Elektrophysiologische Aufnehmen von Drosophila Labellar Geschmack Sensillen

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, die Reaktionen der einzelnen Geschmackssensa auf das Labum von Drosophila zu messen. Dies wird erreicht, indem zunächst ein Elektrophysiologie-Rig gebaut und alle notwendigen Geräte eingerichtet werden. Der zweite Schritt besteht darin, die Fliege für die Aufnahme vorzubereiten.

Als nächstes wird ein einzelnes Lum mit einer Geschmacksverbindung stimuliert, während gleichzeitig die neuronale Reaktion aufgezeichnet wird. Letztendlich wird die elektrophysiologische Aufzeichnung von einzelnen Etiketten-Silla verwendet, um die Reaktionen von Geschmacks-Illa auf verschiedene Geschmacksverbindungen zu zeigen. Die visuelle Demonstration dieser Methode ist von entscheidender Bedeutung, da die Schritte zur Vorbereitung der Fliege technisch anspruchsvoll und schwer zu erlernen sein können.

Bei diesem Verfahren werden die neu ELOs Fliegen aus den gut gepflegten Fliegenkulturen gesammelt. Lassen Sie sie dann fünf bis 10 Tage in frischen Kulturfläschchen altern, bevor Sie vor der Fliegenvorbereitung die Mikroskopplatte 15 bis 30 Minuten lang auf Eis abkühlen lassen. Füllen Sie anschließend die Glasreferenzelektrode mit B- und E-Lösung auf.

Und klopfen Sie alle Blasen vorsichtig unter dem Präpariermikroskop aus. Brechen Sie mit der Pinzette einen kleinen Teil der Spitze ab. Verwenden Sie anschließend die Kapillarwirkung, um die verbleibenden Blasen mit dem Gewebe herauszuziehen.

Schieben Sie dann die mit B und E gefüllte Referenzelektrode über den Draht des Elektrodenhalters und um darauf zu achten, dass danach keine Luftblasen entstehen, saugen Sie eine Fliege in eine Pipettenspitze P 200 ein. Geben Sie es in einen Eiskübel und kühlen Sie es 30 Sekunden bis eine Minute lang. Nehmen Sie anschließend die Mikroskopplatte vom Eis und positionieren Sie sie unter dem Mikroskop, nachdem Sie die Feuchtigkeit abgewischt haben.

Klopfen Sie dann den Hosenschlitz vorsichtig aus der Pipettenspitze auf die Mikroskopplatte bei geringer Vergrößerung. Entfernen Sie die vier Beine mit einer Pinzette, während Sie die Forex mit der anderen Pinzette stabil halten. Positionieren Sie die Fliege auf der Bauchseite mit der Rückenseite nach oben.

Achten Sie immer darauf, dass Sie während des Präparationsprozesses nicht mit der Pinzette mit dem Etikettengummi in Berührung kommen, um mechanische Beschädigungen zu minimieren, während Sie die Fliege mit einer Pinzette an Ort und Stelle halten, führen Sie die Referenzelektrode an der Mittellinie des hinteren dorsalen Thorax in einem Winkel von ca. 45 Grad in Richtung des Kopfes ein. Befestigen Sie dann den Referenzelektrodenhalter mit Modelliermasse so, dass die Fliege unter dem Mikroskop bei hoher Vergrößerung sichtbar ist. Manövrieren und winkeln Sie die Glaselektrode an Hals und Kopf an und schieben Sie den Flyer mit zwei Pinzettenpaaren in Richtung des Referenzelektrodenhalters.

Verlängern Sie nun vorsichtig den Rüssel mit einer Pinzette und schieben Sie die Fliege weiter nach unten auf der Glasreferenzelektrode, bis sich die Spitze der Elektrode im Etikettengummi befindet und der Rüssel vollständig ausgefahren ist. Befestigen Sie in diesem Schritt den Referenzelektrodenhalter an dem Mikromanipulator, der auf dem Lufttisch montiert ist. Positionieren Sie einen Lappen des Label-Labums im Sichtfeld des Mikroskops unter starker Vergrößerung und in einer Linie mit dem befeuchteten Luftstrom.

Schalten Sie danach das Humidified Airstream Computer Digital Acquisition System (DAS) und den Verstärker ein. Ziehe als Nächstes mit einer Spritze und einem Plastikschlauch mindestens 10 Mal eine kleine Menge Reinstwasser durch den Schlauch. Um die Aufzeichnungselektrode des Glases zu spülen, spülen Sie die Aufzeichnungselektrode anschließend mindestens fünfmal mit TAST aus.

Füllen Sie dann die Aufnahmeelektrode etwa zu einem Drittel bis zur Hälfte mit Geschmack und nehmen Sie sie aus dem Schlauch. Wenn Luftblasen vorhanden sind, tippen Sie, um diese zu lösen, oder füllen Sie einfach die Elektrode nach. Schieben Sie nun die Elektrode schnell und reibungslos auf den Silberdraht des Kopftisches.

Um das Einbringen von Luftblasen zur Stimulation des Einzelsenders zu vermeiden, verwenden Sie zunächst den Mikromanipulator, um die Aufnahmeelektrode mit dem interessierenden Sensor in Einklang zu bringen. Drücken Sie anschließend das Fußpedal, um den Erfassungsmodus des Verstärkers auszulösen. Schieben Sie dann die geschmackliche und gefüllte Aufnahmeelektrode mit dem feinen Drehknopf des Mikromanipulators vorsichtig vor, bis sie die Spitze des Sensors berührt und beginnen Sie mit der Aufnahme.

Entfernen Sie die Elektrode nach ein bis zwei Sekunden. Wiederholen Sie den Vorgang erneut mit einer anderen illa und warten Sie zwischen den Präsentationen mindestens eine Minute auf denselben Betrag. Wenn Sie mit einem einzigen Geschmack und über einen längeren Zeitraum aufnehmen, können der Geschmack und die Lösung austrocknen und die Lösung in der Spitze kann konzentrierter werden.

Dies kann behoben werden, indem die Spitze der Glaselektrode vorsichtig mit glattem Papier berührt wird, um eine kleine Menge Flüssigkeit durch Kapillarwirkung zu entfernen, um die Reaktionen auf einen anderen Geschmack aufzuzeichnen, die Aufzeichnungselektrode zu spülen und mit neuem Geschmack zu beladen und den Vorgang zu wiederholen. Speichern Sie regelmäßig Datendateien mit identifizierenden Informationen wie Datum, Genotyp und Geschmack. Diese Abbildung zeigt die Reaktion eines Centums auf einen Zuckersaccharose.

Das gleiche Centum reagiert nicht auf eine Bitterverbindung Berberin, und diese Abbildung zeigt, dass ein Augensensor, der ein bitter reagierendes Neuron enthält, größere Amplitudenspitzen als Reaktion auf Berberin und kleinere Amplitudenspitzen als Reaktion auf Saccharose zeigt. Hier ist ein repräsentatives suboptimales elektrophysiologisches Ergebnis zu sehen. Diese Ablaufverfolgung stellt ein völliges Fehlen eines Signals dar.

Das ist das 50- oder 60-Hertz-Rauschen von externen elektrischen Quellen, und das ist das stochastische Rauschen. Diese Spur stellt dar, dass das sensorische Neuron der Meno alleine feuerte, während sowohl das rezeptorneuron des bitteren Geschmacks als auch das sensorische Neuron der Meno feuerten. Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie man neuronale Reaktionen von Oph Atory Silla auf dem Labum aufzeichnet.