Name: Die systemische Injektion von Neural Stem / Progenitor-Zellen in Mäusen mit chronischer EAE (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-04-15T18:45:00.000+00:00
Duration: 9 min 24 s
Description: Lernen Sie die systemische Injektion von neuronalen Stammzellen bei Mäusen mit chronischer EAE. Diese Methode ermöglicht eine minimal-invasive Transplantation zur Untersuchung von Zelltherapie bei Multipler Sklerose.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Die Autoren danken Jayden Smith für die kritische Prüfung und der Nachweis der Bearbeitung des Manuskripts. Diese Arbeit Unterstützung von der National Multiple Sclerosis Society (NMSS, Teilstipendien RG-4001-A1) erhalten hat, die Italienische Multiple Sklerose Vereinigung (AISM gewähren 2010/R/31), dem italienischen Gesundheitsministerium (GR08-7), Wings for Life, die Banca Agricola Popolare di Ragusa (BAPR), des European Research Council (ERC) im Rahmen des ERC-2010-StG Finanzhilfevereinbarung Nr. 260511-SEM_SEM und die Europäische Gemeinschaft (EG) 7. Rahmenprogramm (FP7/2007-2013) unter Grant Agreement n * deg; 280772 - Ione.

<ol><li>Ben-Hur, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplanted+multipotential+neural+precursor+cells+migrate+into+the+inflamed+white+matter+in+response+to+experimental+autoimmune+encephalomyelitis%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Transplanted multipotential neural precursor cells migrate into the inflamed white matter in response to experimental autoimmune encephalomyelitis.</a> Glia. 41, 73-80 (2003).</li>
<li>Pluchino, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Injection+of+adult+neurospheres+induces+recovery+in+a+chronic+model+of+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Injection of adult neurospheres induces recovery in a chronic model of multiple sclerosis.</a> Nature. 422, 688-694 (2003).</li>
<li>Chu, K., Kim, M., Jeong, S. W., Kim, S. U., Yoon, B. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+neural+stem+cells+can+migrate%2C+differentiate%2C+and+integrate+after+intravenous+transplantation+in+adult+rats+with+transient+forebrain+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci.+Lett%22%5BJournal%5D)">Human neural stem cells can migrate, differentiate, and integrate after intravenous transplantation in adult rats with transient forebrain ischemia.</a> Neurosci. Lett. 343, 129-133 (2003).</li>
<li>Bottai, D., Madaschi, L., Di Giulio, A. M., Gorio, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viability-dependent+promoting+action+of+adult+neural+precursors+in+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Med%22%5BJournal%5D)">Viability-dependent promoting action of adult neural precursors in spinal cord injury.</a> Mol. Med. 14, 634-644 (2008).</li>
<li>Pluchino, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurosphere-derived+multipotent+precursors+promote+neuroprotection+by+an+immunomodulatory+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Neurosphere-derived multipotent precursors promote neuroprotection by an immunomodulatory mechanism.</a> Nature. 436, 266-271 (2005).</li>
<li>Einstein, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraventricular+transplantation+of+neural+precursor+cell+spheres+attenuates+acute+experimental+allergic+encephalomyelitis%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Intraventricular transplantation of neural precursor cell spheres attenuates acute experimental allergic encephalomyelitis.</a> Mol. Cell Neurosci. 24, 1074-1082 (2003).</li>
<li>Chu, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+neural+stem+cell+transplantation+reduces+spontaneous+recurrent+seizures+following+pilocarpine-induced+status+epilepticus+in+adult+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Human neural stem cell transplantation reduces spontaneous recurrent seizures following pilocarpine-induced status epilepticus in adult rats.</a> Brain Res. 1023, 213-221 (2004).</li>
<li>Jeong, S. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+neural+stem+cell+transplantation+promotes+functional+recovery+in+rats+with+experimental+intracerebral+hemorrhage%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Human neural stem cell transplantation promotes functional recovery in rats with experimental intracerebral hemorrhage.</a> Stroke. 34, 2258-2263 (2003).</li>
<li>Aboody, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+stem+cells+display+extensive+tropism+for+pathology+in+adult+brain%3A+evidence+from+intracranial+gliomas%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Neural stem cells display extensive tropism for pathology in adult brain: evidence from intracranial gliomas.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 97, 12846-12851 (2000).</li>
<li>Muller, F. J., Snyder, E. Y., Loring, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+therapy%3A+can+neural+stem+cells+deliver%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Gene therapy: can neural stem cells deliver.</a> Nat. Rev. Neurosci. 7, 75-84 (2006).</li>
<li>Martino, G., Pluchino, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+therapeutic+potential+of+neural+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The therapeutic potential of neural stem cells.</a> Nat. Rev. Neurosci. 7, 395-406 (2006).</li>
<li>Deckert-Schluter, M., Schluter, D., Hof, H., Wiestler, O. D., Lassmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+expression+of+ICAM-1%2C+VCAM-1+and+their+ligands+LFA-1%2C+Mac-1%2C+CD43%2C+VLA-4%2C+and+MHC+class+II+antigens+in+murine+Toxoplasma+encephalitis%3A+a+light+microscopic+and+ultrastructural+immunohistochemical+study%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neuropathol.+Exp.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Differential expression of ICAM-1, VCAM-1 and their ligands LFA-1, Mac-1, CD43, VLA-4, and MHC class II antigens in murine Toxoplasma encephalitis: a light microscopic and ultrastructural immunohistochemical study.</a> J. Neuropathol. Exp. Neurol. 53, 457-468 (1994).</li>
<li>Hemmer, B., Archelos, J. J., Hartung, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+concepts+in+the+immunopathogenesis+of+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">New concepts in the immunopathogenesis of multiple sclerosis.</a> Nat. Rev. Neurosci. 3, 291-301 (2002).</li>
<li>Butcher, E. C., Picker, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphocyte+homing+and+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Lymphocyte homing and homeostasis.</a> Science. 272, 60-66 (1996).</li>
<li>Rampon, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+mechanism+of+systemic+delivery+of+neural+precursor+cells+to+the+brain%3A+assembly+of+brain+endothelial+apical+cups+and+control+of+transmigration+by+CD44%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Molecular mechanism of systemic delivery of neural precursor cells to the brain: assembly of brain endothelial apical cups and control of transmigration by CD44.</a> Stem Cells. 26, 1673-1682 (2008).</li>
<li>Pluchino, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+neural+stem+cells+ameliorate+autoimmune+encephalomyelitis+in+non-human+primates%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Human neural stem cells ameliorate autoimmune encephalomyelitis in non-human primates.</a> Ann. Neurol. 66, 343-354 (2009).</li>
<li>Martino, G., Pluchino, S., Bonfanti, L., Schwartz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+regeneration+in+physiology+and+pathology%3A+the+immune+signature+driving+therapeutic+plasticity+of+neural+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Brain regeneration in physiology and pathology: the immune signature driving therapeutic plasticity of neural stem cells.</a> Physiol. Rev. 91, 1281-1304 (2011).</li>
<li>Aharonowiz, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroprotective+effect+of+transplanted+human+embryonic+stem+cell-derived+neural+precursors+in+an+animal+model+of+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Neuroprotective effect of transplanted human embryonic stem cell-derived neural precursors in an animal model of multiple sclerosis.</a> PLoS ONE. 3, e3145(2008).</li>
<li>Pluchino, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+regulatory+neural+stem%2Fprecursor+cells+protect+from+central+nervous+system+autoimmunity+by+restraining+dendritic+cell+function%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Immune regulatory neural stem/precursor cells protect from central nervous system autoimmunity by restraining dendritic cell function.</a> PLoS One. 4, (2009).</li>
<li>Einstein, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+precursors+attenuate+autoimmune+encephalomyelitis+by+peripheral+immunosuppression%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Neural precursors attenuate autoimmune encephalomyelitis by peripheral immunosuppression.</a> Ann. Neurol. 61, 209-218 (2007).</li>
<li>Gritti, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multipotential+stem+cells+from+the+adult+mouse+brain+proliferate+and+self-renew+in+response+to+basic+fibroblast+growth+factor%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Multipotential stem cells from the adult mouse brain proliferate and self-renew in response to basic fibroblast growth factor.</a> J. Neurosci. 16, 1091-1100 (1996).</li>
<li>Furlan, R., Pluchino, S., Marconi, P. C., Martino, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytokine+gene+delivery+into+the+central+nervous+system+using+intrathecally+injected+nonreplicative+viral+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Cytokine gene delivery into the central nervous system using intrathecally injected nonreplicative viral vectors.</a> Methods Mol. Biol. 215, 279-289 (2003).</li>
<li>Constantin, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualization+and+analysis+of+adhesive+events+in+brain+microvessels+by+using+intravital+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Visualization and analysis of adhesive events in brain microvessels by using intravital microscopy.</a> Methods Mol. Biol. 239, 189-198 (2004).</li>
<li>Politi, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnetic-resonance-based+tracking+and+quantification+of+intravenously+injected+neural+stem+cell+accumulation+in+the+brains+of+mice+with+experimental+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Magnetic-resonance-based tracking and quantification of intravenously injected neural stem cell accumulation in the brains of mice with experimental multiple sclerosis.</a> Stem Cells. 25, 2583-2592 (2007).</li>
<li>Melzi, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Co-graft+of+allogeneic+immune+regulatory+neural+stem+cells+%28NPC%29+and+pancreatic+islets+mediates+tolerance%2C+while+inducing+NPC-derived+tumors+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Co-graft of allogeneic immune regulatory neural stem cells (NPC) and pancreatic islets mediates tolerance, while inducing NPC-derived tumors in mice.</a> PLoS One. 5, (2010).</li>
<li>Amariglio, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Donor-derived+brain+tumor+following+neural+stem+cell+transplantation+in+an+ataxia+telangiectasia+patient%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Med%22%5BJournal%5D)">Donor-derived brain tumor following neural stem cell transplantation in an ataxia telangiectasia patient.</a> PLoS Med. 6, (2009).</li>
<li>Ben-Hur, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+proinflammatory+cytokines+on+the+growth%2C+fate%2C+and+motility+of+multipotential+neural+precursor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Effects of proinflammatory cytokines on the growth, fate, and motility of multipotential neural precursor cells.</a> Mol. Cell Neurosci. 24, 623-631 (2003).</li>
<li>Giusto, E., Donega, M., Cossetti, C., Pluchino, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuro-immune+interactions+of+neural+stem+cell+transplants%3A+From+animal+disease+models+to+human+trials%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Neuro-immune interactions of neural stem cell transplants: From animal disease models to human trials.</a> Exp. Neurol. , (2013).</li>
</ol>

Die Autoren haben nichts zu offenbaren.

Somatische Stammzelltherapien sind als einer der vielversprechendsten Strategien zur Behandlung von chronisch-entzündlichen ZNS-Erkrankungen wie MS2 11 entstehen. Während die Mechanismen Erhaltung ihrer therapeutischen Wirkungen vollständig aufgeklärt werden müssen, noch hat die wesentlichen Auswirkungen der NPC-Transplantation in verschiedenen experimentellen Modellen neurodegenerativer Erkrankungen Anlass zu der etwas provokanten Überzeugung, dass Zellen können bald in Studien am Menschen angewendet werden ...

Starke Beweise von in vivo-Studien zur Bestätigung der therapeutischen Wirksamkeit der Transplantation von neuralen somatischen Stammzellen / Vorläuferzellen (NPC) in Tiermodellen für Erkrankungen des ZNS 1-8 entstanden ist. Dennoch, eine Reihe von Fragen im Zusammenhang mit der Lieferung von Stammzellen in das Wirts erfordern eine sorgfältige Überlegung, bevor diese experimentellen Ergebnisse in klinische Anwendungen umgesetzt werden. Eine besonders erhebliche Hürde für die Entwicklung der (nicht-hämatopoetischen) Stammzellen restaurative Therapien für multifokale, chronisch-entzündliche Erkrankungen des Gehirns ist die Identifizierung der idealen Route der NPC-Injektion. Ein Unternehmen Verständnis der Pathophysiologie der Zielerkrankung (fokale oder multifokale; primäre entzündliche oder degenerative) und einer vorsichtigen Analyse der Machbarkeit und Risikofragen mit den Liefer Techniken verbunden sind, sind bei der Ermittlung der optimalen Protokoll für die Stammzell Lieferung. Während der Schwerpunkt ( <em&gt; ZB. in das Nervensystem Parenchym) Stammzell-Transplantation ist ein logischer Ansatz für die Behandlung von ZNS-Erkrankungen, die durch räumlich begrenzten Bereichen von Schäden (z. B. Parkinson-und Huntington-Krankheit, Gehirn und Rückenmark traumatische Verletzungen und Schlaganfall), kann die gleichen Ansatz zu beweisen unter Bedingungen, wie MS, wo eine multifokale, chronische und räumlich verbreitet ZNS-Schädigung akkumuliert im Laufe der Zeit praktisch nicht durchführbar. In diesem letzteren Fall wird Targeting Brennzellinjektionen an einzelne Läsionen auch durch die begrenzte Fähigkeit der transplantierten NPC gehinderte lange Strecken innerhalb des ZNS wandern über Parenchym, so veranlasst die Identifizierung von alternativen, geeigneten Methoden von ZNS-Targeting mit weniger invasiven NPC Transplantationen . Große Versprechen, entstand aus den Beobachtungen, die NPCs Ziel eine intrakranielle Tumor (z. B.. Gliom) bei Mäusen, wenn außerhalb der CNS9 intravasal injiziert. Nach dieser bahnbrechendenIn-vivo-Nachweis der Stammzellen pathotrophism 10, umfangreiche Daten akkumuliert worden sind in Bezug auf die Machbarkeit und die therapeutische Wirksamkeit des systemischen Transplantation von NSC in Labortieren mit experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis (EAE), ein Modell für entzündliche ZNS-Schädigung, entweder über intravenöse (iv) oder intracerebroventricular (ICV). NPC Injektion 1,2,5,6,8 .. Wir haben zuerst gezeigt, dass dies abhängig von der Fähigkeit der transplantierten NPCs zum Ziel und geben Sie die entzündeten ZNS, und anschließend mehrere inter engagieren Kommunikationsprogramme in spezifischen Mikroumgebung in vivo 11. Um speziell auf die ZNS, NPCs sind direkt in die Rückenmarksflüssigkeit (CSF) Zirkulation durch icv Injektion oder in die Blutbahn über iv Injektion verabreicht. Nach Eingabe entweder die Blutbahn oder CSF, transplantiert NPCs interagieren aktiv mitdie Blut-Hirn-(BBB) ​​oder Blut Liquor (BCSFB) Barrieren und geben Sie die ZNS-Parenchym. Diese Wechselwirkung zwischen dem Transplantat und der NPC BBB (oder BCSFB) von bestimmten Satz von NPC Oberfläche Zelladhäsionsmoleküle (CAMs) geregelt und durch die Expression von großen Mengen von CAM Gegenliganden auf aktivierten Endothelzellen / Ependymzellen 12-14 erleichtert. Beispiele für diese Nocken umfassen, die den Rezeptor für Hyaluronat, CD44, und die interzelluläre Adhäsionsmolekül (ICAM) -1 Ligand sehr späten Antigens (VLA) -4 5,15,16 (dh, in Leukozyten, sind verantwortlich für die Interaktion mit aktivierten Ependymzellen und Endothelzellen), und zu einem viel geringeren Ausmaß Lymphozytenfunktion-assoziiertes Antigen (LFA) -1 und P-Selektin-Glykoprotein-Liganden (PSGL) -1. NPCs eine breite Palette von Chemokin-Rezeptoren, einschließlich CCR1, CCR2, CCR5, CXCR3 und CXCR4 Ausdruck auch (aber nicht ausdrücken, CCR3 und CCR7), die funktionell aktiv sind, sowohl in vitro als auch in vivo 5,16. So SYSTEMICALLY injiziert NSC verwenden diese Nocken, zusammen mit G-Protein-gekoppelten Rezeptor (GPCR), die auf Ebene des entzündeten ZNS ansammeln. Umgekehrt injiziert NPCs systemisch in gesunden Mäusen nicht in das ZNS über vaskuläre oder Zerebrospinalflüssigkeit Platz zwei Routen. CNS-Entzündung, oder Endothelzellen / ependymalen Zellaktivierung nach einer systemischen Cytokin oder lypopolisaccharide (LPS) Injektion als Modell für chemisch induzierte Enzephalitis, ist daher für die Akkumulation von systemisch injiziert NSC in das Gehirn und das Rückenmark 2 erforderlich. So erfolgreich Targeting des ZNS mit systemischen Therapien NPC abhängig von der Identifikation eines krankheitsspezifischen Zeitfenster (woo) in das Gehirn und das Rückenmark Umwelt sind förderlich für die Akkumulation und die transendotheliale Migration von NSC. Solche Bedingungen entstehen in der Regel im Rahmen der akuten und subakuten Entzündungs ​​17. Sobald er die CNS eingegeben, transplantierten undifferenzierten NPCsEs ist gezeigt worden, um die klinisch-pathologischen Merkmale von Mäusen als auch größere, nicht-menschlichen Primaten, die mit EAE verbessern. Dies wurde beschrieben abhängig von minimalen Zellenwechsel 2 und bemerkenswerte Sekretion von immunregulatorische und neuroprotektive parakrine Faktoren innerhalb perivaskuläre CNS 2,5,6,18 vs nicht-entzündeten Bereichen ZNS 19,20 (zB Lymphknoten) in Reaktion auf das zu sein, Entzündungszellsignalisierung durch Infiltration Immunzellen 5 ausgelöst. Hier beschreiben wir die wichtigsten methodischen Aspekte der systemischen Injektion von somatischen NPCs in einem Mausmodell der chronischen EAE. Genauer gesagt, definieren wir die Protokolle, die wir haben, um (i) gegründet ableiten, erweitern und die Vorbereitungen für die Transplantation somatischer NPCs aus dem Subventrikularzone (SVZ) der erwachsenen C57BL / 6 Mäusen; (Ii) induziert chronische EAE in solchen Mäusen und (iii) durchzuführen therapeutisch wirksame systemische (iv oder ICV) NPC Transplantation into EAE Mäusen.

<table><tbody><tr><td>Cell culture</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>EBSS</td><td>Sigma</td><td>E2888</td><td></td></tr><tr><td>L-Cystein</td><td>Sigma Aldrich</td><td>C7352</td><td></td></tr><tr><td>Papain</td><td>Worthington</td><td>30H11965</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Fisher Scientific</td><td>D/0700/50</td><td></td></tr><tr><td>Maus NeuroCult Basalmedium</td><td>Stammzelltechnologien</td><td>05700</td><td></td></tr><tr><td>NeuroCult Proliferationsergänzungsmittel</td><td>Stammzelltechnologien</td><td>05701</td><td></td></tr><tr><td>Heparin</td><td>Sigma</td><td>H3393</td><td></td></tr><tr><td>Basischer Fibroblasten-Wachstumsfaktor</td><td>Peprotech</td><td>100-18B-1000</td><td></td></tr><tr><td>Epidermaler Wachstumsfaktor</td><td>Peprotech</td><td>AF-100-15-1000</td><td></td></tr><tr><td>Pen/Strep</td><td>Invitrogen</td><td>1514012</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel (Beschichtungslösung)</td><td>BD Biosciences</td><td>354230</td><td></td></tr><tr><td>NeuroCult&reg; Differentiation Kit (Maus)</td><td>Stammzelltechnologien</td><td>05704</td><td></td></tr><tr><td>Accumax</td><td>eBioscience</td><td>00-4666-56</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's PBS (DPBS) (10x) ohne Ca und Mg</td><td>PAA Laboratories</td><td>H15-011</td><td></td></tr><tr><td>Myco-Spur</td><td>PAA Laboratories</td><td>Q052-020</td><td></td></tr><tr><td>Dimethylsulfoxid (DMSO)</td><td>Sigma</td><td>D2650<</td><td></td></tr><tr><td>stark> Immunfluoreszenz</stark></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Normales Ziegenserum</td><td>PAA Laboratories</td><td>B11-035</td><td></td></tr><tr><td>Polyethylenglykol p-(1,1,3,3-tetramethylbutyl)-phenylether</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T8787</td><td></td></tr><tr><td>Maus anti Nestin</td><td>Abcam</td><td>ab11306</td><td></td></tr><tr><td>Kaninchen anti GFAP</td><td>DAKO</td><td>203344</td><td></td></tr><tr><td>Maus anti Histon H3 (phospho S10)&nbsp;</td><td>Abcam</td><td>ab14955</td><td></td></tr><tr><td>Kaninchen anti MAP-2</td><td>Abcam</td><td>ab32454</td><td></td></tr><tr><td>Ratte anti MBP</td><td>AbD SEROTEC</td><td>MCA409S</td><td></td></tr><tr><td>Anti-O4 Antikörper, Klon 81 | MAB345</td><td>Millipore</td><td>MAB345</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Invitrogen</td><td>D1306</td><td></td></tr><tr><td>Eindecklösung</td><td>DAKO</td><td>S3023</td><td></td></tr><tr><td>EAEFreund's</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Adjuvans unvollständig</td><td>Sigma Aldrich</td><td>F5506</td><td></td></tr><tr><td>Mycobacterium tuberculosis</td><td>DIFCO</td><td>H37Ra</td><td></td></tr><tr><td>MOG(35&ndash; 55)&nbsp;</td><td>Espikem</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pertussis</td><td>toxin Liste Biologische Laboratorien</td><td>181</td><td></td></tr><tr><td>Gewebeverarbeitung</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Iris Schere gerade</td><td>Fine Sciences Tools</td><td>14060-09</td><td></td></tr><tr><td>Stumpfe/gebogene Pinzette</td><td>Fine Sciences Tools</td><td>11080-02</td><td></td></tr><tr><td>Schneidemaschine für das Gehirn</td><td>Zivic Instruments</td><td>BSMAS005-1</td><td></td></tr><tr><td>Chirurgische Klingen</td><td>Swann-Morton</td><td>324</td><td></td></tr><tr><td>P200, P1000 Pipetten</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ketamin (Vetalar)</td><td>Boehringer Ingelheim</td><td>01LC0030</td><td></td></tr><tr><td>Xylazin (Rompun)</td><td>Bayer</td><td>32371</td><td></td></tr><tr><td>Stereotaktischer Rahmen</td><td>KOPF</td><td>Modell 900</td><td></td></tr><tr><td>Hamilton</td><td>Spritze Hamilton</td><td>7762-04</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyd (PFA)</td><td>Sigma</td><td>158127</td><td></td></tr><tr><td>VECTASTAIN Elite ABC Kit</td><td>Vector Laboratories</td><td>PK-6100</td><td></td></tr></tbody></table>

die systemische injektion von neural stem / progenitor-zellen in mäusen mit chronischer eae

Systemic Injection of Neural Stem/Progenitor Cells in Mice with Chronic EAE

Neuronale Stammzellen / Vorläuferzellen (NPCs) sind eine vielversprechende Quelle für die Stammzelltransplantation Ansätze mit dem Ziel Gehirn Reparatur oder Wiederherstellung in der regenerativen Neurologie. Diese Richtlinie wurde von der umfangreichen Beweise dafür, dass Gehirn Reparatur nach fokaler oder systemische NPC Transplantation in mehreren präklinischen Modellen von neurologischen Erkrankungen erreicht entstanden. Diese experimentellen Daten wurden die Zellabgabe Route als eine der wichtigsten Hürden der restaurativen Stammzellen Therapien für Erkrankungen des Gehirns, die dringende Beurteilung erfordert identifiziert. DruckmessungVentrikuläre Stammzellentransplantation stellt einen logischen Ansatz zu diesen Pathologien gekennzeichnet durch isolierte und zugänglich Hirnläsionen wie Rückenmarksverletzungen und der Parkinson-Krankheit. Leider ist dieses Prinzip schlecht für Zustände, die durch eine multifokale, entzündliche und verbreitet (sowohl in Zeit und Raum) Art, einschließlich multipler Sklerose (MS). Als solche Gehirn-Targeting durch systemic NPC Lieferung hat sich zu einem niedrigen invasive und therapeutisch wirksame Protokoll zu den Zellen in das Gehirn und Rückenmark von Nagern und Primaten durch experimentelle chronisch entzündliche Schädigung des zentralen Nervensystems (ZNS) betroffen zu liefern. Dieses alternative Verfahren der Zellabgabe beruht auf der NPC pathotropism, insbesondere ihre angeborene Fähigkeit, (i) Erfassen der Umwelt über funktionelle Zelladhäsionsmoleküle und inflammatorische Zytokin und Chemokin-Rezeptoren; (Ii) überqueren Sie die undichte anatomische Barrieren nach intravenöser (iv.) Oder intracerebroventricular (ICV) Injektion; (Iii) sammeln sich an der Höhe des perivaskulären mehreren Stelle (n) von entzündlichen Hirn-und Rückenmarksverletzungen; und (iv) ausüben bemerkenswerte trophischen Gewebe-und Immun regulatorische Effekte auf verschiedenen Host-Zielzellen in vivo. Hier beschreiben wir die Methoden, die wir für die iv entwickelt. und &lt;em&gt; ICV Lieferung von syngenen NPCs in Mäusen mit experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis (EAE), als Modell der chronischen entzündlichen ZNS-Demyelinisierung und sehen die systemische Stammzell Lieferung als wertvolle Technik für die selektive Ausrichtung der entzündeten Gehirn in der regenerativen Neurologie.

NPC Ableitung und Charakterisierung SVZ Dissektionen an Pools von 6-8 Wochen alte C57BL / 6 Mäuse durch mechanische und enzymatische Spaltung (Fig. 1A) (n = 5-7 Mäuse / Pool). Nach ein paar Tagen der Kultivierung in CGM, beginnen frei schwebenden Neurosphären bilden (1A und 1B). Primäre Kugeln werden gesammelt und mechanisch agiert alle 4-5 DIV. Nach der Passage werden Zahlen von lebenden und toten Zellen ermittelt und kumulative Zellzahlen aufgetragen, um eine W...

Die Transplantation von neuronalen Stammzellen / Vorläuferzellen (NPCs) hält große Versprechungen in der regenerativen Neurologie. Die systemische Verabreichung von NPCs ist in effektive, invasiv und therapeutisch sehr wirksam Protokoll wandte sich Stammzellen im Gehirn und Rückenmark von Nagern und Primaten durch experimentelle chronisch entzündliche Schädigung des zentralen Nervensystems betroffen zu liefern.

Die systemische Injektion von Neural Stem / Progenitor-Zellen in Mäusen mit chronischer EAE

Neural stem/precursor cells (NPCs) are a promising stem cell source for transplantation approaches aiming at brain repair or restoration in regenerative ...

Das übergeordnete Ziel dieses Protokolls besteht darin, neuralen Stammprogenitorzellen über eine intravenöse Injektion in die ZNS von Mäusen mit experimentell-autoimmuner Enzephalomyelitis zu verabreichen, einem Krankheitsmodell, das die Multiple Sklerose nachahmt. Dies wird erreicht, indem zunächst neuronale Stammprogenitorzellen, oder NPCs, aus der Subventrikularzone des Gehirns erwachsener Mäuse gewonnen werden. Der zweite Schritt besteht darin, die NPCs mittels Vektor-Virustechnologie genetisch zu markieren, um eine Identifizierung und Verfolgung der Zellen in vivo zu ermöglichen.Anschließend werden proliferierende Neuro­sphären in eine Einzelzell­aufschläm­mung dissoziiert, in der gewünschten Dichte resuspendiert und in die Schwanzvene von EAE-Mäusen am Höhepunkt der Erkrankung injiziert. Abschließend erfolgen die postmortale Untersuchung der Organ- und Gewebepathologie sowie immunhistochemische Analysen, um Überleben, Verteilung und Integration der injizierten Stammzellen nachzuweisen und zu charakterisieren. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass sie eine minimalinvasive, sichere und wirksame Methode zur Transplantation von Stamm- und Vorläuferzellen in das entz

systemic-injection-neural-stemprogenitor-cells-mice-with-chronic

Research

Forschung

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie und Infektion

Bestimmte Maus-Stämme sind in der Lage, die Induktion der experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis (EAE) mit Myelin basisches Protein zu widerstehen. Hier beschriebene ist ein einfaches Protokoll, das die Immunisierung Teilnahmslosigkeit umkehrt und induziert paralytischen Erkrankung in mehreren typischen EAE resistent Maus Flecken.

Die Überwindung der nicht mehr reagiert, in der experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis (EAE) Beständig Mausstämmen durch adoptiven Transfer-und Antigen-Challenge

Dieses Video zeigt die Methode zur Induktion einer experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis (EAE) durch Injektion von Myelin-abgeleiteten Peptiden mit einem Adjuvans, um autoreaktive T-Zellen zu aktivieren, die ins Gehirn wandern. Pertussis-Toxin wird verabreicht, um die Durchlässigkeit der Blut-Hirn-Schranke zu erhöhen, so dass diese T-Zellen und andere Immunzellen in das Gehirn eindringen können. Diese Immunzellen verursachen eine Demyelinisierung, die zu einer gestörten...

Generierung einer experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis im Mausmodell

In diesem Video wird ein Mausmodell für Multiple Sklerose mit Hilfe der experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis (EAE) erstellt. Der Maus wird eine Emulsion injiziert, die ein neuronales Peptid und ein Adjuvans enthält, wodurch eine Immunantwort ausgelöst wird, die autoreaktive T-Zellen aktiviert. Darauf folgt eine Injektion von Pertussis-Toxin (PTX), um die Durchlässigkeit der Blut-Hirn-Schranke zu erhöhen, so dass die autoreaktiven T-Zellen das Gehirn infiltrieren können. Diese...

Induktion einer experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis im Mausmodell

Wir beschreiben eine Methode zur Implantation und Aufrechterhaltung von Glasfenstern über dem freiliegenden Rückenmark erwachsener Mäuse zur Untersuchung der experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis. Diese Fenster bieten einen chronischen optischen Zugang zum Rückenmark zur Überwachung der Zelldynamik auf subzellulärer Ebene bei lebenden Tieren mittels Zwei-Photonen-Mikroskopie.

Implantation von gläsernen Rückenmarksfenstern bei erwachsenen Mäusen mit experimenteller autoimmuner Enzephalomyelitis

Experimentelle Autoimmun-Enzephalomyelitis (EAE) ist ein etabliertes Tiermodell für multiple Sklerose. C57BL / 6 Mäuse mit Myelin-Oligodendrozyten-Glykoprotein (MOG)-Peptid 35-55 (MOG 35-55) immunisiert, was zu einer aufsteigenden schlaffen Lähmung durch autoreaktive Immunzellen im zentralen Nervensystem verursacht. Protokolle für die Krankheitsinduktion und Überwachung diskutiert.

Myelin Oligodendrozyten Glykoprotein (MOG<sub&gt; 35-55</sub&gt;) Induzierten experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis (EAE) in C57BL / 6 Mäuse

Dieses Manuskript beschreibt die Methoden zur Induktion und Bewertung des experimentellen Modells der autoimmunen Enzephalomyelitis (EAE), zusammen mit der Beurteilung der Immunzellverteilung und der mRNA-Zytokinspiegel in Lymphknoten, Milz, Blut und Rückenmark mittels Durchflusszytometrie bzw. quantitativer PCR in verschiedenen Krankheitsstadien.

Die Induktion der experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis bei Mäusen und die Auswertung des Krankheitsabhängige Verteilung von Immunzellen in verschiedenen Geweben

Wir zeigen eine Technik für die in vivo lebenden Biolumineszenz und Nahinfrarot-Bildgebung von Optikusneuritis und Enzephalitis in der experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis (EAE) -Modell für Multiple Sklerose in SJL / J - Mäusen.

Biolumineszenz und Nah-Infrarot-Imaging von Neuritis und Gehirnentzündung im EAE-Modell der Multiplen Sklerose in Mäusen

Hier präsentieren wir Ihnen Protokolle, um die Beeinträchtigung der neurovaskuläre Einheit während experimentelle autoimmune Enzephalomyelitis in vivo zu untersuchen. Wir gezielt auf Durchlässigkeit der Blut - Hirn-Schranke und Gelatinase Tätigkeit in Leukozyte Migration über die Glia Limitans ermitteln.

Beeinträchtigung der Endothelzellen und glialen Barrieren des Referats neurovaskuläre während experimentelle Autoimmune Enzephalomyelitis In Vivo Visualisierung

Das vorliegende Protokoll beschreibt die Induktion einer experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis in einem Mausmodell unter Verwendung von Myelin-Oligodendrozyten-Glykoprotein und die Überwachung des Krankheitsprozesses mit einem klinischen Scoring-System. Experimentelle autoimmune Enzephalomyelitis-bezogene Symptome werden mittels Mausfemur-Mikro-Computertomographie und Freilandtest analysiert, um den Krankheitsprozess umfassend zu beurteilen.

Induktion und diverse Bewertungsindikatoren der experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis

Bis heute sind Protokolle für die gleichzeitige Isolierung aller wichtigsten Zelltypen des Zentralnervensystems aus derselben Maus ein ungedeckter Bedarf. Das Protokoll zeigt ein Verfahren, das in naiven und experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis-Mäusen angewendet werden kann, um komplexe zelluläre Netzwerke während der Neuroinflammation zu untersuchen und gleichzeitig die erforderliche Anzahl von Mäusen zu reduzieren.

Gleichzeitige Isolierung der wichtigsten Zelltypen des Zentralnervensystems aus adulten Autoimmun-Enzephalomyelitis-Mäusen

Die experimentelle autoimmune Enzephalomyelitis (EAE) dient als Tiermodell der Multiplen Sklerose. Dieser Artikel beschreibt einen Ansatz zur Bewertung von Rückenmarksentzündungen, Demyelinisierung und axonalen Verletzungen bei EAE. Darüber hinaus wird eine Methode zur Quantifizierung des löslichen Neurofilament-Lichtspiegels im Mäuseserum vorgestellt, die die Beurteilung der axonalen Schädigung in lebenden Mäusen erleichtert.

Bewertung von Entzündungen, Demyelinisierung und Axonverletzungen des Zentralnervensystems bei experimenteller autoimmuner Enzephalomyelitis

Lernen Sie die systemische Injektion von neuronalen Stammzellen bei Mäusen mit chronischer EAE. Diese Methode ermöglicht eine minimal-invasive Transplantation zur Untersuchung von Zelltherapie bei Multipler Sklerose.

Die systemische Injektion von Neural Stem / Progenitor-Zellen in Mäusen mit chronischer EAE

Weitere Videos entdecken