerob wachsen und Sulfit zu Schwefelwasserstoff reduzieren, wobei sie mit Eisenionen schwarze Ausfällungen bilden. Schwarze Kolonien werden mit aseptischen Techniken aus der Agartiefe isoliert und zur fortgesetzten anaeroben Inkubation in...

Subkultivierung von sulfitreduzierenden anaeroben Bakterien aus einer Agarkultur

Dieses Protokoll beschreibt die Cefoperazon Maus - Modell von Clostridium difficile - Infektion (CDI) eine klinisch relevante und genetisch-lenkbar - Stamm verwenden, R20291. Schwerpunkt auf der klinischen Krankheitsüberwachung, C. difficile Bakterien-Enumeration, Toxin Zytotoxizität und histopathologischen Veränderungen im gesamten CDI in einem Mausmodell werden im Protokoll aufgeführt.

Cefoperazon behandelten Maus-Modell der klinisch relevanten<em&gt; Clostridium difficile</em&gt; Dehnungs R20291

Die Wirksamkeit von Antibiotika wird am häufigsten durch die Durchführung von kinetischen Abtötungsstudien und die Messung von koloniebildenden Einheiten (KBE) bestimmt. Durch die Integration der Rasterelektronenmikroskopie (REM) in diese Standardmethoden können wir die pharmakologischen Wirkungen der Behandlung zwischen verschiedenen Antibiotika unterscheiden.

Ein Protokoll zur Charakterisierung der morphologischen Veränderungen von<em&gt; Clostridium difficile</em&gt; In Antwort auf Antibiotika-Behandlung

Da verpflichtende anaerobe Organismen bei Sauerstoffexposition nicht wachsen können, ist der Einsatz anaerobe Kultivierungstechniken unerlässlich. Hier zeigen wir eine einfache und effektive Methode zur Kultivierung einer Mischkultur aus einer Biogasanlage von der Medienaufbereitung bis zur Gas- und Fettsäurequantifizierung.

Mittlere Vorbereitung für den Anbau von Mikroorganismen unter streng anaeroben/anoxischen Bedingungen

Der Schwerpunkt dieses Papiers liegt auf der Beschreibung von Best Practices für die Herstellung von Medien für anspruchsvolle anaerobe Mikroorganismen, die aus einer Umgebung stammen. Diese Methoden helfen bei der Verwaltung anaerober Kulturen und können angewendet werden, um das Wachstum von schwer fassbaren, unkultivierten Mikroorganismen, der "mikrobiellen dunklen Materie", zu unterstützen.

Eine Reihe von in situ informierten simulierten Medienformaten für die Kultivierung umweltbedingt erworbener anaerober Mikroorganismen

Das Protokoll stellt zwei Methoden vor, um die Isolierung von anaeroben Darmbakterien zu verbessern. Die erste konzentriert sich auf die Isolierung einer Vielzahl von Bakterien mit unterschiedlichen Nährmedien. Die zweite konzentriert sich auf die Kultivierungsschritte einer bestimmten mikrobiellen Gruppe, die möglicherweise Myo-Inositol assimiliert, um ihre ökologische Bedeutung vollständig zu verstehen.

Strategien zur Verbesserung der Kultivierung anaerober Bakterien aus dem Magen-Darm-Trakt von Hühnern

Wir skizzieren Methoden für die effiziente und schnelle Isolierung / Kultur lebensfähiger Mikroglia aus dem Neugeborenen Hirnrinde und erwachsenen Rückenmark. Die Präparation und Beschichtung der kortikalen Mikroglia kann innerhalb von 90 Minuten erreicht werden, mit der anschließenden Mikroglia Ernte stattfindet ~ 10 Tage nach der ersten Sektion.

Kultivierung Mikroglia aus dem Neugeborenen und Erwachsenen Central Nervous System

Wir beschreiben hier ein einfaches Fluoreszenz in situ Hybridisierung (FISH)-Verfahren zur Lokalisierung von Viren und Bakterien in Insekten-und Pflanzengeweben. Dieses Protokoll kann für die Visualisierung von mRNA in ganze Berg und mikroskopische Abschnitte erweitert werden.

Fluoreszenz<em&gt; In situ</em&gt; Hybridisierungen (FISH) für die Lokalisierung von Viren und Bakterien in Endosymbiotic Pflanzen-und Insekten Gewebe

In diesem Protokoll beschreiben wir Methoden zur effizienten Transfektion von murinen Makrophagen-Zelllinien mit siRNAs unter Verwendung des Amaxa Nucleofector 96-well Shuttle Systems, zur Stimulation der Makrophagen mit Lipopolysaccharid und zur Überwachung der Auswirkungen auf die Produktion von entzündlichen Zytokinen.

Mit RNA-Interferenz, um die angeborene Immunantwort in Makrophagen der Maus Untersuchen

Lernen Sie die Isolierung, Kultivierung und Lagerung von Clostridium difficile in anaeroben Bedingungen. Diese Methoden ermöglichen die Gewinnung von Glycerin-Stämmen und Sporen für Forschungszwecke.

Kultivierung und Pflege

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