Name: Milchauffangmethoden für Mäuse und Reeves Muntjac Deer (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-07-19T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 34 s
Description: Erfahren Sie eine kostengünstige Methode zur Milchgewinnung bei Mäusen und Reeves Muntjac Deer mittels Oxytocin und manueller Expression. Diese Technik ermöglicht Forschung zur passiven Immunität und Pathogenübertragung.

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Diese Experimente wurden durch den NIH-Zuschuss #RAI093634A finanziert. Wir danken Jenny Powers, DVM, PhD, für ihre Hilfe beim Melken von Muntjaks.

1. Maus Melken Protokoll Die in diesem Protokoll beschriebenen Verfahren wurden durch IACUC genehmigt. 1. Trennung des Dam von Offspring <ol><li> Wählen Sie den Damm, um gemolken zu werden. Wählen Sie einen Damm mit einem Wurf von 4 oder mehr Welpen, die 8-12 Tage nach der Geburt zu bieten maximale Milchsammel-Sammlung ist zwar zu jedem Zeitpunkt nach der Geburt bis zu 21 Tagen möglich. </li><li> Trennen Sie die Staumauer aus ihrem Wurf mindestens 2 Stunden vor dem Melken. Hinweis: Sollte ein Wunsch, mehr als ein Damm in einem bestimmten Zeitraum zu melken, ist es akzeptabel, die Dämme getrennt im gleichen Käfig mit ausreichend Nahrung und Wasserversorgung unterzubringen. </li></ol> 2. Verabreichung von Oxytocin, Anästhesie und Augen Schmiermittel <ol><li> Verwalten Sie 2 IE / kg von Oxytocin intraperitoneal (IP). Oxytocin ist ein Hormon, das in den Milchdrüsen von säugende Weibchen wirkt, um die Freisetzung von Milch zu stimulieren. Oxytocin kann fr erworben werdenom ein Tierarzt. </li><li> Verwalten eines Narkosemischung, die 80 bis 100 mg / kg Ketamin in Kombination mit 5-10 mg / kg Xylazin IP. So könnte beispielsweise eine 10 ml Stamm Anästhetikagemische im Voraus für Mäuse mit einem Gewicht ca. 30 g vorbereitet werden und würde 0,1 ml Xylazin, 8,9 ml H 2 O und 1,0 ml Ketamin enthalten. 0,25 ml Gesamt Betäubung wird eine Maus dieser Größe für ca. 20-30 min zu sedieren, die ausreichend Zeit für Milchsammel bieten sollte. Hinweise: Um festzustellen, dass das Tier betäubt wurde erfolgreich ist, setzen sie auf dem Bauch auf einer festen Oberfläche; sie sollte nicht zu bewegen ihre Füße oder der Versuch, auf die Füße steigen, wenn sie vollständig betäubt wird. Im Falle einer Maus nicht vollständig mit der ursprünglichen Dosis betäubt, kann der Forscher ein weiteres verwalten ¼ oder ½ der ursprünglichen Dosis des Narkosegemisch je nach Größe der Maus und / oder das Niveau der Sedierung, die die Maus bereits erreicht hat . Allerdings könnte dies increase die Chance auf eine negative Reaktion auf Anästhesie, und kann auch in der Maus ist mehr tief anästhesiert und / oder für eine längere Zeit betäubt führen. Hinweis: Wenn mehr als ein Melken Damm, ist es notwendig, Oxytocin und Betäubungsspritzen aufgrund der kurzen Halbwertszeit von Oxytocin und Sedierung Zeiten für Ketamin und Xylazin staffeln. </li><li> Eine kleine Menge von Augen Schmiermittel auf die Ecke jedes Auge und verbreiten, um die Augen der Maus vor dem Austrocknen während der Narkose zu vermeiden. </li></ol> 3. Milchauffang Die Milchsammlung wird am einfachsten mit zwei Forschern durchgeführt: ein Forscher, um die narkotisierten Maus zu halten, während die Milch (als R1 bezeichnet) und ein Forscher, um die Milch (R2) sammeln manuell abzugeben. Dieses Verfahren kann auch mit einer Person durchgeführt werden, wenn die Maus auf einer ebenen Fläche befestigt ist, um Schaden zu vermeiden. <ol><li> R2 sollte mit sterilem Alkoholtupfer ausgestattet werden, einen P-200 pipEtman, eine saubere Pipettenspitze für jede Maus und einen Behälter, um die Milch, wie ein 1,5-ml-Eppendorf-Röhrchen oder einem 1,2 ml Kryoröhrchen (siehe Tabelle der Materialien) zu halten. </li><li> Wie der Oxytocin zu wirken beginnt, wird Milch in den Brustbereich Enttäuschung der Maus die sichtbar werden (siehe Abbildung 1A). R1: Packen Sie eine sterile Alkohol Prep Pad und wischen Sie die Brustfläche der Maus den Bereich vor dem Melken reinigen. Manuell Ausdruck Milch aus der Zitze mit dem Daumen und Zeigefinger, um sanft zu massieren und drücken die Brustgewebe in einer Aufwärtsbewegung, bis ein sichtbarer Wulst Milch beginnt an der Basis des Saugers bilden. </li><li> Drücken Sie die P-200 Pipetman Kolben, um seine erste Station, um Luft aus der Pipettenspitze freizugeben und die Vorbereitungen für Milchsammel. </li><li> Positionieren Sie die Pipettenspitze an der Spitze der Tropfen Milch, und ziehen Sie die Milch in die Pipettenspitze durch langsames Lösen Druck auf den Kolben. Achten Sie darauf, um die Spitze zu nahe an der Zitze oder die Haut gesetzt (sieheAbbildung 1b). Es ist nicht notwendig, um den Kolben vollständig zu lösen, da dies die Milch bis hin zu der Oberseite der Pipettenspitze zu ziehen und wird es schwierig, die oft viskose Milch in den Aufnahmebehälter auszustoßen. </li><li> Vertreibt die Milch in den Behälter mit dem Daumen, um den Kolben über den ersten Anschlag drücken (siehe Abbildung 1C). Zur Vertreibung von Kleinmengen zu erleichtern, drücken Sie die Pipettenspitze an der Seite der Röhre, so dass keine Flüssigkeit verloren geht. </li><li> Weiterhin Milch aus jeder Zitze manuell auszudrücken, Bewegen entweder im Uhrzeigersinn oder gegen den Uhrzeigersinn, um nicht alle Zitzen überspringen. Es ist akzeptabel und sinnvoll, zurück zu kommen und immer wieder ausdrücken Milch aus der Zitze gleiche sollte es mehr Milch als andere zu produzieren. </li></ol> 4. Betäubungsmittel Reversal in der Dam <ol><li> In den meisten Fällen ist es für die Mutter zu beginnen zu beginnen, während des Melkvorgangs aufwachen. Ist dies nicht der Fall, legen Sie die Staumauer in einem cage indirekt unter einer Wärmequelle, wie einen beheizten zirkulierenden Decke, bis sie beginnt, um aufzuwachen. Hinweis: Da die Mutter beginnt zu erwachen, halten genaue Beobachtung ihrer Tätigkeit, bis sie in der Lage, über ihren Käfig auf ihrem eigenen Fuß ist. </li><li> Nachdem der Damm über den Käfig in Bewegung, ohne Kampf, legen Sie sie zurück in ihre ursprüngliche Käfig mit ihrem Wurf. Keine negativen Auswirkungen haben, in Bezug auf die Welpen &#39;Fähigkeit, nach Milchsammel füttern festgestellt worden. </li></ol> 2. Muntjaks Melk-Protokoll Die in diesem Protokoll beschriebenen Verfahren wurden durch IACUC genehmigt. 1. Trennung der Doe von Offspring <ol><li> Wählen Sie das doe gemolken werden. Reeves &#39;muntjac Hirsche in der Regel geben Geburt ein Kitz 2. Milch Die Hirschkuh am Tag nach der Geburt, um das Kitz Möglichkeit, den Zugang zu essentiellen Nährstoffe im Colostrum 8 gewinnen können. Hinweis: Die Kitz in der Regel versteckt und nicht während der proc wiederEDURE; Trennung von der Mutter-Kind-Paar ist nicht erforderlich. </li></ol> 2. Verabreichung von Oxytocin, Anästhesie und Augen Schmiermittel <ol><li> Verwalten 10 IU / kg Oxytocin intramuskulär (IM). Oxytocin ist ein Hormon, das in den Milchdrüsen von säugende Weibchen wirkt, um die let-down von Milch zu stimulieren. Oxytocin kann von einem Tierarzt erworben werden. </li><li> Verwalten Sie die BAM Betäubung IM Butorphanol 11 enthält 0,45 mg / kg, Azaperon 0,25 mg / kg, medetomadine 0,07 mg / kg. Eine Dosis des Narkose BAM Mischung eine muntjac für ca. 20-30 Minuten, die genügend Zeit für die komplette Milchsammlung bietet sedieren. Eine weitere Option für Narkose ist Midazolam bei 1-2 mg / kg, die eine muntjac für ca. 10-15 min beruhigen wird. Während dies eine angemessene Zeit für Milchsammlung, ist diese Betäubung schneller verstoffwechselt als BAM und das Tier kann versuchen, am Ende des kürzeren Zeitraum zu entkommen. Hinweis: Minimale Reaktion auf Schmerz, Kleinere Reflexe bei Berührung die Ohren, gefolgt von der Fähigkeit der R1, die MJ ohne Kampf zu halten bedeutet, dass das Tier wurde erfolgreich betäubt. Anmerkung: In dem Fall eines muntjac nicht vollständig mit der ursprünglichen Dosis anästhesiert kann der Forscher eine weitere verabreichen ¼ oder ½ der ursprünglichen Dosis des Anästhetikums Mischung abhängig von der Größe des Tieres und / oder das Niveau der Sedierung, die bereits hat erreicht. Dies könnte jedoch die Möglichkeit einer negativen Reaktion auf die Anästhesie zu erhöhen, und kann auch in der muntjac wobei tiefer betäubt und / oder für eine längere Zeit betäubt führen. </li><li> Tragen Sie eine kleine Menge des Schmiermittels in die Ecke eines jeden Auges und die Ausbreitung auf die Augen des muntjac die vor dem Austrocknen während der Narkose zu vermeiden. </li></ol> 3. Milchauffang Die Milchsammlung wird am einfachsten mit zwei Forschern durchgeführt werden; ein Forscher, die in narkotisierten muntjac haltendie Runde, während die Milch (als R1 bezeichnet), und eine zweite Forscher, den Kopf des muntjac in einem komfortablen und sicheren Position zu halten und die Milch (R2) sammeln manuell abzugeben. <ol><li> Je nach der Narkose verwendet wird, sollte das Melken entweder 1) in ihre Stifte geführt werden, um einen sicheren Platz für sie zu sorgen sollten sie aufwachen während des Verfahrens (Midazolam-induzierten) oder 2) in einer Bettwäsche frei Vorraum Sauberkeit halten (BAM- induziert). </li><li> R1 und R2 sollte mit Ethanol getränkten Gaze und mehrere 15 ml konischen Polypropylen-Röhrchen, um die Milch zu halten ausgestattet werden. </li><li> Wie der Oxytocin zu wirken beginnt, wird Milch Enttäuschung geworden in den Brustbereich des muntjac sichtbar. R1: Sanitize behandschuhten Hände und Finger, sowie das gesamte Euter und jede einzelne Zitze des Tieres mit dem Ethanol-getränkten Gaze. R2: Halten Sie den Kopf des muntjac in einer sicheren und bequemen Position, um eine einfache Atem ermöglichen und zu verhindern, Pansen Aufstoßen. Halten Sie die Sammelröhrchen cl<html> ose an die Zitze wird, ohne es zu berühren, Verunreinigungen zu verhindern gemolken. </li><li> Express-Milch aus einer Zitze mit Hilfe der Daumen und Zeigefinger drücken Sie leicht die Brustgewebe in einer Aufwärtsbewegung, bis die Zitze mit Milch angeschwollen, und sanft rollen die Milch aus der Zitze und in das Rohr, das hält R2 (siehe Abbildung 2 ). </li><li> Hinweis: Die Milch kommt in einem Bach, so ist es wichtig für R2 zu haben, das Sammelrohr so ​​positioniert, dass wenig bis gar keine Milch verschwendet werden. </li><li> Die muntjac Euter ist in Quadranten unterteilt. R1: Weiter zur Milch aus jedem Quadranten ausdrücken, bis die Milch nicht mehr so ​​leicht fließt. Wenn Milch nicht von einer Zitze ausgedrückt werden, ausdrücklich von allen anderen Zitzen vor der Rückkehr in die erste. Es ist akzeptabel und sinnvoll, zurück zu kommen und immer wieder ausdrücken Milch aus der Zitze gleiche sollte es mehr Milch als andere zu produzieren. </li></ol> 4. Betäubungsmittel Reversal in der Doe t &quot;&gt; Es ist üblich, Midazolam-induzierten doe zu beginnen, um beim Melken aufwachen. In den meisten Fällen wird das Reh versuchen, zu entkommen, bevor die gesamte Milch wurde zum Ausdruck gebracht. Minor Zurückhaltung ist in dem Bemühen, die Milch zu erhöhen Ausbeute, aber die Sicherheit und den Komfort der beiden Forscher und der Hirschkuh sind gleichermaßen wichtig. <ol><li> Verwalten Atipamezol bei 2,5 mg / mg subkutan medetomadine für eine schnelle Umkehr der BAM betäubt doe. Hinweis: Bei beiden Arten der Narkose, ist es erforderlich, eine enge Beobachtung des doe zu halten, bis sie in der Lage, auf eigene Faust, ohne zu stolpern oder fallen zu Fuß ist, und ist in der Lage zu essen und zu trinken, ohne Angst vor Aspiration oder Ersticken. Keine negativen Auswirkungen haben, in Bezug auf die Fähigkeit, Kitz nach Milchsammlung pflegen festgestellt worden. </li></ol>

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<li>Pei, K., Taber, R., O'Gara, B., Wang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Breeding+cycle+of+the+Formosan+Reeves+muntjac+%28Muntiacus+reevesi+micrurus%29+in+northern+Taiwan%2C+Republic+of+China%5BTitle%5D)+AND+%22Mammalia%22%5BJournal%5D)">Breeding cycle of the Formosan Reeves muntjac (Muntiacus reevesi micrurus) in northern Taiwan, Republic of China.</a> Mammalia. 59 (2), 223-228 (1995).</li>
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</ol>

Die Autoren haben nichts offenzulegen.

Maus Es gibt mehrere Faktoren zu berücksichtigen, wenn das Sammeln Milch von einer Maus zu machen, einschließlich 1) die Zeit, die für die Sammlung beiseite gesetzt, 2) die Dosis von Oxytocin verabreicht, 3), wie viele Jungtiere die Mutter ist derzeit Pflege und 4) die Menge der Zeit, die seit der Geburt zum Zeitpunkt der Sammlung durchlaufen hat. Mit früheren Studien als Richtlinien, machten wir uns um die Bedingungen für die Milchleistung zu optimieren. <p class="jove_...

Tiermodelle geben Einblick in Krankheitspathologie, die nicht durch in vitro-Analyse gewonnen werden können. Um die wirksamsten Ergebnisse zu erzielen, ist es wichtig, ein Tiermodell, das eng mit der Krankheit und verwandte Spezies von Interesse verwendet wird. Zum Beispiel, die Reeves &#39;muntjac (Muntiacus reevesi), eine kleine asiatische Hirsche 1,2 und transgenen Mäusen, die Hirsch Prion-Protein (CerTgPrP) 3 exprimieren sind nützlich, Tiermodelle für Hirscharten. Beide Arten sind polyestrous, so dass das ganze Jahr über Zucht, und somit eine konsistente Quelle für schwangerschaftsbedingten Gewebe und Flüssigkeiten, um spezifische Mechanismen in Hirsch Biologie zu studieren. Untersuchungen von Milch haben eine breite Palette von Anwendungen, die einfach (und kostengünstig) sind in Tiermodellen erreicht als beim Menschen. Forscher könnten Milch und Kolostrum als eine potenzielle Quelle von 1) Übertragung von Infektionskrankheiten zu untersuchen, 2) Immunglobuline von Mutter zu Kind in die Entwicklungs übertragenpment der passiven Immunität 4 und 3) Lactoferrin, ein Protein in der menschlichen Muttermilch in passive Immunität, die Forscher versuchen derzeit, beteiligt gefunden kommerziell produzieren 5. Sammeln eine erhebliche Menge an Milch von Kleintieren kann sich als eine schwierige Aufgabe sein. Rogers vorgeschlagen, einen Ansatz für die Milch von Ratten 6, die anschließend in Mäuse verwendet wurde, zu sammeln. DePeters und Hovey vorgeschlagen zwei Verfahren zur Milchsammlung, eine mit einer manuell erzeugten Unterdruck durch ein Gummipipettenkolben in eine Pasteur-Pipette befestigt erzeugt, und einem zweiten, das den Aufbau einer Melkeinheit, die dann an eine Vakuumquelle angeschlossen (wie erforderlich wie einen Wasserhahn), um Maus Milch 7 ernten. Hier schlagen wir eine einfache, kostengünstige Methode zur Erfassung von Milch von Mäusen und Reeves &#39;muntjac Rehe, die nur leicht verfügbaren Laborausstattung und grundlegende technische Fähigkeiten erfordert. Unsere Methode liefert ausreichend Milchmengen für verschiedeneAnwendungen.

<table><tbody><tr><td colspan="4">Materialien&#8212; </td></tr><tr><td>Maus-Ketamin (KetaVed 100 mg/ml) (Dosis: 80-100 mg/kg)</td><td>MWI/Vedco</td><td>011075</td><td></td></tr><tr><td>Xylazin (TranquiVed 100 mg/ml) (Dosis: 5-10 mg/kg)</td><td>MWI/Vedco</td><td>NADA 139236</td><td></td></tr><tr><td>Augengleitmittel</td><td>MWI/Apexa</td><td>701013</td><td></td></tr><tr><td>Oxytocin (2 IE/kg)</td><td>Vet One</td><td>501013</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">Materialien&#8212; Muntjac</td></tr><tr><td>Midazolam (1-2 mg/kg)</td><td>Amerisource Bergen Drug Corp</td><td>924326</td><td>Optional: Forscher können Midazolam entweder allein oder BAM-Kombination als Anästhetikum</td></tr><tr><td>verwenden Butorphanol-Tartrat (Torbugesic) (0,45 mg/kg)</td><td>Fort Dodge Animal Health</td><td>NADA 135-780</td><td></td></tr><tr><td>Azaperon-Tartrat (0,25 mg/kg)</td><td>ZooPharm</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Medetomadin HCl (0,07 mg/kg)</td><td>ZooPharm</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Antipamezolhydrochlorid (Antisedan) (Dosis: 0,25 mg/kg)</td><td>Orion Corporation</td><td>NADA 141-033</td><td></td></tr><tr><td>Oxytocin (10 IE/kg)</td><td>Vet One</td><td>501013</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">Ausrüstung&#8212; Maus</td></tr><tr><td>P-200 Pipetman</td><td>Gilson</td><td>F123601</td><td></td></tr><tr><td>200 &mu; l Pipettenspitzen</td><td>Light Labs</td><td>B-2004-SH</td><td></td></tr><tr><td>1 ml Spritzen</td><td>MWI</td><td>005427</td><td></td></tr><tr><td>27 G Nadeln</td><td>MWI</td><td>002031</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">Ausrüstung&#8212; Muntjac</td></tr><tr><td>15 ml konische Röhrchen</td><td>VWR</td><td>21008-918</td><td></td></tr><tr><td>22 G Nadeln</td><td>MWI</td><td>873</td><td></td></tr><tr><td>3 ml Luer-Lock-Spritzen</td><td>MWI</td><td>001377</td><td></td></tr></tbody></table>

milchauffangmethoden für mäuse und reeves muntjac deer

Milk Collection Methods for Mice and Reeves' Muntjac Deer

Tiermodelle werden häufig in Forschungslaboratorien verwendet, um das zu erreichen, was normalerweise im nativen Wirt eines Krankheitserregers als unpraktisch angesehen würde. Die Milchgewinnung von Tieren gibt Wissenschaftlern die Möglichkeit, viele Aspekte der Fortpflanzung zu untersuchen, einschließlich vertikaler Übertragung, passiver Immunität, Biologie der Brustdrüse und Laktation. Die Gewinnung ausreichender Milchmengen für diese Studien ist eine schwierige Aufgabe, insbesondere aus Kleintiermodellen. Hier veranschaulichen wir eine kostengünstige und einfache Methode zur Milchgewinnung bei Mäusen und Reeves-Muntjakhirschen, die keine spezielle Ausrüstung oder umfangreiche Schulung erfordert. Für diese spezielle Methode sind zwei Forscher erforderlich: einer, um die Milch abzupumpen und das Tier zu stabilisieren, und einer, der die Milch in einem geeigneten Behälter aus einem Muntjak- oder Mausmodell sammelt. Das Mausmodell erfordert außerdem die Verwendung eines P-200-Pipettierers und entsprechender Pipettenspitzen. Obwohl diese Methode kostengünstig und relativ einfach durchzuführen ist, sollten die Forscher darauf hingewiesen werden, dass eine Betäubung des Tieres für eine optimale Milchgewinnung erforderlich ist.

Maus Aus unseren Experimenten haben wir festgestellt, dass es möglich ist, ungefähr 100-400 &amp;mgr; l Milch einer Labormaus, hängt von mehreren Variablen zu sammeln. Diese Variablen umfassen 1) die Zeit für die Sammlung beiseite gesetzt, 2) die Dosis von Oxytocin verabreicht, 3), wie viele Jungtiere die Mutter ist derzeit Pflege und 4) die Menge der Zeit nach der Geburt. Unsere Studien haben gezeigt, dass die höchste Ausbeute erhalten wird, wenn die Dämme von ihren Nachkom...

Die Milchgewinnung aus Tiermodellen erleichtert verschiedene Forschungswege: das Verständnis der passiven Immunität, die Identifizierung von Krankheitserregern, die für die vertikale Übertragung verantwortlich sind, und durch die Verwendung transgener Mäuse sogar die kommerzielle Produktion von Proteinen, die in menschlicher Muttermilch vorkommen. Hier veranschaulichen wir eine einfache Methode zur Milchgewinnung bei Mäusen und Reeves-Muntjakhirschen.

Milchauffangmethoden für Mäuse und Reeves Muntjac Deer

Animal models are commonly used throughout research laboratories to accomplish what would normally be considered impractical in a pathogen&#8217;s native ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, zu demonstrieren, wie Milch von einer Maus oder einem Reeve's Mutt Jack Deer für eine Vielzahl wissenschaftlicher Experimente gesammelt werden kann. Dies wird erreicht, indem zuerst Oxytocin dem Tier verabreicht wird, um das Ausschüttung von Milch zu stimulieren, anschließend wird das Tier anästhesiert. Danach exprimiert ein Forscher manuell die Milch, während ein zweiter Forscher sie auffängt.Der letzte Schritt besteht darin, die Sicherheit des Tieres sicherzustellen, während es sich von der Anästhesie erholt. Letztendlich können pro Sitzung etwa fünf bis 30 Milliliter Mutt-Jack-Milch oder bis zu 450 Mikroliter Mäusemilch gesammelt werden. Der Hauptvorteil dieser Technik gegenüber bestehenden Methoden, wie solchen, die spezielle Ausrüstung erfordern, liegt darin, dass diese Technik vergleichsweise kostengünstig ist und leicht zu erlernen ist.Diese Methode kann dabei helfen, verschiedene wissenschaftliche Fragen zu beantworten, beispielsweise, ob ein Pathogen über die Muttermilch von der Mutter auf die Nachkommen übertragen werden kann. Personen, die mit dieser Methode noch nicht vertraut sind, werden sich in der Regel entmutigt fühlen, da es Übung erfordert, die Milch korrekt zu exprimieren. Bei diesem Verfahren wird sie Stephanie Fullaway, eine Technikerin aus unserem Labor, unterstützen, um die Freisetzung von Milch bei einer stillenden Maus zu stimulieren.Geben Sie zwei internationale Einheiten Oxytocin pro Kilogramm Körpergewicht intraperitoneal unmittelbar vor der Milchentnahme verabreichen, das Tier anästhesieren und eine kleine Menge Augenschmiermittel auf jedes Auge auftragen, um zu verhindern, dass die Augen der Maus austrocknen, während auf die Wirkung des Anästhetikums gewartet wird. Bereiten Sie einige sterile Alkoholtupfer, eine P-200-Pipette, sterile Pipettenspitzen und einen Behälter zur Aufbewahrung der Milch vor, beispielsweise ein 1,5-Milliliter-Eppendorf-Röhrchen oder ein 1,2-Milliliter-Kryoröhrchen. Die Melkprozedur erfordert zwei Forscher.Ein Helfer fixiert das Tier und presst die Milch aus, während der andere die Milch auffängt. Der Milchaufnehmer sammelt die Milch und achtet darauf, die Sammelgefäße nicht zu kontaminieren. Vor dem Melken reinigt der Milchauspreser den Bereich der Brustdrüse vorsichtig mit einem sterilen Alkoholtupfer.Innerhalb von ein oder zwei Minuten nach der Oxytocin-Injektion wird die Milchausschüttung im Brustbereich der Maus sichtbar. Drücken Sie die Milch manuell aus der Zitze, indem Sie mit Daumen und Zeigefinger das Brustgewebe sanft nach oben massieren und zusammendrücken, bis ein sichtbarer Milstropfen an der Basis der Zitze entsteht. Der Milchsammler drückt nun den Kolben der P-200-Pipette bis zum ersten Anschlag, um Luft aus der Pipettenspitze zu verdrängen und die Milchaufnahme vorzubereiten.Dann positioniert der Milchsammler die Pipettenspitze an der Oberseite des Milchtropfens. Dabei achtet er darauf, die Spitze nicht zu nahe an die Zitze oder die Haut zu bringen, und lässt langsam den Druck auf den Kolben ab, um die Milch in die Pipettenspitze zu ziehen. Die Pipettenspitze wird dabei gegen die Wand des Sammelröhrchens gedrückt, damit keine Flüssigkeit verloren geht. Der Milchsammler verwendet den Daumen, um den Kolben über den ersten Anschlag hinaus niederzudrücken und die Milch in den Behälter zu pressen.Setzen Sie die manuelle Milchentleerung von jedem Zitze fort, wobei Sie sich entweder im Uhrzeigersinn oder gegen den Uhrzeigersinn bewegen. Es ist zulässig, zu einem zuvor behandelten Zitze zurückzukehren, um weitere Milch zu entleeren, insbesondere wenn dieser mehr Milch produziert als andere Zitzen. Sobald die Milchsammlung abgeschlossen ist, lassen Sie die Maus aus der Anästhesie aufwachen.Sobald sich das Tier innerhalb des Käfigs leicht bewegt, stellen Sie es zurück in den ursprünglichen Käfig zu seinem Wurf, um die Milchausschüttung zu stimulieren. Bei laktierenden Reeve-Mut-Jack-Kaninchen verabreichen Sie 10 internationale Einheiten pro Kilogramm Oxytocin intramuskulär und führen anschließend unverzüglich die Anästhesie des Mut-Jack durch. Der Anästhesiegrad gilt als ausreichend, wenn beim Berühren der Ohren nur geringe Reflexe auftreten und der Milchausdrücker das Mut-Jack ohne Gegenwehr halten kann.Als Nächstes wird eine kleine Menge Gleitmittel auf jedes Auge aufgetragen, um zu verhindern, dass die Augen des Mut-Jacks austrocknen. Bestücken Sie sowohl den Milchausdrücker als auch den Milchsammler mit mit Ethanol getränkter Gaze und mehreren 15-Milliliter-Kegelrohren aus Polypropylen zur Aufnahme der Milch. Wenn das Oxytocin zu wirken beginnt, wird die Milchausschüttung im Brustbereich der Mut-Jacks sichtbar. Sowohl der Milchausdrücker als auch der Milchsammler sollten Handschuhe tragen und diese mit mit Ethanol getränkter Gaze desinfizieren. Desinfizieren Sie außerdem den gesamten Euter und jede einzelne Zitze des Tieres mit mit Ethanol getränkter Gaze, wobei Sie den Kopf des Munch Jack in einer bequemen Position halten, um eine ungehinderte Atmung zu ermöglichen und eine Pansenreflux zu verhindern. Der Milchsammler platziert das Sammelröhrchen nahe an der gerade gemolkenen Zitze, ohne sie dabei mit der Haut in Berührung zu bringen.Der Milchausdrücker verwendet Daumen und Zeigefinger, um das Brustgewebe sanft nach oben zu drücken, bis die Zitze mit Milch gefüllt ist, und rollt dann die Milch vorsichtig aus der Zitze in das Röhrchen, das der Milchsammler hält. Die Milch tritt in einem Strahl aus, weshalb es wichtig ist, das Sammelröhrchen so zu positionieren, dass möglichst wenig Milch verloren geht. Das Euter von Mt Jack ist in Quadranten unterteilt. Der Milchausdrücker setzt das Ausdrücken der Milch aus jedem Quadranten fort, bis die Milch nicht mehr leicht fließt. Wenn aus einer Zitze keine Milch ausgedrückt werden kann, wird zunächst von allen anderen Zitzen Milch abgepresst, bevor zur ersten Zitze zurückgekehrt wird. Nach Beendigung der Milchsammlung wird Aamaz subkutan verabreicht, um die Bam-Anästhesie rasch aufzuheben. Schließlich wird die Maus überwacht, bis sie wieder in der Lage ist, selbstständig zu laufen, zu fressen und zu trinken. Diese Abbildung zeigt, dass 100 bis 450 Mikroliter Milch von einer laktierenden Maus gewonnen werden können.Die maximalen Milchmengen wurden acht bis zwölf Tage post partum unter Verwendung von zwei internationalen Einheiten Oxytocin pro Kilogramm Körpergewicht gewonnen. Hier wird die ungefähre Milchleistung einer laktierenden Maus dargestellt, aufgetragen entsprechend der Wurfgröße beim Reeves-Zwergmuntjak. Das pro Sammelvorgang gewonnene Milchvolumen lag zwischen fünf und 30 Milliliter, abhängig vom verwendeten Anästhetikum und dem Zeitpunkt post partum. Die Anfangs- und Enddaten der Milchentnahmen für die Muttertiere des Zwergmuntjaks sind in dieser Tabelle angegeben.Die Milch wurde durchschnittlich nach 80 Tagen gesammelt, wobei der Bereich von 18 bis 150 Tagen reichte. Sobald diese Technik beherrscht ist, kann sie in etwa einer Stunde durchgeführt werden, abhängig davon, von wie vielen Tieren Sie pro Sitzung Proben sammeln möchten. Bei der Durchführung dieses Verfahrens ist es stets wichtig, daran zu denken, dass die Sicherheit der Tiere an erster Stelle steht. Nach diesem Verfahren kann eine Aufbereitung der Milch erforderlich sein, gefolgt von In-vitro-Tests oder Bioassays, die helfen können, weitere Fragen bezüglich der Bestandteile der Milch zu beantworten.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Dieses Protokoll zeigt Methoden zur Gewinnung von Spermien aus den Hoden der Männchen und dann Besamung weiblichen Mäusen. Dieses Verfahren ist nützlich, wenn die genaue Zeit in entwicklungspsychologischen Studien sowie transgene Arbeit benötigt wird.

Harvesting Sperma und künstliche Besamung von Mice

Diese Methode beschreibt, wie zu sezieren und zu bewerten Brustdrüse Entwicklung und Funktion von Mäusen. Abgeschnittene Milchdrüsen sind für den Grad der Entwicklung mit whole mount beurteilt, während Milchspendereflex wird ausgewertet, wobei Oxytocin-basierte myoepithelialen Zelle Kontraktion Assay.

Evaluation der Brustdrüse Entwicklung und Funktion in Mausmodellen

Transabdominaler Ultraschall wird als wirksames, nichtinvasives Mittel zur Beurteilung des Fortpflanzungsstatus bei Reeves' Muntjac-Hirschen beschrieben. Diese Methoden können verwendet werden, um eine frühe Schwangerschaftsdiagnose zu erreichen und die fetale Lebensfähigkeit zu bewerten. Zukünftige Anwendungen dieser Technik umfassen die Schätzung des Schwangerschaftsalters und der Auswirkungen von Mütterkrankheiten auf die fetale Entwicklung.

Transabdominaler Ultraschall für die Schwangerschaftsdiagnose in Reeves' Muntjac-Hirsch

Milch ist eine primäre Nahrungsquelle für das Neugeborene. Die Analyse von Milchbestandteilen kann Aufschluss über mütterliche Faktoren geben, die sich auf die Gesundheit der Nachkommen auswirken. Dieses Protokoll beschreibt eine manuelle Methode zur Entnahme von Milchproben von der laktierenden Ratte, die dann für weitere nachgelagerte Analysen verwendet werden können.

Milchsammlung in der Ratte Mit Kapillarröhrchen und Schätzung der Milchfettgehalt von Creamatocrit

Phänotypische Unterschiede zwischen den Populationen der Cervid können mit Bevölkerung Genetik und Ernährung zusammenhängen; die in freier Wildbahn ist schwierig zu erkennen. Dieses Protokoll beschreibt, wie wir eine kontrollierte Studie entwickelt wo ernährungsphysiologischen Variation ausschied. Wir fanden, dass die phänotypische Variation der männlichen weiß - angebundene Rotwild mehr als Genetik durch Ernährung begrenzt war.

Protokoll für die Beurteilung der relativen Auswirkungen von Umwelt und Genetik auf Geweih und Körperwachstum für eine langlebige Cervid

Diese Studie berichtet Blutentnahme aus Rute Vene bei Mäusen mit einer Absauganlage Rohr mit Brillen Lupe. Unsere Methode ist einfach und für wiederholte Blutentnahme bei Mäusen genutzt werden.

Modifizierte Blutentnahme aus Tail Venen nicht narkotisierten Mäuse mit einem Vakuum Blut Sammelsystem und Brillen Lupe

Dieser Artikel beschreibt und demonstriert die Verabreichung von intranasalen Impfstoffen und die Sammlung von Milch von stillenden Kaninchen (Oryctolagus cuniculus) als Mittel zur Beurteilung der Schleimhautimmunität in einem translational geeigneten Modell der mütterlichen Immunisierung.

Intranasale Immunisierung und Milchsammlung in Studien zur mütterlichen Immunisierung bei neuseeländischen Weißen Kaninchen (Oryctolagus cuniculus)

Hier beschreiben wir die mikropipettengesteuerte Arzneimittelverabreichung (MDA) als eine alternative Methode zur oralen Sonde, die das Versuchstier dazu anregt, Behandlungen ohne weiteres und mit minimalem Stress und Unbehagen einzunehmen.

Verwendung der Mikropipetten-gesteuerten Verabreichung von Medikamenten als alternative Methode zur oralen Sonde in Nagetiermodellen

In diesem Artikel wird beschrieben, wie Sie ein Gerät zusammenbauen, mit dem Milch von Labormäusen gesammelt werden kann. Dieses Gerät ist erschwinglich, tragbar und ermöglicht eine Entnahme von 0,1 bis 0,5 ml Milch durch eine geschulte Person. Ein detailliertes Melkprotokoll ist ebenfalls enthalten.

Eine effiziente Ein-Personen-Technik für die Milchprobenahme von Labormäusen

Hier stellen wir ein Protokoll für eine optimierte Blutentnahmetechnik bei murinen Probanden durch Venenpunktion im Gesicht mit einer Lanzette vor. Wir verwenden diese Technik zusammen mit der durchflusszytometrischen Beurteilung, um zelluläre Phänotypen von transgenen, kongenen und Reporterstämmen zu charakterisieren. Es eignet sich auch für die Serumzytokinanalyse und Diabetesstudien.

Venenpunktion im Gesicht zur Blutentnahme von Mäusen

Erfahren Sie eine kostengünstige Methode zur Milchgewinnung bei Mäusen und Reeves Muntjac Deer mittels Oxytocin und manueller Expression. Diese Technik ermöglicht Forschung zur passiven Immunität und Pathogenübertragung.

Milchauffangmethoden für Mäuse und Reeves Muntjac Deer

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