Analyse von Skelettmuskeldefekten bei Zebrafischlarven mittels Doppelbrechung und berührungsempfindlichen Escape-Response-Assays

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, das Ausmaß der myofibrillären Organisation in durchscheinenden Zebrafischlarven zu bewerten und ihre Schwimmstrecke als Reaktion auf die taktile Stimulation für beide Methoden zu quantifizieren. Dies wird zunächst durch die Paarung des Zebrafisches und dann durch das Sammeln lebensfähiger Eier im zweiten Schritt des Assays zur Beurteilung der Muskelstruktur erreicht. Ein beschichteter anästhesierter Zebrafischembryo wird direkt zwischen zwei polarisierten Linsen auf einem Stereomikroskoptisch positioniert, so dass der Fisch entlang der Seitenachse seines Körpers ausgerichtet ist und sich in einer möglichst flachen Ausrichtung befindet.

Die Doppelbrechung wird dann visualisiert und die Muskelintegrität quantifiziert. Im zweiten Schritt des berührungsevozierten Escape-Assays wird eine einzelne beschichtete Larve in eine tiefe Petrischale gelegt und dann im Sichtfeld des Stereomikroskops zentriert. Ein meno-sensorischer Reiz wird an die Larven abgegeben, indem der Schwanz mit einer Insektennadel berührt wird, und die Reaktion des Tieres wird abgebildet, bis der Embryo aufhört zu schwimmen oder aus dem Sichtfeld schwimmt.