Methods to Identify the NMR Resonances of the <sup>13</sup>C-Dimethyl N-terminal Amine on Reductively Methylated Proteins

Kevin J. Roberson; Pamlea N. Brady; Michelle M. Sweeney; Megan A. Macnaughtan

doi:10.3791/50875

Methoden, um die NMR-Resonanzen von Identify 13 C-Dimethyl-N-terminalen Amins auf redu...

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Chemistry

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Methods to Identify the NMR Resonances of the ¹³C-Dimethyl N-terminal Amine on Reductively Methylated Proteins

Methoden, um die NMR-Resonanzen von Identify 13 C-Dimethyl-N-terminalen Amins auf reduktiv methylierte Proteine

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13:59 min

December 12, 2013

DOI: 10.3791/50875-v

Kevin J. Roberson¹, Pamlea N. Brady¹, Michelle M. Sweeney¹, Megan A. Macnaughtan¹

¹Department of Chemistry,Louisiana State University

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Es werden zwei Verfahren zur Zuordnung der α- und ε-Dimethylamin-Kernspinresonanzsignale eines reduktiv ¹³C-methylierten N-terminalen Lysins beschrieben. Eine Methode nutzt die pH-induzierte Selektivität der reduktiven Methylierungsreaktion, und die andere verwendet Aminopeptidase, um das N-terminale Lysin selektiv zu entfernen.

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist die Zuordnung des Alpha- und Epsilon-Kohlenstoffs 13 Dimethylamin NMR-Resonanz des endterminalen Lysins, Rests von Lysozym. Dies wird erreicht, indem zunächst reduktiv Lysozym bei niedrigem und hohem pH-Wert mit einer subgeometrischen Menge an Kohlenstoff-13-Formaldehyd methyliert wird.

Der zweite Schritt besteht darin, die Proben mit niedrigem und hohem pH-Wert reduktiv zu methylieren, wobei die natürliche Häufigkeit für Formaldehyd überschüssig ist, um die Methylierung abzuschließen. Der letzte Schritt besteht darin, die reduktiv methylierten Proben für die NMR-Analyse in D-Zwei-O-Puffer zu puffern. Bei der zweiten Methode wird das Ziel durch den Abbau der Aminopeptidase einer Lysozymprobe erreicht.

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