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Eine modifizierte Niederschlag Methode zu Urinary Exosomen Isolieren
Eine modifizierte Niederschlag Methode zu Urinary Exosomen Isolieren
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JoVE Journal Medicine
A Modified Precipitation Method to Isolate Urinary Exosomes

Eine modifizierte Niederschlag Methode zu Urinary Exosomen Isolieren

Full Text
18,104 Views
05:05 min
January 16, 2015

DOI: 10.3791/51158-v

Rupesh Kanchi Ravi1, Mahdieh Khosroheidari1, Johanna K. DiStefano1

1Diabetes, Cardiovascular and Metabolic Diseases Division,Translational Genomics Research Institute (TGen)

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This manuscript describes a protocol for isolating exosomes from human urine using a modified precipitation technique. The method aims to provide a quick, scalable, and effective alternative for exosome isolation.

Key Study Components

Area of Science

  • Neuroscience
  • Biology
  • Exosome Research

Background

  • Exosomes are small extracellular vesicles involved in intercellular communication.
  • Isolating exosomes from urine can provide insights into various biological processes.
  • Current methods may be time-consuming and less efficient.
  • A modified precipitation technique could enhance exosome recovery.

Purpose of Study

  • To develop a rapid method for exosome isolation from urine.
  • To improve scalability and effectiveness of exosome extraction.
  • To facilitate downstream applications such as biomarker identification.

Methods Used

  • Centrifugation to remove large cells and debris from urine samples.
  • Dissolving the pellet in isolation solution containing DTT.
  • Incubating the supernatant with exo quick TC reagent overnight.
  • Final centrifugation to obtain the exosome pellet.

Main Results

  • The modified method successfully isolates exosomes from urine.
  • Exosomes can be used for downstream analyses like Western blot and qPCR.
  • Efficient removal of contaminants enhances the purity of isolated exosomes.
  • The protocol is scalable for larger sample sizes.

Conclusions

  • The modified precipitation technique is a viable method for exosome isolation.
  • This approach can streamline exosome research in various biological studies.
  • Future studies may explore additional applications of isolated exosomes.

Frequently Asked Questions

What are exosomes?
Exosomes are small vesicles released by cells that play a role in cell communication and can carry proteins, lipids, and RNA.
Why is urine used for exosome isolation?
Urine is a non-invasive source of exosomes and can provide valuable biological information.
What is the significance of isolating exosomes?
Isolating exosomes can help identify biomarkers for diseases and understand cellular communication mechanisms.
How does the modified precipitation technique work?
The technique involves centrifugation to remove debris, followed by incubation with a reagent that precipitates exosomes for collection.
What downstream applications can be performed on isolated exosomes?
Isolated exosomes can be analyzed using techniques like Western blotting and real-time PCR to study their content and function.

Dieses Manuskript beschreibt ein Protokoll zur Isolierung von Exosomen aus menschlichem Urin unter Verwendung einer modifizierten Fällungstechnik.

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, eine modifizierte Exosomenfällungsmethode zu entwickeln, die eine schnelle, skalierbare und effektive Alternative für die Isolierung von Exosomen aus dem Urin bietet. Dies wird erreicht, indem zunächst große abgestorbene Zellen und Zelltrümmer durch Zentrifugation aus der Urinprobe entfernt werden und die Snat, die die Urin-Exosomen enthält, in ein frisches Röhrchen überführt wird. Im zweiten Schritt wird das Pellet in einer DVB-T-haltigen Isolierlösung aufgelöst, um das TAM-Pferdefallprotein zu entfernen.

Nach weiterer Zentrifugation wird der TP-freie Überstand über Nacht mit dem Reagenz exo quick TC inkubiert, um die Exosomen am nächsten Tag auszufällen. Die mit Exo Quick TC behandelten Proben werden ein letztes Mal zentrifugiert, um das Exosom-Pellet zu erhalten. Letztendlich können nachgelagerte Prozesse wie Western Blot und Echtzeit-QPCR an den Exosomen durchgeführt werden, um die interessierenden Biomarker zu identifizieren.

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