Name: Sequentiell In-vivo- Imaging von osteogenen Stammzellen / Vorläuferzellen während Fracture Repair (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-05-23T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 30 s
Description: Erfahren Sie, wie osteogene Stammzellen während der Knochenfrakturheilung mittels Intravitalmikroskopie sequentiell verfolgt werden. Diese Methode ermöglicht die quantitative Analyse von Zellmigration, Proliferation und Differenzierung in vivo.

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Wir danken C. Park zum Lesen des Manuskripts. Diese Arbeit wurde durch die Auszeichnung unter NIAMS Anzahl K01AR061434 und Leukemia &amp; Lymphoma Society Fellowship Award (5127-09) zu DP unterstützt und Zuschüsse von den National Institutes of Health zu CPL und DTS Der Inhalt ist allein in der Verantwortung der Autoren und nicht notwendigerweise die offizielle Meinung der National Institutes of Health.

1. Mäuse und Präkonditionierung Hinweis: Alle Mäuse wurden in keimfreien Bedingungen gehalten und alle Protokolle wurden von der Institutional Animal Care und Verwenden Committee (IACUC) am Massachusetts General Hospital genehmigt. Alle Operation sollte unter sterilen Bedingungen mit sterilen autoklaviert Ausrüstung durchgeführt werden. Mx1-Cre 15, Rosa26-loxP-Stop-loxP-EYFP (Rosa-YFP) und Rosa26-loxP-Stop-loxP-tdTomato (Rosa-Tomate), waren von Jackson Laboratories. Osteocalcin-GFP-Mäuse wurden durch Dr. Henry Kronenberg zur Verfügung gestellt. Für die quantitative Analyse der OSPC Migration und Proliferation in vivo wurden Mx1-Cre + Rosa-YFP + (einfarbig-Reporter)-Mäusen verwendet. Für detaillierte Verfolgung von deren Differenzierung in Osteocalcin + reifen Osteoblasten, verwendeten wir trigenic Mx1-Cre + Rosa-Tomate + OCN-GFP +Mäusen. <ol><li> MX1 +-Zellen in vivo zu kennzeichnen, bereiten Polyinosin-Polycytidylsäure (Pipc, 2,5 mg / ml) in sterile PBS-Lösung und injizieren 200 ul für 20 g Mx1-Cre + Reporter Maus intraperitoneal einmal jeden zweiten Tag für 10 Tage. </li><li> Um ansässig Mx1 + hämatopoetischen Zellen zu beseitigen, bestrahlen Mäusen, die mit einer Einzeldosis von 9,5 Gy. Nach 24 Stunden der Bestrahlung, Transplantationswildtyp-Knochenmark-Zellen (1x10 6 Zellen / Maus) intravenös 16. Hinweis: Da Mx1-induzierbare Zellen schließen hämatopoetischen Zellen und hämatopoetischen stammenden Osteoklasten, die Beseitigung von Mx1 + hämatopoetischen Zellen verbessert die Bildqualität und die Quantifizierung von Mx1 + osteogenen Zellen. </li><li> Nach Knochenmarktransplantation, überwachen Tiere für vier bis sechs Wochen, um eine erfolgreiche Wiederbesiedlung von Spendermarkzellen zu erreichen. </li></ol> 2. MoVorbereitung nutzen <ol><li> Maus anästhesiert durch intraperitoneale Injektion von 50 ul Ketamin / Xylazin (100 mg / kg, Xylazin 12 mg / kg Körpergewicht) unter Verwendung eines IACUC-genehmigten Verfahren. Hinweis: Die Dauer der Wirkung kann durch eine zusätzliche Dosis von Ketamin / Xylazin erweitert werden. </li><li> Zu bestimmen, ob die Maus vollständig durch die fehlende Reaktion auf Zehe und / oder Schwanz drückt anästhesiert. (Optional) Wenn die Maus narkotisiert, sichern eine Isofluran-Gasmaske über der Nase durch Abkleben. Stellen Sie den Pegel von Isofluran, um sicherzustellen, das Tier völlig ruhig gestellt wird. </li><li> Clip der Kopfhaare mit einem elektrischen Trimmer oder kleine Schere. Entfernen Sie die Haare Fragmente und sterilisieren die freiliegende Haut mit 70% Alkoholtupfer. Bewerben Tränen Gel auf der Hornhaut eine Austrocknung zu verhindern. </li></ol> 3. Microfracture Injury <ol><li> Nachdem sichergestellt wurde, das Tier völlig ruhig gestellt ist, stellen Sie einen einzelnen umgekehrten L-förmigen Einschnitt, um die Kopfhaut zu öffnen. Kurz gesagt, einen ersten Querschnitt (weniger als 1 cm) starting von einem Ohr zum anderen Ohr. Schalten ~ 60 ° und weiter in Richtung der Nase einzuschneiden, bis ~ 2-3 mm von der Nase. Anmerkung: Dieser Schnitt die Bildung von Narbengewebe über dem abzubildenden Bereich minimiert. </li><li> Trennen Sie die Hautlappen durch Ziehen zu den Seiten hin mit einer Pinzette. Beide Stirnbeins und der Schnittpunkt der sagittalen und koronalen Naht sollte klar freigelegt werden. </li><li> Reinigen Sie die offene Fläche durch Spülen mit sterilem PBS und sanfte Wisch mit steriler Gaze oder einem Wattestäbchen, bis alle Resthaare werden eliminiert. </li><li> Um Mikrofrakturen auf dem Schädeldach zu erzeugen, halten Sie die Mauskopf mit einer Hand und eine 30-G-Nadel mit einer anderen Hand. Machen Sie eine Mikropunktion (~ 0,2 mm Durchmesser Wunde mit &lt;1 mm Tiefe) auf der linken Stirnbein in der Nähe der Kreuzung der sagittalen und Koronarnaht indem Sie die Spitze einer 30 G-Nadel mit sanftem Druck und Drehbewegung. Achtung: Es ist wichtig, um die Nadel am Eindringen in das Gehirn zu vermeiden, wodurch die Minimierung bleeding-und Gewebeschäden. </li><li> Wechseln Sie zu einem größeren Nadel (20 oder 25 G) und erweitern das Einstichloch durch Drehen der Nadel (Durchmesser ~ 0,5 mm). </li><li> Wiederholen Sie Schritt 3,3 bis 3,5 auf den zweiten Punktion auf der kontralateralen Stirnbein zu generieren. </li><li> Wischen Sie die verletzten Stellen durch kontinuierliche Absinken der PBS bis die Blutung aufhört. Hinweis: Blutung auf Bruchstellen werden mit entsprechenden Bild stören und Narbenbildung induzieren. </li><li> Einen Tropfen steriler physiologischer Kochsalzlösung oder 2% Methocel auf den Schädel, um ein Austrocknen zu verhindern. Hinweis: Lassen Sie keine der Schädeloberfläche, um zu trocknen, die Klarheit des Bildes verringert wird. Es ist wichtig, eine ausreichende Menge an Gel oder Kochsalzlösung verwenden, um den Bereich abzudecken. </li></ol> 4. Intravital Imaging <ol><li> (Optional) vor der Bilderzeugung, einige Mäuse mit einem Gefäß Farbstoff, um die Blutgefäße injiziert visualisieren. Injizieren retroorbital mit 20 ul von nicht-zielgerichteten Qtracker 705 (2 &amp;mgr; M-Lösung in 50 mM Borat-Puffer), verdünnt in 80 ml PBS. Verwenden Sie eine Insulinspritze zu Reagenz Abfall zu minimieren. Wenn das Signal nicht ausreichend hell ist, könnten zusätzliche Mengen benötigt werden. </li><li> Schalten Sie den Scanner. Hinweis: Ein Polygon-basierte Laserscanner ermöglicht die gleichzeitige Mehrkanal-Bildaufnahme in Videorate (30 Bilder pro Sekunde). Video Rate Scannen ist für Live-Tierbildgebung sehr wichtig. </li><li> Einschalten des Multiphotonen-Laser (Femtosekunden-Titan: Saphir-Laser). Stellen Sie die Wellenlänge auf 880 nm und stellen die Energie für Erzeugung der zweiten Harmonischen-Bildgebung (440 nm) des Knochens. Für GFP und tdTomato Anregung, schalten Sie die 491 nm und 561 nm Festkörperlaser. </li><li> Schalten Sie den PMT (Fotovervielfacherröhre) Detektoren für jedes Signal (ein 435 ± 20 nm Bandpassfilter für die zweite Harmonische ein 528 ± 19 nm Bandpassfilter für GFP, und 590 ± 20 für tdTomato.) (Optional) verwenden eine 638 nm Helium-Neon-Laser und einen PMT mit einer 695 ± 27,5 nm Bandpassfilter zur Detektion Qtracker 705 Signal. </li><li> Place das Tier auf einer XYZ-Achsen-motorisierte Mikroskoptisch. Halten Sie die Maus in die bequemste Position mit einem elektrischen Heizkissen zur Aufrechterhaltung der Körpertemperatur (dies reduziert das Risiko von Tierverlust). Verwenden Sie Klebeband, um die Maus zu halten, um die Bewegung während der Bildaufnahme zu minimieren und die Bildfläche so waagerecht wie möglich zu halten. </li><li> Einen Tropfen warmen 2% Methylcellulose-Gel oder physiologischer Kochsalzlösung auf den Schädel, um ein Austrocknen zu verhindern. Setzen Sie ein Deckglas auf dem Imaging-Bereich. Verwenden Sie eine niedrige Vergrößerungslinse (30x Wasserimmersionsobjektiv mit 0,9 NA), um die Schädeldecke zu scannen. </li><li> Mit der XYZ-Achsen-Steuerung, finden Sie die Oberfläche der Kalotte durch Erfassen der SHG-Signal von Knochen und identifizieren eine entscheidende Meilenstein Lage, wie der Schnittpunkt zwischen der sagittalen Nähten und Koronarnaht. Erwerben Sie ein Bild und notieren Sie die XYZ-Koordinaten. </li><li> Weiterhin für den Ort der Verletzung durch die Beobachtung SHG-und Fluoreszenzsignalen. </li><li> Wenn Verletzungsstellen oder die Region of Interesse gefunden werden, erhalten ein Bild der besten Fokusebene enthält SHG-und Fluoreszenzsignale von den Zellen von Interesse. Speichern XYZ-Koordinaten und der Abstand zum Schnittpunkt der sagittalen und koronalen Naht, ihre genaue Position für die nächste Runde der Abbildungs ​​definieren. </li><li> Um 3D-Zell-und Knochenstrukturen von Bruchschäden sammelt, speichert Bilder von Z-Stapel (2-5 um Intervall) mit ~ 100 um Tiefe von endostalen Knochenoberfläche. Nach Abschluss der Bildgebung von einer Seite der Verletzung, wiederholen Abbildungsprozesses für die nächste Verletzungsstellen. </li></ol> 5. Beitrag Operation Procedures <ol><li> Nach der Bild gründlich Bildstelle mit steriler Kochsalzlösung, die Methylcellulose-Gel aus dem Schädel zu entfernen. Mit einem sterilen Wattestäbchen, eine kleine Menge von Triple antibiotische Salbe auf der Oberfläche. Decken Sie die Hautlappen und wieder schließen, die Kopfhaut durch chirurgische Naht. Dies kann mit einer hypoallergenen Nähfaden (resorbierbaren Polyglactin su getan werdentur) und 5-0 Größe Nähnadel. Achtung: Gute Nahttechnik minimiert Narbenbildung. </li><li> Behandeln Sie alle Tiere, die mit IP-Injektion von 0,05 bis 0,1 mg / kg alle 12 h Buprenorphin für 48 Stunden nach der Operation. Halten Sie Tiere in einer Wärmerückgewinnung Kammer, bis sie genügend Bewusstsein wieder zu erlangen. Nach 3 bis 5 Tagen, öffnen Sie erneut den Faden und wiederholen Intravital-Bildgebung vor, um die zellulären Veränderungen während der Frakturheilung zu verfolgen. </li></ol>

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</ol>

Die Autoren erklären, dass sie keine finanziellen Interessen zu haben.

Die Regulierung der Skelett Stammzellen von großer Bedeutung für die Definition bessere Methoden, um die Knochenregeneration zu erreichen. Quantitative und sequentielle Bildgebung auf zellulärer Ebene ist technisch anspruchsvoll gewesen. Obwohl die Maus Röhrenknochenfrakturmodell wurde weit verbreitet und eignet sich für biomechanische Studien 17, haben ihre tiefe Gewebestelle, unebene Bruch Größe, Weichteilschaden, und die Anwendung der stabilisierenden Fixateur sequentielle Bildgebung Intravital begrenzt. H...

Degenerative Knochenerkrankungen und altersbedingten Knochenverlust führt zu einem hohen Risiko für osteoporotische Fraktur zu einer großen Herausforderung für die öffentliche Gesundheit ein. Knochenerhalt wird von knochenbildenden Osteoblasten und Osteoklasten Knochen gesteuert. Mängel der knochenbildenden Zellen sind die Hauptursache der altersbedingten Knochenverlust und degenerative Knochenerkrankungen 2,3. Während umfangreiche Forschung hat sich auf die Verbesserung der Frakturheilung konzentriert, um die Entdeckung der zuverlässige Medikamente degenerative Knochenerkrankungen zu heilen und die Schwäche der osteoporotischen Frakturen umkehren bleibt ein wichtiges Thema. So studieren die Quelle der knochenbildenden Zellen und ihre Kontrollmechanismen in der Knochenregeneration und Reparatur stellt eine neuartige Einblicke in Skelett-Regeneration zu verbessern und umzukehren Knochenverlust Krankheiten. Das Vorhandensein von multi mesenchymalen Zellen im Knochenmark wurde basierend auf der Identifikation von klonogenen Populationen vorgeschlagen, könnten unterschiedlicheiate in osteogene, chondrogene adipogene und Ex-vivo-Linien 4. kurzem mehrere Studien haben berichtet, dass Skelett / mesenchymale Stammzellen (SSC / MSC) sind eine natürliche Quelle von Osteoblasten und sind entscheidend für die Knochenumsatz, Umbau-, Reparatur-und Bruch 5,6 . Darüber hinaus unsere Linie-Tracing-Studie ergab, dass reife Osteoblasten haben eine unerwartet kurze Halbwertszeit (~ 60 Tage) und werden kontinuierlich durch ihre Stammzellen / Vorläuferzellen in beiden normalen homöostatischen und Bruchreparaturbedingungen 6 aufgefüllt. Die in vivo-Identität von Stammzellen und wie solche Zellen reagieren jedoch um Verletzungen zu zerbrechen und liefern knochenbildenden Zellen sind unklar. Daher ist es wichtig, eine Methode, die in der Lage, die Migration, Proliferation und Differenzierung endogener SSC / MSCs in unter physiologischen Bedingungen zu analysieren entwickeln. Bruchreparatur ist ein vielzelliger und dynamischer Prozess durch eine Anordnung von komplexen geregeltZytokine und Wachstumsfaktoren 7. Die beliebteste Ansatz für die Bruch Studien ist es, ein Tiermodell mit langKnochenBruch zu nutzen und Knochen durch Knochen Schnitte und Immunfluoreszenz-Techniken 10.08 analysieren. Dieses Reparaturverfahren kann von mehreren Bildgebungstechniken einschließlich Mikro-CT 11, Nah-Infrarot-Fluoreszenz 12 und Chemilumineszenz Abbildungs ​​13 überwacht werden. Jedoch hat jede dieser Techniken bestimmte Beschränkungen und es wurde keine wirksame Möglichkeit, SSC / MSC-Funktion auf zellulärer Ebene in vivo zu überwachen. Kürzlich, konfokale / Zwei-Photonen-Intravitalmikroskopie wurde entwickelt und verwendet werden, um Krebszellen und transplantierten hämatopoetischen Stammzellen auch bei Single-Cell-Auflösung in lebenden Tieren 14 zu erfassen im Rahmen der ihr Knochenmark-Mikroumgebung. Durch die Kombination dieser Technologie mit einer Reihe von Linienverfolgungsmodelle, waren wir in der Lage, festzulegen, dass osteogene Stammzellen / Vorläuferzellen genetisch durch transiente ac gekennzeichnetvierung des Myxovirus Widerstand -1 (MX1)-Promotor und Mx1-induzierte Vorläuferzellen können die Mehrheit der reifen Osteoblasten im Laufe der Zeit zu halten, aber nicht in der Erzeugung von Chondrozyten in der erwachsenen Maus 6 zu beteiligen. Darüber hinaus haben wir gezeigt, dass Mx1-markierten OSPCs liefern die Mehrheit der neuen Osteoblasten in Frakturheilung 6. Hier mit Osteo-Linie Verfolgungsmodelle und Intravitalmikroskopie wird ein Protokoll vorgesehen, um die in vivo-Kinetik Mx1 + osteogenen Stammzellen / Vorläuferzellen in Bruchreparatur zu definieren. Dieses Protokoll bietet sequentielle Bildgebung, um die Verlagerung von osteogenen Stammzellen / Vorläuferzellen in Bruchstellen und die quantitative Messung der Osteoprogenitorzellen Expansion in der frühen Reparaturprozess zu verfolgen. Dieser Ansatz kann sinnvoll in mehreren Zusammenhängen einschließlich der Bewertung der therapeutischen Kandidaten für die Knochenreparatur zu verbessern.

<table><tbody><tr><td>C57BL/6J (H-2b)</td><td>Jackson Laboratories (Bar Harbor, ME)</td><td>000664</td><td></td></tr><tr><td>Ketaminhydrochlorid-Injektion</td><td>Bionichepharma</td><td>67457-001-10</td><td>&nbsp; Fläschchengröße: 10 ml (50 mg/ml)</td></tr><tr><td>Xylazin Sterile Lösung</td><td>Lloyd Inc.</td><td>NADA# 139-236</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorphin Hl</td><td>BEDFORD LAB</td><td>NDC 55390-100-10</td><td>Fläschchen: 0,3 mg/ml, Dosen: 0,05-0,1 mg/kg</td></tr><tr><td>DPBS, 1X</td><td>CORNING cellgro</td><td>21-031-CV</td><td></td></tr><tr><td>Alkoholvorbereitungspads (70% Isopropylalkohol)</td><td>Kendall WEBCOL</td><td>5110</td><td></td></tr><tr><td>Feine chirurgische Schere</td><td>F.S.T</td><td>14568-09</td><td></td></tr><tr><td>Extra feine Pinzette</td><td>F.S.T</td><td>11150-10</td><td></td></tr><tr><td>VICRYL*Plus Nahtmaterial</td><td>Ethicon</td><td>VCP490G</td><td></td></tr><tr><td>Qtracker 705 nicht zielgerichteter Quantenpunkt</td><td>Invitrogen</td><td>Q21061</td><td></td></tr><tr><td>Methocel 2%</td><td>OmmiVision</td><td></td><td></td></tr><tr><td>pIpC (Polyinosin-Polycytidylsäure)&nbsp; &nbsp;</td><td>Sigma</td><td>P0913-50MG</td><td>100 &mu; l (2,5 mg/ml in PBS) für 10 g Maus</td></tr><tr><td>Mai Tai Abstimmbare Ultrakurzpulslaser</td><td>Spectra Physics</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dual Calypso 491 + 532 nm DPSS-Laser</td><td>Cobolt AB</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Radius-635 HeNe-Laser</td><td>Kohärent</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

sequentiell<em&gt; in-vivo-</em&gt; imaging von osteogenen stammzellen / vorläuferzellen während fracture repair

Sequential In vivo Imaging of Osteogenic Stem/Progenitor Cells During Fracture Repair

Knochen dreht sich ständig und ist sehr regenerative nach Verletzungen. Osteogenen Stammzellen / Vorläuferzellen haben die Hypothese aufgestellt worden, lange zu existieren, aber in vivo Nachweis solcher Zellen wurde erst kürzlich erreicht. Dabei sind in vivo bildgebende Verfahren, die Rolle von endogenem osteogenen Stammzellen / Vorläuferzellen (OSPCs) und deren Nachkommen in Knochenreparatur zu untersuchen ist. Mit Osteo-Linie Zellverfolgung Modelle und Intravital Bildgebung von induzierten Mikrofrakturen im Knochen Schädel kann OSPCs direkt während der ersten paar Tage nach der Verletzung, in der kritische Ereignisse in der frühen Reparaturprozess auftreten beobachtet werden. Verletzungsstellen nacheinander abgebildet werden enthüllt, dass OSPCs verlagern, um der Verletzung, vermehren und differenzieren sich in knochenbildenden Osteoblasten. Diese Methoden bieten ein Mittel zur Untersuchung der Rolle von Stammzellen-intrinsische und extrinsische molekulare Regulatoren für die Knochenregeneration und Reparatur.

<html> Die stabilisierte lange Knochenbruch-Modell wurde populär in der Bruchstudien. , Lange Knochen oder große Bruch Modelle führen jedoch mehrere Gewebeschäden und daher eine Beschränkung in der quantitativen Messung der Knochenzellfunktion. Wir entwickelten eine minimal invasive Schädigung (weniger als 1 mm Durchmesser mit minimaler oder ohne Eindringen in die Dura mater) am Schädelknochen frontal mit Nadelbohrung (Fig. 1A-1C). Wir wählten eine Draufsicht auf die Schädelstirnbein für in vivo-Bild...

Quantitative Messung der Knochenvorläuferfunktion in Frakturheilung erfordert hohe Auflösung Serienbildtechnologie. Hier werden Protokolle für die Verwendung von Intravitalmikroskopie und Osteo-Linie Tracking Bild sequentiell und Quantifizierung der Migration, Proliferation und Differenzierung der knochenbild endogene Stammzellen / Vorläuferzellen in den Prozess der Reparatur von Knochenbrüchen vorgesehen ist.

Sequentiell<em&gt; In-vivo-</em&gt; Imaging von osteogenen Stammzellen / Vorläuferzellen während Fracture Repair

Bone turns over continuously and is highly regenerative following injury. Osteogenic stem/progenitor cells have long been hypothesized to exist, but in ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, die Migration, Proliferation und Differenzierung endogener osteogener Stamm- und Vorläuferzellen bei der Knochenbruchheilung schrittweise zu verfolgen und zu quantifizieren. Dies wird erreicht, indem zunächst Mixovirus, Influenza-Virus-Resistenz, eins oder MX1-positive Zellen in vivo durch Injektion von Polyzytosin-Polyuridylsäure markiert werden, gefolgt von der Eliminierung der residenten MX1-positiven hämatopoetischen Zellen mittels Bestrahlung. Im zweiten Schritt werden wildtypische Knochenmarkzellen systemisch den bestrahlten Mäusen verabreicht.Anschließend werden durch Nadelbohren im Cal-Bereich der Maus Mikrofrakturen erzeugt. Schließlich erfolgt die sequenzielle intravitale Bildgebung der Mikrofrakturheilung. Letztendlich können diese intravitale Aufnahmen zur Beurteilung der Dynamik des osteogenen Stamm- und Vorläuferzellzuflusses und deren Expansion in die Frakturbereiche genutzt werden.Der Hauptvorteil dieser Technik besteht also darin, dass sie die wiederholte in-vivo-Bildgebung osteogener Stamm- und Vorläuferzellen während des Knochenheilungsprozesses ermöglicht. Die Bedeutung dieser Technik reicht bis in die Ther

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Forschung

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Medicine

Medizin

Menschliche perivaskulären Stammzellen (PSCs) sind eine neue Klasse für Stammzell-Skelett-Geweberegeneration ähnlich wie mesenchymale Stammzellen (MSCs). PSCs durch FACS (fluorescence activated cell sorting) kann aus dem Fettgewebe während der üblichen Fettabsaugung Verfahren beschafft isoliert werden, dann mit einem osteoinduktiven Gerüst kombiniert, um die Knochenbildung zu...

Verwenden Sie für Menschenrechte Perivaskuläre Stammzellen für die Knochenregeneration

Dieser Artikel beschreibt ein Verfahren zur Stabilisierung von Frakturen langer Röhrenknochen, die über die Anwendung der modifizierten Ilizarov Fixateur externe...

Erstellen Starr stabilisierte Frakturen zur Beurteilung intramembranöse Ossifikation, Distraktionsosteogenese, oder Heilung von kritischer Größe Mängel

Die Art der Wechselwirkung zwischen hämatopoetischen Stamm-und Vorläuferzellen (HSPCs) und Knochenmark Nischen schlecht verstanden. Kundenspezifische Hardware-Modifikationen und eine mehrstufige Akquisitionsprotokoll ermöglichen den Einsatz von Zwei-Photonen-Mikroskopie und konfokaler Bild ex vivo markierten HSPCs innerhalb des Knochenmarks Bereichen referenziert, Tracking-Wechselwirkungen und Bewegung.

In-vivo-4-Dimensional-Tracking von hämatopoetischen Stamm-und Vorläuferzellen im erwachsenen Maus Schädeldachknochenmark

Dieses Protokoll beschreibt die Radiomarkierung von mesenchymalen Stammzellen von Pferden und deren Implantation in Sehnenverletzungen beim Pferd, um das Zellüberleben und die Gewebeverteilung mittels Gammaszintigraphie zu bestimmen.

In-vivo-Imaging und Verfolgung von Technetium-99m markierten Knochenmark mesenchymale Stammzellen in Equine Tendinopathie

Die Auswertung der Gewebeentwicklung in Fraktur Kallus während Endochondral Knochenheilung ist wichtig, den Heilungsprozess überwachen. Wir berichten hier, die Verwendung von einer Magnetresonanztomographie (MRT)-kompatibel Fixateur externe für die Maus Femur erlauben MRI scans während Knochenregeneration bei Mäusen.

In Vivo Bewertung der Fraktur Kallus Entwicklung während der Knochenheilung bei Mäusen mit einem MRI-kompatiblen Osteosynthese Gerät für Maus Femur

Das murine geschlossenen femoralen Fraktur-Modell ist eine leistungsfähige Plattform, Frakturheilung zu studieren und neue therapeutische Strategien zur Knochenregeneration zu beschleunigen. Das Ziel dieses chirurgischen Protokolls soll einseitige geschlossenen femorale Frakturen bei Mäusen mit einem intramedullären Stahl-Stab Femur zu stabilisieren.

Die Generation der geschlossenen femoralen Frakturen bei Mäusen: ein Modell zur Knochenheilung

Die extrazelluläre Matrix (BEM) Knochenmodell für Osteosarkom (OS) ist hier gut etabliert und gezeigt. Es kann als geeignete Gerüst für Primärtumor Wachstum in Vitro imitiert und bietet ein ideales Modell für das Studium der histologischen und cytogenic Heterogenität des Betriebssystems verwendet werden.

Dreidimensionale extrazelluläre Matrix Knochenmodell für Osteosarkom

Dieses Protokoll beschreibt den Nachweis der CCL5-vermittelten periostalen Skelettstammzellmigration in Echtzeit mittels lebender tierexperimenteller Mikroskopie.

Echtzeit-Bildgebung der CCL5-induzierten Migration von periostalen Skelettstammzellen in Mäusen

Dieses Protokoll beschreibt ein chirurgisches Verfahren zur Etablierung einer diaphysären Fraktur im Oberschenkelknochen von Mäusen, die mit einem Markdraht stabilisiert wird, für Frakturheilungsuntersuchungen.

Etablierung eines diaphysären Femurfrakturmodells bei Mäusen

Das murine Knochenmarkverletzungsmodell ist ein nützliches Werkzeug zur Untersuchung der postnatalen Osteogenese durch intramembranöse Ossifikation. Dieses vereinfachte chirurgische Protokoll beschreibt das Verfahren der Knochenmarkablation zur nachgelagerten Beurteilung der Knochenneubildung und der zellulären Reaktionen nach einer Verletzung.

Verbesserte Methodik zur Untersuchung der postnatalen Osteogenese durch intramembranöse Ossifikation in einem murinen Knochenmarkverletzungsmodell

Erfahren Sie, wie osteogene Stammzellen während der Knochenfrakturheilung mittels Intravitalmikroskopie sequentiell verfolgt werden. Diese Methode ermöglicht die quantitative Analyse von Zellmigration, Proliferation und Differenzierung in vivo.

Sequentiell

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