Immunhistochemischen und Calcium Imaging Methoden in der Wholemount Rat Retina

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist die selektive Markierung von retinalen Ganglienzellen in der gesamten Präparation der Halterung durch eine Injektion eines Kalziumindikatorfarbstoffs durch einen Sehnervenstumpf. Dies wird erreicht, indem zuerst ein sehr hochaffiner Kalziumindikatorfarbstoff, wie z. B. Flow vier, in den Sehnervenstumpf injiziert wird. Als nächstes wird die Netzhaut von der Augenmuschel isoliert und in Quadranten unterteilt, um sie auf einen Objektträger zu montieren. In einer Aufnahmekammer, die so eingerichtet ist, dass sie physiologische Bedingungen nachahmt, werden die Beiträge von spannungsgesteuerten Kalziumkanälen zum Kalziumsignal nachgeahmt.

In retinalen Ganglien können Zellen in depolarisierten Zellen mit Hilfe von Kanalblockern gemessen werden. Letztendlich können die Ergebnisse semiquantitative Messungen des Beitrags der spannungsgebildeten Kalziumkanäle zu einem Signal wie einem kalumevozierten Kalziumsignal mit hohem Kaliumgehalt liefern. Der Hauptvorteil dieser Technik gegenüber bestehenden Methoden, wie z. B. Elektroporation und Bulk-Loading, besteht in der Möglichkeit, retinale Ganglienzellen und ihre Axone selektiv in einer ganzen Präparation zu speichern, zu präparieren und ein Aims Medium oder eine ähnliche Lösung zu überwintern.