Bewertung von Morphin-induzierte Hyperalgesie und Schmerztoleranz in Mäuse mit Thermal-und Maschinen Nozizeptive Modalitäten

Das übergeordnete Ziel des folgenden Experiments ist es, die Entwicklung von Opioid-induzierter Hyperalgesie und analgetischer Toleranz bei Mäusen zu beobachten. Dies wird erreicht, indem in einem zweiten Schritt die thermischen und mechanischen nozizeptiven Reaktionen naiver Mäuse nach Morphingabe über einen Zeitverlauf am Tag Null gemessen werden. Die nozizeptive Schwelle wird täglich vor der Verabreichung von Morphin am siebten Tag gemessen.

Die analgetische Wirkung von Morphin wird über einen Zeitverlauf noch einmal gemessen, um die Entwicklung der analgetischen Toleranz aufzuzeigen. Es werden Ergebnisse erzielt, die eine Erhöhung der Schmerzempfindlichkeit sowie die Entwicklung einer analgetischen Toleranz zeigen. Nach wiederholter Morphinverabreichung.

Diese Methode kann jedoch Aufschluss über die Entwicklung von Schmerzüberempfindlichkeit und analgetischer Toleranz bei Mehrfachmäusen geben. Nach einer chronischen Opiatbehandlung kann es auch bei anderen Opiaten oder genetisch veränderten Mäusen angewendet werden. Um die stressinduzierte Analgesie zu minimieren, werden Mäuse jeden Tag fünf Minuten lang angefasst und daran gewöhnt, bis sie frei in den Rückhalteapparat gelangen.

Sobald Sie sich daran gewöhnt haben, beginnen Sie den Schwanztauchtest, indem Sie den Thermostat auf 48 Grad Celsius einstellen. Führen Sie die Maus vorsichtig in den Rückhaltebehälter ein. Sobald Sie richtig zurückgelehnt sind, tauchen Sie das herstehende zwei Drittel des Hecks in das Wasserbad und starten Sie den Chronometer.

Die Unterscheidung zwischen nozizeptiver und nozizeptiver Reaktion ist ein wesentliches Element dieses Verfahrens. Ein ordnungsgemäßes Schiedsverfahren und eine ordnungsgemäße Praxis sind entscheidend für den Erfolg. Überwachen Sie die Bewegung des Tieres und stoppen Sie den Chronometer.

Sobald die Maus ihren Schwanz aus dem heißen Wasser zieht, zeichnen Sie die Entnahmelatenz auf. Setze die Maus in ihren Käfig zurück und teste das nächste Tier bis zum Ende der Serie in der gleichen Reihenfolge. Wiederholen Sie die Messungen der nozizeptiven Reaktion noch zwei weitere Male.

Die nozizeptive Reaktionslatenz in Sekunden für jede Maus wird als Mittelwert für drei aufeinanderfolgende Bestimmungen bestimmt. Für den Schwanzdrucktest führst du die Maus zunächst vorsichtig in den Halteapparat ein und positionierst ihren Schwanz unter der konnischen Spitze des analen JMeter. Sobald Sie an Ort und Stelle sind, drücken Sie den Fußschalter, um gleichmäßig zunehmenden Druck auf den proximalen Teil des Schwanzes auszuüben.

Beim ersten Anzeichen einer nozizeptiven Reaktion ziehen Sie die Spitze zurück. Nozizeptive Reaktionen können Kämpfen, Quietschen oder Zurückziehen des Schwanzes umfassen. Notieren Sie die aktuelle Kraft in Gramm, die die nozizeptive Reaktion auslöst.

Wiederholen Sie diese Messung an den mittleren und distalen Teilen des Schwanzes derselben Maus in 32. Intervallen, bringen Sie das Tier in seinen Heimatkäfig zurück und wiederholen Sie diese Schritte, bis alle Mäuse getestet sind. Definieren Sie zunächst zwei Gruppen von Tieren mit vergleichbaren durchschnittlichen nozizeptiven Werten. Messen und notieren Sie als Nächstes das Körpergewicht jedes Tieres.

Sobald die Kochsalz- und Morphingruppen bestimmt sind, bereiten Sie eine Morphinlösung in physiologischer Kochsalzlösung für die subkutane Verabreichung vor. Messen Sie die Latenzen der nozizeptiven Reaktion sowohl im Schwanzimmersions- als auch im im Schwanzdrucktest und notieren Sie diese als Zeit 0,0 für jede Gruppe. Als nächstes injizieren Sie jedem Tier je nach Gruppe Morphium oder Kochsalzlösung.

Beginnen Sie nach 30 Minuten mit der Aufzeichnung nozizeptiver Reaktionen bei jedem Tier. Achten Sie genau auf die Grenzwerte, da es unwahrscheinlich ist, dass Mäuse zu diesem frühen Zeitpunkt auf die schädlichen Reize reagieren. In Ermangelung einer nozizeptiven Reaktion wird ein Cutoff von 25 Sekunden verwendet, um Gewebeschäden bei gleicher Testreihenfolge zu vermeiden.

Wiederholen Sie die nozizeptiven Messungen alle 30 Minuten bis 3,5 Stunden nach der Injektion zur Behandlung mit chronischem Morphin. Erhalten Sie Tageswerte, indem Sie die nozizeptive Reaktion der Tiere auf die TIT und TPT messen, wie bereits gezeigt. Bereite eine frische Morphinlösung vor.

Verabreichen Sie Morphium- oder Kochsalzlösungsinjektionen entsprechend der Gruppeneinteilung und lassen Sie die Tiere bis zum nächsten Tag ruhen. Messen Sie am nächsten Tag die nozizeptiven Reaktionen auf TIT und TPT, bevor Sie eine zweite Injektionsrunde verabreichen. Wiederholen Sie diese Schritte sechs Tage lang jeden Tag.

Bewerten Sie am siebten Tag die Morphin-induzierte Analgesie. Gemäß dem Zeitverlaufsparadigma, das zuvor im Schwanzimmersionstest demonstriert wurde, wurde die maximale analgetische Wirkung von Morphin nach 30 Minuten erreicht. Im Heckdrucktest wurde jedoch nach 60 Minuten die maximale Wirkung im Vergleich zu mit Kochsalzlösung injizierten Kontrollen erreicht.

Diese Ergebnisse zeigen, dass tägliche Morphininjektionen über einen Behandlungszeitraum von sieben Tagen zu einer signifikanten und fortschreitenden Senkung der thermischen und mechanischen nozizeptiven Basalwerte führten. Nach chronischer Behandlung war der basale nozizeptive Wert bei mit Morphin behandelten Mäusen signifikant niedriger als bei Kontrollmäusen, die mit Kochsalzlösung injiziert wurden. Nach akutem Morphin stieg die nozizeptive Reaktion der chronisch mit Morphin behandelten Gruppe signifikant an, übertraf jedoch nur geringfügig den basalen nozizeptiven Wert der in Kochsalzlösung injizierten Kontrolle.

nach 30 Minuten in TIT und TPT und nach 60 Minuten in TIT gemessen wurden, hier werden nozizeptive Schwellenwerte, die 30 Minuten nach der Kochsalz- oder Morphininjektion gemessen wurden, für den Tag Null und den Tag sieben danach für die Entwicklung am siebten Tag aufgetragen. Diese Technik ebnete den Weg für Forscher auf dem Gebiet der Schmerzforschung, um die Wirkung pharmakologischer oder genetischer Eingriffe bei der Entwicklung von Schmerzüberempfindlichkeit und analgetischer Toleranz zu untersuchen, die durch chronische Morphinverabreichung induziert werden.