Name: Inchworming: A Novel Motor Stereotypie in der BTBR T + Itpr3 Tf / J-Maus-Modell von Autismus (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-07-05T16:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 3 s
Description: Erfahren Sie die Analyse von Inchworming-Verhalten bei BTBR-Mäusen zur Untersuchung motorischer Stereotypien im Autismus-Spektrum. Diese Methode nutzt einen modifizierten Juvenile-Play-Test mit Videodokumentation.

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Die Autoren sind dankbar für die technische und logistische Unterstützung und Know-how von Tobias Rose, Younghee Ahn, und David N. Ruskin zur Verfügung gestellt. Die hier beschriebene Arbeit wurde von der Alberta-Kinderklinik-Stiftung und der Alberta-Kinder Hospital Research Institute.

Alle Verfahren wurden in Übereinstimmung mit dem Animal Care Committee Canadian durchgeführt und von der University of Calgary Animal Care Committee zugelassen. 1. Vorbereitung der Tiere <ol><li> Isolieren Mäuse über Nacht (12 Stunden) vor dem Test. Um dies zu tun, legen alle BTBR und B6-Mäusen (P35-P40) für die experimentelle Analyse in Käfigen notwendig durch sie selbst, am Tag vor der Prüfung. </li><li> Legen Sie die isolierten Mäuse in der Verhaltensanalyse Zimmer 30 min vor der Prüfung, so dass Tiere auf die neue Umgebung zu gewöhnen. </li></ol> 2. Vorbereitung der Ausrüstung <ol><li> Legen Sie die 30 x 30 cm Plexiglas-Box mit einem abnehmbaren Deckel in den Testraum. Stellen Sie den Karton auf einem Tisch und positionieren Sie die Videokamera an einen 45 °-Winkel von der Unterseite; Diese Position der Kamera ermöglichen die Visualisierung der gesamte Boden des Gehäuses und der Maus. Verwenden Sie eine Infrarot-Hintergrundbeleuchtung, um Blendung zu minimieren, von der Wanddie Box. </li><li> Verwenden Sie eine Videokamera, die eine hohe Zoom-Funktion besitzt, mit Infrarot-Fähigkeiten, um Dreharbeiten in einem niedrigen Lux-Umgebung zu optimieren. Stellen Sie die Kamera auf dem Gehäuse das Bild zu vergrößern, so dass die Mäuse in der gesamten Box visualisiert. </li><li> Decken den gesamten Boden der Box mit Sägemehl Betten (sollte etwa 1 cm tief sein). </li></ol> 3. Testverfahren <ol><li> Legen Sie eine intra-Dehnungs-Paar von Mäusen (BTBR - BTBR oder B6-B6) innerhalb der Test Gehäuse. </li><li> Mach das Licht aus in den Testraum. </li><li> Starten Sie die Videokamera zu erfassen und den Raum zu verlassen. Dies wird Experimentator Einfluss auf das Verhalten der Mäuse verhindern. Notieren Sie sich die Aktivität für 11 min. </li><li> Sobald die Aufnahme abgeschlossen ist, wieder in den Testraum und geben die Mäuse in ihre ursprünglichen Käfige. </li><li> Entsorgen Sie das Sägemehl Betten, waschen Sie den gesamten Testfeld mit 70% Ethanol und neue Bettwäsche Sägemehl legen in den Boden des TestGehäuse. </li><li> Wiederholen Sie den gesamten Vorgang für den Rest der intra-Fleck-Paare und Rück die Mäuse in ihre ursprünglichen Käfige. </li></ol> Hinweis: Um die Zuverlässigkeit der Daten zu überprüfen inchworming kann das Verfahren an den folgenden Tagen mit verschiedenen BTBR BTBR-und B6-B6 Paarkombinationen wiederholt werden. Dadurch wird sichergestellt, dass das beobachtete Verhalten ist nicht abhängig von der speziellen Partner in der Umhüllung, aber die einzelnen inchworming. 4. Datenanalyse <ol><li> Inchworming als Synchron-und Ausfahren der Vorder-und Hinterfüße des Tieres definiert ist, mit mindestens einem Co-auftretende nach innen und dann nach außen anschließenden Bewegung, die das Bettzeug effektiv verdrängt. Manuell sehen und punkten jedes Video zweimal (einmal für jede Maus), um die Gesamtdauer, die Frequenz und Latenz zu ermitteln, um in der 10 min Video InchWorm. Manuelle Scoring inchworming Dauer, Häufigkeit und Latenz sollte über die Folge basierenten Definitionen: Inchworming Dauer: Wird als Gesamtzeit verbringt jede Maus in der inchworming Verhalten engagiert definiert. Um diesen Aspekt inchworming punkten, verwenden Sie einen Timer, gestartet und gestoppt werden kann. Startzeitpunkt, wenn die Maus fängt an InchWorm und stoppen Sie den Timer, wenn die Maus nicht mehr inchworming. Wann und ob die Maus beginnt wieder inchworm, Re-Start und Re-Timer stoppen. Wiederholen, das Starten und Stoppen des Zeitgebers für die Dauer der 10-minütigen Beobachtungsperiode jedes Mal, wenn die Maus Inchworms. Dies wird eine inchworming Dauer Partitur, die von 0.00 bis 10.00 min zu erzeugen. Inchworming Frequenz: wird als die Anzahl, wie oft die Maus in die inchworming Verhalten in der 10-minütigen Beobachtungsperiode greift definiert. Eine einzelne Zähler wird jedes Mal die Starts und Stopps Maus inchworming ausgezeichnet. Die inchworming Frequenz-Score wird eine Zahl zwischen 0 und ∞ sein. Latency auf Inchworm: Ist als die Zeit definiert, thbei läuft vor dem ersten Auftreten von inchworming. Starten Sie den Timer, wenn das Video startet, wird diesmal 0.00 Uhr sein, und stoppen Sie den Timer, wenn die Maus Inchworms für die erste Zeit. Wenn die Maus nicht die inchworming Verhalten nicht angezeigt, die Latenz zu InchWorm wird 10.00 sein. Bei der Analyse der Latenzzeit bis zum inchworm, wird eine Punktzahl von 0.01 bis 10.00 min erreicht werden. Mäuse, die für die Dauer der Testperiode Inchworm ausfallen sollte der Probenpopulation entfernt werden, um sicherzustellen, dass die Ergebnisse sind relevant für eine Population von Mäusen, die inchworming Verhalten anzuzeigen. </li> <li> Berechnung des Gesamt Häufigkeit und Dauer der inchworming für jede Maus in dem Video. Berechnung der Zeit für die erste Maus in dem Paar für die Latenz für diesen bestimmten Paar von Mäusen Inchworm Inchworm erforderlich. Diese Parameter werden über den Stand der methodischen Arbeit, um sich wiederholende Verhaltensweisen in Graben 6 Mäusen verwandt basiert. </li><li> Berechnen Sie die durchschnittliche Dauer, Häufigkeit,und Latenz für jede Versuchsgruppe in der Analyse (dh BTBR vs B6) zu graben. Verwenden Sie eine Varianzanalyse oder ein t-Test, um Daten zwischen Stämmen / experimentellen Gruppen zu vergleichen. Hinweis: Wenn das Verfahren an einem zweiten Tag beendet ist, verwenden Sie eine ANOVA mit wiederholten Messungen, um sicherzustellen, dass es keine Folgewirkungen oder Testpaarung Wirkungen. </li></ol>

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<li>Crawley, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Designing+mouse+behavioral+tasks+relevant+to+autistic-like+behaviors%5BTitle%5D)+AND+%22Mental+Retardation+and+Developmental+Disabilities+Research+Reviews%22%5BJournal%5D)">Designing mouse behavioral tasks relevant to autistic-like behaviors.</a> Mental Retardation and Developmental Disabilities Research Reviews. 10 (4), 248-258 (2004).</li>
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<li>Pobbe, R. H., Defensor, E., Pearson, B. L., Bolivar, V. J., Blanchard, D. C., Blanchard, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((General+and+social+anxiety+in+the+BTBR+T%2B+tf%2FJ+mouse+strain%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">General and social anxiety in the BTBR T+ tf/J mouse strain.</a> Behavioural Brain Research. 216 (1), 446-451 (2011).</li>
</ol>

Die Autoren haben nichts zu offenbaren.

Inchworming ist ein neues Maß für repetitive Verhaltensweisen, die verwendet werden können, um viele Störungen, Stereotypien wie ASD aufweisen studieren. Es gibt 4 Schritte, die von entscheidender Bedeutung für die Erzeugung zuverlässiger inchworming Daten aus dem modifizierten Jugend soziale Interaktion Protokolls sind: 1) die längere Isolationszeitraum ist für die inchworming Test und sollte nicht aus dem Protokoll entfernt oder verkürzt werden. Diese Forderung ist in der hier beschriebenen Paare spezifische Prüfung v...

Obwohl die Pathophysiologie der Autismus-Spektrum-Störungen (ASD), bleibt unklar, Diagnose hängt von der Anwesenheit von drei breiten Kategorien Symptom: abnorme soziale Gegenseitigkeit, Beeinträchtigungen in der Kommunikation, und sich wiederholende / stereotype Verhaltensweisen ein. Die meisten Nager-Modelle sind nicht in der Lage gleichzeitig wiederzugeben, alle drei Symptome in einem einzigen Tier. So können Modelle, die einige oder alle Aspekte der Erkrankung zuverlässig simulieren kann halten großen Wert für die Entwicklung wirksamer Präventions-und Therapiestrategien. Ein Modell, das alle drei Aspekte der ASD Anzeige macht, ist die Maus BTBR 1,2. In Kombination mit Ultraschall-Laute und sozialen Ansatz Assays wird die Jugendsozialinteraktionstest häufig verwendet, um Maus-Modellen der pädiatrischen ASD charakterisieren; Diese Tests Maß verringert und abnorme soziale Verhaltensweisen, die Kernfunktionen des ASD zu vertreten. Neben der juvenilen sozialen Interaktionstest, viele andereTests wurden zur stereotypes Verhalten in Tiermodellen von ASD messen. Zum Beispiel die Marmor Vergraben Test, der die Tendenz eines Tieres auf Einstreu verdrängen mit der Schnauze und Vorderpfoten in der Bemühung um ein Objekt zu decken sucht, wird gedacht, um zwanghafte Verhaltensweisen, die stereotype Reaktion auf aversive Reize 3,4 auftreten, zu messen. Dementsprechend Graben Tests wurden durchgeführt, um diese repetitive Verhaltensweisen in ASD Tiermodellen und verschiedenen Arten von Nagetieren 3,5-7 quantifizieren. Graben Verhaltensweisen sind so offensichtlich gerichtet Aktionen der Schnauze oder Pfoten zu Einstreu verdrängen definiert und haben die Hypothese aufgestellt, um ein empfindlicher Parameter der repetitive motorische Verhalten 4 sein. Hier wird eine neue Art von Graben, die wir &quot;inchworming&quot; in der BTBR-Stamm von Mäusen bezeichnet Wir berichten. Die Charakterisierung dieser neuartigen Verhalten kann eine stabile Messung eines repetitiven Motorverhalten, das für die weitere val verwendet werden kanndierung von Nagetier-Modelle wie ASD, Huntington-Krankheit oder Zwangsverhalten 8,9. Wir definieren &quot;inchworming&quot; als mindestens eine synchrone Bewegung der vorderen und hinteren Extremitäten nach innen durch eine synchrone Bewegung nach außen, die auf die Verschiebung des Auflagematerials führt gefolgt. Dies unterscheidet sich von typischen Grabverhalten in vielerlei Hinsicht. Zuerst wird das Verhalten inchworming Regel als eine Kombination von Episoden eher als eine einzelne isolierte Ereignis beobachtet. Im Gegensatz dazu kann als Einzelgrab koordinierte Bewegung entweder der Hinter oder Vorderpfoten 3 auftreten. Zusätzlich inchworming Bewegungen dazu neigen, in das Gehäuse horizontal Boden auftreten, im Gegensatz zu den feststehenden Positionen, die charakteristisch für das Graben Verhaltensweisen sind. Schließlich tritt der unten beschriebenen inchworming Verhalten häufig in der BTBR Inzucht-Stamm von Mäusen, aber nur selten in der B6-Kontrollstamm identifiziert, während typische Grab Verhaltensweisen sind häufig in B6 und BTBR Stämme von Mäusen <sup&gt; 10. Die in dieser Studie dargelegten inchworming Testverfahren stellen Modifikationen von einem Standard-Protokoll Jugend soziale Interaktion ein. Da Marmor Vergraben, graben, und Jugendspielwert haben für die Messung abnormales Verhalten in Maus-Modellen der ASD gegründet, ergänzt die inchworming Verhalten diese zuvor definierten Messungen der stereotypen Verhaltensweisen. Insbesondere stellt die inchworming Verhalten eine sinnvolle Maßnahme, um der unteren Motor Stereotypien, die häufig in ASD 8,11 identifiziert werden. Darüber hinaus kann dieses neue Verfahren inchworming Forscher mit einer zusätzlichen wertvolles Werkzeug für die Analyse der sich wiederholenden Motor relevant Entwicklungsstörungen wie ASD Verhalten bereitzustellen.

<table><tbody><tr><td>30 cm x 30 cm Plexiglasbox mit Deckel</td><td></td><td></td><td>Kann aufgebaut werden </td></tr><tr><td>IR-Kamera </td><td>Survshop (Calgary, Alberta)</td><td>Sony CCD Kamera DP955V- 30&#8217; Infrarot-Panzerkuppel</td><td>Finden Sie eine Kamera mit hoher Auflösung und Zoomfunktion</td></tr><tr><td>DVR</td><td>Supercircuits (Austin, Texas)</td><td>SCHWARZ 4-Kanal-H.264-Sicherheits-DVR der Enterprise-Klasse mit DVD-Brenner</td><td>Hohe Datenkapazität</td></tr><tr><td>Sägemehl</td><td></td><td></td><td>Wie Einstreumaterial </td></tr></tbody></table>

inchworming: a novel motor stereotypie in der btbr<em&gt; t<sup&gt; +</sup&gt; itpr3<sup&gt; tf</sup</em&gt; / j-maus-modell von autismus

Inchworming: A Novel Motor Stereotypy in the BTBR T+ Itpr3tf/J Mouse Model of Autism

Autismus-Spektrum-Störung (ASD) ist ein verhaltens definiert neurologische Erkrankung, die durch eine verminderte der sozialen Interaktion, abnorme Kommunikation und repetitive Verhaltensweisen mit eingeschränktem Interesse. Als Diagnose basiert auf klinischen Kriterien sollten alle potenziell relevanten Tiermodellen dieser heterogene Erkrankung ideal rekapitulieren diese unterschiedlichen Verhaltensmerkmale. Die BTBR T + Itpr3 tf / J (BTBR) Maus ist ein etabliertes Tiermodell der ASD, zeigt repetitive Verhaltensweisen wie erhöhte Körperpflege, sowie kognitive Inflexibilität. In Bezug auf die soziale Interaktion und Interesse hat die Jugendspieltest in mehreren Tiermodellen des ASD beschäftigt. Hier zeigen wir, dass, wenn BTBR Mäuse werden in einer Jugend soziale Interaktion Gehäuse Sägemehl Bettwäsche enthalten getestet, eine sich wiederholende Bewegungssynchrongrab zeigen sie. Diese sich wiederholenden motorischen Verhalten, bezeichnet als &quot;inchworming&quot;, hießwegen der stereotypen Charakter der Bewegungen der Mäuse zeigten während horizontal bewegt über den Boden. Inchworming Mäuse müssen ihre Vorder-und Hintergliedmassen synchron verwenden, um die Betten zu verdrängen, die Durchführung mindestens ein nach innen und nach außen eine Bewegung. Obwohl beide BTBR und C56BL/6J (B6) Mäuse zeigen dieses Verhalten, BTBR Mäuse zeigen eine deutlich höhere Dauer und Häufigkeit der inchworming und eine verringerte Latenz zu initiieren inchworming, wenn in einem Bett Gehäuse gesetzt. Wir schließen daraus, dass diese neu beschriebene Verhalten stellt ein Maß einer repetitiven Motor Stereotypie, die leicht in Tiermodellen von ASD gemessen werden kann.

Die modifizierte Version des hier beschriebenen jugendlichen Spiel Test kann verwendet werden, um zu beobachten und zu analysieren, die sich wiederholenden Roman Grab Verhalten bezeichnet inchworming werden. Inchworming wird in einem weit größeren Umfang als BTBR Mäuse B6 Kontrollen ausgestellt. In einem typischen 10 Minuten-Sitzung BTBR Mäuse den deutlichen inchworming Verhalten (Synchron-und Ausfahren der Pfoten in dem Bemühen, das Sägemehl zu verdrängen Betten) für ca. 5 min, oder die Hälfte der Beobachtungszeitraum ...

Inchworming ist ein stark repetitiven synchrone Bewegung durch Grab BTBR T + ITPR 3TF / J (BTBR) Mäusen angezeigt, wenn in einem Test Käfig mit genügend Bettwäsche Sägemehl gelegt. Das Verfahren ist eine Modifikation des Jugendlichen soziale Interaktion Protokoll und wird hier verwendet, um sich wiederholende Motor relevant Autismus-Spektrum-Störung Stereotypien zu beurteilen.

Inchworming: A Novel Motor Stereotypie in der BTBR<em&gt; T<sup&gt; +</sup&gt; Itpr3<sup&gt; Tf</sup</em&gt; / J-Maus-Modell von Autismus

Autism Spectrum Disorder (ASD) is a behaviorally defined neurodevelopmental disorder characterized by decreased reciprocal social interaction, abnormal ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, einen modifizierten juvenilen Spieltest zu verwenden, um das Inch-Worm-Verhalten, eine neuartige motorische Stereotypie, zu beobachten. Dies wird erreicht, indem zunächst jede Maus 12 Stunden vor Beginn des Tests sozial isoliert wird, mit eigenständigem Futter und Wasser. Der zweite Schritt besteht darin, die Videokamera in einem Winkel von 45 Grad zur Testumgebung aufzustellen.Anschließend werden die isolierten Mäuse paarweise in die Vorrichtung gebracht, wo sie für eine Dauer von 11 Minuten im Dunkeln videoaufgezeichnet werden. Im letzten Schritt wird das Inchworm-Verhalten anhand des Videos analysiert, um Dauer, Frequenz und Latenz des Inchwormens zu bestimmen. Letztendlich ermöglicht diese Methode die Analyse motorischer Neuropathien und kann als Indikator für die Prüfung neuartiger therapeutischer Interventionen dienen.Diese Methode kann helfen, zentrale Fragen im Bereich Autismus zu beantworten, beispielsweise die Häufigkeit und Regulierung motorischer Stereotypien. Die visuelle Demonstration dieses Verfahrens ist entscheidend für das Erlernen der Aufgabe, da das Verhaltensphänotyp schwer zu identifizieren ist und das In

inchworming-novel-motor-stereotypy-btbr-t-itpr3tfj-mouse-model

Research

Forschung

JoVE Journal

Behavior

Verhalten

Dieses Video zeigt die Verwendung eines radialen Lokomotionsassays zur Bewertung der motorischen Dysfunktion in C. elegans, die entweder Wildtyp- oder ALS-mutiertes humanes TDP-43-Protein exprimieren. Würmer mit unterschiedlicher Wildtyp- oder mutierter TDP-43-Expression werden kriechen gelassen, und ihre Bewegung wird anhand der radialen Strecke gemessen, die vom zentralen Punkt auf der Assay-Platte zurückgelegt wird. Der Assay unterscheidet zwischen leichten, mittelschweren und schweren...

Bewertung der motorischen Beeinträchtigung in C. elegans-Modellen mit dem Radial Locomotion Assay

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Murmelvergraben und Nestlet-Schreddern als Tests für sich wiederholende, zwanghafte Verhaltensweisen bei Mäusen

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Video Imaging und Raum-Zeit-Karten zur Analyse Gastrointestinale Motilität bei Mäusen

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Die Autismus-Spektrum-Störung (ASS) ist mit einer Beeinträchtigung des sozialen und kommunikativen Verhaltens und dem Auftreten von sich wiederholendem Verhalten verbunden. Um die Wechselbeziehung zwischen ASD-Genen und Verhaltensdefiziten im Drosophila-Modell zu untersuchen, werden in dieser Arbeit fünf Verhaltensparadigmen zur Untersuchung von sozialem Abstand, Aggression, Balz, Pflege und Gewöhnungsverhalten beschrieben.

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