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Helminthensammlung und -bestimmung von Wildtieren
Helminthensammlung und -bestimmung von Wildtieren
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JoVE Journal Environment
Helminth Collection and Identification from Wildlife

Helminthensammlung und -bestimmung von Wildtieren

Full Text
16,516 Views
09:37 min
December 14, 2013

DOI: 10.3791/51000-v

Maria S Sepulveda1, John M Kinsella2

1Department of Forestry and Natural Resources,Purdue University, 2Helm West Laboratory

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Wilde Tiere werden häufig von einer Vielzahl von Helminthen parasitiert. Die vier Haupttypen von Helminthen sind "Spulwürmer" (Nematoden), "Dornkopfwürmer" (Acanthocephalane), "Egel" (Trematoden) und "Bandwürmer" (Cestoden). Hier beschreiben wir, wie Helminthen von einem Wirbeltier gesammelt werden und wie sie konserviert und taxonomisch identifiziert werden.

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, Helme von Wildtieren zu sammeln, zu konservieren und zu identifizieren. Dies wird durch die erste Autopsie, ein wildes Tier, erreicht. Als nächstes werden Helme aus verschiedenen Organen gesammelt, dann werden die Helme mit einer Vielzahl von Techniken für die spätere Identifizierung konserviert.

Schließlich werden die Helme geräumt, gebeizt und montiert und die Arten identifiziert. Letztendlich können Ergebnisse erzielt werden, die durch Clearing- und/oder Färbetechniken spezifische Helmstrukturen zeigen, die bei der Identifizierung von Arten sehr hilfreich sein können. Diese Methode kann jedoch zur Identifizierung von Helmen von Säugetieren, Vögeln, Reptilien und Amphibien angewendet werden.

Es kann auch auf andere Organismen wie Fische angewendet werden. Positionieren Sie das Tier zunächst auf einer ebenen Fläche und untersuchen Sie mit einer Lupe alle äußeren Öffnungen, einschließlich Ohren, Mundhöhle und Augen, auf das Vorhandensein von Nematoden, CSEs, Zehen und Trematoden. Mit einer scharfen Klinge oder einem scharfen Messer und einer Präparierzange.

Machen Sie einen Schnitt über der Bauchhöhle und achten Sie darauf, dass keine Organe reißen. Öffnen Sie dann bei Bedarf mit einem Knochenschneider oder einer kleinen Handsäge die Brusthöhle. Untersuchen Sie beide Hohlräume auf Fal, Spulwurm und große Trematoden.

Binden Sie dann einen Faden nahe dem Anfang der Speiseröhre und einen weiteren am Ende des Dickdarms zur Untersuchung. Trennen Sie unter einem Stereomikroskop das Herz und die großen Blutgefäße, die Luftröhre und die Lunge in einzelne Petrischale. Entfernen Sie die Leber, die Gallenblase und den Ductus, die Bauchspeicheldrüse, die Milz, die Nieren und die Harnblase und untersuchen Sie sie unter dem Stereomikroskop.

Entfernen Sie dann das gesamte Verdauungssystem und legen Sie jeden Abschnitt in eine Glasschale. Nachdem die Organe entfernt wurden, verwenden Sie einen Schlauch oder eine Spritzflasche, die mit 0,9 % Kochsalzlösung gefüllt sind, um die Körperhöhle zu waschen, und lassen Sie sie durch ein 106-Mikrometer-Maschensieb filtrieren. Spülen Sie den Inhalt des Siebs in eine Petrischale zurück und untersuchen Sie den Inhalt unter einem Stereomikroskop. Bei Fatwürmern oder Bluttrematoden öffnen Sie mit einer Schere jeden Abschnitt des Verdauungstrakts.

Kratzen Sie die Schleimhaut ab und untersuchen Sie sie sorgfältig auf das Vorhandensein großer Parasiten. Die Psci von Encanto Cephas sind oft tief in die Darmwand eingebettet. Verwenden Sie daher bei Bedarf eine Pinzette und/oder eine kleine Schere, um sie vorsichtig aus dem Gewebe zu ziehen.

Legen Sie jeden offenen Abschnitt unter fließendes Wasser und waschen Sie den Inhalt in ein 106-Mikrometer-Sieb. Öffnen Sie dann das Herz und die großen Blutgefäße, die Luftröhre sowie die Harn- und Gallenblase und untersuchen Sie den Inhalt. Auf die gleiche Weise können Sie mit einer scharfen Klinge und einer Pinzette feste Organe wie Leber, Lunge, Niere, Milz und Bauchspeicheldrüse aufschneiden und zerkleinern, den Inhalt waschen und untersuchen. Notiere die Arten von Parasiten.

Habe die Anzahl der einzelnen Typen und die Organe gefunden, in denen sie gefunden werden. Beschriften Sie Fläschchen oder Gläser, indem Sie ein kleines Stück einer einfachen Karteikarte mit Bleistift beschriftet hineinlegen, um Helme für spätere genetische Studien aufzubewahren. Legen Sie sie zuerst direkt in Ethanol.

Nachdem Sie die Probe für ein bis mehrere Tage fixiert haben, geben Sie sie zur Langzeitlagerung in ein Fünf-Milliliter-Glasfläschchen, das mit 70 % Ethanol gefüllt ist. Um Trematoden zu konservieren, legen Sie lebende Proben auf ein Glasmikroskop, schieben Sie einen Tropfen Kochsalzlösung hinein, tragen Sie einen Glasdeckglas auf und führen Sie den Objektträger über eine Flamme, ohne die Kochsalzlösung zu kochen. Lassen Sie dann den Objektträger in eine Petrischale fallen, die Alkohol, Forminessigsäure oder eine FA enthält und lassen Sie den Deckel abschwimmen

.

Fixieren Sie tote Trematoden 48 Stunden lang in einem FA oder einem 10%gepufferten Formin, bevor Sie sie zur Langzeitlagerung in ein mit 70%Ethanol gefülltes Glas umfüllen. Um estos zu fixieren, entspannen Sie lebende Tiere in einer Petrischale, indem Sie sie mit fast kochendem Wasser übergießen und dann zur Langzeitlagerung in ein mit 70%igem Ethanol gefülltes Glas umfüllen. Entspannen Sie lebende Encanto-Cephas, indem Sie sie für ein bis mehrere Stunden in eine Petrischale mit Leitungswasser in den Kühlschrank stellen, bis der Rüssel vollständig abgewandt ist.

Füllen Sie sie zur Langzeitlagerung in ein mit 70 % Ethanol gefülltes Glas oder einen FA um. Töte kleine oder zerbrechliche Nematoden und heißes 70%iges Ethanol ab und konserviere es in einem Glas, das mit 70%Ethanol und 5%Glycerin gefüllt ist, um es abzutöten. Mittelgroße bis große Nematoden.

Legen Sie sie in kalte Eisessig und geben Sie sie nach 15 Minuten in ein Glas, das mit 70 % Ethanol und 5 % Glycerin gefüllt ist. Bereiten Sie Harris Hematin vor, indem Sie Hämatin und Alkohol auflösen und Ammoniumaluminiumsulfat in überhitztem Wasser auflösen. Beide Lösungen mischen und zum Kochen bringen.

Dann Natriumjodat hinzufügen und zwei bis drei Minuten kochen lassen. Wenn die Lösung abgekühlt ist, wird die Lösung mit 5 41 Filterpapier filtriert, um Trematodes estos zu verschmutzen, und Cephas über Nacht in Harris Hematin oder halbhalbem Karmin dekantieren, um die Proben aufzubewahren. In 70%iges saures Ethanol geben, bis die Organe sichtbar sind.

Um die Verfärbung zu stoppen, werden die Proben mindestens 30 Minuten lang auf 70 % basisches Ethanol umgefüllt. Dehydrieren Sie die Proben in einer Ethanolserie und verwenden Sie Xylol oder Methylsalicylat, um sie zu reinigen, um die Proben auf einen Objektträger zu montieren, fügen Sie einen Tropfen Canada Bossum und ein Deckglas hinzu. Lassen Sie kleine bis mittelgroße Nematoden und Encanto-Cephas über Nacht trocknen, indem Sie sie in Halterungen aus Lact Phenol auf einen Objektträger legen und 15 bis 30 Minuten lang mit einem Deckglas abdecken. Für große Nematoden und Encanto Cephas.

Bis

zu 60 Minuten in 80% Phenol legen. Untersuchen Sie unter einem Lichtmikroskop, um die Freigabe kleinerer Strukturen für die Untersuchung des culex atos zu überprüfen. Schneiden Sie es ab und legen Sie es auf die Menge Lactophenol.

Auf einem Objektträger. Verwenden Sie ein Deckglas, um den Culex zu quetschen, um das Messen und Zählen der Rosen-Sternhaken zu ermöglichen. Schneiden Sie das vordere Ende ab und montieren Sie Foss auf ein Mikroskop.

Schieben Sie es unter ein paar Tropfen Lact Phenol oder in ein Glycerin-Gelee für eine dauerhafte Montage. Betrachten Sie die Mundwerkzeuge unter einem Lichtmikroskop. Nach dem Abschneiden der Schwänze großer Nematoden und dem Einbetten in Lactophenol beobachten Sie die ventralen Paoli und die Morphologie der Männchen unter einem Lichtmikroskop mit den in diesem Video beschriebenen Methoden.

Eine Umfrage zu den Helmen der Maskenspitzmaus Sox-Szenarien wurde in Missoula County, Montana, durchgeführt. Zwischen 2007 und 2011. Insgesamt 56 Spitzmäuse wurden aus Fallgruben geholt und innerhalb von zwei Stunden nach dem Tod untersucht.

Die Gesamtprävalenz der Infektion lag bei 96 %, nur zwei Spitzmäuse waren frei von Parasiten. Es wurden 15 Arten von Helmen identifiziert, darunter neun Arten von Estos und sechs Arten von Nematoden. Eine Art der Esto-Gattung staphylo authorities war bisher unbeschrieben.

Zu den infizierten Organen gehörten der Dünndarm, der Magen, die Lunge und die Harnblase. Die Gesamtinfektionsintensität reichte von sieben bis 234 Würmern pro infizierter Wirtsart, der Reichtum oder die Anzahl der Helmarten pro infiziertem Wirt reichte von eins bis acht mit einem Mittelwert von 4,1 Nach der Beherrschung. Diese Technik kann bei einem kleinen Säugetier wie einem Eichhörnchen mit ein bis zwei Rs und bei einem größeren Säugetier wie einem Waschbären mit vier bis fünf Rs durchgeführt werden.

Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein sehr gutes Verständnis dafür haben, wie man Helme von Wildtieren sammelt, konserviert und identifiziert.

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Schlüsselwörter: Helminthe Nematod Akanthocephalan Trematod Cestode Autopsie Sieb Mikroskop Fixierung Clearing Färbung Artbestimmung Wirbeltier

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