Name: Calciumphosphat-Transfektion von primären Hippocampus-Neuronen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-11-12T18:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 22 s
Description: Erfahren Sie die Calciumphosphat-Transfektion von Hippocampus-Neuronen in Ko-Kultur mit Astrozyten. Diese wirtschaftliche Methode erreicht bis zu 50 % Transfektionseffizienz und ermöglicht die Genübertragung in schwer transfizierbare Zellen.

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Diese Arbeit wird von NIH NS065183 und Start-up-Fonds von der Rutgers Robert Wood Johnson Medical School unterstützt.

1. Vorbereiten Rat Astrocyte Kultur für konditionierte Medien und Astrocyte-Neuron-Kokulturen. <ol><li> Bereiten Dissektion Puffer (BSS, siehe Tabelle 1 für Rezept) und bei 4 ° C bis zur Verwendung. </li><li> Anesthetize neonatalen Rattenjungen (P0-P2) mit Isofluran in einem 500 ml-Becherglas. </li><li> Bei Jungtieren sind unbeweglich, Spray mit 70% Ethanol und enthaupten. </li><li> Entfernen Sie das Gehirn. <ol><li> Halten Sie den Kopf fest mit einem Paar von Dumont Nr. 5 Pinzette und einer feinen Schere verwenden, um einen Mittelschnitt durch die Haut und Schädel zu machen. </li><li> Expose das Gehirn durch die Reflexion der Schädel an den Seiten, und entfernen Sie das Gehirn in eine Schale mit kaltem BSS. </li></ol></li><li> Trennen Sie die Gehirnhälften aus dem Zwischenhirn und Hirnstamm unter einem Binokular. Entfernen Sie vorsichtig alle Hirnhäute durch die Stabilisierung des Gewebes mit einer Pinzette und sanft zog sich die Hirnhaut mit einer anderen Pinzette. </li><li> Sammeln Sie alle Hemisphären in einem 60 mm-Schale. Mit einer kleinen Schere, zerkleinern Gewebe so fein wie möglich. Übertragen Sie anschließend die zerkleinerten Gewebes auf eine 50 ml konischen Röhrchen. </li><li> 1,5 ml von 1% DNase und 1,5 ml 2,5% Trypsin und 12 ml BSS (Gesamtvolumen 15 ml) zu Gehirnen. Inkubieren in einem Schüttelwasserbad für 15 min bei 37 ° C. Um eine gute Durchmischung zu gewährleisten, ist das Rohr von Hand alle 5 min verwirbelt. </li><li> Überstand durch eine 70 um Zellsieb über ein neues 50 ml konischen Röhrchen. 3 ml FBS zu dieser Überstand. </li><li> Auf die verbleibenden Teile, addieren 13,5 ml BSS und 1,5 ml 2,5% Trypsin und Inkubation im Schüttelwasserbad für weitere 15 min. </li><li> Die restliche Überstand durch die Zelle Sieb und verbinden sich mit dem Überstand aus Schritt 1.8. </li><li> Zentrifugieren bei 1000 UpM für 5 min, um die Zellen zu pelletieren. </li><li> Resuspendieren Pellets in 5 ml Gliazellen Medien. Der Überstand kann wieder zentrifugiert werden, um die restlichen Zellen zu pelletieren. </li><li> Zählen von Zellen mit einer Zählkammer. </li><li> Teller cells in einer Dichte von 1 x 10 7 pro 150 cm 2-Kolben. </li><li> Ändern Sie Medien an die frische Gliazellen Medien am Tag nach der Beschichtung. Danach ernähren Zellen zweimal eine Woche mit Glia-Medien. </li><li> Wenn Zellen&gt; 80% Konfluenz (ca. 10 Tage nach der Beschichtung) erreicht, Gefrierzellen in 90% Pferdeserum und 10% DMSO und halten Aktien in flüssigem Stickstoff. Die Zellen werden mit 2 x 10 6 pro Fläschchen eingefroren. Etwa 5 Fläschchen können aus jedem Kolben eingefroren werden. </li><li> Über 10-14 Tage vor der Einrichtung des Hippocampus-Kultur werden Gliazellen aus den gefrorenen Aktien plattiert. Wir Platte in der Regel fünf 6-Well-Platten, das ist genug, um das Wachstum von 90 Deckgläser von Hippocampus-Neuronen (drei 15 mm runden Deckgläsern pro Well) zu unterstützen. Wir Platte auch eine zusätzliche acht bis zehn 60-mm-Schalen von Gliazellen, die für Anlage N2.1 Medien für die Transfektion verwendet wird. Am Tag vor der neuronalen Kultur, sollten die Zellen mit NB27 Medien zugeführt werden. Die Astrozyten sollte idealerweise&gt; 90% konfluent sein thist der Punkt. Wir finden, dass das Einfrieren stark verringert die Anzahl der Mikrogliazellen in der Astroglia-Kulturen. Da erhöhte Neurotoxizität beobachtet wird, wenn in den Mikroglia Astroglia Kulturen vorhanden ist, verwenden wir immer Astroglia-Kultur aus gefrorenen Beständen, für Co-Kultur mit den Neuronen hergestellt. </li></ol> 2. Neuronale Kultur <ol><li> Saubere Glas-Deckgläser von ersten Spülen in Milli-Q-Wasser 2x. Sie werden dann in konzentrierte Salpetersäure für 24 Stunden mindestens fünfmal insgesamt 2 h eingeweicht und mit Milli-Q-Wasser gespült. Die Deckgläser werden durch Backen in einem Ofen bei 225 ° C für 6 Stunden getrocknet und sterilisiert. </li><li> Überdeckgläser bis 60 mm Schalen nach der Sterilisation. Platzieren vier Punkte sterilem Paraffin nahe der Außenkante jedes Deckglas zu halten Neuronen Gliazellen trennen während Kokultur. </li><li> Deckmantel mit 1 mg / ml Poly-L-Lysin in 0,1 M Borat-Puffer über Nacht bei 37 ° C Inkubator. </li><li> Am nächsten Tag, spülen Deckgläser zweimal in sterilem milliQ Wasser für jeweils mindestens 15 min. Sie werden dann über Nacht in Plattenmedien in 37 ° C-Inkubator inkubiert. </li><li> Euthanize schwangere Ratte (E18) von Isofluran-Narkose, gefolgt von Pneumothorax und einschläfern embryonalen Ratten durch Enthauptung. Gehirn entfernen und zerlegen sich die Hirnhälften wie oben beschrieben. </li><li> Präparieren Sie die hippocampi von der Großhirnhemisphäre. Zeigen alle Hippocampus in eine 15 ml konischen Röhrchen und Verdau mit 0,25% Trypsin (0,5 ml 2,5% Trypsin, 4,5 ml BSS) bei 37 ℃ für 15 min. </li><li> Aufgeschlossene hippocampi in BSS 3x für jeweils 5 Minuten gespült. Sie werden dann mit einer Glaspasteurpipette zerrieben, und die Zelldichte wird unter Verwendung einer Zählkammer bestimmt. Neuronen werden dann in einer Dichte von 2 x 10 5 Zellen pro 60 mm-Schale ausgesät. </li><li> Etwa 2-4 Stunden nach der Beschichtung, Transferdeckgläser mit ange Neuronen zu den Schalen, die Astroglia-Zellen mit Nervenzellen in Richtung der Glia nach unten. Bei DIV3, fügen Cytosinarabinosid dieZellen in einer Endkonzentration von 5 &amp;mgr; M bis Glia-Proliferation zu stoppen. </li></ol> 3. Calcium Transfektion <ol><li> Zustand N2.1 Medien auf Glia der Tag vor der Transfektion. </li><li> Am Tag der Transfektion nehmen Anlage N2.1 Medien aus der Glia und übertragen in eine neue Schüssel. Überdeckgläser mit den Neuronen in der konditionierten Medien N2.1. Lassen Sie ins Gleichgewicht im Inkubator für 10-30 min. </li><li> Einem Satz von sterilen Röhrchen verbinden 1-4 ug DNA, 12,5 &amp;mgr; l 2 M CaCl 2 und sterilem H 2 O für ein Gesamtvolumen von 100 ul. Einem zweiten Satz von Rohren, mit 100 ul 2x HBS. </li><li> Hinzufügen ⅛ Volumen 2 × HBS (12,5 ul) zu einem Zeitpunkt zu dem Röhrchen mit dem CaCl 2 / DNA-Mischung, Vortexen für ein paar Sekunden jedesmal. Ermöglichen, dass die Rohre für 15 min stehen. </li><li> Nach 15 min Inkubation, fügen Sie die Transfektion Mischung tropfenweise zu den Zellen. Inkubieren 1-1,5 Stunden. Eine Schicht aus einem sandartigen Ausfällungen sichtbar sein sollunter dem Mikroskop mit einem 10X-Objektiv. </li><li> Nach Inkubation spülen Deckgläser zweimal mit warmem HBS Waschpuffer. </li><li> Zurück zur ursprünglichen Deckschalen mit Glia, fügen Kynurensäure zu einer endgültigen Konzentration von 0,5 mM. </li><li> Transfizierten Neuronen können live abgebildet oder Immunzytochemie schon am nächsten Tag verarbeitet werden. Neuronen können bis zu drei Wochen nach der Transfektion überleben. </li></ol>

<ol><li>Karra, D., Dahm, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transfection+techniques+for+neuronal+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Transfection techniques for neuronal cells.</a> J. Neurosci. 30, 6171-6177 (2010).</li>
<li>Zeitelhofer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-efficiency+transfection+of+mammalian+neurons+via+nucleofection%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">High-efficiency transfection of mammalian neurons via nucleofection.</a> Nat. Protoc. 2, 1692-1704 (2007).</li>
<li>Janas, J., Skowronski, J., Van Aelst, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lentiviral+delivery+of+RNAi+in+hippocampal+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Method+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Lentiviral delivery of RNAi in hippocampal neurons.</a> Method Enzymol. 406, 593-605 (2006).</li>
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<li>Dudek, H., Ghosh, A., Greenberg, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium+phosphate+transfection+of+DNA+into+neurons+in+primary+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Protoc.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Calcium phosphate transfection of DNA into neurons in primary culture.</a> Curr. Protoc. Neurosci. Chapter 3, Unit 3 11(2001).</li>
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<li>Kohrmann, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fast%2C+convenient%2C+and+effective+method+to+transiently+transfect+primary+hippocampal+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Res%22%5BJournal%5D)">Fast, convenient, and effective method to transiently transfect primary hippocampal neurons.</a> J. Neurosci. Res. 58, 831-835 (1999).</li>
<li>Jiang, M., Chen, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+Ca2%2B-phosphate+transfection+efficiency+in+low-density+neuronal+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">High Ca2+-phosphate transfection efficiency in low-density neuronal cultures.</a> Nat. Protoc. 1, 695-700 (2006).</li>
<li>Goetze, B., Grunewald, B., Baldassa, S., Kiebler, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemically+controlled+formation+of+a+DNA%2Fcalcium+phosphate+coprecipitate%3A+application+for+transfection+of+mature+hippocampal+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Chemically controlled formation of a DNA/calcium phosphate coprecipitate: application for transfection of mature hippocampal neurons.</a> J. Neurobiol. 60, 517-525 (2004).</li>
</ol>

Konflikte Interesse erklärt.

Es gibt mehrere wichtige Parameter, die sorgfältig für konsequent erfolgreiche Transfektionen 10,11 kontrolliert werden müssen. Der kritischste Parameter zur Calciumphosphat-Transfektion ist der pH-Wert von 2 x HBS, die in unseren Händen variiert üblicherweise zwischen 7,10 bis 7,15. Es wird empfohlen, drei Chargen von Titeln mit pH-Werten in 0,05-Schritten, um die Differenz zwischen den pH-Meter ausmachen. Alternativ stellt die Clontech Säugetier Transfektion Kit 2x HBS, die durchweg guten Wirkungsgrad ergib...

Primären Neuronen eine der schwierigsten Zelltypen zu transfizieren, wie sie sind postmitotischen und sind sehr empfindlich gegenüber Mikroumweltveränderungen. Es gibt vier häufigsten verwendeten Arten von Verfahren zur Expression von exogenen Genen und Kurzhaarnadel-RNAs (shRNAs) in diesen Zellen ein. Jeder hat seine eigenen Vorteile und Nachteile. Zum Beispiel wird in der Regel auf Elektroporation frisch isolierten Neuronen 2 durchgeführt, wie Zellen müssen in Küvetten für die Transfektion übertragen werden. Virus-Infektion kann in der Regel sehr hohen Wirkungsgrad erreichen, 3, ist aber arbeitsintensiv und riskant für die Betreiber. Viele Lipid-vermittelte Transfektion Reagenzien sind kommerziell erhältlich, mit unterschiedlichem Erfolg in Neuronen und verschiedene Ebenen der Zytotoxizität. Calciumphosphat-Transfektion eine bequeme und kostengünstige Methode zur Einführung von Fremdgenen in Neuronen. Die Methode wurde zuerst verwendet, um Adenovirus-DNA in Säuger cel vorstellenls von Graham und van der Eb (1973) 4. Transfektion wurde durch Mischen von Calciumchlorid, die mit rekombinanten DNA in einem Phosphatpuffer durchgeführt. Dies ermöglicht die Bildung von DNA / Calciumphosphat-Präzipitate, die, wenn nach und nach auf eine Monoschicht von Zellen gesunken, sich an die Zelloberfläche werden durch Endozytose aufgenommen und schließlich in den Kern 5. Dieses Verfahren würde die Expression von Fremdgenen eingeführt in der Zielzelle führen. Typische Wirkungsgrade von Calciumphosphat-Transfektion Bereich zwischen 0,5-5% 6-8. Bei sorgfältiger Optimierung und konsistente Ausführung des experimentellen Protokolls ist es jedoch möglich, eine Transfektionseffizienz von nahezu 50% erreichen. Hier beschreiben wir unsere detaillierten Protokoll für die Calciumphosphat-Transfektion von primären Hippocampus-Neuronen, die mit Astroglia-Zellen in einem Sandwich-Format 9 kokultiviert werden.

<table><tbody><tr><td>Dumont #5 Pinzette</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-20</td><td></td></tr><tr><td>Feine Schere</td><td>Fine Science Tools</td><td>14090-09</td><td>gerade / scharf 8,5 cm</td></tr><tr><td>Vannas-Tubinger Federschere</td><td>Fine Science Tools</td><td>15008-08</td><td>abgewinkelt / scharf / 8,5 cm / 5 mm Schneide</td></tr><tr><td>Zange mit Standardmuster</td><td>Fine Science Tools</td><td>11000-16</td><td></td></tr><tr><td>Student chirurgisch Schere</td><td>Fine Science Tools</td><td>91401-14</td><td>stumpf / 14,5 cm</td></tr><tr><td>Federschere</td><td>Fine Science Tools</td><td>15006-09</td> seitlich <td>abgewinkelt / 9 cm / 10 mm Schneide</td></tr><tr><td>Isofluran</td><td>Webster Veterinary</td><td>14043-225-06</td><td></td></tr><tr><td>Poly-L-Lysin</td><td>Sigma</td><td>P2636</td><td></td></tr><tr><td>MEM</td><td>Sigma</td><td>M2279</td><td></td></tr><tr><td>100 mM Natriumpyruvat</td><td>Sigma</td><td>S8636</td><td></td></tr><tr><td>Glukose</td><td>Sigma</td><td>G8270</td><td></td></tr><tr><td>10x HBSS</td><td>Sigma</td><td>H4385</td><td></td></tr><tr><td>1 M HEPES, pH 7,3</td><td>Gibco/Invitrogen</td><td>15630-080</td><td></td></tr><tr><td>GlutaMAX</td><td>Gibco/Invitrogen</td><td>35050-061</td><td></td></tr><tr><td>Neurobasale Medien</td><td>Gibco/Invitrogen</td><td>21130-049</td><td></td></tr><tr><td>B27 Ergänzung (50x)</td><td>Gibco/ Invitrogen</td><td>17504-044</td><td></td></tr><tr><td>N2 Supplement</td><td>Gibco/Invitrogen</td><td>17502-048</td><td></td></tr><tr><td>Ovalbumin</td><td>Sigma</td><td>A5503</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin/Streptomycin</td><td>Gibco/Invitrogen</td><td>15070-063</td><td></td></tr><tr><td>2,5% Trypsin</td><td>Gibco/Invitrogen</td><td>15090-046</td><td></td></tr><tr><td>DNase I</td><td>Sigma</td><td>DN-25</td><td></td></tr><tr><td>Cytosin Arabinosid</td><td>Calbiochem/EMD Millipore</td><td>251010</td><td></td></tr><tr><td>Kynurensäure</td><td>Sigma</td><td>K3375</td><td></td></tr></tbody></table>

calciumphosphat-transfektion von primären hippocampus-neuronen

Calcium Phosphate Transfection of Primary Hippocampal Neurons

Calciumphosphat-Präzipitation ist eine bequeme und kostengünstige Methode zur Transfektion von kultivierten Zellen. Mit Optimierung ist es möglich, dieses Verfahren auf Fest transfizierbaren Zellen wie primäre Neuronen verwendet werden. Hier beschreiben wir unsere detaillierten Protokoll für die Calciumphosphat-Transfektion von Neuronen im Hippocampus mit Astroglia-Zellen kokultiviert.

Wenn die verschiedenen Parameter der Transfektion optimiert und sorgfältig von Experiment zu Experiment gesteuert, ist es möglich, Transfektionseffizienzen von bis zu 50% zu erhalten. Fig. 1 zeigt ein Feld von Neuronen, die mit GFP auf DIV4 transfiziert sind. Das Feld enthält insgesamt 28 Neuronen, von denen 16 wurden transfiziert. Dies entspricht einem Wirkungsgrad von über 50%. Eine Probenahme von anderen Bereichen auf dem gleichen Deck zeigt den Gesamtwirkungsgrad liegt bei 50% (Daten nicht gezeigt)....

Calciumphosphat-Transfektion von primären Hippocampus-Neuronen

Calcium phosphate precipitation is a convenient and economical method for transfection of cultured cells. With optimization, it is possible to use this ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, Gene und kurze Haarnadel-RNAs in kultivierte Neuronen einzuführen. Dies wird erreicht, indem zunächst Astroglia-Kulturen von neugeborenen Ratten etabliert werden, um das neuronale Wachstum zu unterstützen. Hippocampus-Neuronen von E 18-Ratten werden dann mit den Gliazellen co-kultiviert.Der nächste Schritt besteht darin, die Neuronen des Hippocampus mit Hilfe einer Calciumphosphat-Fällungsmethode zu transfizieren, die transfizierten Neuronen werden dann durch Fluoreszenzmikroskopie sichtbar gemacht. Bei Verwendung dieser Methoden kann die Transfektionseffizienz bis zu 50% betragenDer Hauptvorteil dieser Technik gegenüber bestehenden Methoden besteht darin, dass sie relativ einfach, wirtschaftlich und sehr effizient ist. Obwohl sich unser Protokoll auf die Transfektion von kultivierten Hippocampus-Neuronen konzentriert, kann es auch auf andere schwer zu transfizierende Zelllinien angewendet werden.Für dieses Protokoll haben Sie einen BSS-Dissektionspuffer bei vier Grad Celsius gebrauchsfertig vorbereitet. Nachdem Sie einen Welpen geköpft haben, halten Sie den Kopf mit einer Zange Nummer fünf fest und machen Sie mit einer feinen Schere

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Research

Forschung

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowissenschaften

Die Dissektion und das Wachstum der Zellen von einem einzelnen Bereich des Gehirns erleichtert Untersuchung zellulärer und physiologischer Parameter. Wir beschreiben ein Verfahren zur Primär-Zellkultur, die Neuron-angereicherten Kulturen produziert in einem Serum-freien Umgebung.

Primäre Kultur des Hippocampus-Neuronen von neugeborenen Ratten P0

Live Cell Imaging ist von besonderem Nutzen bei der Untersuchung der Dynamik von Organellen Menschenhandel. Hier beschreiben wir ein Protokoll für die Live-Darstellung von Dense-Core-Vesikel in kultivierten Neuronen mit Weitwinkel-Fluoreszenzmikroskopie. Dieses Protokoll ist flexibel und kann an image anderen Organellen wie Mitochondrien angepasst werden, Endosomen und Peroxisomen.

Live-Imaging von Dense-Core-Vesikel in Primary hippokampalen Neuronen

Dieses Protokoll beschreibt die erforderlichen Schritte zu zerlegen, zu transfizieren via Elektroporation und Kultur Maus Hippocampus und kortikalen Neuronen. Kurzfristige Kulturen können für die Untersuchung der Axon Auswuchs und Beratung verwendet werden, während die langfristigen Kulturen für ein Studium der Synaptogenese und dendritischen Dorn Analyse verwendet werden können.

Nucleofection und Primärkultur von embryonalen Maus-Hippocampus und kortikalen Neuronen

Quelle: Calvo-Rodríguez, {et al{. Fluoreszenz- und Biolumineszenzbildgebung von subzellulärem Ca2+ in gealterten Hippocampus-Neuronen. J. Vis. exp. (2015).  Dieses Video zeigt den Einsatz von Fluoreszenzbildgebung zur Messung des zytosolischen Kalziumspiegels in kurz- und langfristigen Hippocampuskulturen von Ratten. Durch den Vergleich junger und gealterter Neuronen wird hervorgehoben, wie eine erhöhte spannungsgesteuerte Kalziumkanaldichte vom L-Typ und eine verlängerte Aktivierung in...

In-vitro-Calcium-Bildgebung in Kurzzeit- und Langzeitkulturen des Hippocampus von Ratten

Kulturen mit niedriger Dichte von primären hippokampalen Neuronen benötigen normalerweise eine Glia-Feeder-Schicht, um neurotrophe Faktoren zu liefern und die Langlebigkeit zu erhalten. Wir beschreiben hier eine vereinfachte Methode zur Kultivierung von Neuronen mit extrem niedriger Dichte auf Glasdeckgläsern in Gegenwart einer neuronalen Feeder-Schicht mit hoher Dichte, die die Untersuchung spezifischer neuronal-autonomer Mechanismen erleichtert.

Ein vereinfachtes Verfahren für Ultra-Low Density, Long-Term Primäre Hippocampus Kultur

Hier wird ein Verfahren zur selektiven Aktivierung eines neuronalen Proteins mit einem kurzen Lichtimpuls vorgestellt, indem eine photoreaktive unnatürliche Aminosäure genetisch in ein neuronales Zielprotein kodiert wird, das in Neuronen in Kultur oder in vivo exprimiert wird.

Optische Kontrolle eines Neuronal Protein eine genetisch kodierter unnatürliche Aminosäure in Neurons Verwendung

Dieser Artikel beschreibt das Protokoll zur Kultivierung niedriger Dichte primären hippocampalen Neuronen wachsen auf Glasdeckgläschen über einen einschichtigen glial invertiert. Das Neuron und Glia-Schichten werden durch Paraffinwachsperlen abgetrennt. Die Neuronen durch diese Verfahren gezüchtet sind geeignet für hochauflösende optische Bildgebung und funktionelle Assays.

Low-Density Primäre Hippocampus Kultur

Synaptischen Vesikel Endozytose wird durch Lichtmikroskopie pHluorin verschmolzen mit synaptischen Vesikel Protein und Elektronenmikroskopie der Vesikel Aufnahme erkannt.

Messung der synaptischen Vesikel Endozytose in kultivierten Hippocampal Neuronen

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Verwendung von primär kultivierten Hippocampus-Neuronen zur Untersuchung der Anordnung von Axon-Anfangssegmenten

Hier zeigen wir, wie die Transfektion von primären hippokampalen Nagetierneuronen mit konfokaler Bildgebung in lebenden Zellen kombiniert werden kann, um pathologische Protein-induzierte Effekte auf den axonalen Transport zu analysieren und mechanistische Signalwege zu identifizieren, die diese Effekte vermitteln.

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Erfahren Sie die Calciumphosphat-Transfektion von Hippocampus-Neuronen in Ko-Kultur mit Astrozyten. Diese wirtschaftliche Methode erreicht bis zu 50 % Transfektionseffizienz und ermöglicht die Genübertragung in schwer transfizierbare Zellen.

Calciumphosphat-Transfektion von primären Hippocampus-Neuronen

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