Question 1

Welche Temperaturbedingungen sind am besten für das Züchten von C. elegans im Labor?

Accepted Answer

C. elegans kann je nach Versuchsanforderungen bei 16, 20 oder 25 °C kultiviert werden. Die Temperatur beeinflusst direkt die Geschwindigkeit des Lebenszyklus: Bei 25 °C vervollständigen Würmer ihren Lebenszyklus 2,1-mal schneller als bei 16 °C. Schnelleres Wachstum bedeutet, dass Würmer schneller reifen, mehr Eier legen und mehr Nahrung verbrauchen, wodurch die Temperaturauswahl für das Versuchsdesign entscheidend ist.

Question 2

Was fressen C. elegans und wie werden sie im Labor gefüttert?

Accepted Answer

C. elegans werden mit OP50 gefüttert, einem standardisierten Stamm von E. coli, der in jedem Wurmlabor weltweit verwendet wird. In freier Wildbahn ernähren sich Würmer von sich zersetzender pflanzlicher Substanz, aber im Labor verzehren sie OP50, das auf Nematodenwachstumsmedium (NGM) Platten oder in flüssigem Medium kultiviert wird. Diese standardisierte Ernährung gewährleistet konsistente experimentelle Bedingungen in Forschungseinrichtungen.

Question 3

Wie stellt man NGM-Platten für die C. elegans-Kultur her und bereitet sie vor?

Accepted Answer

Nematoden-Wachstumsmedien-Inhaltsstoffe mit deionisiertem Wasser kombinieren, mindestens 15 Minuten autoklavieren, dann auf 55 °C abkühlen. Bei Bedarf aseptische Additive hinzufügen, in Petrischalen pipettieren bis zu 2/3 gefüllt, und über Nacht trocknen lassen. Mit OP50 E. coli inokulieren, das auf 10X Konzentration geresuspendiert wurde, über Nacht trocknen, dann vor der Verwendung UV-Licht zur Sterilisation aussetzen.

Question 4

Was ist ein Wurmrad und wie ist es konstruiert?

Accepted Answer

Ein Wurm-Picker ist ein Werkzeug, das aus 30-Gauge-Platin-Iridium-Draht hergestellt wird, der in eine Pasteur-Pipettenspitze versiegelt ist. Der Draht wird am Ende abgeflacht und nach oben gebogen, um eine Schaufel zu bilden, und dann geschliffen. Der Picker ermöglicht es Forschern, Würmer unter einem Präparationsmikroskop einzeln zu manipulieren und zu übertragen, ohne sie oder die Agar-Oberfläche zu beschädigen.

Question 5

Wie werden C. elegans für die Langzeitlagerung eingefroren und wiederhergestellt?

Accepted Answer

Waschen Sie frisch verhungerte Larven in M9-Puffer, übertragen Sie sie in ein Cryotube, fügen Sie gleiches Volumen von 30% Glycerin in M9-Puffer hinzu und lagern Sie sie bei -80 °C. Zum Wiederherstellen, bei Raumtemperatur auftauen, auf frische NGM-Platten mit OP50 pipettieren und bei 20 °C inkubieren. Nach 2-3 Tagen die Tiere auf neue Platten übertragen und eine Generation der Reproduktion vor dem Beurteilen der Phänotypen zulassen.

Question 6

Was passiert mit C. elegans, wenn sie Stress oder Überbevölkerung erfahren?

Accepted Answer

Wenn C. elegans unter Hunger oder Übervölkerung leiden, gehen sie in das Dauerstadium über, ein stressresistentes Larvenstadium, in dem Würmer nicht altern. Dieser Überlebensmechanismus ermöglicht es Populationen, unter widrigen Bedingungen zu überleben, bis Ressourcen wieder verfügbar werden, was Dauerlarven für die langfristige Lagerung und experimentelle Manipulation nützlich macht.

Question 7

Wie wird RNA-Interferenz verwendet, um die Genfunktion in C. elegans zu untersuchen?

Accepted Answer

Forscher bereiten Platten mit E. coli vor, die das Zielgen-dsRNA exprimieren, welche die Würmer konsumieren. Würmer im vierten Larvenstadium werden auf RNAi-Platten übertragen, um Eier zu legen, dann werden die Nachkommen in gewünschten Entwicklungsstadien gesammelt und auf Phänotypen untersucht. Dieser Ansatz schaltet spezifische Gene ab, um ihre Funktion zu bestimmen, und nutzt Erkenntnisse von Entwicklung und Reproduktion von caenorhabditis elegans für die Krankheitsforschung.

Haltung von C. elegans - Bewertungsquiz