Name: Der Rat von Helsinki Mikroseitenwand Aneurysma Modell (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-10-12T15:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 53 s
Description: Lernen Sie die mikrochirurgische Erstellung von Seitenwandaneurysmen bei Ratten für neurochirurgische Forschung. Diese Methode ermöglicht standardisierte experimentelle Aneurysmen mit reproduzierbaren Ergebnissen.

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Die Autoren sind allein verantwortlich für das Design und die Durchführung der vorgestellten Studie. Dr. Marbacher wurde durch ein Stipendium des Schweizerischen Nationalfonds zur Förderung der wissenschaftlichen Forschung (PBSKP3-123454) unterstützt. Die Autoren erklären, dass kein Interessenkonflikt besteht. 
Die Beiträge der Autoren zur Studie und zur Vorbereitung des Manuskripts umfassen die folgenden. Konzeption und Design: SM, JM, JF. Erfassung von Daten: SM, EA, JF. Analyse und Interpretation der Daten: SM, JF, JM. Erstellung des Artikels: SM, JF, JM. Kritische Überarbeitung des Artikels: JH, MN. Statistische Analyse: SM, JF. Studienbetreuung: JF, JH, MN.

HINWEIS: Männliche Wistar-Ratten (mittleres Körpergewicht: 356 ± 44 g, 10-14 Wochen alt) wurden in der Tierraum bei 22-24 ° C und 12 Stunden Licht / Dunkel-Zyklus mit freiem Zugang zu Pellet-Ernährung, regelmäßige Leitungswasser untergebracht und auch humane Pflege im Einklang mit den Richtlinien des Instituts erhalten. Die Experimente wurden überprüft und vom Ausschuss für Tierschutz an der Universität Helsinki, Finnland zugelassen. HINWEIS: In der folgenden Demonstration unserer chirurgischen Verfahren ist wie folgt: die Ratten Anesthetize Gewichtsangepassten subkutane Injektion von Medetomidin-Hydrochlorid (0,5 mg / kg) und die intraperitoneale Injektion von Ketamin-Hydrochlorid (50 mg / kg). Test für den Mangel an einer Zehenreflex Klemm zu bestätigen, dass die Ratten vollständig betäubt wird. Augensalbe anwenden, Clip die Operationsstelle, und reinigen Sie die Haut mit einem geeigneten Desinfektionsmittel, zum Beispiel Chlorhexidin, entweder in Alkohol oder Wasser. Hände waschen, auf Schutzkleidung, eine Kopfhaube und Gesicht zaubernMaske und sterile Handschuhe. Haben einen chirurgischen Assistenten helfen bei der aseptischen Operationsbedingungen und die chirurgische Eigenschaften zu dokumentieren (wie in Tabelle 1 aufgeführt). Überwachen Sie die Tiefe der Narkose alle 15 min während der Operation durch folgende Atemfrequenz, Herzfrequenz, und der Reaktion auf Schmerzreiz (toe Prise Test). Die subkutane Injektion von Buprenorphin (0,03 mg / kg) wurde für postoperative Analgesie gegeben und gegebenenfalls wiederholt alle 12 Stunden. 1. Hardware, Verbrauchsmaterialien und Positionierung <ol><li> Halten Sie die Kleintierchirurgie Zimmer ruhig, aseptisch, und die Raumtemperatur auf 23 ° C +/- 3 zu halten. Um die experimentellen Aneurysmachirurgie der folgende minimale Ausrüstung notwendig ist, durchführen: <ol><li> Verwenden Sie eine Tischplatte Operationsmikroskop idealerweise mit einem Assistenten Umfang und Digital-Mikroskop-Kamera ausgestattet. Verwenden Sie nicht porös wiederverwendbar Betriebsfläche und zu reinigen Instrument Oberfläche, um die Labortisch zu schützen. </li><li&gt; Bereiten Verbrauchsmaterialien wie Hautdesinfektionsmittel, physiologische Kochsalzlösung, kleinere und größere Tupfer und Nahtmaterial einschließlich 9-0 Mikronahtmaterial, einem nicht resorbierbaren 5-0, 3-0 und resorbierbares Nahtmaterial. </li><li> Verwenden Sie die folgenden Standard-OP-Instrumente: Chirurgische Scheren, Pinzetten, Weichteilspreizer oder Wundspreizer, und zwei Mosquito chirurgische Klammern. </li><li> Verwenden Sie ein mikrochirurgisches Instrument Grundsatz, der folgendes beinhaltet: Gebogene Mikronadelhalter, eine gekrümmte und zwei geraden Mikropinzetten, und einen geraden oder gebogenen microscissor. </li><li> Halten Sie die mikrochirurgischen Instrumente in einer Nierenschale mit steriler Kochsalzlösung gefüllt, um das Instrument nicht klebrig und sauber während der Operation zu halten. Die Nierenschale mit Gummimatte oder ein OP-Handschuh, um Schäden an den Spitzen der Mikroinstrumenten verhindern gepolstert. Stellen Sie sicher, dass alle Lieferungen sind steril und das Verfahren wird mit aseptischer Technik nach den aktuellen Empfehlungen für das Überleben der Operation an Labortieren durchgeführt <sup&gt; 8-10. </li><li> Darüber hinaus verwenden Sie einen Gefäß Clipapplikator und drei temporäre atraumatische Gefäßklemmen. Es ist wichtig, daß die verwendeten Klemmen weisen eine geringe Schließkraft, um eine Verletzung der sehr dünnen Wand der Aorta von Ratten zu verhindern. Bereiten auch ein Lineal mit Halbmillimeterskala Bars, einem kleinen farbigen Gummi-Pad, und eine kurze stumpfe Nadel. </li><li> Legen Sie die Ratten in Rückenlage, zu immobilisieren vorne und Hinterpfoten mit chirurgischen Band ohne Anwendung Dehnung oder Kompression auf die Haut und beugen den Rücken mit einem dicken Marker oder Stift Kauter, indem er unter der Holz Bereich des Rückens. Es ist wichtig, so viel wie Lordose der Lendenwirbelsäule möglich ist, um Belichtung und retroperitonealen Zugang zu der infrarenalen Aorta, die mikro Anastomose erleichtert Verbesserung erhalten. Diese Positionierung wird für die Bauch-Aorta Aneurysma Schaffung empfohlen, ist aber für die Thoraxspanentnahme nicht notwendig. </li></ol></li></ol> 2. Graft Ernte <ol><li> Under Vollnarkose, öffnen Sie die Brusthöhle (Start Transplantat Ischämie-Zeit). Tragen Sie eine schädliche Zehe Prise zu bestätigen, dass die Ratte nicht reagiert, bevor Sie mit den folgenden Schritten fortfahren. Durch die Bauchwand midventral geschnitten, identifizieren die Membran direkt über der Leber, und schneiden das Bindegewebe an der Unterseite der Membran, um Zugang zu den Brustkorb zu ermöglichen. Mit großen Scheren, stumpfen Seite nach unten, durch Rippen schneiden nur einen Zentimeter links und rechts der Mittellinie des Brustkorbs und öffnen Sie die Brusthöhle. Die Lungen werden an der rechten Seite des Herzens mobilisiert. Opfern die Ratten durch eine Überdosierung mit intra Injektion von Ketamin hydrochloride.Pulmonary Kofferraum, links subclavia, links Schädel Hohlvene und die azygous Vene mit der Ernte der proximalen Aorta stören. </li><li> Caudal zu den prominenten Venen gibt es eine gute Einstiegspunkt, um die Dissektion der Aorta descendens mit Mikro-Schere und microforceps starten. </li><li> Verfolgen Sie die thorakalen Aorta back von der dorsalen Thoraxwand nach oben, um den Aortenbogen durch sanftes Zurückziehen und stumpfe Dissektion mit dem Mosquito chirurgische Klemme. </li><li> Klemme und dann schneiden Sie die Adern mit einer Schere. Pflegen Sie die Klammern auf die Venen und die Verwendung als Aufroller, um die zugrunde liegenden Aortenbogen aussetzen. </li><li> Legen Sie eine nicht-resorbierbaren 6-0 Seidenligatur knapp über dem ersten Zwischenrippenarterie Verlassen der Aorta. </li><li> Schneiden Sie die absteigende Aorta knapp unterhalb des linken Schlüsselbeinarterie und dann unterhalb der Ligatur. Trimmen kann, um eine senkrecht standardisierten Aneurysma Geometrie erhalten erfolgen oder, wenn nötig, um einen bestimmten Winkel zwischen der Achse und dem Aneurysma der Aorta zu erhalten. Messung des Transplantats in der Breite und Länge. HINWEIS: Geerntet Transplantate können entweder sofort in Empfänger Ratten transplantiert werden oder weiterverarbeitet werden, um Dezellularisierung des Transplantats Wand zu erreichen. Dezellularisiertes Transplantate bei -4 Grad Celsius bis zur Wieder Implantation zu einem späteren Zeitpunkt (Abbildung 1) gespeichert werden. The Dezellularisierung der Aneurysmawand ist gezeigt worden, um das Aneurysma zu vergrößern 11 prädisponieren. </li></ol> 3. Graft Dezellularisierung <ol style="margin-left: 40px;"><li> Gefriertspendertransplantaten in Phosphat-gepufferter Salzlösung bei 4 ° C ist. </li><li> Am nächsten Tag auftauen Transplantate gründlich mit gereinigtem und deionisiertem Wasser bei Raumtemperatur und Inkubation für 10 h bei 37 ° C in 0,1% Natriumdodecylsulfat. </li><li> Schließlich, waschen Sie die Natriumdodecylsulfat-behandelten Transplantate drei Mal mit sanfter Bewegung, wieder einfrieren in Phosphat-gepufferte Kochsalzlösung, und halten Sie bei -4 ° C bis zur Verwendung. </li></ol> 4. Aneurysma Creation <ol style="margin-left: 40px;"><li> Dissektion der Bauchaorta <ol><li> Nachdem das Tier wurde betäubt, Clip das Fell von der Operationsstelle und reinigen Sie die Haut mit einem geeigneten Desinfektionsmittel. Test für den Mangel an einer Zehenklemm Reaktion vor Hautinzision. Starten Sie den Schnitt 1cm proximal zu den Genitalien in midventral Position (Startbetriebszeit). Vorsichtig die Haut von den darunter liegenden Muskeln. Ende Präparation 1-2 cm unter dem Brustbein. </li><li> Vorsichtig, aber fest ziehen Sie die zugrunde liegenden Bauchmuskeln, um Schäden an den darunter liegenden Organe zu vermeiden. Verlängern Sie die Längsschnitt entlang der Linea alba nach oben, um den Schwertfortsatz und am Ende in Richtung Schwanz auf der Ebene der Blase. </li><li> Druck auf die Blase sanft an, um es um den Zugang zu dem Retroperitonealraum erleichtern entleeren. </li><li> Bewegen Sie den Dünndarm und den prominenten Blinddarm nach rechts oder links. Identifizieren Sie die Dickdarm nämlich die absteigend Doppelpunkt links unten auf der Bauchhöhle. </li><li> Schneiden Sie das Band zwischen dem Dünndarm und dem absteigenden Dickdarm in Richtung Schädel breitere Exposition der dorsalen Körperwand zu ermöglichen. Legen Sie eine Wundspreizer, den Darm auseinander zu halten. </li><li> Die ideale Lage des Ende-zu-Seite-Anastomose Aneurysma is auf der Ebene zwischen der Nieren-und iliolumbalen Venen gefunden. Die Bauchaorta liegt retroperitoneal im Fettgewebe eingebettet. Bei der Präparation ein besonderes Augenmerk auf die gepaarten fast transparent Harnleiter und Hodengefäße. </li><li> Wenn weitere Zurückziehen der Darm braucht, soll größer Gaze-Swaps. Die Lendenwirbelsäule Lordose während der Positionierung, indem Sie einen Stift oder Kauter ein ähnliches Objekt unter den unteren Rücken der Ratte induziert, reduziert deutlich die Notwendigkeit der Darm Rückzug. </li><li> Die Bauchseite der dorsalen Körperwand ist mit einer dünnen Bauchfell bedeckt. Sobald diese geöffnet wird, visualisieren die Aorta knapp unterhalb. Bei der sorgfältigen scharfe und stumpfe Dissektion der Bauchaorta von benachbarten großen Venen erfassen nur die Adventitia, um Schäden an der Gefäßwand zu vermeiden. </li><li> Selten entstehen kleine Lendenarterien als segmentale Gefäß von der dorsalen Oberfläche der Bauchaorta und stören Vorbereitung. Ligation und Schneiden des Behälters geb.ded retrograden Nässen während Aneurysma Naht zu vermeiden. Verwendung von gekrümmten Mikro-Pinzette können Ligatur Platzierung in der Tiefe zu erleichtern. </li></ol></li><li> End-zu-Seit-Anastomose <ol><li> Setzen Sie einen farbigen Gummipolster unter der Bauchaorta und polstern sie mit einem kleinen Gaze Tupfer. Entfernen Sie lose Bindegewebe und Adventitia auf der Ebene der geplanten Anastomose. </li><li> Spannen Sie den Bauch-Aorta distal der Anastomose, dann proximalen (Start Aorten-Spannzeit). Dies gewährleistet eine feste Füllung des Behälters und erleichtert die anschließende Arteriotomie. </li><li> Führen Sie die Arteriotomie entweder gerade oder gebogen Mikro-Schere. Ein Mikro-Pinzette hält ein sehr kleines Stück der Gefäßwand zu schneiden eine elliptische Form. </li><li> Spülen Sie die Arterie gründlich mit Kochsalzlösung in beide Richtungen mit einem stumpfen Spitze Nadel. </li><li> Platzieren der ersten beiden Nähte des End-zu-Seit-Anastomose an dem proximalen und distalen Ende der Arteriotomie (Startzeit Anastomose). Vermeiden Greifen der Gefäßwand mit den Mikropinzette, wann immer möglich. Stellen Sie sicher, dass jede Naht wird durch alle Schichten der Gefäßwand platziert. </li><li> Führen Naht entweder als durchgehenden oder unterbrochenen Nähten. Wenn unterbrochen Naht gewählt legen Sie dann zuerst die Rückseite neun Uhr Naht. Anschließende Naht auseinander beginnend benachbart der ersten Naht beabstandet ist. Fassen Sie die Adventitia sorgfältig. Vermeiden Sie jede Quetschung / Greifen der Intima. </li><li> Wenn die Rückwand fertig ist, überprüfen Sie die endoluminale Teil der Anastomose nach verlegten Nähten. Führen die gleichen Verfahren in der gleichen Reihenfolge auf der Vorderseite. Stellen Sie sicher, dass der erste von insgesamt drei Knoten pro Naht ist fest, aber nicht zu eng. </li></ol></li><li> Blutstillung und Verschluss <ol><li> Nachdem das Ende Anastomose abgeschlossen ist (End-Anastomose Zeit), spülen Sie die Website mit Kochsalzlösung und entfernen Sie die distale Klemme erste für Rückstau ermöglichen (Aorten-Klemmende und Endzeit Transplantat Ischämie timich). </li><li> Wenn offensichtlich Blutungen aus Rückfluss eine zusätzliche Stich können erforderlich sein, tritt (Startzeit der Hämostase). Bei kleineren Nässen, Blutstillung zu erreichen mit sanftem Druck über die blutende Stelle mit einem kleinen Stück von einem Gaze-Tupfer. </li><li> Entfernen Sie den proximalen Gefäßklemme, spülen Sie die Anastomose noch einmal, und schneiden Sie die verbleibenden Enden der Ligatur am Aneurysma Kuppel. </li><li> Durchgängigkeit des Aneurysmas durch Beobachtung der Volumenzunahme des Aneurysmas während der Spitzen bestätigen arteriellen Pulswelle. Beurteilen distalen Bauchschlagader Durchgängigkeit durch die direkte &quot;Melken Test&quot;. </li><li> Entfernen Sie die Plastikfolie und die kleine Mulltupfer darunter. Der pulsierende Blut Wirbel innerhalb des Aneurysmas erstellt ist deutlich sichtbar. </li><li> Decken Nahtlinien rund um die Anastomose mit kleinen Stücken von Fettgewebe oder Spongostan für zusätzliche Blutstillung, wenn kleine Nässen noch vorhanden ist (Endzeit der Blutstillung). </li><li> Entfernen Sie die Weichteilspreizer und Tupfer.Legen Sie den Dünndarm, Blinddarm, und der Fettmasse zurück in ihre richtige Position. </li><li> Schließen Sie die Mittellinie Bauchmuskeln mit 5-0, 4-0, 3-0 oder resorbierbaren oder nicht resorbierbaren Nahtmaterial, gefolgt von Hautwundverschluss mit fortlaufenden Naht-Technik mit 3-0 resorbierbaren Naht polyfilen (Ende Betriebszeit). Hinweis: Nach unserer Erfahrung Ratten toleriert resorbierbaren Hautnähte besser als nicht-resorbierbares Nahtmaterial Monofilament. </li></ol></li></ol>

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Die Autoren haben keine finanziellen oder wirtschaftlichen Interesse in einem der Medikamente, Materialien oder Geräte verwendet.

Fortschritte in unserem Verständnis der komplexen Biologie der sackförmige Hirnarterie Aneurysma hängt Analyse von epidemiologischen und klinischen Daten, ergänzt durch Laborstudien an Patientenproben und experimentelle Arbeiten in Tiermodellen 3,12,13. Kleintiere wie Ratten inhärent mit niedrigeren Kosten von Versuchen und dem Gehäuse verbunden ist, und verringerten Bedarf an Spezialgeräten. Eine durchschnittliche Betriebszeit von weniger als 60 Minuten für mikro Schaffung einer ...

Bruch einer sackförmigen Hirnarterie Aneurysma verursacht lebensbedrohliche Blutung, die zu Schlaganfall, bleibende neurologische Schäden oder Tod. Bruch kann entweder durch mikrochirurgische Clipping oder endovaskuläre Aneurysma Okklusion verhindert werden. Eine medizinische Behandlung, um Aneurysma Wachstum und Bruch zu verhindern, ist noch nicht erwiesen. Versuchsmodellen für sackförmige Aneurysmen sind erforderlich, um die Biologie von Aneurysmen und zum Testen neuer therapeutischer Vorrichtungen und Strategien zu studieren. Für diese Zwecke sind mehrere verschiedene Modelle in unterschiedlichen Spezies entwickelt und veröffentlicht 1. Vorzugsweise größer Aneurysma Modelle in Schweinen, Hunden und Kaninchen zur endovaskulären Aneurysma Innovationen in komplexen Architektur 1,2 testen. Murine Aneurysma Modelle, auf der anderen Seite, lassen die Prüfung Forschungsfragen in gentechnisch veränderten Arten 3,4 und erleichtern Klärung Aneurysma Biologie auf zellulärer und molekularerNiveau weit besser als größere Arten 1. Obwohl endovaskulären trans carotis und trans-iliaca-Einsetzungs an Ratten größer begrenzt (&gt; 400-500 g) und Stents kleiner als 2,0 mm und 1,5 mm im Durchmesser 5,6 Stents kann auch durch direkte Einführung in die Aorta abdominalis platziert werden Segment beherbergen die experimentellen Aneurysmen. Frühere Arbeiten mit der Ratte mikro Bauch-Aorten-Aneurysma Seitenwand Modell demonstriert die Machbarkeit in der Prüfung Roman embolischen Geräte und ihre Verwendung bei der Untersuchung der molekularen Grundlagen der Biologie Aneurysma 3,7. Viele der aktuell veröffentlichten experimentellen sackförmigen Aneurysmas Modelle erfordern teure Ausrüstung, spezielle Umgebungen (zB sterile OP-Sälen mit Durchleuchtung Fähigkeiten), der interventionellen Radiologie Kompetenz, oder die Verwendung von teuren Arten. Diese Anforderungen schränken die weit verbreitete Verwendung dieser Modelle, und führen zu der Verwendung von verschiedenen Modellen in verschiedenen Laboratorien, worin MFlocken Datenvergleich und Meta-Analyse schwierig, wenn nicht unmöglich. Eine einfache, robuste und kostengünstige Versuchsmodell wird als standardisiertes Tool, das in einer standardisierten Art und Weise in verschiedenen Labors, um vergleichbare Ergebnisse von verschiedenen Institutionen erhalten verwendet werden können, benötigt. Zu diesem Zweck haben wir die Rattenaorta Seitenwand sackförmiges Aneurysma arteriellen Modell erstellt. Das Ziel dieses Berichts ist es, Schritt-für-Schritt-Handlungsanweisungen, Informationen über notwendige Ausrüstung zu präsentieren und wichtige anatomische und chirurgische Eigenschaften für die erfolgreiche Schaffung von mikro Bauch-Aorten-Aneurysmen Seitenwand in der Ratte zu diskutieren.

<table><tbody><tr><td>Medetomidin</td><td></td><td></td><td>Jedes Genericon</td></tr><tr><td>Ketamin</td><td></td><td></td><td>Jedes Genericon</td></tr><tr><td>Buprenorphin</td><td></td><td></td><td>Jedes Genericon</td></tr><tr><td>Phosphat gepufferte Kochsalzlösung</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Natriumdodecylsulfat (0,1%)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>3-0 resorbierbares Nahtmaterial</td><td>Ethicon Inc., USA</td><<td>a name="BEREICH! C7">VCP824G</a></td><td></td></tr><tr><td>5-0 nicht resorbierbares Nahtmaterial</td><td>Ethicon Inc., USA</td><td>8618G</td><td></td></tr><tr><td>6-0 nicht resorbierbares Seidennaht</td><td>B. Braun, Deutschland</td><td>C0761060</td><td></td></tr><tr><td>9-0 Nylon-Mikronaht</td><td>B. Braun, Deutschland</td><td>G1118471</td><td></td></tr><tr><td>Spongostan</td><td>Ethicon Inc., USA</td><td>MS0002</td><td></td></tr><tr><td>Operationsmikroskop</td><td>Leica, Deutschland</td><td>M651</td><td></td></tr><tr><td>Digitale Mikroskopkamera</td><td>Sony, Japan</td><td>SSC-DC58AP</td><td></td></tr><tr><td>Chirurgische Standardinstrumente</td><td>B. Braun, Deutschland</td><td>Mehrfach</td><td>Siehe Protokoll 1.4</td></tr><tr><td>Mikrochirurgische Instrumente</td><td>B. Braun, Deutschland</td><td>Mehrfach</td><td>Siehe Protokoll 1.5</td></tr><tr><td>Gefäßclip-Applikator</td><td>B. Braun, Deutschland</td><td>FT495T</td><td></td></tr><tr><td>Temporäre Gefäßklemmen</td><td>B. Braun, Deutschland</td><td>FT250T</td><td></td></tr><tr><td>Graph Pad Prism Statistiksoftware&nbsp;</td><td>GraphPad Software, San Diego, California, USA</td><td></td><td>V 6.02 für Windows</td></tr></tbody></table>

der rat von helsinki mikroseitenwand aneurysma modell

The Helsinki Rat Microsurgical Sidewall Aneurysm Model

Experimentelle sackförmigen Aneurysmas Modelle sind für die Prüfung neuartige chirurgische und endovaskuläre Behandlungsmöglichkeiten und Geräte, bevor sie in die klinische Praxis eingeführt werden, erforderlich. Darüber hinaus werden experimentelle Modelle benötigt, um die komplexe Biologie Aneurysma, die zu der sackförmigen Aneurysmen reißen aufzuklären. Mehrere verschiedene Arten von experimentellen Modellen für sackförmige Aneurysmen in verschiedenen Spezies nachgewiesen. Viele von ihnen erfordern jedoch besondere Fähigkeiten, teure Ausrüstung oder spezielle Umgebungen, was ihre weitverbreitete Verwendung einschränkt. Eine einfache, robuste und kostengünstige Versuchsmodell wird als standardisiertes Werkzeug, das in standardisierter Weise in verschiedenen Einrichtungen verwendet werden können, erforderlich. Die mikrochirurgische Ratte Bauch-Aorten-Aneurysma Seitenwand Modell kombiniert die Möglichkeit, sowohl neue endovaskuläre Behandlungsstrategien und die molekularen Grundlagen der Biologie Aneurysma in einem standardisierten und preiswert studierenWeise. Standardisierten Transplantate durch Form, Größe und Geometrie von Aorta descendens einer Spenderratte geerntet und dann mit einem syngenen Ratten-Empfänger transplantiert. Aneurysmen sind mit durchgehenden Naht Ende-zu-Seite oder unterbrochen 9-0 Nylonnaht an der infrarenalen Bauchaorta. Wir präsentieren die Schritt-für-Schritt-Handlungsanweisungen, Informationen über notwendige Ausrüstung und diskutieren wichtige anatomische und chirurgische Details für eine erfolgreiche mikro Schaffung eines Bauch-Aorten-Aneurysma Seitenwand in der Ratte.

Ein Pilot-Serie umfasst 14 Ratten. Anschließend wurden insgesamt 84 Tiere wurden nach dem vorgelegten Protokoll für mehrere Forschungsprojekte zwischen März und September 2012 weitere 29 Tiere dienten als Spender für die arterielle sackförmigen Transplantate betrieben. Die übrigen Versuche wurden unter Verwendung vorbehandelt Transplantate geerntet und aus früheren Experimenten mit Ratten des gleichen Geschlechtes, Stammes, Gewicht, Alter und gespeichert. Körpergewicht, Gesamtbetriebszeit, A...

Mikrochirurgische Seitenwandaneurysmen bei Ratten entstehen durch End-to-Side-Anastomose eines Aortentransplantats an der abdominalen Aorta. Wir präsentieren Schritt-für-Schritt-Anleitungen und besprechen anatomische und chirurgische Details für eine erfolgreiche experimentelle Anlage eines sackförmigen Aneurysmas.

Der Rat von Helsinki Mikroseitenwand Aneurysma Modell

Experimental saccular aneurysm models are necessary for testing novel surgical and endovascular treatment options and devices before they are introduced ...

Das Helsinkier Ratzen-Mikrochirurgie-Seitenwand-Aneurysma-Modell. Das folgende Video bietet detaillierte Beschreibungen der wichtigsten Merkmale des am Abteilung für Neurochirurgie des Universitätsklinikums Helsinki, Finnland, entwickelten mikrochirurgischen Seitenwand-Aneurysma-Modells an der Ratte. Wir stellen schrittweise Verfahrensanweisungen bereit, geben Informationen zu erforderlicher Ausrüstung und erörtern wichtige anatomische und chirurgische Details für die erfolgreiche mikrochirurgische Erzeugung eines Seitenwand-Aneurysmas an der Ratte sowie zu Hardware und Verbrauchsmaterialien.Der Operationsraum für Kleintiere muss ruhig, aseptisch gehalten werden und die Raumtemperatur sollte bei 23 ± 3 °C liegen. Für die experimentelle Aneurysma-Operation wird die folgende Mindestausrüstung benötigt: Ein Tischmikrochirurgiemikroskop, das idealerweise mit einem Assistenzokular und einer digitalen Mikroskopkamera ausgestattet ist.Es wird eine nicht poröse, wiederverwendbare Arbeitsfläche und eine reinigbare Instrumentenoberfläche verwendet, um die Laborbank vor Verbrauchsmaterialien wie Hautdesinfektionsmitteln, physiologischer Zelllinie, kleineren und größeren Materialien zu schützen. Goldtausch- und Nahtmaterialien, einschließlich Neun-Null-Mikronähte, werden bereitgestellt. Eine Fünf-Null-nicht resorbierbare und eine Null-Null-resorbierbare Naht werden vorbereitet.Für die folgenden standardmäßigen chirurgischen Instrumente werden chirurgische Scheren, Gewebepinzetten, ein Weichgewebespreizer oder ein selbsthaltender Retraktor sowie zwei feine chirurgische Klemmen benötigt. Die grundlegende mikrochirurgische Instrumentenausstattung umfasst einen gebogenen Mikronadelhalter, eine gebogene und zwei gerade Mikropinzetten sowie eine gerade oder gebogene Mikroschere. Die mikrochirurgischen Instrumente sollten in einer Nierenschale, gefüllt mit steriler Zellkultur, aufbewahrt werden, um zu verhindern, dass sie ankleben, und um sie sauber zu halten.Während der Operation. Die Nierenschale ist mit einer Gummimatte oder einem chirurgischen Handschuh gepolstert, um Beschädigungen an den Spitzen der Mikroinstrumente zu verhindern. Zusätzlich werden ein Vaskularclip-Applikator und drei vorübergehende vaskuläre atraumatische Klammern benötigt.Es ist wichtig, dass die verwendeten Klemmen eine geringe Schließkraft aufweisen, um Verletzungen an der sehr dünnen Wand der Rattenaorta zu vermeiden. Außerdem bereiten wir ein Lineal mit halbmilimetergenauen Skaleneinteilungen, ein kleines farbiges Gummikissen und eine kurze stumpfe Nadel vor. Die Ratte wird entsprechend ihrem Gewicht durch subkutane Injektion von Meine-Hydrochlorid, 0,4 Milligramm pro Kilogramm, und intraperitoneale Injektion von Ketomine-Hydrochlorid, 60 Milligramm pro Kilogramm, anästhesiert. Überprüfen Sie das Fehlen eines Zwickreflexes, um sicherzustellen, dass die Ratte vor dem Aufschneiden der Haut und der Eröffnung vollständig anästhesiert ist. Überwachen Sie den Zustand der Anästhesie alle 15 Minuten während der Operation anhand der Atemfrequenz, Herzfrequenz und Reaktion auf nozizeptive Reize.Die subkutane Injektion von Buprenorphin 0,03 Milligramm pro Kilogramm wird zur postoperativen Analgesie verabreicht und bei Bedarf wiederholt. Alle 12 Stunden Gewinnung der Transplantate aus der Aorta des Jurassischen. Legen Sie die Ratte in Rückenlage und fixieren Sie sowohl die Vorder- als auch die Hinterpfoten mit Operationsklebeband, ohne die Haut zu dehnen oder zu komprimieren.Wenden Sie einen schmerzhaften Doppelpinzettengriff an, um zu bestätigen, dass die Ratte vollständig reaktionslos ist, bevor die Brusthöhle geöffnet wird. Unmittelbar nach der Öffnung der Brusthöhle wird die Ratte durch eine intrakardiale Injektion von Ketaminhydrochlorid in tödlicher Dosis getötet, und die Lungen werden zur rechten Seite des Herzens verlagert. Pulmonalstamm, linke Vena subclavia, linke kraniale Vene, V. cava und die Venen der ATUs behindern die Entnahme der proximalen thorakalen Aorta nahe den markanten Venen.Es gibt einen guten Ansatzpunkt, um die Dissektion der absteigenden Aorta thoracica mit Mikroschere und Mikrozange zu beginnen. Verfolgen Sie die Aorta thoracica ausgehend von der dorsalen Wand des Tox nach kranial bis zum Aortenbogen durch vorsichtige stumpfe Retraktion und Dissektion mit der feinen chirurgischen Klemme, wobei die Gefäße abgeklemmt und anschließend mit der Schere durchtrennt werden. Die Klammern verbleiben an den Gefäßen und dienen als Retraktoren, um den darunterliegenden Aortenbogen freizulegen.Ein Ligatur wird direkt oberhalb der ersten A. intercostalis, die die Aorta verlässt, angelegt. Die Aorta descendens wird dann direkt unterhalb der A. subclavia sinistra und anschließend unterhalb der Ligatur durchtrennt. Es kann ein Dreaming durchgeführt werden, um eine standardisierte, senkrechte Aneurysmangeometrie zu erhalten oder gegebenenfalls einen bestimmten Winkel zwischen der Achse des Aneurysmas und der Aorta zu erreichen.Das Transplantat wird in seiner Breite und Länge gemessen. Gewonnene Transplantate können entweder unmittelbar in Empfängerratten transplantiert oder weiterverarbeitet werden, um eine Entzellerung der Gefäßwand zu erzielen. Entzelligte Transplantate können bis zur Reimplantation bei minus vier Grad Celsius gelagert werden.Zu einem späteren Zeitpunkt. Die Dekellularisierung der Aneurysmawand wurde als prädisponierend dafür gezeigt, dass das Aneurysm wächst, nachdem das Tier anästhesiert wurde; schneiden Sie das Fell von der Operationsstelle ab und reinigen Sie die Haut mit einem geeigneten Desinfektionsmittel, legen Sie die Ratte in Rückenlage fest und immobilisieren Sie sowohl die Vorder- als auch die Hinterpfoten mit einem chirurgischen Klebeband, ohne Zug oder Druck auf die Haut auszuüben; beugen Sie den Rücken durch Platzieren eines dicken Markers oder eines Ery-Stifts unter den Lendenwirbelbereich. Es ist wichtig, so viel Lordose der Lendenwirbelsäule wie möglich zu erreichen, um die retroperitoneale Exposition und den Zugang zur infrarenalen Aorta zu verbessern, was die mikrochirurgische Anastomose erleichtert; testen Sie das Fehlen des Zupfreflexes, um zu bestätigen, dass die Ratte vor dem Hautschnitt vollständig anästhesiert ist.Nach medianer Inzision werden der Dünndarm und der auffällige Saum nach rechts oder links verlagert. Das Ligament zwischen Dünndarm und absteigendem Kolon wird in kranialer Richtung durchtrennt. Um eine größere Exposition der dorsalen Körperwand zu ermöglichen, wird ein selbsthaltender Retraktor platziert, um den Darm fixiert auseinanderzuhalten.Die ideale Position der Endozyten-Aneurysma-Anastomose befindet sich auf der Ebene zwischen den Nieren- und den iliolumbalen Venen. Die Bauchaorta liegt während der Präparation retroperitoneal in Fettgewebe eingebettet. Besondere Aufmerksamkeit ist den paarigen, fast durchsichtigen Harnleitern und Hodengefäßen zu widmen.Eine weitere Zurückziehung der Eingeweide ist erforderlich. Größere Ghost-Swabs können verwendet werden. Die ventrale Oberfläche der dorsalen Körperwand ist mit einem dünnen Parietalperitoneum bedeckt.Einmal geöffnet, kann die Aorta während einer sorgfältigen scharfen und stumpfen Präparation der Bauchaorta direkt darunter sichtbar gemacht werden. Nur die Advia sollte angefasst werden, um Schäden an der Gefäßwand zu vermeiden. Häufig entspringen kleine Lendenarterien als segmentale Gefäße von der dorsalen Fläche der Bauchaorta und erschweren die Präparation.Die Verwendung gebogener Mikrozangen kann die Ligatur erleichtern. Es ist erforderlich, die Ligatur tief anzulegen und das Gefäß zu durchtrennen, um ein retrogrades Sekretieren zu vermeiden. Während der Aneurysmanähe wird eine farbige Gummimatte unter die Bauchaorta gelegt und mit einem kleinen Tupfer lockeres Bindegewebe abgedeckt, und die AIA wird auf Höhe der geplanten Anastomosestelle entfernt.Die Bauchaorta wird zuerst distal zur Anastomose, dann proximal abgeklemmt. Dies gewährleistet eine feste Füllung des Gefäßes und erleichtert den anschließenden arteriotomen Schnitt. Der arteriotome Schnitt wird entweder mit geraden oder gebogenen Mikroscheren durchgeführt.Eine Mikrozange hält ein sehr kleines Stück der Gefäßwand hoch, um eine elliptische Form auszuschneiden. Die Arterie wird gründlich in beide Richtungen mit der Zelllinie mithilfe einer stumpfen Nadel gespült. Die ersten beiden Nähte dieser End-seitlichen Anastomose werden am proximalen und distalen Ende der Arteriotomie platziert.Zu diesem Zeitpunkt wird entweder durchgehend oder unterbrochen genäht. Falls für unterbrochene Nähte entschieden wird, wird zunächst die hintere Naht um neun Uhr gesetzt. Das Greifen der Gefäßwand mit der Mikrozange wird vermieden.Stellen Sie nach Möglichkeit sicher, dass jede Naht durch alle Schichten der Wand durchgeführt wird. Nachfolgende Nähte können im Abstand zueinander gesetzt werden, beginnend direkt neben der allerersten Naht an den jeweiligen Wänden. Die AIA wird vorsichtig gefasst, wobei ein Zusammendrücken oder Greifen der Intima vermieden wird.Wenn die Hinterwand fertiggestellt ist, wird der endoluminale Teil der Anastomose überprüft. Bei fehlplatzierten Nähten werden nun dieselben Schritte in derselben Reihenfolge auf der Vorderseite der Anastomose durchgeführt, insbesondere der erste von insgesamt drei Knoten. Das Vorgehen sollte fest, aber nicht zu straff sein.Nach Abschluss der Endozytose wird der Bereich mit der Zelllinie gespült und zunächst die distale Klemme entfernt, um einen Rückfluss zu ermöglichen. Tritt offensichtlich Blutung aus dem Rückfluss auf, könnte ein zusätzlicher Stich erforderlich sein. Bei geringem Ausbluten kann die Hämostase durch sanften Druck auf die blutende Seite erreicht werden.Unter Verwendung eines kleinen Stückes eines Ghost-Swaps. Danach wird die proximale vaskuläre Klemme entfernt. Die Anastomose-Seite wird erneut gespült, und die verbleibenden Enden der Ligatur an der Aneurysma-Doom werden abgeschnitten. Die Durchgängigkeit der distalen abdominalen Arterie wird mittels direktem Melktest überprüft.Die Plastikfolie und der kleine Geistertupfer darunter werden entfernt. Das pulsierende Blut innerhalb des erzeugten Aneurysmas ist deutlich sichtbar. Nahtlinien um die Anastomose können zur zusätzlichen Hämostase mit kleinen Stücken von Fettgewebe oder Pongo abgedeckt werden.Wenn weiterhin ein geringes Sekretaustritt vorhanden ist, werden der Weichgewebespreizer und die Gazetupfer entfernt. Zusammenfassend lässt sich sagen, dass das Helsinkier Ratten-Aneurysma-Modell eine schnelle, kostengünstige und zuverlässige Methode darstellt, experimentelle Aneurysmen zu erzeugen, die hinsichtlich Größe, Form und geometrischer Konfiguration des Aneurysmas in Bezug auf die Mutterarterie standardisiert sind.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Medicine

Medizin

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