Name: Die Xenopus Eizelle Cut-open Vaseline Gap Voltage-Clamp-Technik Mit Fluorometrie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-03-11T14:55:00.000+00:00
Duration: 10 min 57 s
Description: Lernen Sie die Cut-open Vaseline Gap Voltage-Clamp-Technik mit Fluorometrie zur Aufzeichnung von Ionenströmen in Xenopus-Eizellen. Diese Methode ermöglicht präzise elektrophysiologische Untersuchungen mit hoher zeitlicher Auflösung.

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Alle Mitglieder der Washington University in St. Louis Herz Molecular Engineering Lab. Ein Burroughs Willkommen Fund Career Award in der Scientific Schnittstelle - 1010299 (JS).

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Die Autoren haben nichts zu offenbaren.

Die aufgeschnittenen Eizelle Vaseline Spaltspannung Clamp-Technik ermöglicht eine schnelle Auflösung der Daten, geringes Rauschen, mehr Kontrolle über interne und externe Lösung Lösung Zusammensetzung und stabile Aufnahmen über längere Protokolle 19. Diese Vorteile setzen diese Technik abgesehen von der Standard-Zwei-Elektroden-Voltage-Clamp-und Patch-Clamp-Technik. Obwohl spezielle Ausrüstung erforderlich ist, und das Protokoll ist relativ schwierig, treten sehr wenige Probleme, sobald das System optimiert w...

Specialized Spannungsklemmtechniken erlauben die Aufzeichnung von Ionenströmen bei kontrollierten Membranpotentialen. Weit verbreitet Zwei-Elektroden-Spannungsklemme (TEVC) und Patch-Clamp-Techniken liefern zuverlässige Informationen über die elektrophysiologischen Eigenschaften vieler Ionenkanäle. Jedoch haben beide Verfahren Nachteile, die den Erwerb von zuverlässigen Daten für schnellen spannungsabhängigen Natriumkanäle und andere schnell aktivierenden Kanäle in den Membranen, wie sie von Xenopus Oozyten zu verhindern. Die Bezanilla und Stefani Laboratorien entwickelt folglich die aufgeschnittenen Spalt Vaseline Voltage-Clamp Technik (COVG) für Oozyten 2. Die Technik wurde häufig angewendet, um aufzuzeichnen, Na +, K + und Ca 2 +-Kanäle 3-8. COVG während der Aufzeichnung wird ein heterologes Protein-exprimierenden Oozyten Membran in drei Bereiche unterteilt. Die Ionenstrom-Daten von dem oberen Bereich der Eizelle als die aufgezeichneteBad um den oberen Bereich auf einen Befehl Potential, das leicht und schnell geändert werden kann, eingespannt ist. Der mittlere Bereich schützt gegen Leckströme, indem sie auf dem gleichen Potential wie der Kopfbereich 9 eingespannt. Der Bodenbereich ist, wo Eizelle Öffnung (aufgeschnittenem) durch die Verwendung eines Saponin-Lösung oder einer Kanüle erfolgt. Chemische oder manuelles Öffnen der Membran im Bodenbereich ermöglicht die Steuerung der internen Potential, das an Masse geklemmt ist, und damit ist das Zellinnere angrenzend an die untere Kammer Lösung. Perfusion von Lösungen in die untere Kammer können die Eigenschaften der inneren Umgebung anzupassen, während Lösungsaustausch in der oberen Kammer verändert die äußere Umgebung. <img alt="Figur 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51040/51040fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51040/51040fig1.jpg" width="500px" /> Fig. 1 ist. Eizellen Cut-Voltage-Clamp Öffnen Bad Setup-Übersicht. (A) TopSicht auf den drei Bädern voneinander getrennt. Die Abmessungen der Kammern für COVG sind in der Figur angezeigt. (B) Seitenansicht des Bäder-Setup in Testposition. <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/51040/51040fig1highres.jpg" target="_blank">Klicken Sie hier für eine größere Ansicht</a> . Die Vorteile der Technik COVG sind niedrige Stromrauschen (1 nA bei 3 kHz), Steuerung der Ionenzusammensetzung der externen Medien, die Fähigkeit, die internen Medien, schnelle Zeitauflösung (20-100 Mikrosekunden-Zeitkonstante des Zerfalls des modulieren Kapazität transient), und stabile Aufnahmen für mehrere Stunden 9. Die Nachteile sind, dass es erfordert spezielle Ausrüstung und es ist schwieriger durchzuführen, verglichen mit zwei Elektroden-Spannungsklemm (TEVC) 10. Während die COVG Ansatz erfordert hoch spezialisierte Ausrüstung und komplizierte Verfahrenselemente, ist es für den Erwerb von wertvollen erlauben könnenkönnen elektrophysiologische Daten. Diese Daten, wie Anschnittströme mit schneller Kinetik und Schwanzströme 4, ohne einige der Fragen, mit anderen Klemmspannung Protokolle einschließlich Kanal heruntergekommenen verbunden aufgezeichnet werden. Kleinere Änderungen an der COVG Setup kann für den Einsatz von Temperaturregler und Spannungsklemme Fluorometrie (VCF) zu ermöglichen. Die Einbeziehung der Voltage-Clamp-Fluorometrie Elemente innerhalb der COVG Montage kann die Datenausgabe zu erhöhen durch die Übertragung die Möglichkeit, Protein Konformationsänderungen zu überwachen, während gleichzeitig Aufnahme von Strom 13.11.

<table><tbody><tr><td>Externe Lösung</td><td>Marke</td><td>Katalognummer</td> <td>[Endgültig], Gewicht oder Volumen</td></tr><tr><td>N-Methyl-D-glukamin (NMDG)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M2004</td><td>25 mM</td></tr><tr><td>MES Natriumsalz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M5057</td><td>90 mM</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Research Products International</td><td>H75030</td><td>20 mM</td></tr><tr><td>Calciumhydroxid</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>239232</td><td>2mM</td></tr><tr><td>MES Hydrat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M8250</td><td>variabel (pH bis 7,4)</td></tr><tr><td>Interne Lösung</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>N-Methyl-D-glukamin (NMDG)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M2004</td><td>105mM</td></tr><tr><td>MES Natriumsalz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M5057</td><td>10mM</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Forschung Produkte International</td><td>H75030</td><td>20mM</td></tr><tr><td>Ethylenglykol-bis(2-aminoethylether)-N,N,N',N'-Tetraessigsäure (EGTA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E4378</td><td>2mM</td></tr><tr><td>MES Hydrat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M8250</td><td>variabel (pH bis 7,4)</td></tr><tr><td>Depolarisationslösung</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>221473</td><td>110mM</td></tr><tr><td>Magnesiumchlorid</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M8266</td><td>1,5mM</td></tr><tr><td>Calciumchlorid</td><td>Caisson</td><td>C021</td><td>0,8 mM</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Research Products International</td><td>H75030</td><td>10 mM</td></tr><tr><td>Pipettenlösung</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>221473</td><td>3M</td></tr><tr><td>Saponin Lösung</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Saponin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>47036</td><td>0,125 g</td></tr><tr><td>Intern Lösung</td><td>Siehe oben</td><td></td><td>50 ml</td></tr><tr><td>Agarbrückenlösung</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>N-Methyl-D-Glucamin (NMDG)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M2004</td><td>100 ml 1 M</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Forschungsprodukte International</td><td>H75030</td><td>1,2 g</td></tr><tr><td>MES-Hydrat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M8250</td><td>variabel (pH bis 7,4)</td></tr><tr><td>Granulierter Agar</td><td>Forschungsprodukte International</td><td>A20250</td><td>3%</td></tr><tr><td>NMDG Lagerlösung</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>NMDG, HEPES, MES Hydratlösung</td><td>siehe oben</td><td></td><td>40ml</td></tr><tr><td>Wasser</td><td></td><td></td><td>60ml</td></tr><tr><td>Name des Materials / der Ausrüstung</td><td>Firma</td><td>Katalognummer</td><td>Kommentare/Beschreibung</td></tr><tr><td>Hochleistungs-Eizellklemme</td><td>Dagan</td><td>CA-1B</td><td></td></tr><tr><td>Datenerfassungssystem</td><td>Axon CNS</td><td>&nbsp; Digidata 1440A</td><td></td></tr><tr><td>Oszilloskop</td><td>Tektronix</td><td>TDS 210</td><td></td></tr><tr><td>Rack-Netzfilter</td><td>APC &nbsp;</td><td>G5</td><td></td></tr><tr><td>Temperaturregler für Heiz-/Kühlbad</td><td>Dagan</td><td>HCC-100A</td><td></td></tr><tr><td>PC</td><td>Dell</td><td>Optiplex 990</td><td></td></tr><tr><td>pCLAMP 10.3 Voltage Clamp Software</td><td>Molecular Devices, LLC</td><td>pCLAMP10.3</td><td></td></tr><tr><td>TMC Vibration Control TableTop Platform</td><td>TMC</td><td>64 SERIES</td><td></td></tr><tr><td>TMC Vibration Control Air Table</td><td>TMC</td><td><a name="REICHWEITE! C10">20 Serie&nbsp; </A></td><td></td></tr><tr><td>V1/I Elektroden-Datensammler</td><td>Dagan</td><td>Teil von CA-1B</td><td></td></tr><tr><td>MX10L Mikromanipulator</td><td>Siskiyou</td><td>MX10L</td><td></td></tr><tr><td>Bad/Schutz (I/V) Kopftisch (mit entsprechenden Anschlüssen)</td><td>Dagan</td><td>Teil von CA-1B</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop</td><td>Omano</td><td>OM2300S-JW11</td><td></td></tr><tr><td>Temperature Control Bath</td><td>Custom oder Dagan Custom oder Dagan</td><td>Custom oder HE-204C</td><td>Kundenspezifische Kammer aus Materialien von Cool Polymers (D-Serie). Dagan bietet auch eine vorfeabrierte Stufe (HE-204C).</td></tr><tr><td>Custom AgCl Pellet Container</td><td>Custom</td><td>Custom</td><td>Custom bearbeitete</td></tr><tr><td>Ag/AgCl Elektrode, Pellet, 2,0 mm</td><td>Warner</td><td>E-206</td><td></td></tr><tr><td>Externes Eizellenbad</td><td>Custom oder Dagan</td><td>Custom oder CC-1-T-LB</td><td>Custom bearbeitet oder gekauft von Dagan</td></tr><tr><td>Internes Eizellbad</td><td>Custom oder Dagan</td><td>Custom oder CC-TG-ND</td><td>Custom bearbeitet oder gekauft von Dagan</td></tr><tr><td>Kapillaren für Agarbrücken und gezogene Elektroden</td><td>Warner</td><td>G150T-4</td><td></td></tr><tr><td>Drehbare Halterungen für das Mikroskop, den Mikromanipulator und das Bad</td><td>Siskiyou</td><td>SD-1280P</td><td></td></tr><tr><td>Fiber-Lite</td><td>Dolan-Jenner</td><td>LMI-600</td><td></td></tr><tr><td>Regular Bleach</td><td>Clorox</td><td>470174-764</td><td></td></tr><tr><td>Xenopus laevis Eizellen</td><td>Nasco</td><td>LM535M (geschlechtsreife Frauen)</td><td></td></tr><tr><td>90 Na+ Externe Lösung</td><td>Siehe Lösungsblatt</td><td></td><td></td></tr><tr><td>10 Na+ Interne Lösung</td><td>Siehe Lösungsblatt</td><td></td><td></td></tr><tr><td>3 M KCL</td><td>Siehe Lösungsblatt</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Saponin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>47036</td><td></td></tr><tr><td>NMDG Speicherlösung</td><td>Siehe Lösungsblatt</td><td></td><td></td></tr><tr><td>5-ml-Transferpipetten</td><td>SciMart</td><td>GS-52</td><td></td></tr><tr><td>Modifizierter KCl-Elektrodeninjektor</td><td>BD</td><td>309659</td><td>Spritzenspitze aus Kunststoff geschmolzen, um die Injektion der Lösung in Elektroden zu ermöglichen. Alternativ kann ein Microfil von WPI erworben werden.</td></tr><tr><td>Microvaccum</td><td>Custom</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Custom Pinzette</td><td>VWR</td><td>63040-458</td><td></td></tr><tr><td>Werkzeuge zur Handhabung von Eizellen (Pipettenpumpe)</td><td>VWR</td><td>53502-222</td><td></td></tr><tr><td>Deionisierte Wasserspritzflasche</td><td>VWR</td><td>16649-911</td><td></td></tr><tr><td>Vaseline Vaseline Jelly</td><td>Fisher Scientific</td><td>19-086-291&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Zusätzliche Materialien, die für VCF-Aufnahmen benötigt werden:</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>VCF-Mikroskop</td><td>Nikon</td><td>Eclipse FN1</td><td></td></tr><tr><td>Nikon CFI APO 40XW NIR-Objektiv</td><td>Nikon</td><td>N40X-NIR</td><td></td></tr><tr><td>X-Y Translator-System für aufrechte Mikroskope mit festem Tisch</td><td>Sutter Instruments</td><td>MT500-586</td><td></td></tr><tr><td>Externes VCF-Eizellenbad</td><td>Custom</td><td></td><td>Individuell gefertigt. Die Kammermaße betragen 2,7 x 1,9 x 0,4 cm.</td></tr><tr><td>Intern VCF Eizellenbad</td><td>Custom</td><td></td><td>Custom gefertigt. Die Kammermaße betragen 1,6 x 1,6 x 0,4 cm.</td></tr><tr><td>Modifiziertes Temperaturregelbad Kundenspezifische</td><td></td><td></td><td>Kammer aus Materialien von Cool Polymers (D-Serie). Die Kammerabmessungen des modifizierten Temperaturreglerbades betragen 2,7 x 1,9 x 0,3 cm für die horizontale Kammer und 1 x 2,5 x 0,5 cm für die vertikale Kammer.</td></tr></tbody></table>

die<em&gt; xenopus</em&gt; eizelle cut-open vaseline gap voltage-clamp-technik mit fluorometrie

The Xenopus Oocyte Cut-open Vaseline Gap Voltage-clamp Technique With Fluorometry

Die aufgeschnittenen Oozyte Vaseline Spalt (COVG) Voltage-Clamp Technik erlaubt die Analyse der elektrophysiologischen und kinetischen Eigenschaften von heterologen lonenkanäle in Oozyten. Aufnahmen aus der aufgeschnittenen Setup sind besonders nützlich für die Lösung geringer Größe Gating Strömungen, schnelle Ionenstrom-Aktivierung und Deaktivierung. Die Hauptvorteile gegenüber der Zwei-Elektroden-Spannungsklemme (TEVC)-Technik sind eine erhöhte Klemmgeschwindigkeit, verbessertes Signal-Rausch-Verhältnis, und die Fähigkeit, die intrazelluläre und extrazelluläre Milieu modulieren. Hier verwenden wir die menschlichen kardialen Natriumkanals (HNA V 1.5), ausgedrückt in Xenopus-Oozyten, die aufgeschnittenen und Setup-Protokoll sowie Änderungen, die erforderlich sind, um Spannungsklemme Fluorometrie Fähigkeit hinzufügen demonstrieren. Die Eigenschaften der schnellen Aktivierung von Ionenkanälen, wie z. B. 1,5 V HNA, nicht vollständig in der Nähe von Raumtemperatur gelöst werden mit TEVC in which die Gesamtheit der Eizelle Membran eingespannt ist, wodurch Spannungssteuerung schwierig. In der aufgeschnittenen Technik, Isolierung von nur einem kleinen Teil der Zellmembran ermöglicht jedoch für den Schnellspann erforderlich, genau zu erfassen, während verhindert schnelle Kinetik Kanal Auslauf mit Patch-Clamp-Techniken verbunden sind. In Verbindung mit der COVG Technik Ionenkanal Kinetik und elektrophysiologischen Eigenschaften können durch Verwendung von Spannungsklemm Fluorometrie, wo Proteinbewegung wird über Cystein Konjugation von extrazellulär aufgebracht Fluorophore, Insertion von genetisch kodierten fluoreszierenden Proteinen oder den Einbau von unnatürlichen Aminosäuren getestet werden verfolgt in der Region von Interesse 1. Diese zusätzliche Daten liefert kinetische Informationen über spannungsabhängige Konformationsänderungen des Proteins über Veränderungen in der Mikroumgebung des fluoreszierenden Moleküls.

Figur 4 zeigt die Veränderung der Durchlässigkeit der Eizelle als Saponin-Lösung wird auf den Bodenabschnitt der Eizelle aufgebracht. Fig. 5 zeigt die Geschwindigkeit der intrazellulären Lösungsaustausch durch Diffusion folgenden Saponin Permeabilisierung. 20-40 Minuten sind erforderlich, um zu einem steady-state 2,18 kommen. 6A zeigen Spuren von der Aufnahmeprotokoll erzeugt. Die Figur zeigt, Ionenströme (nach P/-8 Lecksubtraktio...

Die aufgeschnittenen Vaseline Lücke Ansatz werden geringe Geräuschaufnahmen von ionischen und Anschnittströme von spannungsabhängigen Ionenkanälen in Xenopus-Oozyten mit hoher Auflösung von schnellen Kanal Kinetik ausgedrückt zu erhalten. Mit geringen Modifikationen können Spannungsklemm Fluorometrie an den aufgeschnittenen Oozyte Protokoll gekoppelt werden.

Die<em&gt; Xenopus</em&gt; Eizelle Cut-open Vaseline Gap Voltage-Clamp-Technik Mit Fluorometrie

The cut-open oocyte Vaseline gap (COVG) voltage clamp technique allows for analysis of electrophysiological and kinetic properties of heterologous ion ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, Aufnahmen von Ionenströmen und Gating-Strömen spannungsabhängiger Ionenkanäle, die in Zap-Zellen exprimiert sind, mit geringem Rauschen und hoher zeitlicher Auflösung schneller Kanalkinetik zu erhalten. Dies wird erreicht, indem zunächst die mRNA des aufgezeichneten ionischen Kanals in die Froschoocyten injiziert wird. Der zweite Schritt besteht darin, Agarbrücken herzustellen, indem man die Kapillarrohre formt und diese anschließend mit einer Agar-Lösung, die Salz enthält, füllt.Anschließend wird die geöffnete Versuchsanordnung für die Experimentierung vorbereitet, indem alle Komponenten, einschließlich der UO-Stelle und der Agarbrücken, an ihren vorgesehenen Positionen platziert werden. Der letzte Schritt besteht darin, die Mikroelektrode in die UO-Stelle einzuführen, um Spannungs-Klemm-Messungen zu ermöglichen. Schließlich dient das Aufzeichnungsprotokoll dazu, ionische Ströme von Ionenkanälen in der Oozytenmembran darzustellen.Der Hauptvorteil der geöffneten Voltage-Clamp-Technik besteht darin, dass sie stabile, geräuscharme Aufnahmen einer sehr großen Anzahl von Ionenkanälen ermöglicht. Außerdem erlaubt sie eine schnelle

the-xenopus-oocyte-cut-open-vaseline-gap-voltage-clamp-technique-with

Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Dies ist als eine Einführung in die Klemme Aufnahme von Xenopus laevis Oozyten Patch soll. Es deckt Dotterhaut Entfernung, Bildung einer Gigaohm Dichtung (Gigaseal) und die optionale Konvertierung der Patch auf die outside-out-Topologie.

Patch Clamp Recording von Ionenkanälen in Xenopus Oozyten exprimiert

Ionenstrom von BK-Kanälen aufgezeichnet wird mit Patch-Clamp-Techniken. BK-Kanäle sind in...

Patch-Clamp-und Perfusion Techniken zur Untersuchung von Ionenkanälen ausgedrückt in Xenopus Oozyten

Wir beschreiben eine Methode, die die Kinetik von Ionen-Transport von Membranproteinen Maßnahmen neben site-spezifische Analyse von Konformationsänderungen mittels Fluoreszenz an einzelnen Zellen. Diese Technik ist anpassungsfähig an Ionenkanälen, Transportern und Ionenpumpen und kann genutzt werden, um Einschränkungen bei den Protein-Untereinheiten zu bestimmen.

Die Untersuchung der Konformationsänderungen Dynamics von Membranproteinen In situ Mit Site-directed Fluoreszenzmarkierung

Wir beschreiben eine Methode zur Quantifizierung der Aktivität von K+-gegentransportierenden P-Typ-ATPasen durch heterologe Expression der Enzyme in Xenopus-Eizellen und Messung der Rb+- oder Li+-Aufnahme in einzelne Zellen mittels Atomabsorptionsspektrophotometrie. Die Methode ist eine empfindliche und sichere Alternative zu Radioisotopenflussexperimenten, die komplexe kinetische Studien ermöglicht.

Mess-Cation Transport von Na, K-und H, K-ATPase in<em&gt; Xenopus</em&gt; Oozyten mittels Atomabsorptionsspektrometrie: Eine Alternative zu Radioisotopen Assays

Um häufigsten verwendeten Methoden, um zu studieren TRPV4 ergänzen, werden zwei Methoden beschrieben: Seine Mechanosensitivität kann durch Ca 2 +-Aequorin Luminometrie in transgenen Hefe auf hypo-osmotischen Herausforderung untersucht werden. Es kann auch in TRPV4-RNA untersucht werden injizierten Xenopus Oocyten durch Ganzzell-Zweielektroden-Spannungsklemmen-oder Patch-Clamp in Ein-Zelle oder entfernten Modus.

Hefe und luminometrischer Xenopus Eizelle Elektrophysiologische Untersuchungen des Molecular Mechanosensitivität von TRPV4

Es wird ein Verfahren zur Abbildung von Änderungen des Membranpotentials unter Verwendung genetisch kodierter Spannungsindikatoren beschrieben.

Imaging Membrane Potential mit zwei Arten von genetisch kodierten Fluorescent Spannungssensoren

Optimierte Verfahren für die Isolierung einzelner Follikel, zytoplasmatische RNA-Mikroinjektionen, die Entfernung umgebender Zellschichten und die Proteinexpression in Xenopus-Eizellen werden beschrieben. Darüber hinaus wird eine einfache Methode für schnelle Lösungsänderungen in elektrophysiologischen Experimenten mit ligandengesteuerten Ionenkanälen vorgestellt.

Xenopus Oozyten: Optimierte Methoden für die Mikroinjektion, Entfernen von Follicular Zellschichten und schnelle Lösung Änderungen in elektrophysiologischen Experimenten

Dieser Artikel beschreibt eine Verbesserung der konventionellen Voltage-Clamp Fluorometry (VCF), bei der fluoreszierende unnatürliche Aminosäuren (fUAA) anstelle von Maleinimidfarbstoffen verwendet werden, um strukturelle Umlagerungen in Ionenkanälen zu untersuchen. Das Verfahren umfasst Xenopus- Oozyten-DNA-Injektion, RNA / fUAA-Coinjektion und gleichzeitige Strom- und Fluoreszenzmessungen.

Spannklemme Fluorometrie in<em&gt; Xenopus</em&gt; Oozyten mit fluoreszierenden unnatürlichen Aminosäuren

Ganzzellige Aufnahmen von Drosophila Melanogaster Photorezeptoren ermöglichen die Messung von spontanen Dunkelstößen, Quantenstößen, makroskopischen Reaktionen auf Licht und Strom-Spannungs-Beziehungen unter verschiedenen Bedingungen. In Kombination mit D. melanogaster genetischen Manipulationswerkzeugen ermöglicht diese Methode die Untersuchung des ubiquitären Inositol-Lipid-Signalwegs und seines Ziels, des TRP-Kanals.

Elektrophysiologische Methode für Ganzzell-Spannungsklemmen Aufnahmen von<em&gt; Drosophila</em&gt; Fotorezeptoren

Wir beschreiben ein Verfahren zur Herstellung und Live-Bildgebung von unverdünnten zytoplasmatischen Extrakten aus Xenopus laevis-Eiern .

Xenopus laevis Ei-Extrakt-Zubereitung und Live-Bildgebungsverfahren zur Visualisierung der dynamischen zytoplasmatischen Organisation

Hier stellen wir ein Protokoll vor, um Gap-Junction-Proteine in Xenopus-Eizellen zu exprimieren und den Sperrschichtstrom zwischen zwei apponierten Eizellen mit einem kommerziellen Verstärker aufzuzeichnen, der für Dual-Eizellen-Spannungs-Clamp-Aufnahmen in einem hohen Seitenstrom-Messmodus entwickelt wurde.

Aufzeichnung des Gap-Junction-Stroms von Xenopus-Eizellen

Lernen Sie die Cut-open Vaseline Gap Voltage-Clamp-Technik mit Fluorometrie zur Aufzeichnung von Ionenströmen in Xenopus-Eizellen. Diese Methode ermöglicht präzise elektrophysiologische Untersuchungen mit hoher zeitlicher Auflösung.

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