Kapsel Serotypisierung von

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, eine Kapselstereotypisierung von Streptococcus pneumoniae oder des Pneumokokkus mithilfe der Quellungreaktion durchzuführen. Dies wird erreicht, indem zunächst Herzinfusionsbrühe mit einer frischen, über Nacht gezüchteten Reinkultur von Pneumokokken beimpft wird. Im zweiten Schritt wird ein Tropfen der Inokulation auf einen Glasobjektträger übertragen.

Anschließend wird auf dem Objektträger Antiserum in gleichem Volumen zugegeben. Im letzten Schritt werden beide Tropfen vermischt und ein Deckglas über die Suspension gelegt. Abschließend kann die Suspension im Phasenkontrast untersucht werden, um die positive oder negative Quell-Lungen-Reaktion zu beobachten.

Diese Methode zeigt die Goldstandard-Methode zur Pneumokokken-Syp. Die Methode ist einfach, leicht durchzuführen und einfach zu interpretieren. Eine visuelle Demonstration dieser Methode ist wichtig, da Personen, die neu in dieser Technik sind, möglicherweise Schwierigkeiten haben, eine geeignete Zelldichte für die Durchführung des Qualm-Tests zu erkennen.

Beginnen Sie damit, mit einer sterilen, Einweg-Ein-Mikroliter-Schleife einen kleinen Abstrich einer frischen, über Nacht gezüchteten Reinkultur von Pneumokokken zu entnehmen, die auf einer festen, nicht-selektiven Pferdeblut-Agarplatte gezüchtet wurde, und impfen Sie die Pneumokokken in 100 Mikroliter Herzinfusionsbrühe an. Die Suspension sollte gerade sichtbar trüb erscheinen; schütteln Sie das Reagenzglas vorsichtig, um die Zellsuspension zu emulgieren. Verwenden Sie eine neue Ein-Mikroliter-Schleife, um einen Tropfen des Inokulums auf einen Glasobjektträger zu übertragen.

Schieben Sie als Nächstes einen kleinen runden Deckel auf die Suspension und überprüfen Sie die Dichte der Suspension unter Phasenkontrast bei 400-facher Vergrößerung. Wenn das Inokulum zu dicht ist, verdünnen Sie die Zellsuspension mit mehr Brühe und mischen Sie die Zellen erneut vorsichtig. Wenn das Inokulum zu schwach ist, fügen Sie beispielsweise weitere Bakterien zur Zellsuspension hinzu, falls weniger als 50 Zellen sichtbar sind, und mischen Sie erneut vorsichtig.

Bei Erfahrung kann die Dichte der Zellsuspension beurteilt werden, indem man die Suspension schüttelt und gegen das Licht hält, wobei sie gerade sichtbar trüb erscheinen sollte. Unter dem Mikroskop betrachtet sollte die Zelllösung etwa diese Dichte aufweisen.

Nachdem die optimale Verdünnung der Bakterienzellen erreicht wurde, übertragen Sie etwa einen Mikroliter des Inokulums auf das Glasobjektträger. Fügen Sie anschließend mit einer neuen Öse ein gleiches Volumen von Raumtemperatur hinzu.

Antiserum auf den Objektträger geben und beide Tropfen gut vermischen. Sofort mit dem Schleifen ein kleines Deckglas auf die Suspension legen, wobei darauf geachtet werden muss, den Tropfen nicht mit der Pinzette zu berühren. Anschließend die Suspension wie gerade gezeigt im Phasenkontrast mikroskopieren.

Eine negative Quellungslungenreaktion wird beobachtet, wenn kaum oder keine Schwellung der Pneumokokkenzellen festgestellt wird, ähnlich wie bei der negativen Kontrolle, bei der eine Pneumokokkenzellsuspension ohne Zugabe von Antiseren verwendet wird. Eine positive Quellungslungenreaktion tritt auf, wenn typspezifische Antikörper an die Kapsel des Pneumokokkus binden und dadurch den Brechungsindex verändern.

Unter Phasenkontrast erscheinen die Bakterien geschwollen und deutlicher sichtbar. Vergessen Sie nicht, dass Sie bei diesem Verfahren tatsächlich mit lebenden Mikroorganismen arbeiten. Aus diesem Grund müssen Sie vorsichtig sein und gute Laborpraktiken befolgen, Schutzkleidung tragen, die geeignete Laborausrüstung verwenden und am Ende des Prozesses sämtliche Geräte und Reagenzien sicher entsorgen.

Wenn man diese Technik einmal beherrscht, kann sie bei ordnungsgemäßer Durchführung in etwa 10 Minuten durchgeführt werden. Nach der Betrachtung dieses Verfahrens sollten Sie eine gute Vorstellung davon haben, wie man das Pneumokokken-Serotypisierung unter Verwendung der Quellung-Reaktion durchführt. Diese Technik ist wichtig für das Verständnis der Pneumokokken-Epidemiologie, sowohl bei nasopharyngealer Besiedlung als auch bei invasiven Erkrankungen.