Name: Technik der Subnormothermic Ex-vivo- Leberperfusion für die Lagerung, Bewertung, Reparatur von Marginal Lebertransplantate (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-08-13T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 29 s
Description: Erfahren Sie die subnormotherme Ex-vivo-Leberperfusion zur Lagerung und Bewertung marginaler Lebertransplantate. Diese Methode reduziert die Konservierungsverletzung und ermöglicht die funktionelle Beurteilung vor der Transplantation.

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Die Studie wurde von Forschungsstipendien der Roche Organ Transplantation Research Foundation (ROTRF) und Astellas unterstützt. Markus Selzner wurde von einem ASTS Career Development Award unterstützt. Matthias Knaak wurde von der Astellas Forschungsstipendium unterstützt. Wir danken Uwe Mummenhoff und der Birmingham Familie für ihre großzügige Unterstützung.

Eine schematische Übersicht über das Protokoll ist in 1 dargestellt. <img alt="Figur 1" src="/files/ftp_upload/51419/51419fig1highres.jpg" /> Abbildung 1. Studienprotokoll. Schweinestudiendesign von Leberschäden ist auf eine Spende nach Herztod (DCD)-Modell. Nach der Sektion aller Lebergefäße, ist Herztod induziert durch 45 min warmer Ischämie gefolgt Transplantat. Um ein Pfropf Transport zwischen den Donor-und Empfänger Krankenhäusern in einer klinischen Umgebung zu simulieren, wird das Transplantat auf Eis für 4 Stunden nach dem Kalt, Zwei-Mengen gespeichert. Nach kalte Lagerung, ist das Organ subnormothermic perfundierten für 6 Stunden, um die Durchblutung Stabilität zu beurteilen. In einem Transplantationsmodell konnte die Durchblutung Zeit, um die Energiespeicher wieder aufzuladen und die Organe lebensfähig zu bewerten kürzer sein. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51419/51419fig1large.jpg" target="_blank">Bitte klicken er</a>wieder um eine größere Version dieser Figur zu sehen. 1. Tiere HINWEIS: Männlich Yorkshire Schweine, 30-35 kg, wurden für diese Studie verwendet. Alle Tiere erhielten humane Pflege in Übereinstimmung mit den &#39;Grundlagen der Versuchstierpflege &quot;&quot; von der Nationalen Gesellschaft für Medizinische Forschung und dem&#39; Leitfaden für die Pflege von Labortieren &#39;&#39; von den National Institutes of Health formuliert. Das Animal Care Committee der Toronto General Research Institute stimmten allen Studien. 2. Organentnahme <ol><li> Haus männlichen Yorkshire Schweine in Forschungseinrichtungen für 1 Woche vor Perfusion / Transplantation das Niveau von Stress zu reduzieren und um die Tiere zu den Wohnbedingungen zu gewöhnen. Weniger als 2 Tage von Wohnungen in der Anlage zu einer Stress-induzierten physikalische Reaktion, die die Durchblutung des Ergebnisses 22,23 verändern kann führen. </li><li> Betäuben Schweinedurch eine intramuskuläre (im) Injektion einer Mischung aus Ketamin (25 mg / kg), Atropin (0,04 mg / kg) und Midazolam (0,15 mg / kg). </li><li> Vor der Intubation sicher das Schwein spontan atmet 2 l O 2 mit 5% Isofluran verabreicht. Sprühen Sie die Stimmbänder mit 2% Lidocain 2 min vor der Intubation zu Stimmbandkrämpfe zu vermeiden. Beispielsweise für einen 35 kg Schweine mit einem 6,5 fr. Trachealtubus. Sperrung der Trachealtubus mit 3-5 ml Raumluft. </li><li> Nach der Intubation Kapnometrie verwenden, um die korrekte Intubation bestätigen. Senken Sie die Isofluran-Gas bis 2%. Stellen Sie den Ventilator auf 14-16 Atemzüge / min und einem Atemvolumen von 10 ml / kg Körpergewicht. </li><li> Legen Sie eine 20 G intravenöse (iv) Katheter nach einem der Ohrvenen Infusion von Ringer-Laktat-Lösung (200 ml pro Stunde) zu ermöglichen. Dann reiben Sie das Schwein und bedecken Sie es mit sterilen Tüchern. </li><li> Machen Sie eine Mittellinienschnitt, gefolgt von einer linken seitlichen Erweiterung. Verwenden Sie ein Handtuch, um große und kleine Darm decken und verschieben Sie sie auf der linken Seite. </li><li> Separate InFElegene Hohlvene (IVC) und die distale Aorta voneinander; Ligat Aorta verzweigt in den Rücken; isolieren und kostenlos Nierenarterien von anhaftendem Gewebe. </li><li> Teilen Sie die falciforme Band und den dreieckigen Ligament mit Kauter. </li><li> Lassen Sie die Pfortader durch einen Einschnitt des Bauchfells zwischen Pankreas und Pfortader. Abbinden Venen aus der Bauchspeicheldrüse in die Pfortader. </li><li> Präparieren Sie die Zöliakie-Stamm unter der Pfortader und folgen ihm nach hinten, um die Aorta. Umgeben die A. mesenterica mit einem 2-0 Krawatte; umgeben die Milz und die linke Magenarterien, die Niederlassung nach hinten auf die Zöliakie-Stamm. Präparieren Sie die Zöliakie-Stamm aus der Pfortader. </li><li> Ligieren die Lymphgefäße im Ligamentum hepatoduodenale lymphatischen Auslaufen zu verhindern. Teilen Sie die richtige Magenarterie zwischen Krawatten. Ligieren kleineren Adern. Trennen Sie den Gallengang von der Band und teilen sie distal nach Ligation. </li><li> Präparieren Sie die Aorta hinter der Membran zwischen Herz und Zöliakie trunk; legen Sie eine Krawatte um 2-0 der Aorta. </li><li> Lassen Sie die Leber aus dem unteren Cava auf der rechten Seite mit Elektrokauter; mit einer Schere für den oberen Teil zwischen Sekt und Leber. </li><li> Entfernen der Gallenblase und der Gallenblase aus kauterisieren Bluter Bett. </li><li> Iv verabreichen 1.000 IE / kg Spendergewicht von Heparin. Für eine DCD-Modell, Herzstillstand herbei durch intra Injektion von 40 mval KCl 3 Minuten nach Heparingabe. Set Herzstillstand als Ausgangspunkt der warmen Ischämie. </li><li> Für die Durchblutung, sammeln 1,6 l Schweineblut in CPDA Beutel (Citrat, Phosphat, Dextrose, Adenosin) unmittelbar nach Herztod. Führen Sie einen Soft-Spin (2.000 × g ohne Bremse). Entfernen Sie das Plasma und die Buffy-Coat unter sterilen Bedingungen (Biosicherheitswerkbank Klasse II) und speichern die Erythrozyten in CPDA Taschen für die Transfusion. </li><li> Kanülieren Pfortader und Aorta mit Orgel bündig Linien. Binden Sie die zuvor eingestellte Krawatten um Oberschenkel, Nieren, Milz, mesenterialen und linken Magen-Kunstdeckungen sowie der oberen Aorta. Für einen Herzschlag Spender (HBD) Modell, führen Sie die Kanülierung der Aorta und Pfortader unter Herz schlagen Bedingungen. </li><li> Nach 45 min warme Ischämie, spülen Sie die Leber mit der University of Wisconsin (UW)-Lösung mit Dual-Perfusion über Aorta (Drucksack) und Pfortader (Schwerkraft angetrieben). </li><li> Schneiden Sie die Leber aus dem Schwein, lange verlassen alle verbleibenden Schiffe. </li><li> Während der Rück Tabelle Vorbereitung, klemmen die oberen IVC mit einem Satinsky klemmen und spülen der Leber ein zweites Mal mit etwa 0,5 l UW-Lösung retrograd über niedrigere IVC, bis die Pfortader Abfluss ist klar. </li><li> Binden Sie alle Arterienäste aus der Aorta und Truncus. Führen Sie einen arteriellen Druck zurück-Tabelle Perfusion mit etwa 0,5 l UW-Lösung. </li><li> Spülen Sie den Gallengang mit UW-Lösung. </li><li> Kanülieren die oberen und unteren Teile des IVC mit 2.1 &quot;x 8.3&quot; Minderer mit Luer-Lock; kanülieren die Pfortader und Leberarterie mit 8.3 &quot;; x 4.1 &quot;und 4.1&quot; x 8.3 &quot;Minderer mit Luer-Lock. Verwenden Sie die obere und untere Hohlvene als venöse Drainage. </li><li> Legen Sie die Leber in einem Organ Tasche, schließen Sie die Orgel Tasche, und speichern Sie die Leber auf Eis, bis die Durchblutung hat begonnen. </li></ol> 3. Ex-vivo-Perfusion Leber <ol><li> Bereiten Sie die Perfusionslösung mit 2000 ml Steen Lösung gewaschen, 400 ml Erythrozyten, 550 mg Natriumpyruvat, Aminosäuren 100 ml Säurelösung (10% Travasol), 10 mg Calcium-Gluconat, 1.000 IE schnell wirkenden Insulin, 1 g Cefazolin, 500 mg Metronidazol, und 10.000 IE Heparin. Andere Moleküle für die Gefäßerweiterung, Immunsuppression, Abfangen von reaktiven Sauerstoffspezies oder Leberzell-Therapie bezogen auf den jeweiligen Studienprotokoll. </li><li> Für die Dialyse-Komponente, verwenden Standard-Dialysat, das 3,5 mM Kalium, 25 mM Natriumbicarbonat, 27 mM Glucose, sowie 275 mg / l Pyruvat. </li><li> Einrichten der Perfusionskreislauf (Schema siehe Abbildung 2). <img alt="Figur 2" src="/files/ftp_upload/51419/51419fig2highres.jpg" /> Abbildung 2. Stromkreis einrichten. Aus dem Hauptreservoir als Ausgangspunkt und Ende wird die Perfusionslösung mit einer Kreiselpumpe durch einen Oxygenator angetrieben. Gleich nach Oxygenierung der Lösung teilt sich die Schaltung in einem kleineren Linie, um einen Dialysator Einheit für Elektrolyt-Homöostase und einer größeren Leitung zu einer Leukozyten-Filter zur Reduktion der Rest der weißen Blutzellen (WBC) läuft. Die Lösung, die durch den Dialysator führt zurück zum Hauptbehälter. Nach der Leukozyten-Filter, teilt die Schaltung wieder in 2 gleiche Zeilen. Eine Linie verläuft bei hohem Druck (ca. 60 mmHg) direkt in die Aorta, um die Leberarterie durchströmen. Die andere Linie läuft in einem zweiten Behälter. Aus diesem Reservoir der Pfortader perfundiert. Der Druck des Portals Perfusion hängt von der Höhe der Energiepegel der Lösung des Reservoirs (etwa 2-6 mm Hg). Alle Flüssigkeiten sind drüber die Infrastruktur und überLeberVenen zurück in das Hauptreservoir ained. Für Schwerkraftreduzierung und homogene Perfusion wird die Leber in einem Pool mit Wassertemperatur geregelt gefüllt war. Es ist aus dem Wasser durch eine undurchlässige Membran getrennt, und es in einer Perfusion Suspension schwimmt. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51419/51419fig2large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Figur zu sehen.</a> <ol><li> Sammeln Sie alle Flüssigkeiten aus dem Kreislauf in einem 3 L Behälter (Hauptbehälter) und klemmen den Abfluss. </li><li> Verbinden der Abfluss zu einer Kreiselpumpe, gefolgt von einer kommerziellen Oxygenator. </li><li> Hinter dem Oxygenator, aufgeteilt den Schlauch in 2 Zeilen. Schließen Sie eine Leitung an einem Dialysegerät und lassen sie zurück in das Hauptreservoir. Schließen Sie die zweite Linie zu einer Reduktion der Leukozyten-Filter. </li><li> Split die Linie nach der Leukozytenreduktion Filter in einer arteriellen Linie, die Durchblutung Lösung der Leberarterie versorgt, und ein Portal vgene Linie liefern Perfusionslösung zu einem zweiten Reservoir, das in die Pfortader durch die Schwerkraft Abfluss entwässert. Spannen Sie den Zustrom Portal. </li><li> Schließen Sie den arteriellen Linie zu einer Hohlvene Linie Entwässerung in das Hauptreservoir für die Fluid Erinnerung. </li><li> Zum Sammeln der Aszites oder Leckage der Perfusionslösung aus der Leber, bereiten eine Saugleitung zu dem Hauptspeicher verbunden. </li></ol></li><li> Lassen Sie den Abfluss Klemme von dem Hauptbehälter und füllen Sie die Schaltung mit der Perfusionslösung. Starten Sie die Kreiselpumpe bei 1.500 U / min. Die Perfusion Lösung wird durch die arterielle Leitung in die Hohlvene line zurück in das Hauptreservoir zu fahren. Stellen Sie sicher, dass alle Luft aus der Schaltung angetrieben. </li><li> Schalten Sie die Gaszufuhr zu dem Oxygenator. </li><li> Nehmen Sie die Leber aus dem Eis. Spülen, die UW-Lösung mit Kochsalzlösung. </li><li> Platzieren der Leber, mit ihrer konvexen Seite nach unten, um den Zugriff zu den Behältern zu erleichtern, idealerweise in einer schwerelosen Umgebung zu vermeiden,Organ Kompression an der Kontaktfläche. Verwenden Sie eine Wärme und kühlbaren Wasserbad. Stellen Sie die Starttemperatur der Schaltung und Wasserbad auf 20 ° C. Decken Sie die Wasser-Bad mit einer undurchlässigen Membran und setzen Sie die Leber auf dieser Membran. Reduzieren Sie die Schwerkraft angetrieben Kompression durch Eintauchen der Leber mit Perfusion Lösung. </li><li> Reduzieren Sie die Geschwindigkeit der Kreiselpumpe zu 1.000 U / min und legen Sie zwei Klammern an der Verbindung der arteriellen und Hohlvene Linien. Dann schneiden Sie den Schlauch zwischen den Klemmen. Mit einem 3-Wege-Stecker, verbinden beide Cava Abflüsse und verbinden Sie diese mit der Vena Cava Linie. </li><li> Lösen Sie die Klemme von der arteriellen Linie, gießen Perfusionslösung in die arterielle Kanüle in der Luftblasen zu entfernen, und schließen Sie die Zeile mit der Kanüle. Erhöhen Sie die Kreiselpumpe zu 1.500 U / min. Lassen Sie die zweite Klemme von der Hohlvene Linie. </li><li> Lösen Sie die Klemme von der Pfortader-Reservoir, um sie zu füllen. Lassen Perfusionslösung in das Portal Cannu gießenla und anschließen. Besondere Vorsicht stabiler Flüssigkeitsspiegel im Reservoir-Portal. </li><li> Verbinden Druckleitungen zu den Luer Locks der arteriellen, portal, und Hohlvene Kanülen. </li><li> Physiologischen Bedingungen zu imitieren, gelten Behandlungen in die richtige Schiff. Injizieren Glukose in die Pfortader und nicht in die arterielle Linie, um einen Farbverlauf imitiert eine erhöhte Pfortader-Glukose Gradienten und Induktion Glykogensynthese 24,25 etablieren. </li><li> Nach dem Anschluss der Leber an der Rennstrecke und erhöhen die Temperatur auf 33 ° C innerhalb von 60 min. </li><li> Ziel für eine arterielle Startstrom bei etwa 250 ml / min bei 40 mmHg. Dies kann 700 ml / min während der Perfusion zu erreichen, sobald der Druck auf 70 mmHg erhöht. </li><li> Am Starttemperatur, Ziel für einen Pfortaderflusses von 500-600 ml / min bei 3-5 mmHg. Nach Erhöhung der Temperatur, die Überwachung der Pfortader-Flow, der bis 1100 ml / min bei 4-6 mmHg erhöhen wird bis. Nicht zu überschreiten Portal Druck über PhysiologicaL-Werte (etwa 8 mmHg), um sinusförmige Fensteranordnungen 26 zu schützen. Vermeiden Gesamtdurchfluss von mehr als über 2000 ml / min, um eine Beschädigung des Organs zu verhindern. Stellen Sie den Abfluss bis -2 mmHg durch Absenken der Hauptreservoir zu Leberüberlastung durch funktionelle Obstruktion zu verhindern. </li><li> Hinzufügen des Dialyse Komponente an die Schaltung, um die Perfusionslösung auf vorbestimmte Werte 27 äquilibrieren. Stellen Sie die Dialysatfluss bis 500 ml / h. Besondere Aufmerksamkeit auf die Dialyse Abfluss einstellen, so dass die Durchblutung Lösung wird weder verdünnt noch konzentriert. Innerhalb der ersten Stunde der Durchblutung das Hauptreservoir muss sorgfältig beobachtet werden! </li><li> Eine homogene Sauerstoffversorgung des Gewebes unter Verwendung einer Hauptkomponentengasgemisch von O 2 (95-98%) und CO 2 (2-5%) wiederherzustellen und zu erhalten Organfunktion. Verwenden variablen Gas während der Perfusion, da die Leber ändert seinen Stoffwechsel und sein pH-Nachfrage während der Perfusion. </li><li> Halten Sie einen niedrigen pH-Wert während des Beginns derPerfusion, um das Organ zu schützen, die das Paradox pH Konzept 28 und vermeiden Sie schwere Gewebeschäden, die von schnellen Verbindungen nach physiologischen pH-Wert unter Reoxygenierung führen kann, da nach der Lagerung in UW-Lösung, hat die Orgel eine azidotische pH-Wert unter 7. Stellen Sie den Partialdruck von CO 2 kontinuierlich bis auf 25-30 mm Hg, so daß der pH-Wert eines physiologischen Niveau innerhalb von 1 h zu erreichen. </li><li> Hinzufügen Natrium oder Kaliumbicarbonat zu der Schaltung, um eine physiologische Konzentration von Standard-Bicarbonat in der Perfusionslösung zu erzielen. Spritzen sie vorsichtig unter sich wiederholenden Blutgas und Elektrolytkontrolle. </li><li> Überwachen Sie die Durchblutung durch periodische venöse und arterielle Blutgasanalysen und AST. Die venöse PO 2 bleibt über 175 mmHg während der Perfusion. Überwachen Gefäßstrom und Druck, und beachten Sie eine stabile Durchblutung durch einen konstanten Gefäßwiderstand. </li><li> Halten Sie die Perfusion System für bis zu 8 Stunden stabil. Am Ende der Ex-vivo-Perfusion Zeitraum, coolauf der Perfusion System auf 20 ° C und nach dem Trennen Schlauch der Schaltung aus der Leber, spülen Sie die Perfusionslösung die Leber dual mit eiskaltem UW-Lösung. Bewahren Sie die Leber wieder auf Eis in einem sterilen Beutel gelegt Orgel. </li></ol>

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</ol>

Die Autoren haben nichts zu offenbaren.

In einem Schweinemodell, das DCD Lebertransplantation nachahmt, haben wir gezeigt, dass subnormothermic Leberperfusion mit einem zellulären Perfusionslösung zu stabilen Perfusionsparameter, minimale Leberzellschädigung und Leberstoffwechsel aktiv. Unsere subnormothermic Perfusion einzurichten hat sich ein Leberzell Homöostase und Stoffwechsel erholen. Glykogen-Speicher wiederhergestellt und Metaboliten werden verworfen. Ex vivo Leberperfusion als Konservierungstechnik bietet erstmals die Möglichkeit, Markierungen von Transplantatfunktion und Schädigung während Organkonservierung und vor der Transplantation zu bewerten. Neben der makroskopischen Beurteilung der Transplantatdurchblutung Homogenität, Durchflusswerte bieten einen guten Indikator für die Lebensfähigkeit des Transplantats und das Ausmaß der ischämischen Verletzung es früher 29 erlitten hatte. Sauerstoffverbrauch und Galle Produktion sind Marker für metabolische Funktion. Leberenzymwerte wie AST kann als verwendet werdensess den Grad und die Dynamik der Leberzellschädigung 30. Diese gründliche Transplantat Beurteilung kann eine zuverlässige Unterscheidung zwischen transplantierbarer und nicht-transplantierbaren Rand Organe ermöglichen. Wir wählten eine subnormothermic Temperatur von 33 ° C in unserem Perfusionssystem, da die Temperatur ausreichend ist, um den Stoffwechsel als auch ATP und Glykogen-Synthese zu ermöglichen. Gleichzeitig bietet sie eine verringerte Sauerstoffbedarf im Vergleich zur Normothermie Perfusion Einstellungen, die zusätzliche Sicherheit gegen ischämische Verletzungen bietet. Im allgemeinen Perfusion Temperaturen über 30 ° C haben sich als kalte ischämische Verletzung zu minimieren und eine ausreichende metabolische Aktivität 31. Im Gegensatz zu anderen Gruppen, haben wir nicht genutzt Vollblut als Perfusat, aber ein normo-osmotischen Albuminlösung (Steen) mit gewaschen und filtriert roten Blutkörperchen. Unter Ausschluss der Plasmakomponenten sowie Thrombozyten und Leukozyten, die Perfusionslösung deunterzeichnet, um pro-inflammatorischen Signal während der Ex-vivo-Perfusion zu minimieren. Neben dem Transplantat Bewertung, stabil Perfusionsbedingungen über mehrere Stunden ermöglichen Transplantat Behandlung. Zahlreiche Moleküle gezeigt, Reperfusionsverletzung unter experimentellen Bedingungen 32 zu dämpfen. Allerdings hat fast keine Behandlung Regime seinen Weg in die klinische Praxis, noch nicht. Ein Grund scheint der Mangel an Gelegenheit, diese Behandlungen während der kalten Lagerung anzuwenden. Eine stoffwechselaktiven Leber auf einer Ex-vivo-Perfusion System ist optimal für die Anwendung jeglicher Art von Behandlung. In diesem Zusammenhang nicht nur Behandlungen Reperfusion Bedingungen wie Dämpfung von Kupffer-Zell-Aktivität oder Abfangen von reaktiven Sauerstoff-Spezies zu verbessern denkbar, sondern auch Anwendungen wie der Gentherapie, um das Transplantat, beispielsweise gegen Hepatitis C Rezidiv zu konditionieren. Andere mögliche Strategien könnten Ermäßigung auf Steatose während der Ex-vivo-Perfusion sindZeitraum 33. Zusammenfassend ist die ex vivo Leberperfusion eine neue Strategie, um kalte ischämische Verletzung zu minimieren und die Randlebertransplantationen vor der Lebertransplantation zu bewerten. Die Ex-vivo-Perfusion Einstellung bietet die einmalige Gelegenheit, zu reparieren und Zustand Transplantate vor der Transplantation.

Lebertransplantation ist die einzige Behandlungsoption für Patienten mit terminaler Lebererkrankungen oder fortgeschrittenem Leberzellkarzinom. In den letzten 25 Jahren hat sich die Anzahl der Warteliste Kandidaten nach und nach erhöht und überstieg die Zahl der verfügbaren Transplantate. Die Zahl der Herzschlag Spender hat sich in den letzten zehn Jahren zurückgegangen. Zur gleichen Zeit haben die Nummern der Rand Transplantate, wie Spende nach Herztod (DCD), sowie alte und Fettlebern 1,2 erhöht. Rand Transplantate werden häufig für eine Lebertransplantation aufgrund der höheren Wahrscheinlichkeit von Primärimplantat nicht oder verzögerte Funktion zurück. In DCD Transplantate, ist ein besonderes Anliegen der Entwicklung von ischämischen Typ biliäre Strikturen (ITBS). Mit der herkömmlichen statischen kalten Konservierungstechnik, treten bei etwa 10-40% der DCD Transplantate ITBS. In der Mehrzahl der Patienten führt ITBS neu Transplantation oder Tod des Patienten. Vor allem längere warme und kalte ischämische Zeiten sind RisikoFaktoren für ITBS 3-7. Spenderalter, genetische Prädispositionen (wie CCR5 Delta 32), und die Wahl der Konservierungslösung wurden ebenfalls diskutiert, als zusätzliche Risikofaktoren 7-10. Teil Mikrothromben der peribiliären Schiffe wurde als möglicher Mechanismus für ITBS nach Lebertransplantation mit DCD Transplantate 11 vorgeschlagen worden. Vor der klinischen Einführung der Lebertransplantation, Leber Perfusionen ex vivo verwendet worden, um den Leberstoffwechsel und Physiologie 12,13 studieren. Nach Lebertransplantation fand seinen Weg in der klinischen Einstellung in den 1960er Jahren wurden unzählige Versuche unternommen worden, ex vivo Perfusion der Leber als Konservierungsverfahren durch die Nachahmung von physiologischen Ernährung und Sauerstoffversorgung Bedingungen. Sein Nutzen für die Erhaltung der Grenz Transplantate hat in den letzten zehn Jahren untersucht worden, aber es hat nicht zu erreichen Standard der klinischen Versorgung. Wir haben vor kurzem beschrieben eine Reduktion der Gallengang Verletzungen in DCD Lebertransplantation durch ex vivo perfundierten Erhaltung 14. Verschiedene Ansätze zur Perfusionslösung wurden. Die Auswahl reicht von Mobillösungen wie Vollblut aus dem Spendertier oder gepackte rote Zellen in Kombination mit Humanplasma zu azellulären Ansätze wie Maschinen University of Wisconsin-Lösung, IGL Lösung oder Steen Lösung 14-19. Die Temperatur liegt im Bereich von 4-37ºC 20. Die Nomenklatur in Hypothermie, subnormothermic und normotherme ist sehr variabel und inkonsistent. Alle verschiedenen Techniken, Lösungen und Temperatureinstellungen zielen auf 1) stabil Perfusionsbedingungen, 2) eine ausreichende Sauerstoffversorgung, und 3) Wiederherstellung der Organfunktion. Eine verbesserte Erhaltung Kapazität sowie die Fähigkeit der Orgel Beurteilung und Behandlung während normotherme und subnormothermic Perfusion Gesichter höhere technische Komplexität und Kosten im Vergleich zu hypothermen Perfusion 20,21. Wir haben eine subnormothermic ex vivo Perfusion Leber-System in den letzten 4 Jahren entwickelt. Das System kann bis 1) verwendet &quot;wieder aufzuladen&quot;, den hepatischen Energiegehalt werden, 2) die Qualität des Transplantats zu bewerten und zu 3) reparieren marginalen Lebern vor der Transplantation. Das folgende Protokoll enthält alle Informationen für eine stabile Leberdurchblutung.

<table><tbody><tr><td>Circuit</td><td>Maquet (Hirrlingen, GER)</td><td>Hauptbehälter nach Maß</td><td>(3 L, 3/8" Abfluss) 
Portalbehälter (1,5 L, 1/4", Abfluss) 
Kreiselpumpe 
Oxygenator 
Lykozytenfilter </td></tr><tr><td>Schlauch (1/4" x 1/16")</td><td>Raumedic (Helmbrechts, GER)</td><td>MED7506</td><td></td></tr><tr><td>Schlauch (3/8" x 3/32")</td><td>Raumedic (Helmbrechts, GER)</td><td>MED7536</td><td></td></tr><tr><td>Schlauchverbinder</td><td>Raumedic (Helmbrechts, GER)</td><td></td><td>verschiedene Größen</td></tr><tr><td>Dialysefilter, Optiflux F160NR</td><td>Fresenius Medical Care (Waltham, MA)</td><td>F160NR</td><td></td></tr><tr><td>STEEN Lösung</td><td>XVIVO (G&ouml; teborg, SWE)</td><td>19004</td><td>2 L</td></tr><tr><td>Dialysesäurekonzentrat A</td><td>Baxter (Mississauga, ON)</td><td>D12188M</td><td>45 ml</td></tr><tr><td>Aminosäure, Travasol 10%</td><td>Baxter (Mississauga, ON)</td><td>JB6760</td><td>100 ml</td></tr><tr><td>Natriumpyruvat</td><td>Sigma-Aldrich (St. Louis, MO)</td><td>P2256</td><td>1,1 g</td></tr><tr><td>Heparin</td><td>Sandoz Canada Inc (Toronto, ON)</td><td>10750</td><td>40.000 iU</td></tr><tr><td>Calcium Gluconat</td><td>Pharmaceutical Partners of Canada (Richmond Hill, ON)</td><td>C31110</td><td>10 mg</td></tr><tr><td>Schnell wirkendes Insulin</td><td>verschiedene Anbieter</td><td></td><td>1.000 iU</td></tr><tr><td>Cefazolin</td><td>verschiedene Anbieter</td><td></td><td>1 g</td></tr><tr><td>Metronidazol</td><td>Baxter (Mississauga, ON)</td><td>JB3401</td><td>500 mg</td></tr></tbody></table>

technik der subnormothermic<em&gt; ex-vivo-</em&gt; leberperfusion für die lagerung, bewertung, reparatur von marginal lebertransplantate

Technique of Subnormothermic Ex Vivo Liver Perfusion for the Storage, Assessment, and Repair of Marginal Liver Grafts

Der Erfolg der Lebertransplantation hat in einem dramatischen Organmangel geführt. In den meisten Regionen Transplantation 20-30% der Patienten auf der Warteliste für eine Lebertransplantation sterben, ohne eine Organtransplantation oder für den Krankheitsverlauf ausgelistet. Eine Strategie, um den Spenderpool zu erhöhen, ist der Einsatz von Grenz Transplantate, wie Fettleber, Transplantate von älteren Spendern oder Spende nach Herztod (DCD). Die aktuelle Konservierungstechnik von Kalt statische Speicher nur schlecht durch marginale Leber was zu erheblichen Organschäden toleriert. Darüber hinaus bedeutet kalt statischen Speicherorgan nicht erlauben Transplantat Bewertung oder Reparatur vor der Transplantation. Diese Mängel der kalten statischen Erhaltung haben ein Interesse an warmen bluteten Organkonservierung ausgelöst, um kalte ischämische Verletzungen zu reduzieren, zu bewerten Lebertransplantate während der Konservierung, und erkunden Sie die Möglichkeit, Rand Lebern vor der Transplantation zu reparieren. Die optimalen presund Durchflussbedingungen die Perfusion Temperatur, Zusammensetzung der Perfusionslösung und die Notwendigkeit für einen Sauerstoffträger ist umstritten in der Vergangenheit. Trotz der vielversprechenden Ergebnisse in mehreren Tierstudien haben die Komplexität und die Kosten eine breitere klinische Anwendung bisher verhindert. Kürzlich mit verbesserter Technologie und ein besseres Verständnis der Physiologie der Leber während der ex vivo Perfusion der Ausgang des warmen Leberperfusion wurde verbessert und durchweg gute Ergebnisse erzielt werden können. Dieses Papier wird Informationen über Leber-Retrieval, Speichertechniken und isolierte Leberperfusion bei Schweinen. Wir veranschaulichen a) die Anforderungen, um eine ausreichende Sauerstoffversorgung des Organs zu gewährleisten, b) technische Überlegungen zur Perfusion Maschine und der Perfusionslösung und c) biochemischen Aspekte des isolierten Organen.

Nachfolgend werden die Ergebnisse von 5 Versuchen mit Perfusion DCD-Transplantate nach 45 min Erwärmung und 4 Stunden einer kalten Ischämie vor Beginn des subnormothermic ex vivo Perfusion. Das Hauptziel für eine ex vivo Leberperfusion ist, um eine ausreichende Sauerstoffversorgung des Organs sicherzustellen. Ischämie verursacht Vasokonstriktion, wodurch die Perfusion Beständigkeit. Erreichen konstanter Gefäßströme mit stabilen Druck ist ein guter Indikator für eine ausreichende Sauerstoffversorgung. Bei einer Induktionszeit von 1-2 Stunden die Perfusionslösung und das Organ sind bis zu 33 ° C, die den Gefäßwiderstand der Leber versterben erwärmt. Sobald die Zieltemperatur von 33 ° C erreicht wird, Level-Flusswerte bei einer konstanten, nahezu physiologischen Bereich für den Rest der Zeit 6 Stunden Perfusion (3A-3D). Zur gleichen Zeit wird das Organ metabolisch aktiv. 4A zeigt den venösen pO &lt;sub&gt; 2, ein Marker des Sauerstoffverbrauchs. Innerhalb der ersten 2 Stunden der venösen pO 2 Rückgänge zu einem konstanten Plateau. An dieser metabolisch aktiven Zustand, der Leber beginnt mit der Produktion Galle (4B). Der Dialysator bietet eine ausgewogene Elektrolyt-Homöostase (4C-4D). Eine erste Hyperkaliämie schnell nivelliert. Online AST-Messung dient als Kontrolle der Leberzellschäden. Abbildung 5 zeigt nur eine flache lineare AST Anstieg über den gesamten Zeitraum Perfusion. H &amp; E-Färbung nach 6 Stunden der Perfusion zeigt hepatischer Nekrose &lt;5% mit einer intakten lobulären und sinusförmige Struktur (6). PAS-Färbung gleichzeitig Punkt zeigt wieder aufgefüllt zelluläre Glykogen-Speicher im Vergleich zu erschöpft Lagerung in kaltem erhalten DCD-Transplantate (Abbildung 7). <img alt="Figur 3" src="/files/ftp_upload/51419/51419fig3highres.jpg" /> Abbildung 3. Perfusion Ströme und Druck (n = 5, Fehlerbalken zeigen Standardabweichung). (A, B) Leberarterie (HA) Durchfluss und Druck: Während der Erwärmungsphase in den ersten 1-2 Stunden, wird der Fluß erhöht bei stabilem Druck und danach konstant. Mit Blick auf die Abnahme der Pfortader (C), kann die Erhöhung der HA-Strömung in Richtung zum Ende der Perfusion eine autoregulatorische Reaktion der Leber. (C, D) in der Pfortader (PV) Strom steigt entsprechend dem HA Fluss während Die ersten 2 h Erwärmung. Die Drücke relativ stabil bleiben. <img alt="Figur 4" src="/files/ftp_upload/51419/51419fig4highres.jpg" /> Abbildung 4. Überwachungsparameter (n = 5, Fehlerbalken zeigen Standardabweichung). (A) Die venöse pO 2 als Marker der Sauerstoffbedarf und die metabolische Aktivität in der Anfangsphase der Erwärmung abnimmt aufgrund aktiviert cellular Stoffwechsel; es bleibt danach stabil (B) Galleproduktion als Marker der metabolischen Aktivität beginnt bei Temperaturen um 30 ° C und damit zwischen der ersten und zweiten Stunde Perfusion (C, D) Der Dialysator sichert Elektrolyt-Homöostase.. eine erste Hyperkaliämie ist schnell ausgeglichen. <img alt="Figur 5" src="/files/ftp_upload/51419/51419fig5highres.jpg" /> Abbildung 5. AST (n = 5, Fehlerbalken zeigen Standardabweichung) AST ist ein sensibler Marker für Leberzellschädigung. der flache Anstieg deutet darauf hin, keine signifikante Verletzungen während Ex-vivo-Perfusion. <img alt="Figur 6" src="/files/ftp_upload/51419/51419fig6highres.jpg" /> Abbildung 6. H &amp; E-Färbung (20-facher Vergrößerung). (A) Sham Leberprobe vor warme Ischämie, einem Vertreter Leberläppchens mit intakten architecture. (B) Leberprobe nach 45 min warmer Ischämie, 4 h kalt Ischämie und 6 h subnormothermic Perfusion intakt ohne Nekrose und nur minimale Zellschwellung der lobulären Architektur, die sinusförmigen Bereiche sind leicht im Vergleich zu den erweiterten Schein-Probe.

Rand Transplantate, wie Fettleber, Transplantate von älteren Spendern oder Lebern nach Herztod (DCD) abgerufen tolerieren herkömmlichen, Kälte statische Speicher nur schlecht. Wir entwickelten ein neuartiges Modell der subnormothermic ex vivo Perfusion der Leber für die Erhaltung, Bewertung und Instandsetzung von Randlebertransplantationen vor der Transplantation.

Technik der Subnormothermic<em&gt; Ex-vivo-</em&gt; Leberperfusion für die Lagerung, Bewertung, Reparatur von Marginal Lebertransplantate

The success of liver transplantation has resulted in a dramatic organ shortage. In most transplant regions 20-30% of patients on the waiting list for ...

Ziel dieses Verfahrens ist es, ein Lebertransplantat unter nahezu physiologischen Bedingungen zu erhalten und zu beurteilen. Dies wird erreicht, indem zunächst das Lebertransplantat von einem Spenderschwein entnommen wird. Im zweiten Schritt wird die Leber kanüliert und dann das Transplantat an den ex vivo-Perfusionskreislauf angeschlossen.Im letzten Schritt werden die Perfusionseigenschaften und die Eigenschaften des Lebertransplantats für die gewünschte Perfusionszeit überwacht. Letztendlich werden Aspartat-Aminotransferase- oder a-ST-Spiegel und histologische Analysen von Parenchymbiopsien verwendet, um den Erhalt der Verletzung und die Lebensfähigkeit des Lebertransplantats zu zeigen. Der Hauptvorteil dieser Technik gegenüber bestehenden Konservierungsmethoden, wie z.B. der sogenannten statischen Lagerung, besteht darin, dass die Konservierung unter physiologischen Bedingungen zu weniger Konservierungsschäden führt und die funktionelle Beurteilung und Behandlung des Transplantats vor der eigentlichen Organtransplantation ermöglicht.Unmittelbar nach der Einleitung des Herztodes durch Kaliumchlorid-Verabreichung sammeln Sie 1,6 Liter Blut von einem 30 bis 35 Kilogramm schweren männlichen Yorkshire-Schwein in CPDA-Beuteln in der Nähe des Bauches, lassen Sie die Leber 45 Minuten lang intraabdominal, um unmittelbar vor dem Ende der warmen Ischämie eine warme ischämische Verletzung zu induzieren. Zu diesem Zeitpunkt werden auch die Aorta und die Pfortader mit Organspüllinien durch die Zeit kanüliert. Verwenden Sie eine duale Perfusion über Aortendruck und portale Schwerkraftbeutel, um die Leber mit der Lösung der University of Wisconsin zu spülen.Schneiden Sie dann die Leber aus dem Schwein heraus, lassen Sie alle restlichen Gefäße lang und legen Sie sie in einen Organbeutel. Kanülieren Sie die supra- und infrahepatischen Teile der unteren Venahöhle mit einem halben Zoll mal drei Achtel Zoll großen Reducern mit einem Köderverschluss. Kanülieren Sie die Pfortader und die Leberarterie mit drei Achteln Zoll mal Viertelzoll und Viertelzoll mal drei Achtel Zoll.Reduziert sich zu diesem Zeitpunkt auch mit einer Ködersperre. Dann den Beutel verschließen und die Leber bis zur Perfusion auf Eis lagern. Um den Ex-vivo-Perfusionskreislauf einzurichten, schließen Sie den Abfluss eines Hauptreservoirs an eine Kreiselpumpe und einen handelsüblichen Oxygenator hinter dem Oxygenator an.Teilen Sie den Schlauch in zwei Leitungen auf. Schließen Sie eine Leitung an einen Dialysator an, der in das Hauptreservoir zurückfließt. Verbinden Sie die andere Leitung mit einem Leukozytenreduktionsfilter.Teilen Sie die Leitung nach der Leukozytenreduktion in eine arterielle Leitung zur Versorgung der Leberarterie mit Perfusion acht und in eine portalvenöse Leitung zur Abgabe von Perfusion acht an ein zweites Reservoir, das durch Schwerkraftabfluss in die Pfortader abfließt. Klemmen Sie den portalen Zufluss ein und verbinden Sie dann den arteriellen Zugang mit einer Venenhöhleschlinge, die in das Hauptreservoir abfließt. Für die Flüssigkeitsrückgewinnung stellen Sie die Starttemperatur des Kreislaufs und des Wasserbads auf 20 Grad Celsius ein.Decken Sie dann das Bad mit einer undurchlässigen Membran ab, um Aszites oder Leckagen des Perfundachtels aufzufangen. Schließen Sie eine von der Rollenpumpe angetriebene Saugleitung an den Hauptbehälter an. Lösen Sie dann die Abflussklemme aus dem Hauptbehälter und füllen Sie den Kreislauf mit der Perfusionslösung.Starten Sie die Kreiselpumpe mit 1.500 Umdrehungen pro Minute und stellen Sie sicher, dass die gesamte Luft aus dem Kreislauf gedrückt wird. Schalten Sie dann die Gaszufuhr zum Oxygenator ein. Die Leber mit dem Kreislauf zu verbinden, ist der schwierigste Teil des Eingriffs.Achten Sie darauf, ein Abknicken des Schlauchs zu vermeiden und Blasen zu entfernen, um eine Behinderung des Leberabflusses zu vermeiden. Auch der Füllstand des Portalreservoirs muss aufmerksam verfolgt werden. Er darf nie leer ausgehen.Nehmen Sie die Leber aus dem Eis und spülen Sie die Lösung der University of Wisconsin mit Kochsalzlösung aus. Legen Sie dann die Leber auf die Membran über dem Wasserbad. Reduzieren Sie die Drehzahl der Kreiselpumpe auf 1000 Umdrehungen pro Minute und platzieren Sie zwei Klemmen an der arteriellen Seite der Hohlvenenschlaufe.Schneiden Sie dann den Schlauch zwischen den Klemmen ab und verbinden Sie beide Venahöhlenausläufe mit der Venenhöhlenleitung. Lösen Sie die Klemme vom arteriellen Zugang. Gießen Sie Perfunde acht in die arterielle Kanüle, um die Blasen zu entfernen und die Leitung mit der Kanüle zu verbinden.Erhöhen Sie die Kreiselpumpe auf 1.500 Umdrehungen pro Minute und lösen Sie die zweite Klemme aus der Venner-Höhlenleitung und lösen Sie die Klemme aus dem portalvenösen Reservoir, um sie aufzufüllen. Lassen Sie die Perfusionslösung in die Pfortaderkanüle gießen und verbinden Sie diese dann. Darauf zu achten, dass der Flüssigkeitsstand im Pfortaderbehälter stabil bleibt.Nachdem Sie die Leber an den Kreislauf angeschlossen haben, erhöhen Sie die Temperatur des Wasserbads in den nächsten 60 Minuten auf 33 Grad Celsius. Streben Sie einen arteriellen Startfluss von etwa 250 Millilitern pro Minute bei 40 Millimeter Quecksilbersäule an. Diese kann während der Perfusion 700 Milliliter pro Minute erreichen.Sobald der Druck auf bis zu 70 Millimeter Quecksilbersäule erhöht ist, streben Sie einen Portvenenfluss von 500 bis 600 Millilitern pro Minute bei drei bis fünf Millimetern Quecksilbersäule an. Nach dem Erhöhen der Temperatur steigt der venöse Portfluss auf bis zu 1.100 Milliliter pro Minute an. Senken Sie das Hauptreservoir ab, um den Abfluss auf minus zwei Milligramm Quecksilber einzustellen, um eine Verstopfung der Leber durch funktionelle Abflussbehinderung zu verhindern, und stellen Sie sicher, dass sich keine Luftblasen in den Kavalschläuchen verfangen.Stellen Sie den Dialysierungs-Acht-Durchfluss auf 500 Milliliter pro Stunde ein. Es ist darauf zu achten, dass der Dialyseabfluss so eingestellt wird, dass der PERFUSE eight weder verdünnt noch konzentriert wird. Halten Sie zu Beginn der Perfusion einen niedrigen pH-Wert aufrecht, um das Organ zu schützen.Den Partialdruck des Kohlendioxids stufenlos auf 25 bis 30 Millimeter Quecksilbersäule heruntereinstellen, so dass der pH-Wert innerhalb einer Stunde ein physiologisches Niveau erreicht. Um physiologische Bedingungen nachzuahmen, injizieren Sie kontinuierlich Glukose und Insulin in die Pfortader. Injizieren Sie vorsichtig Natrium- oder Kaliumbicarbonat in den Kreislauf unter wiederholter Blut-, Gas- und Elektrolytkontrolle und überwachen Sie die Perfusion durch periodische venöse und arterielle Blutgas- und ST-Analysen.Überwachen Sie den Gefäßfluss und den Druck. Eine stabile Perfusion hält den Gefäßwiderstand am Ende der ex vivo-Perfusionsperiode konstant. Rufen Sie das Perfusionssystem herunter und spülen Sie dann, nachdem Sie den Schlauch von der Leber getrennt haben, die PERFUSE acht doppelt aus der Leber mit eiskalter Lösung der University of Wisconsin.Lagern Sie die Leber schließlich vor der Transplantation auf Eis in einem sterilen Organbeutel. Das Erreichen konstanter Gefäßflüsse mit stabilem Druck ist ein guter Indikator für eine ausreichende Sauerstoffversorgung. Sobald die Zieltemperatur von 33 Grad Celsius erreicht ist, pendeln sich die Flusswerte für den Rest der Perfusionszeit in einem konstanten, nahezu physiologischen Bereich ein, gleichzeitig wird das Organ metabolisch aktiv.Diese Grafik zeigt den venösen Sauerstoffpartialdruck, einen Marker für den Sauerstoffverbrauch. Innerhalb der ersten zwei Stunden sinkt der venöse Sauerstoffpartialdruck auf ein dann konstantes Plateau ab. In diesem stoffwechselaktiven Zustand beginnt die Leber mit der Produktion von Galle und der Dialysator sorgt für eine ausgeglichene Elektrolythomöostase.Die Online-A-ST-Messung dient als Monitor für Leberzellschäden. In diesem Experiment wird beispielsweise nur ein geringer Anstieg des A ST über die gesamte Perfusionsperiode beobachtet. Die H- und e-Färbung nach sechsstündiger Perfusion zeigt eine Hepatozytennekrose von weniger als 5% mit einer intakten lobulären und sinusförmigen Struktur.Die BAS-Färbung einer ex vivo perfundierten Leber zum gleichen Zeitpunkt zeigt einen aufgefüllten zellulären Glykogenspeicher im Vergleich zu dem erschöpften Speicher, der bei kältekonservierten Spenderherztodtransplantaten beobachtet wurde. Im Anschluss an dieses Verfahren kann ein Organreperfusionsmodell wie eine Lebertransplantation durchgeführt werden, um die Wirkung der ex vivo Leberperfusion auf die Reperfusionsschädigung und die Organfunktion zu untersuchen.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Medicine

Medizin

Die Untersuchung der Physiologie der tierischen Organe kann durch die Durchführung eines experimentellen ex vivo Perfusionssystems erreicht werden. Die Hinzufügung einer Schweineniere als homöostatisches Organ zu unserem zuvor entwickelten ex vivo Leberperfusionsmodell kann ein wichtiger Schritt sein, um ein besseres physiologisches Milieu zu erreichen.

Schritte für das autologe ex vivo perfundierte Leber-Nieren-Experiment an Schweinen

Hier präsentieren wir ein Protokoll beschreibt, sauerstoffreiches ex situ Maschine Perfusion der Spenderleber Transplantate. Dieser Artikel enthält eine Schritt für Schritt-Protokoll zu beschaffen und bereiten den Lebertransplantat für Maschinendurchblutung, bereiten Sie die Perfusionsflüssigkeit, prime die Perfusion Maschine und durchzuführen, mit Sauerstoff angereicherten normothermen Maschine Perfusion des Transplantats.

Ex-situ-normothermen Maschine Perfusion von Spenderlebern

Wir beschreiben ein Verfahren zur ex vivo-Maschine Perfusion von menschlichen Lebertransplantate in subnormothermic Temperatur (21 ° C).

Funktionale Menschliche Leber Erhaltung und Rückgewinnung mittels Subnormothermic Maschine Perfusion

Die schwere Organmangel hat zu einer erhöhten Nutzung von Grenznierentransplantate zur Transplantation geführt. Dies hat das Interesse an alternativen Speichermethoden ausgelöst, da marginal Transplantate besonders vertragen Kältespeicher schlecht. Die Technik der normothermen ex vivo Nierendurchblutung (NEVKP) stellt eine neuartige Konservierungsverfahren für Nierentransplantate vor der Transplantation.

Normothermen<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Kidney Perfusion für die Erhaltung der Nierentransplantate vor der Transplantation

Fehlt ein wichtiger Leber Geber, und Kriterien für die Leber Spender wurden erweitert. Normothermic ex Vivo Leber Perfusion (NEVLP) wurde entwickelt, um zu bewerten und Organfunktion zu ändern. Diese Studie zeigt einem Rattenmodell der NEVLP und testet, ob der pegylierten-Katalase, um Verletzungen der Leber Erhaltung zu mildern.

Ein kleines Tier Modell der Ex Vivo Normothermic Leber Perfusion

Die normotherme ex vivo maschinelle Perfusion (NEVP) ist für die Konservierung von Pankreasallotransplantaten bisher kaum erforscht. Wir stellen eine innovative Konservierungstechnik für Allotransplantate der Bauchspeicheldrüse vor der Transplantation vor.

Normotherme ex vivo Pankreasperfusion zur Konservierung von Pankreas-Allotransplantaten vor der Transplantation

Das hier beschriebene Schweinemodell der normothermen maschinellen Perfusion (NMP) der Leber kann erfolgreich zur Untersuchung von NMP als Konservierungsstrategie, als Instrument zur Bewertung der Lebensfähigkeit und als Plattform für die Organreparatur eingesetzt werden. Es hat einen hohen translationalen Wert, ist jedoch technisch anspruchsvoll und arbeitsintensiv.

Normothermische isolierte Leberperfusion bei Schweinen

Für die Leber von Mäusen wurde ein normothermisches ex vivo Leberperfusionssystem (NEVLP) entwickelt. Dieses System erfordert Erfahrung in der Mikrochirurgie, ermöglicht aber reproduzierbare Perfusionsergebnisse. Die Möglichkeit, Mäuselebern zu verwenden, erleichtert die Untersuchung molekularer Signalwege zur Identifizierung neuartiger Perfusat-Additive und ermöglicht die Durchführung von Experimenten, die sich auf die Reparatur von Organen konzentrieren.

Normotherme ex vivo Lebermaschinenperfusion bei Mäusen

Dieses Protokoll beschreibt die Methodik zur Etablierung eines Schweinemodells unter Verwendung einer variablen temperaturgesteuerten maschinellen Perfusion (MP) zur Erhaltung der Spenderleber, gefolgt von einer orthotopen Lebertransplantation (OLTx). Ziel ist es, die Erfolgsrate von OLTx mittels Spenderspende nach Kreislauftod (DCD) Leber zu fördern und ein stabiles Modell zu etablieren.

Erhalt der Schweinespendeleber nach zirkulatorischem Tod (DCD) durch Perfusion und orthotope Lebertransplantation

Hier stellen wir ein Protokoll vor, wie eine isolierte Leberperfusion (IHP) mit Melphalan durchgeführt werden kann, und wir diskutieren auch IHP als Behandlungsoption für Lebermetastasen des Aderhautmelanoms.

Isolierte Leberperfusion als Behandlung für Lebermetastasen von Aderhautmelanom

Erfahren Sie die subnormotherme Ex-vivo-Leberperfusion zur Lagerung und Bewertung marginaler Lebertransplantate. Diese Methode reduziert die Konservierungsverletzung und ermöglicht die funktionelle Beurteilung vor der Transplantation.

Technik der Subnormothermic

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