Kapsel Serotypisierung von Streptococcus pneumoniae Verwenden der Quellung Reaktion

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, eine Kapselstereotypisierung von Streptococcus pneumoniae oder dem Pneumokokken mit Hilfe der Quelling-Reaktion durchzuführen. Dies wird erreicht, indem zuerst Herzinfusionsbrühe mit einer frischen, über Nacht reinen Kultur von Pneumokokken geimpft wird. Im zweiten Schritt wird ein Tropfen Inokulum auf einen Objektträger aus Glas übertragen.

Als nächstes wird das Antis-Serum in gleichem Volumen auf den Objektträger gegeben. Im letzten Schritt werden beide Tropfen gemischt und ein Deckglas über die Suspension gelegt. Letztendlich kann die Suspension unter Phasenkontrast betrachtet werden, um die positive oder negative Quell-Lungenreaktion zu beobachten.

Diese Methode stellt die Goldstandardmethode der Pneumokokken-Syp dar. Die Methode ist einfach, leicht durchzuführen und leicht zu interpretieren. Die visuelle Demonstration dieser Methode ist wichtig, da Personen, die neu in dieser Technik sind, Schwierigkeiten haben können, eine geeignete Zelldichte für die Durchführung des Quum-Tests zu erkennen.

Beginnen Sie mit der Verwendung einer sterilen Einweg-Schlaufe von einem Mikroliter, um einen kleinen Schwung einer frischen Reinkultur von Pneumokokken über Nacht zu erhalten, die auf einer festen, nicht selektiven Pferdeblutagarplatte gezüchtet wurde, und impfen Sie die Pneumokokken in 100 Mikroliter Herzinfusionsbrühe. Die Suspension sollte nur sichtbar trüb erscheinen und das Röhrchen vorsichtig bewegen, um die Zelllösung zu emulgieren. Verwenden Sie eine neue Ein-Mikroliter-Schlaufe, um einen Tropfen des Inokulums auf ein Glasmikroskop zu übertragen.

Schieben Sie als nächstes, legen Sie einen kleinen kreisförmigen Deckslip über die Aufhängung und überprüfen Sie die Dichte der Aufhängung unter Phasenkontrast bei mal 400-facher Vergrößerung. Wenn das Inokulum zu schwer ist, verdünnen Sie die Zellsuspension mit mehr Brühe und mischen Sie die Zellen erneut vorsichtig an, wenn das Inokulum zu hell ist. Wenn beispielsweise weniger als 50 Zellen sichtbar sind, fügen Sie der Zellsuspension weitere Bakterien hinzu und mischen Sie erneut vorsichtig.

Mit Erfahrung. Die Dichte der Zellsuspension kann beurteilt werden, indem man die Suspension schüttelt und gegen das Licht hält, wo sie nur sichtbar trüb erscheinen sollte. Unter dem Mikroskop betrachtet, sollte die Zelllösung etwa so dicht sein.

Ist die optimale Verdünnung der Bakterienzellen erreicht, wird etwa ein Mikroliter des Inokulums auf das Glasmikroskop übertragen. Schieben Sie als nächstes. Fügen Sie mit einer neuen Schlaufe das gleiche Volumen der Raumtemperatur hinzu.

Antiserum auf den Objektträger geben und beide Tropfen gut vermischen. Legen Sie mit der Schlaufe sofort einen kleinen Abdeckschirm auf die Aufhängung und achten Sie darauf, den Tropfen nicht mit der Pinzette zu berühren. Betrachten Sie dann die Federung unter Phasenkontrast, wie gerade gezeigt.

Eine negative Quell-Lungenreaktion wird beobachtet, wenn eine geringe bis keine Schwellung der Pneumokokkenzellen beobachtet wird. Ähnlich wie bei der Negativkontrolle eine Pneumokokken-Zellsuspension ohne Zusatz von Antiseren. Eine positive Quell-Lungenreaktion tritt auf, wenn typspezifischer Antikörper an die Kapsel des Pneumokokken bindet, was zu einer Veränderung seines Brechungsindex führt.

Im Phasenkontrast erscheinen die Bakterien geschwollen und sichtbarer. Vergessen Sie nicht, dass Sie bei diesem Verfahren tatsächlich mit lebenden Mikroorganismen arbeiten. Aus diesem Grund müssen Sie darauf achten, dass Sie gute Laborpraktiken befolgen, Schutzkleidung und die entsprechende Laborausrüstung tragen und alle Geräte und Reagenzien am Ende des Prozesses sicher entsorgen.

Einmal gemeistert, kann diese Technik in etwa 10 Minuten durchgeführt werden, wenn sie richtig ausgeführt wird. Nachdem Sie sich dieses Verfahren angesehen haben, sollten Sie eine gute Vorstellung davon haben, wie Sie den Pneumokokken mit Hilfe der Qua-Lungenreaktion serotypisieren können. Diese Technik ist wichtig für das Verständnis der Pneumokokken-Epidemiologie, sowohl bei der nasopharyngealen Übertragung als auch bei einer invasiven Erkrankung.