Name: Heterotope Hilfs Ratte Leber-Transplantation mit strömungs geregelt Pfortader Arterialisation in akutes Leberversagen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-09-13T14:00:00.000+00:00
Duration: 16 min 19 s
Description: Lernen Sie die heterotope Hilfslebertransplantation bei der Ratte mit strömungsgeregelter Pfortaderarterialisation zur Behandlung des akuten Leberversagens. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung von Transplantatfunktion und -morphologie.

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Diese Studie wurde von der &quot;Deutschen Forschungsgemeinschaft&quot; (DFG) gefördert. K. Schleimer wurde von der Lise-Meitner-Stipendium des Ministeriums für Wissenschaft und Forschung des Landes NRW unterstützt. Wir möchten Frau Mary-Joan Blümich für ihre ausgezeichnete Bearbeitung Unterstützung danken. Dr. Maria Kokozidou wurde von der Fresenius 2011_A61 finanziert.

1. Versuchstiere <ol><li> Besorgen Sie sich eine Ethikkommission die Genehmigung für alle Experimente, die durchgeführt werden, in Übereinstimmung mit den Tierschutz FELASA Richtlinien (K 40, 17/99). </li><li> Verwenden männlichen Lewis-Ratten zur Verfügung, um von jeder kommerziellen Züchter (zB Charles River Wiga GmbH, Sulzfeld, Deutschland) erwerben. Hier, 224 Tiere (112 Spendern, 112 Empfänger) wurden verwendet, um 112 Transplantationen durchzuführen. Die Empfänger wurden bei 6 Wochen nach der Operation getötet. Zum Zeitpunkt der Operation sollten die Tiere 250-350 g wiegen. </li><li> Halten Sie die Tiere in klimatisierten Räumen mit freiem Zugang zu Nahrung und Wasser. </li></ol> 2. Anästhesie und Operative Vorbereitung <ol><li> Platzieren Sie die Ratte in einem Plexiglaskasten zu der Anästhesiemaschine mit einer Sauerstoffdurchflussrate von 1 l / min und einer Isofluran Verdampfer mit 5% Narkosegas Anästhesie herbei verbunden. Aufrechterhaltung einer Narkose bei 1,5% Isofluran. </li><li> Legen Sie die Ratten inRückenlage auf einer Warmhalteplatte. </li><li> Entfernen Sie das Fell des Bauches mit einer Enthaarungscreme. </li><li> Bereiten Sie einen sterilen OP-Bereich wie folgt: Verwenden Sie ein Desinfektionsmittel, um den Tisch reinigen. Zur Desinfektion von der Inzisionsstelle Verwendung Chlorhexidin ersten, zweiten Alkohol und schließlich einer Waschlösung (zB Chlorhexidin und 70% Isopropylalkohol). Tragen Sie einen Einweg-OP-Kittel und OP-Handschuhen. </li><li> Sterile Mikroinstrumenten. </li><li> Verwenden Sie ein Operationsmikroskop in 12-20-fache Vergrößerung. </li></ol> 3. Chirurgische Verfahren <ol><li> Spender Betrieb Vorbereitung <ol><li> Führen Sie eine mediane Laparotomie und Resektion der linken Seitenlappen und der Mittellappen des Transplantats durch Higgins beschrieben. 14 </li><li> Dann bereiten die Ligamentum hepatoduodenale. Ersten ligieren den Gallengang, um Staus und Dilatation der kleinen Gallengang zu induzieren. Dann ligieren und durchtrennen die gastroduodenal Vene und Arterie. Anschließend isolieren Zöliakie Stamm und die gemeinsame Leberarterie und durchschneiden die linke Magenarterie und die Milzarterie. Inzision der Gallengang verstopft, und die Einführung einer 20-G-Stent hinein. Die Positionierung des Stents muss die Entwässerung der gesamten hilar Gallengangsystems zu gewährleisten. Schneiden den Gallengang distal des Stents. </li><li> Isolieren Sie die infrahepatische Segment der Hohlvene rechts über der rechten Nierenvene. Perfusion </li><li> Nach der Ligation der Aorta oberhalb des Truncus, klemmen die Pfortader und einzuschneiden es. Einführung der Perfusion Katheter (14 G) in die Pfortader, und führen Sie die Perfusion mit 30 ml Histidin-Tryptophan-Ketoglutarat (HTK) -Lösung (12 cm H2O, 4 ° C). </li><li> Schneiden Sie die Membran und das suprahepatischen Hohlvene, damit das Perfusat zu fließen. </li><li> Verbrauchsteuern Das Zöliakie-Stamm zusammen mit einem Aorten-Patch und spülen Sie es mit Histidin-Tryptophan-Ketoglutarat-Lösung. Explantation </li><li> Durchschneiden die infrahepatische Hohlvene rechts über der rechten Nierenvene. </li><li> Legen Sie dann einen Stent mit einem Durchmesser von 0,3 mm in der Pfortader und fixieren Sie es mit einer Ligatur. Beim folgenden Vorgang wird die Pfortader über die rechte Nierenarterie arterialisiert. Durchschneiden die Pfortader distal des Stents. </li><li> Nach der Ligation der suprahepatischen Hohlvene, Transekt es zusammen mit einer Manschette des Zwerchfells. </li><li> Explantation der Prothese und speichern sie in Histidin-Tryptophan-Ketoglutarat (HTK) -Lösung bei 4 ° Celsius in einer Plastiktüte auf Eis. Platz Ecke Nähte (8-0 Ethilon) in der infrahepatische Hohlvene. </li></ol></li><li> Empfänger Betrieb <ol><li> Führen Sie eine mediane Laparotomie und bereiten die infrahepatische Hohlvene. Dann isolieren die rechte Nierenarterie und der Harnleiter, ligieren den Harnleiter und durchschneiden sie. Klemmen Sie die rechte Nierenarterie an seinem Ursprung, dann ligieren das Recht Nierenvenen. Dann, nach Durchtrennung der beiden neunal Gefäße, führen Sie die Nephrektomie. Anschließend verkürzen die rechte Nierenarterie, spülen Sie es mit Heparin Kochsalzlösung (40 UI Heparin / ml Kochsalzlösung). </li><li> Durchschneiden das Recht Nierenvenen proximal der Ligatur nach proximal und distal Klemmung des infrahepatische Hohlvene zu einer ovalen Lumen im infrahepatische Hohlvene erstellen. Spülen Sie die Hohlvene mit Heparin Kochsalzlösung. Implantieren das Transplantat in der rechten Nierengegend des Bauches des Empfängers. </li><li> Anastomosieren infrahepatische Hohlvene Ende-zu-Seite des Spenders auf die recipient`s Hohlvene mit einem 8-0 Ethilon laufende Naht. </li><li> Nach dem Spülen mit Heparin / Kochsalzlösung einzuführen, den Stent in der Pfortader in der rechten Nierenarterie (3). Schließen Sie die Pfortader und Nierenarterie mit 2 Maschen (8-0 Ethilon). Befestigen Sie die Verknüpfung Stent in der Nierenarterie mit einer Ligatur (geflochtene Seide schwarz 7-0). </li><li> Der Reperfusion zu ermöglichen, zunächst die Arterienklemme zu entfernen, dann beidevenösen Klemmen (4). </li><li> Bereiten Sie die infrarenalen Aorta, dann einen proximalen und distalen microCLAMP und einschneiden die Aorta rechts zwischen den beiden Klemmen. Führen Sie eine Ende-zu-Seit-Anastomose zwischen der Aorta und Truncus des Spenders, mit einem Aorten-Patch, mit einem 10-0 Ethilon laufende Naht. </li><li> Legen Sie die Gallengang in den Zwölffingerdarm: Tragen Sie eine Tabaksbeutelnaht im Zwölffingerdarmwand, machen Sie einen kleinen Schnitt in der Zwölffingerdarmwand in der Mitte der Tabaksbeutel. Einführung der Stent Gallengang in den Zwölffingerdarm, und ziehen Sie die Tabaksbeutelnaht. Schließlich halten den Zwölffingerdarm und der Gallengang fest zusammen mit zwei Maschen (Ethilon 8-0) (Abbildung 5). </li><li> Führen Sie dann eine Zwischensumme Resektion des nativen Leber, zuerst von Emond et al. um akute Leberversagen zu imitieren. 7 </li><li> Fixieren die suprahepatischen Hohlvene des Transplantats mit einer Manschette Membran, an der seitlichen Bauchwand von der Wiederfänger mit 4-0 Vicryl Naht. Spülung der Bauch mit Kochsalzlösung (Abbildung 6). </li><li> Für die Muskelschicht mit einem 4-0 Vicryl genäht und die für die Haut ein 3-0 Vicryl fortlaufende Naht. </li></ol></li></ol> 4. Wiederherstellung und Postoperative Behandlung <ol><li> Lassen Sie die Tiere aus der Narkose zu erholen unter einer Infrarotwärmelampe. </li><li> Injizieren Buprenorphin in einer Dosierung von 0,03-0,05 mg / kg KG sc alle 8-12 Stunden für 2 Tage. </li><li> Untersucht die Tiere über den Allgemeinzustand und Anzeichen von Krankheit oder Infektionen. </li></ol> 5. Berechnung des Anfangsmutterlebergewicht Berechnen Sie die ersten nativen Lebergewicht in der folgenden Weise: subtrahieren das Gewicht der resezierten Leberlappen aus der vollständigen Lebergewicht (2,66% des Körpergewichts (dieser Wert mit einer Standardabweichung von 0,49% +/- wurde in früheren Experimenten mit n bestimmt = 80 Tiere des gleichen Stamms undge)). 15

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<li>Palmes, D., Dietl, K. H., Drews, G., Holzen, J. P., Spiegel, H. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxiliary+partial+orthotopic+liver+transplantation%3A+treatment+of+acute+liver+failure+in+a+new+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22Langenbecks+Arch+Surg%22%5BJournal%5D)">Auxiliary partial orthotopic liver transplantation: treatment of acute liver failure in a new rat model.</a> Langenbecks Arch Surg. (386), 534-541 (2002).</li>
<li>Schleimer, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+microcirculation+of+a+liver+graft+by+controlled+portal+vein+arterialization%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Improved microcirculation of a liver graft by controlled portal vein arterialization.</a> J Surg Res. 116 (2), 202-210 (2004).</li>
<li>Schleimer, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Portal+hyperperfusion+causes+disturbance+of+microcirculation+and+increased+rate+of+hepatocellular+apoptosis%3A+investigations+in+heterotopic+rat+liver+transplantation+with+portal+vein+arterialization%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">Portal hyperperfusion causes disturbance of microcirculation and increased rate of hepatocellular apoptosis: investigations in heterotopic rat liver transplantation with portal vein arterialization.</a> Transplant Proc. 38 (3), 725-729 (2006).</li>
</ol>

Alle Autoren erklärten keine Interessenkonflikte.

Der erste Hilfs heterotopen Rattenlebertransplantation wurde von Lee et al., 16 1966, gefolgt von Hess. 17 Pfortader des Transplantats wurde mit der Pfortader des Empfängers anastomosiert. Während dieser Prozedur wird die Pfortader Blutversorgung des nativen Leber beeinträchtigt. Im Jahr 1991 durchgeführt Hong HALT mit PVA über die Beckenarterie des Empfängers. Ohne 13 Blutfluss Regulierung massiven Portal und Sinus Staus aufgetreten. <p class="j...

Akute Leberversagen stellt ein schwerwiegendes Problem in der klinischen Medizin, die zu einer Mortalitätsrate von 60-80%. 8 In akuten Leberversagen ist die Hilfslebertransplantation eine vielversprechende alternative Therapie, um die akute Phase überbrücken. Die native Leber ist links zu regenerieren und nach dem Regenerations die Immunsuppression Medikamente können abgesetzt werden. Als Folge das Transplantat werden atrophisch. Allerdings ist die Operationstechnik für Hilfslebertransplantation ist immer noch diskutiert. 1-3 In diesem Zusammenhang berichtet Terpstra den Mangel an Platz für das Transplantat, das Portal Blut stehlen Phänomen und das Problem der venösen Stauung und Entwässerung. 9-10 Pfortader des Spenders wurde Pfortader des Empfängers anastomosiert Ende-zu-Seite. Dies führte zu Portal-Flow Wettbewerb zwischen dem Transplantat und der nativen Leber und in Portalvenenthrombose. Die meisten dieser technischen Probleme können bei der Verwendung des APOLT-Methode (orthotop vermiedenic Implantation von Hilfssegmente). 4 Allerdings erfordert diese Methode umfangreichen Resektionen sowohl der nativen Leber und des Transplantats. 4 1998 Erhard und sein Team entwickelten die heterotope Hilfslebertransplantation (HALT) unter Verwendung Pfortader Arterialisation (PVA) (Abbildung 1 ). Hilus und die Pfortader der nativen Leber mit der Verwendung dieses Verfahrens eingehalten. Das schont die Empfänger von unerwünschten Nebenwirkungen wie Thrombose der Pfortader und Portalblut stehlen Phänomen, das Mutter Leber Erholung stören könnten. Darüber hinaus werden keine umfangreichen Leber Resektionen der nativen Leber und Transplantat für diese Methode zur Überbrückung (Graft) und Regeneration (native Leber) erforderlich, damit mit weniger Blutungen und verbleibende Gesamt Leberparenchymzellen Masse. Diese Technik zeigte vielversprechende erste klinische Ergebnisse. 5-6 Das Ziel dieser experimentellen Arbeit war die Entwicklung eines HALT-Technik mit Pfortader in Arterialisationdie Ratte für Forschungszwecke (Abbildung 2). In den Vorversuchen haben wir nicht berücksichtigen, das den Blutfluss Regulierung der arterialisierte Pfortader 11 Seitdem der Blutfluss in der Pfortader arterialisierte nehmen, die in Staus des transplantierten Transplantat nach Reperfusion und massive Blutungen aus der Leberkapsel geführt. wurde mit einem Stent, der mit einem Innendurchmesser von 0,3 mm und einer Länge von 8 mm geregelt. Modellversuche habe gezeigt, dass ein Stent Durchmesser von 0,3 mm ergibt sich eine mittlere Durchblutung im arterialisierten Pfortader, die innerhalb des oberen physiologischen Bereich liegt (1,7 +/- 0,4 ml / min / g Lebergewicht). 12 Unsere Ergebnisse ohne Blutflussregel korrelieren mit den Ergebnissen der Hong, der HALT mit PVA über die Beckenarterie des Empfängers 13 In seinen Experimenten. ohne Blutfluss Regulierung massiven Portal durchgeführt und Sinus Staus aufgetreten. Das Ziel unserer Video ist auf demonstrate schrittweise dies ne.w Versuchsoperationstechnik bei der Ratte. Auf lange Sicht kann die vorgeschlagene Technik in Studien zur Leberregeneration und inter Leber Wettbewerb und Pfortader Arterialisation, Pfortader Hyperperfusion und Portalblutflussregelung verwendet werden.

<table><tbody><tr><td>Geflochtene Seide schwarz 7-0&nbsp;</td><td>Ethicon Produkte</td><td>892100</td><td></td></tr><tr><td>Vicryl 3-0</td><td>Ethicon Produkte</td><td>J285G</td><td></td></tr><tr><td>Vicryl 4-0</td><td>Ethicon Produkte</td><td>J284G</td><td></td></tr><tr><td>Ethilon 8-0</td><td>Ethicon Produkte</td><td>1714G</td><td></td></tr><tr><td>Ethilon 10-0</td><td>Ethicon Produkte</td><td>7770G</td><td></td></tr><tr><td>Vasofix Sicherheit 14G</td><td>B Braun</td><td>2758853</td><td></td></tr><tr><td>Vasofix Sicherheit 20G</td><td>B Braun</td><td>2758818</td><td></td></tr><tr><td>2 französische (0,012"/0,3 mm ID x 0,025"/0,6 mm OD) x 24"/60 cm Polyurethan-Katheter</td><td>Access Technologies ein Geschäftsbereich von Norfolk Medical, Inc., Illinois, USA</td><td>CNC-2P</td><td></td></tr><tr><td>HTK-Lösung, Custodiol</td><td>Dr. Franz K&ouml; hler Chemie GmbH, Alsbach-H&auml; hnlein, Deutschland</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isofluoran 5 %</td><td></td><td></td><td>Jedes Genericon</td></tr><tr><td>Heparin</td><td></td><td></td><td>Jedes Genericon</td></tr><tr><td>0,9 % Kochsalzlösung</td><td></td><td></td><td>Jedes Genericon</td></tr><tr><td>Buprenorphin</td><td></td><td></td><td>Jedes Genericon</td></tr></tbody></table>

heterotope hilfs ratte leber-transplantation mit strömungs geregelt pfortader arterialisation in akutes leberversagen

Heterotopic Auxiliary Rat Liver Transplantation With Flow-regulated Portal Vein Arterialization in Acute Hepatic Failure

In akuten Leberversagen Hilfslebertransplantation ist eine interessante Alternative Ansatz. Ziel ist es, eine vorübergehende Unterstützung bieten, bis die ausgefallene nativen Leber regeneriert hat. 1-3 Die APOLT-Methode, die orthotope Implantation von Hilfs segments- wendet die meisten technischen Probleme. Allerdings erfordert diese Methode umfangreichen Resektionen sowohl der nativen Leber und des Transplantats. 4 Im Jahr 1998 entwickelte Erhard heterotopen Hilfslebertransplantation (HALT) unter Verwendung Pfortader Arterialisation (PVA) (Abbildung 1). Diese Technik zeigte vielversprechende erste klinische Ergebnisse. 5-6 Wir entwickelten eine HALT-Technik mit stromgeregelten PVA bei der Ratte um den Einfluss der Strömungs geregelt PVA auf die Transplantat Morphologie und Funktion (Abbildung 2) zu untersuchen. Eine Lebertransplantat auf 30% seiner ursprünglichen Größe verringert wurde heterotop in der rechten Nierengegend des Empfängers nach der Explantation der rechten Niere implantiert.60; Die Infrarot-Leber Hohlvene des Transplantats wurde mit dem infrahepatische Hohlvene des Empfängers anastomosiert. Die Arterialisierung Pfortader des Spenders wurde über rechte Nierenarterie des Empfängers mit dem Stent-Technik durchgeführt. Der Blutdurchflussregulierung des arterialisierten Pfortader wurde mit der Verwendung eines Stents mit einem Innendurchmesser von 0,3 mm erreicht. Die Zöliakie-Stamm des Transplantats war Ende-zu-Seite mit der Aorta des Empfängers und des Gallengangs anastomosiert wurde in den Zwölffingerdarm implantiert. Eine Zwischensumme Resektion des nativen Leber wurde durchgeführt, um akutes Leberversagen auslösen. 7 Auf diese Weise wurden 112 Transplantationen durchgeführt. Die perioperative Überlebensrate betrug 90% und der 6-Wochen-Überlebensrate betrug 80%. Sechs Wochen nach der Operation, die native Leber regeneriert, zeigt eine Gewichtszunahme von 2,3 ± 0,8 g auf 9,8 ± 1 g. Zu dieser Zeit, Gewichtsabnahme des Transplantats von 3,3 ± 0,8 g auf 2,3 ± 0,8 g. </p&gt; Wir waren in der Lage, vielversprechende langfristige Ergebnisse in Bezug auf die Transplantat-Morphologie und Funktion zu erhalten. HALT mit stromgeregelten PVA zuverlässig überbrückt akutes Leberversagen, bis die einheimischen Leber regeneriert.

Die mittlere Dauer der Transplantation war etwa 150 min. Die kalte Ischämie Zeit betrug 64 min +/- 7, die warme Ischämie Zeit weniger als 25 min. Die perioperative Überlebensrate betrug 90% und der 6-Wochen-Überlebensrate betrug 80%. Der Verlust von 20% ist auf Peritonitis, da der Stent-Dislokation und Gallen Leckage (vier Tiere) während der ersten postoperativen Woche und wegen Lungenentzündung, intra-abdominalen Abszess und Ileus (sieben Tiere) in den folgenden fünf Wochen. Die überlebende...

Hilfslebertransplantation bietet eine temporäre Unterstützung in akuten Leberversagen, bis die Regeneration der Leberversagen. Die heterotope Hilfslebertransplantation (HALT) mit Pfortader Arterialisation (PVA) macht ausreichende Leberfunktion. Wir entwickelten eine analoge Technik in der Ratte, um den Einfluss der Pfortader Arterialisation auf die Morphologie und Funktion des Transplantats zu untersuchen.

Heterotope Hilfs Ratte Leber-Transplantation mit strömungs geregelt Pfortader Arterialisation in akutes Leberversagen

In acute hepatic failure auxiliary liver transplantation is an interesting alternative approach. The aim is to provide a temporary support until the ...

Das akute Leberversagen stellt ein schwerwiegendes Problem in der klinischen Medizin dar und führt bei akutem Leberversagen zu einer Sterblichkeitsrate von 60 bis 80 %. Die Hilfslebertransplantation ist eine vielversprechende alternative Therapie. Nach Regeneration der Eigenleber kann die Immunsuppression abgesetzt und das Lebertransplantat entfernt oder sich zur Atrophie überlassen werden.Jedoch ist die operative Technik der Hilfslebertransplantation umstritten. Die APOL-Methode, bei der Hilfssegmente orthotop implantiert werden, vermeidet die meisten technischen Probleme, die auftreten könnten. Diese Methode erfordert jedoch umfangreiche Resektionen sowohl der Eigenleber als auch des Transplantats.1998 initiierten Erhart und sein Team die heterotopische auxiliäre Lebertransplantation, bekannt als HALT. Mithilfe einer arteriellen Portadvenen-Anastomose, genannt PVA, zeigte diese Technik zunächst verheißungsvolle klinische Ergebnisse. Wir haben eine HALT-Technik mit flussregulierter Portadvenen-Arterialisierung an der Ratte zu Forschungszwecken entwickelt. Dieses Video veranschaulicht detailliert diese neue experimentelle Technik. 224 syngene männliche Lewis-Ratten mit einem Gewicht von 250 bis 350 Gramm wurden operiert.Die Operationen am Spender und Empfänger wurden unter Inhalationsanästhesie durchgeführt. Die Vollnarkose der Tiere wurde mit Oph-Fluoran in einer mit dem Anästhesiegerät verbundenen Plexiglasbox induziert, wobei die Sauerstoffflussrate bei einem Liter pro Minute lag. Der Verdampfer hatte eine Konzentration von 5 % Fluoran.Die Anästhesie wurde bei 1,5 % aufrechterhalten. Die Genehmigung des lokalen Ethik-Komitees wurde für alle Experimente eingeholt, die gemäß den Tierschutz-phia-Richtlinien durchgeführt wurden. Während der folgenden Operation wird die Pfortader über die rechte Nierenarterie artifizialisiert.Der Blutfluss in der arterialisierten Pfortader wird durch einen Stent mit einem Innendurchmesser von 0,3 Millimetern und einer Länge von acht Millimetern reguliert. Pilotexperimente hatten gezeigt, dass ein Stentdurchmesser von 0,3 Millimetern einen durchschnittlichen Blutfluss in der arterialisierten Pfortader ergibt, der innerhalb des oberen physiologischen Bereichs liegt.Die hepatische Mikrozirkulation wird mittels OPS-Bildgebung sichtbar gemacht, einer Reflexionsspektroskopie-Technik, die die Echtzeitbeobachtung der hepatischen Mikrozirkulation in vivo ermöglicht. Ohne Verwendung von Kontrastmitteln und unter physiologischer Kochsalzlösung wird die Sonde vorsichtig auf der Oberfläche des rechten Leberlappens positioniert. Dabei ist es wichtig, das Leberparenchym nicht zu komprimieren.Die Spenderoperation wird zunächst nach medianer Laparotomie demonstriert. Der linke laterale Lappen und der mediale Lappen des Transplantats werden gemäß Higgins reseziert. Hier sehen Sie die Präparation des hepatoduodenalen Ligaments.Der Gallengang wird zuerst ligiert, um eine Stauung und Dilatation des kleinen Gallengangs zu induzieren. Die Vena und Arterie gastroduodenalis werden ligiert und durchtrennt. Anschließend werden der CIC-Stamm, die Arteria hepatica communis, die Arteria gastrica sinistra und die Arteria splenica freigelegt.Die Arteria gastrica sinistra und die Arteria splenica werden durchtrennt. Hier sehen Sie den CIC-Stamm und hier die Arteria hepatica communis. Der gestaute Gallengang wird incidiert, und ein Stent mit 20 Gauge wird in ihn eingeführt.Die Positionierung des Stents muss die Drainage des gesamten hileren Gallengangsystems sicherstellen. Der Gallengang wird distal zum Stent durchtrennt. Das infrahepatische Segment der Vena cava wird direkt oberhalb der rechten Nierenvene isoliert.Hier sehen Sie die Organe nach der Vorbereitung, nach der Ligatur der Aorta oberhalb des Truncus coeliacus. Die Vena portae wird geklemmt und incidiert. Der Perfusionskatheter wird nun eingeführt, und die Perfusion erfolgt mit 30 Milliliter Histidin-Tryptophan-Keto-Glutarat-Lösung.Das Zwerchfell und die vena cava suprahäpatisch werden durchtrennt, um das Abfließen des Blutes zu ermöglichen. Der CIC-Stamm zusammen mit einem aortalen Patch wird entfernt und mit einer Histidin-Tryptophan-Ketoglutarat-Lösung gespült. Die vena cava infrahäpatisch wird direkt oberhalb der rechten Nierenvene durchtrennt.Danach wird ein Stent mit einem Durchmesser von 0,3 Millimetern in die Vena portae eingebracht und mit der Ligatur fixiert. Die Vena portae wird distal zum Stent durchtrennt. Hier sehen Sie den Ductus choledochus, die Vena portae, den Truncus coeliacus und die infrahepatische Vena cava.Nach der Ligatur der suprahepatischen Vena cava wird diese zusammen mit einem Diaphragmamantel durchtrennt. Das Transplantat wird explantiert und in einer Plastiktüte auf Eis in Histidin-Tryptophan-Ketoglutarat-Lösung bei vier Grad Celsius gelagert. Eckenähte werden in der infrahepatischen Vena cava platziert. Die Empfängeroperation wird als Nächstes demonstriert.Nach Laparotomie und Vorbereitung werden zunächst die unterhalb der Leber verlaufende Hohlvene und die rechte Nierenarterie freigelegt. Anschließend wird der Harnleiter ligiert und durchtrennt. Nachdem die rechte Nierenarterie an ihrer Abzweigungsstelle abgeklemmt wurde, wird die rechte Nierenvene ligiert.Danach wird nach Durchtrennung beider Nierengefäße die Nephrektomie durchgeführt. Anschließend wird die rechte Nierenarterie verkürzt und mit Heparin-Salzlösung durchgespült, nach proximaler und distaler Abklemmung der infrahepatischen Vena cava. Die rechte Nierenvene wird proximal zur Ligatur durchtrennt.Auf diese Weise wird ein ovales Lumen in der infrahepatischen Kabelvene erzeugt. Das Transplantat wird unterhalb der nativen Leber platziert. Die infrahepatische Kabelvene des Spenders wird end-seitlich mit der Kabelvene des Empfängers mittels einer kontinuierlichen Naht aus acht-0-Ethylon verbunden.Nach der Spülung mit Heparin-Salzlösung wird der Stent in der Vena porta in die rechte Nierenarterie eingeführt. Die Vena porta und die Nierenarterie werden mit zwei Nähten verbunden. Die Verwendung eines Stents mit einem Innendurchmesser von 0,3 Millimetern und einer Länge von acht Millimetern ermöglicht eine arteriovenöse Anastomose mit standardisierten, strömungsregulierten Zuflussraten.Der Verbindungsstent wird mit einer Ligatur in der Arteria renalis fixiert, um eine Reperfusion zu ermöglichen. Zunächst wird die arterielle Klemme entfernt, gefolgt von beiden venösen Klemmen. Nun sieht man die Mikrozirkulation zum Zeitpunkt der Reperfusion, beginnend in den interlobulären Gefäßen, fortlaufend entlang der Sinusoide bis zur zentralen Vene des Leberläppchens.Hier sehen Sie nun das reperfundierte Transplantat, die artifiziell gemachte Portalvene und den Gallengang. Die infrarenale Aorta wird präpariert, anschließend abgeklemmt und incidiert. Eine End-zu-Seit-Anastomose zwischen der Aorta und dem Truncus coeliacus unter Verwendung eines Aortenpatches wird mit einer laufenden 10-O-Ethylennadht durchgeführt.Nachdem eine Beutelnaht angelegt wurde, wird eine kleine Inzision in der Darmwand des Duodenums vorgenommen. Der stentversehene Gallengang wird dann in das Duodenum eingeführt und die Beutelnaht wird festgezogen. Abschließend werden Duodenum und Gallengang mit zwei Nähten fest miteinander verbunden.Hier sehen Sie die reperfundierte Transplantat und die native Leber, die subtotal reseziert wurde, um ein akutes Leberversagen nachzuahmen. Die Tiere erhielten postoperativ zwei Tage lang alle acht bis zwölf Stunden subkutan Buprenorphin injiziert.Die perioperative Überlebensrate betrug 90 % und die Sechs-Wochen-Überlebensrate lag bei 80 %. In der ersten postoperativen Woche verstarben vier Ratten an einer Peritonitis aufgrund einer Stentdislokation und biliaerer Leckage. Außerdem verstarben sieben Ratten an Pneumonie, intraabdominalem Abszess oder Ileus. Die überlebenden Tiere befanden sich in einem exzellenten Allgemeinzustand.Sechs Wochen nach der Operation lagen die Parameter der Lebersynthese im Normalbereich. Hier sehen Sie die Wissenschaftler sechs Wochen nach der heterotopen auxiliären Lebertransplantation bei der Ratte mit arterieller Portader. Sechs Wochen nach der Operation hatte sich die native Leber regeneriert, wobei ihr Gewicht von 2,3 ± 0,8 Gramm auf 9,8 ± 1 Gramm zunahm.Zu diesem Zeitpunkt war das GRAT atrophisch und das Lebergewicht nahm von 3,3 ± 0,8 Gramm auf 2,3 ± 0,8 Gramm ab. Das Gesamtgewicht beider Lebern lag innerhalb des physiologischen Verhältnisses von Lebergewicht zu Körpergewicht in der histopathologischen Färbung mit Hämatoxylin-Eosin sechs Wochen nach Beendigung. Reguläre Hepatozyten wurden ohne Ödem oder fettige Degeneration beobachtet.Alle Graphen zeigten eine leichte Proliferation der Gallenwege, duktilen und cholangitischen Veränderungen aufgrund von Schlammformation. Nur in zwei Graphen konnte eine niedriggradige interstitielle hepatocelluläre Nekrose beobachtet werden. Die Verwendung eines Stents mit einem Innendurchmesser von 0,3 Millimetern und einer Länge von acht Millimetern führt zu einem durchschnittlichen portalen Blutfluss nach Reperfusion der arterialisierten Vena portae, der im oberen physiologischen Bereich liegt.Die biliäre Drainage ist die Achillesferse der Lebertransplantation. Bei der Lebertransplantation an Ratten sterben die Empfänger häufig innerhalb der ersten postoperativen Tage aufgrund von biliärem Leck und Peritonitis. Wir führen die Kolodochoostomie unter Verwendung eines Stents, einer peristringalen Naht und zwei zusätzlichen Stichen durch, die sie gegen Leckagen und Lösung sichern.Mithilfe dieser Technik konnten die biliären Komplikationen auf 4 % reduziert werden. In der vorliegenden Studie wurde eine subtotale Resektion der nativen Leber durchgeführt. Wir verwenden diese zuerst von Amond beschriebene Methode, um ein akutes Leberversagen zu induzieren. Im Gegensatz zur Anwendung hepatotoxischer Substanzen ist diese Methode standardisiert und zeigt keine Nebenwirkungen auf andere Organsysteme oder auf das Transplantat. Im Gegensatz zur orthotopen Lebertransplantation gibt es keine endgültige hepatische Phase. Während der heterotopen Lebertransplantation kann die Anas ohne Zeitdruck durchgeführt werden. Außerdem besteht in der heterotopen Position keine Störung durch das sich bewegende Zwerchfell.Außerdem wird die Pfortader des Empfängers nicht abgeklemmt, wodurch eine venöse Stauung im Dünndarm, Milz, Pankreas und Magen vermieden wird. Mit dieser Technik erzielten wir vielversprechende Langzeitergebnisse hinsichtlich Transplantat, Morphologie und Funktion bei heterotoper, akzessorischer Rattenlebertransplantation mit flußgeregelter Pfortader. Die arterielle Pfortader ist eine innovative Technik, die nur wenige Fallstricke bietet und leicht zu erlernen ist.Diese Technik eignet sich zur Untersuchung der Wirkung einer portalen Venen- und arteriellen hepatischen Hyperperfusion sowie der Durchblutungsregulation auf die Mikrozirkulationsfunktion und -morphologie der Leber. Dieses Modell ermöglicht zukünftige Studien zur Leberregeneration im Rahmen einer interhepatischen Konkurrenz.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Medicine

Medizin

Wir präsentieren einen einfach zu etablieren Revision der klassischen Zwei-Manschette Technik zur orthotopen Lebertransplantation in der Ratte.

Lebertransplantation bei der Ratte

Lebertransplantation bei Ratten ist ein unverzichtbares experimentelles Modell für die biomedizinische Forschung. Hier präsentieren wir unsere chirurgischen Verfahren zur orthotopen Ratten Lebertransplantation mit arteriellen Rekonstruktion mit 50% partielle Transplantat.

Chirurgische Verfahren für eine Ratte Modell Teilweise Lebertransplantation mit arteriellen Rekonstruktion

Experimentelle Tierversuche spielen eine zentrale Rolle bei der Entwicklung der klinischen Transplantationspraxis. Das porzine orthotope Lebertransplantationsmodell (OLTx) ähnelt stark den menschlichen Bedingungen und wird häufig in der klinisch orientierten Forschung eingesetzt. Das folgende Protokoll enthält alle Informationen für ein zuverlässiges porzines OLTx-Modell unter Verwendung eines aktiven Porto-Kaval-Jugular-Shunts.

Technik der Schweineleber Beschaffung und orthotopen Transplantation mit einem Active Porto-Kava-Shunt

Wir beschreiben eine neuartige Technik für die heterotope abdominale Herz-Lungen-Transplantation (HAHLT) bei Ratten. Die Transplantatkonfiguration führt zu einer teilweise beladenen Transplantatzirkulation, die eine direkte funktionelle Beurteilung ermöglicht. Dieses Modell kann für akute oder chronische Studien der Funktion und des immunologischen Status des transplantierten Transplantats verwendet werden.

Rat Heterotope Abdominal Herz / Einzel-Lungen-Transplantation in einer Volume-Konfiguration geladen

Hier ist ein Protokoll mit neu arterialized Ratte teilweise Lebertransplantation vorgestellt. Insbesondere war 70 % Leber resezierten in Vivo durch eine aktualisierte Technik des Schiffes-orientierte Hepatektomie. Die leberarterie wurde in einer End-to-Side Weise rekonstruiert. Die Manschette Technik wurde modifiziert, um die Anastomose Infrahepatic Vena Cava verkürzen.

Re Arterialized Ratte teilweise Leber Transplantation mit einem in Vivo Schiff-orientierte 70 % Hepatektomie

Die Rekonstruktion der Suprahepatic Vena Cava (SHVC) bleibt ein schwieriger Schritt in der Ratte orthotopen Leber Transplantation. In diesem Artikel zeigen wir Schritt für Schritt-Protokoll für den Wiederaufbau der SHVC bei Ratten mit einer neuartigen magnetischen Anastomose-Technik.

Einem Rattenmodell der orthotopen Lebertransplantation mit einer neuartigen magnetischen Anastomose-Technik für Suprahepatic Vena Cava Wiederaufbau

Das Ziel dieser Studie ist es, das orthotopische Lebertransplantationsmodell der Ratte zu modifizieren, um die Transplantation menschlicher Leber besser darzustellen und das Überleben der Empfänger zu verbessern. Die vorgestellte Methode stellt den hepatischen arteriellen Zufluss wieder her, indem die gemeinsame Leberarterie der Spenderleber mit der richtigen Leberarterie der Empfängerleber verbunden wird.

Reduzierte Komplikationen nach arterieller Wiederverbindung in einem Rattenmodell der orthotopischen Lebertransplantation

Dieses Papier enthält eine detaillierte Beschreibung, wie man ein Tiermodell der anhepatischen Phase (Leberischämie) bei Ratten baut, um die Grundlagenforschung zur Ischämie-Reperfusionsverletzung nach einer Lebertransplantation zu erleichtern.

OrganIschemia-Reperfusion Verletzung durch Simulation hämodynamischer Veränderungen im Lebertransplantationsmodell der Ratte

Das hier beschriebene heterotope Hilfslebertransplantationsprotokoll der Ratte bietet ein praktisches Untersuchungswerkzeug zur Erforschung der Mechanismen der Abstoßung von Lebertransplantaten. Dieses Modell trägt dazu bei, die chirurgischen Hürden und den Stress der orthotopen Lebertransplantation bei Ratten zu verringern.

Heterotopes Hilfstransplantationsmodell für die ganze Leber von Ratten unter Verwendung einer Hepaticoureterostomie für Studien zur Abstoßung von Allotransplantaten

Das Manuskript beschreibt die erforderlich sind, um die heterotopen Herztransplantation in der Maus führen Sie die Schritte.

Murine Heterotope Heart Transplant-Technik

Lernen Sie die heterotope Hilfslebertransplantation bei der Ratte mit strömungsgeregelter Pfortaderarterialisation zur Behandlung des akuten Leberversagens. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung von Transplantatfunktion und -morphologie.

Heterotope Hilfs Ratte Leber-Transplantation mit strömungs geregelt Pfortader Arterialisation in akutes Leberversagen

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