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DOI: 10.3791/51158-v
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This manuscript describes a protocol for isolating exosomes from human urine using a modified precipitation technique. The method aims to provide a quick, scalable, and effective alternative for exosome isolation.
Dieses Manuskript beschreibt ein Protokoll zur Isolierung von Exosomen aus menschlichem Urin unter Verwendung einer modifizierten Fällungstechnik.
Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, eine modifizierte Exosomenfällungsmethode zu entwickeln, die eine schnelle, skalierbare und effektive Alternative für die Isolierung von Exosomen aus dem Urin bietet. Dies wird erreicht, indem zunächst große abgestorbene Zellen und Zelltrümmer durch Zentrifugation aus der Urinprobe entfernt werden und die Snat, die die Urin-Exosomen enthält, in ein frisches Röhrchen überführt wird. Im zweiten Schritt wird das Pellet in einer DVB-T-haltigen Isolierlösung aufgelöst, um das TAM-Pferdefallprotein zu entfernen.
Nach weiterer Zentrifugation wird der TP-freie Überstand über Nacht mit dem Reagenz exo quick TC inkubiert, um die Exosomen am nächsten Tag auszufällen. Die mit Exo Quick TC behandelten Proben werden ein letztes Mal zentrifugiert, um das Exosom-Pellet zu erhalten. Letztendlich können nachgelagerte Prozesse wie Western Blot und Echtzeit-QPCR an den Exosomen durchgeführt werden, um die interessierenden Biomarker zu identifizieren.
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