Name: Murine Heterotope Heart Transplant-Technik (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-07-08T23:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 27 s
Description: Erfahren Sie die heterotope Herztransplantation bei Mäusen mit arterieller und venöser Anastomose. Diese Methode ermöglicht die Überwachung des Transplantatüberlebens durch tägliche Palpation.

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Die Autoren danken Dr. Biagio Pietra für seine bisherige Arbeit in unserem Labor danken.

Alle Tiere wurden unter keimfreien Bedingungen an der Universität von Colorado Barbara Davis-Center Tierhaltung unter IACUC Genehmigung untergebracht und versorgt nach den NIH-Richtlinien. Narkosetiefe wird durch Zeh Prise zunächst und durch Einhaltung der Atmungsrate beurteilt, sobald das Verfahren begonnen hat. 1. Donor Heart Ernte <ol><li> Betäuben Donor Maus durch Injektion von Pentobarbital (60 mg / kg IP). </li><li> Unbeweglichkeitseffekt der Maus durch 4-Wege-Clip Stützen und das Fell. Wischen Sie die Haut mit Alkohol. </li><li> Nach sezieren entfernt die Haut, öffnen Sie die Bauchhöhle, indem sie einen Querschnitt unmittelbar unterhalb des Zwerchfells. </li><li> Schneiden Sie die Membran hinter Rippen Einsetzen und heben Sie den vorderen Brustwand nach vorn und oben Aussetzen des Herzens. </li><li> Erweitern einer vollen Dicke die hinteren seitlichen Brusthöhle geschnitten auf der linken und der rechten Seite der Brust. </li><li> Isolieren Sie dieVena cava inferior (IVC) und setzen eine lose 5-0 Seidennaht um den IVC angrenzend an sein Einsetzen in das rechte Atrium. </li><li> Spritzen 1,0 ml 4 ° C Heparin Kochsalzlösung (200 u / cm ³) in die IVC, dann ligieren das Schiff mit dem 5-0 Seidennaht und sich teilen. </li><li> Isolieren Sie die rechte obere Hohlvene (rSVC) in ähnlicher Art und Weise und zu ligieren mit 5-0 Seidennaht und sich teilen. </li><li> Rollen Sie das Herz auf der rechten Seite der Tiere und zu isolieren, die linke obere Hohlvene (lSVC), abzubinden mit einem 5-0 Seidennaht und teilen Aussetzen der linken Lungenarterie. </li><li> Sichern Sie das Herz unter einer feuchten Gaze während der Thymus ist stumpf vom Hauptlungenarterie (PA) und der linken und rechten PA Filialen seziert und aufsteigend Aortenbogen. </li><li> Blunt sezieren die Aortenbogen frei von den umgebenden Gewebe. Mikroscheren verwendet werden, um die Aorta proximal zu der rechten Arteria brachialis-Kopfteilen, dh es sollte keine Verzweigungen zwischen dem Herzen und der Teilung seinPunkt der Aorta. </li><li> Dieser Abschnitt des Aortenbogens bildet die arterielle Manschette für den Implantationsprozess. </li><li> Spiegeln die Aorten-Manschette inferior, um die PA Stamm und die linken und rechten Zweige der PA aus. </li><li> Blunt die linken und rechten PA Zweige von den umgebenden Geweben weit vom Herzen wie möglich zu sezieren. Dies ermöglicht eine einfache Zerlegung des PA Stamm von umgebenden Geweben. </li><li> Teilen Sie die PA Stamm als distal wie möglich, nur in der Nähe seiner Gabelung. Dieser Abschnitt der Lungenarterie bildet die Venenmanschette für den Implantationsprozess. </li><li> Legen Sie ein 5-0 Seidenfaden um die Basis des Herzens und Krawatte. Das Herz wird dann an der Basis frei geschnitten und in 4 ° C Salzlösung gelegt. Gesamterntezeit ca. 10-15 min. </li></ol> 2. Herzimplantattechnik <ol><li> Betäuben die Empfängermäuse mit Pentobarbital (60 mg / kg IP Initialdosis 25 mg / kg IP zusätzliche Dosis, falls erforderlich). </li><li> Clip der Pelz-undImmobilisierung der Maus durch 4-Wege-prep Stützen und die Haut mit PVP-Jod und Fall steril. </li><li> Machen Sie eine 2 cm vertikale Mittellinie Bauchschnitt und geben Sie die Bauchhöhle. </li><li> Fahren Sie den Darm nach oben und auf der Brust externalisiert. Halten Sie in sterilen feuchten Gaze (sterile Kochsalzlösung) in der gesamten Fall gewickelt. </li><li> Isolieren Sie die Bauch-Aorta und untere Hohlvene (IVC) unterhalb der Nierengefäße und legen 4-0 Baumwolle Krawatten um die Aorta und IVC überlegen dann schlechter als die Anastomose. </li><li> Identifizieren Sie alle Schiffe in der Lendenfeld und Ligation mit 10-0 Nylonnaht. </li><li> Knoten Sie die Baumwoll Krawatten, zuerst die untere, gefolgt von der überlegen. Auf diese Weise wird etwas Blut in der Aorta so dass die Aortotomie leichter beibehalten. </li><li> Bilden die Aortotomie mit einer 30 G-Nadel, um das Lumen der Aorta zu gelangen. Erweitern Sie den Schnitt mit feinen Mikro Schere auf eine Länge von etwa 2 mm. Dieser Schnitt wird in einer geraden Linie entlang der langen hergestelltitudinal Achse des Behälters. </li><li> Machen Sie Schluss mit Anastomose der Spender Aorta Aorta an den Empfänger in der folgenden Weise. Legen Sie ein 10-0 Nylonnaht Aufenthalt Stich in der Spender Aorta und an den unteren Winkel des Einschnitts in der Empfänger Aorta und Krawatte. Legen Sie eine zweite 10-0 Nylon gegenüber der ersten in der Spender Aorta und der überlegenen Ecke der Schnitt in der Bauchaorta und Krawatte. </li><li> Mit Anlauf Nahtlinie aus überlegen, unterlegen in der Seitenwand der Aorta und Krawatte gegen die zuvor platzierten Aufenthalt Stich. Seien Sie sicher, die Intimas (innere Gefäßoberfläche) zusammen zu bringen, wie Sie nähen. Dann Naht der medialen Seite in einem laufenden Mode und Krawatte. Die erste und die letzte Masche auf jeder Seite sollte möglichst nahe an den Aufenthalt Stiche wie möglich platziert werden. Dann wollen drei gleichmäßig verteilten Stiche zwischen diesen beiden so dass insgesamt 5 Stiche haben. </li><li> Machen Sie Schluss mit Anastomose der Spenderlungenarterie an den Empfänger IVC in der folgenden Weise. PunctAbbildung der IVC mit einem 30-G-Nadel und erweitern den Schnitt für ca. 2 mm mit feinen Mikro Schere. Dieser Schnitt wird in einer geraden Linie entlang der Längsachse des Behälters hergestellt. </li><li> Binden Sie die Spenderlungenarterie in der unteren Ecke der Schnitt in der IVC mit 10-0 Nylon. Legen Sie eine zweite 10-0 Nylon gegenüber der ersten in der Spenderarterie und der überlegenen Ecke der Schnitt in der IVC und Krawatte. </li><li> Mit Anlauf Nahtlinie zwischen Lungenarterie und der IVC und Krawatte. Die erste und die letzte Masche auf jeder Seite sollte möglichst nahe an den Aufenthalt Stiche wie möglich platziert werden. Dann sollen bis 5 Stiche gleichmäßig verteilt zwischen diesen beiden so dass insgesamt sieben Stiche haben. </li><li> Lassen Sie die distalen 4:0 Baumwolle Krawatte Wiederherstellung Venenfluss. </li><li> Sobald die Blutstillung der venösen Anastomose beobachtet worden, der proximale 4:0 Baumwolle Krawatte allmählich gelockert und die arterielle Anastomose zur Blutstillung beobachtet. Wenn beide Anastomosen gelten als sicher, entfernen Sie die cotton Binder von der Maus. </li><li> Bringen Sie den Darm auf den Bauch. Die Bauchwand wird in zwei Schichten mit 5-0 Seidennaht in einem laufenden Mode geschlossen. </li><li> Verwalten eines Bolus von 1,0 ml steriler, physiologischer Kochsalzlösung in warmem Abdomen als Flüssigkeitszufuhr beim Schließen, und 0,8 ml physiologischer Kochsalzlösung subkutan post-operativ injiziert werden. Während der Operation sind keine weiteren unterstützenden Maßnahmen erforderlich. Recover das Tier auf eine wärmende Decke. Insgesamt Implantat Zeit beträgt ca.. 90-120 min für Anfänger, 45-60 min mit Erfahrung. Verwalten Buprenorphin Analgesie, 0,05 mg / kg, SC, 0,1-0,2 ml zu Beginn des Verfahrens und alle 6-12 h für 72 Stunden nach der Operation. </li></ol> 3. Graft Beurteilung <ol><li> Bewerten Transplantatfunktion täglich von trans-abdominale Palpation. </li><li> Halten Sie die Maus, als ob es um eine intraperitoneale Injektion verabreicht werden. </li><li> Drücken Sie vorsichtig die Spitze eines Zeigefinger gegen die Bauchwand und festzustellen, das Schlagen strength und Ordnungsmäßigkeit des Transplantats. </li><li> Geben Palpation Qualität eine Punktzahl von 4 (normale Amplitude und Frequenz) bis 0 (nicht-schlag abgelehnt Transplantat). </li></ol> WICHTIGE HINWEISE: Alle Instrumente sind sterilisiert, sterile Handschuhe sind während des gesamten Verfahrens tragen und einen sterilen Bereich erhalten bleibt. Die Spender und Empfänger-Operationen werden durch die Verwendung eines Operationsmikroskops durchgeführt. Stellen Sie sicher, dass die Anastomosen sind &quot;sauber&quot;. Das heißt, dass die Rückwände sind nicht bei der Platzierung Maschen verfangen. Dadurch wird eine signifikante Verengung fließen mehr als wahrscheinlich, dass Ergebnis wird in einem gescheiterten Transplantat und im Extremfall zu-Hinterbeinlähmung. Es ist auch sehr wichtig, dass die gesamte Dicke geht einschließlich der Gefäß Adventitia und Intima der Nähnadel erreicht. Evertion der Kanten gewährleistet auch, dass es Intima-zu-Intima-Kontakt, der in Dicht-und Heilung der Anastomose hilft. Eine weitere wichtige Tatsache von entscheidenderoder ist sicherzustellen, dass die Spannung der anastomotischen Nahtlinien ist auch optimal. Zu locker und es wird irreversible undicht zu sein, zu eng und zu fließen Stenose führen wird. Wenn auf der arteriellen Seite wird dies zu einer schlechten Durchblutung des Transplantats führen, wenn auf der venösen Seite eine lasteten Herzen resultieren.

<ol><li>Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+transplantation+in+congenic+strains+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">Heart transplantation in congenic strains of mice.</a> Transplant Proc. 5 (1), 733 (1973).</li>
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</ol>

Die Autoren haben nichts zu offenbaren.

Diese OP-Technik ist nicht einfach zu meistern, aber einmal gemeistert ist eine leistungsstarke Recherche-Tool. Der Forscher / Chirurg durch Konsistenz der Technik und durch die Liebe zum Detail belohnt. Geduld während der Lernphase ist der Schlüssel. Wie von Niimi 3 veröffentlicht, mit Hilfe einer Video-basierten Lernwerkzeug dauert es durchschnittlich 11 Versuche, die erste erfolgreiche Verfahren und 78 Versuche, eine Erfolgsquote von 90% zu erreichen zu erreichen. Videos sind zu einem wichtigen Lehrmittel in der Chirurgie 11,12. Fehlerbehebung Blutungen aus der Anastomosen auftreten und dies ist wahrscheinlich auf entweder fehlende richtige Spannung in den Fäden, oder zu wenige Nähte. Während ein Gerinnungsmittel wie Induktion Gelfoam kann nützlich sein für die Verluste zu verringern, empfehlen wir, dass der Chirurg sollte sich auf die Technik verlassen. Überlastete nicht-schlagende Herz ist meist durch Anastomosen, die zu eng sind, insbesondere auf der venösen Seite. Ein nicht-beating, nicht-perfundierte Transplantat wird gewöhnlich durch eine Luftblase, die in eine der Koronararterien verursacht gereist ist. Es ist wichtig, um eine feuchte benetzbaren Bereich zu halten, um den Eintritt von Blasen in den Behältern zu vermeiden. Grenzen der Technik Diese Technik ist nicht geeignet, wenn ein Forscher möchte Auswirkungen auf eine voll funktions Herz zu untersuchen. Das wäre eine orthotope Transplantation Technik, die bislang unmöglich durchzuführen erwies erfordern. Bedeutung gegenüber den bestehenden Methoden Wenn man die Auswirkungen auf vollständig vaskularisiert, Organtransplantation in der Maus zu untersuchen will, dann ist das Herz-Modell wohl am einfachsten zu meistern. Mausmodelle von Lungen-, Nieren-und Lebertransplantation nicht vorhanden sind, sind jedoch viel schwieriger zu lernen und perfekt. Kritische Schritte Innerhalb des Protokolls Es ist äußerst wichtig, dass die vollständige Dicke pEsel einschließlich der vaskulären Intima-und Adventitia der Nähnadel erreicht. Evertion der Kanten gewährleistet auch, dass es Intima-zu-Intima-Kontakt, der in Dicht-und Heilung der Anastomose hilft. Ein weiterer entscheidender Faktor ist wichtig sicherzustellen, dass die Spannung der anastomotischen Nahtlinien ist ebenfalls optimal. Zu locker und es wird irreversible undicht zu sein, zu eng und zu fließen Stenose führen wird. Wenn auf der arteriellen Seite wird dies zu einer schlechten Durchblutung des Transplantats führen, wenn auf der venösen Seite eine lasteten Herzen resultieren. Vor allem wird die Wiederholung, die Konsistenz der Verfahren und kontinuierliche Aufmerksamkeit zum Detail großartige Ergebnisse und finanzierbar und publikations Daten ergeben.

In einer Zeit, als es möglich ist, Nieren-, Lungen-, Leber-und Pankreastransplantationen an Mäusen durchgeführt, die Grundpfeiler der Organtransplantation und Immunologie Forschung seit 1973 1-4 bleibt der heterotopen Herztransplantationsmodell in der Maus. In den dazwischenliegenden Jahren mehrere Arbeiten veröffentlicht worden Detaillierung Verbesserungen / Weiter 5,6 auf dieses Verfahren. Als Modell für Organtransplantation in erster Linie gefäß diese Prozedur ist unübertroffen. Einmal bewältigt dieses Verfahren eignet sich in allogenen Abstoßungsreaktionen 7, die Entwicklung der chronischen Gefäßerkrankungen 8 und die Mechanismen der Ischämie-Reperfusionsverletzung 9 Forschung. Die Schlüssel, um erfolgreich zu lernen, dieses Verfahren sind wie jede andere Operation, Geduld auf Seiten der Ausbilder und der Auszubildenden und Liebe zum Detail. Zu Beginn des Verfahrens wird der neue Chirurg wird, dass t findenhey viele Stunden auf jeder Transplantation zu verbringen. Wie die Erfahrung gewonnen, werden chirurgische Zeiten und damit Ischämie, drastisch zu reduzieren. Die Aufmerksamkeit auf die Details jeder Schritt wird früher oder später zum Erfolg führen. Während die Lehrer können ihr Bestes tun, um weiterzugeben und zu antizipieren, zu allen möglichen Grube fällt, die während dieser Operationen auftreten können, wird die &quot;kreative&quot; Trainee wahrscheinlich feststellen, einige ihrer eigenen! Die Grundlagen des Verfahrens sind wie folgt. Der Spender aufsteigend Aortenbogen ist End-zu-Seite zu dem Empfänger abdominalen Aorta und Lungenarterie des Spenders ist anastomosiert Ende-zu-Seite zu dem Empfänger abdominalen Vena cava inferior (IVC) anastomosiert. Blut fließt aus der Empfänger Aorta retrograd durch die Aorta Spender zu den Koronararterien. Wenn das Blut durch die Herzkranzsystem über den Koronarsinus in den rechten Vorhof abfließt geflossen ist, in die rechte Herzkammer gepumpt unddann über die Lungenarterie in den Empfänger IVC. Auf diese Weise wird die koronare Arteriensystem blutet und Sinusrhythmus zurückkehrt, um das Transplantat innerhalb von 1-2 min Reperfusion. Da die linke Herzkammern sind im wesentlichen unter Druck belasteten der linksventrikulären freien Wand wird mit der Zeit verkümmern.

<table><tbody><tr><td>Instrument</td><td>Roboz #</td><td>Fine Science Tools #</td><td>Arosurgical #</td></tr><tr><td>Gerade Mikro-Präparierzange #5</td><td>RS-5015</td><td>11295-51</td><td></td></tr><tr><td>Gebogene Mikro-Präparierzange #7</td><td>RS-5047</td><td>11297-00</td><td></td></tr><tr><td>Gebogene Zange</td><td>RS-5137</td><td>11052-10</td><td></td></tr><tr><td>Vannas Mikro-Präparierschere, kurz</td><td>RS-5610</td><td></td><td>09.140.08</td></tr><tr><td>Mikro-Präparierschere, gerade, scharf, lang</td><td></td><td>11.602.11</td><td></td></tr><tr><td>Mikro-Federgriff-Nadelhalter</td><td></td><td></td><td>11.549.15</td></tr><tr><td>Gerade Mückenzange</td><td></td><td>91308-12</td><td></td></tr><tr><td>Mikro-Präparierschere, gerade, stumpf</td><td>RS-5962</td><td>14078-10</td><td></td></tr><tr><td>Mikro-Präparierschere, gebogen, stumpf</td><td>RS-5981</td><td>14079-10</td><td></td></tr><tr><td>Mikro-Retraktor</td><td>RS-6540</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Instrumentenablage, 10" x 6 &frac12; &rdquo; x &frac34; "</td><td>RT-1350S</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Seidennaht, 5/0, 22,5 m Spule</td><td></td><td>18020-50</td><td></td></tr><tr><td>10/0 Nylon</td><td></td><td></td><td>T4A10Q07</td></tr><tr><td>5/0 Seide</td><td></td><td></td><td>E19A05N</td></tr><tr><td>Handschuhe</td><td></td><td>Biogel von Medex Supply</td><td></td></tr><tr><td>Drapes</td><td></td><td>Precept, #64-9012-9</td><td></td></tr><tr><td>Spritzen</td><td></td><td>B-D 1 cc Insulin, #329424</td><td></td></tr><tr><td>Baumwollapplikatoren</td><td></td><td>Marke Fisher, #23-400-100</td><td></td></tr><tr><td>Povidon-Jodtupfer</td><td></td><td>PDI, #B40600</td><td></td></tr><tr><td>4/0 Baumwollkrawatten</td><td></td><td></td><td>Heimische Baumwolle autoklaviert mit Instrumenten</td></tr></tbody></table>

murine heterotope heart transplant-technik

Murine Heterotopic Heart Transplant Technique

Es ist nun über vierzig Jahre her, seit diese Technik wurde zuerst von Corry, Wynn und Russell berichtet. Es dauerte zwar einige Jahre für andere Labors beherrschen zu werden und nutzen diese Technik, wird es jetzt von vielen Labors auf der ganzen Welt eingesetzt. Ein erheblicher Verfeinerung der Originaltechnik wurde entwickelt und im Jahr 2001 von Niimi berichtet. Beschrieben werden hier die Techniken, die über mehr als ein Jahrzehnt in den Händen von drei Chirurgen (Plenter, Grazia, Pietra) in unserem Zentrum entwickelt haben. Diese Techniken werden nun auf eine jüngere Generation von Chirurgen und Forscher weitergegeben. Details, die wir uns bemühen, hier in einer Weise, die andere kann in der Lage, diese sehr nützliches Modell zu verwenden beziehen - basiert weitgehend auf der Niimi Erfahrung haben die verwendeten Verfahren in den feinen Details entwickelt. Wie Niimi, haben wir festgestellt, dass ein Video-Lernhilfe ist eine unschätzbare Ressource für den Anfänger.

<html> Die Verwendung dieser chirurgischen Technik wird der Weg für entweder einfache Transplantatüberleben / Ablehnung Studien oder sehr komplex Versuchsprotokollen. In der Studie kurz in der Abbildung unten beschrieben ist, haben wir versucht, die Beteiligung der Fas-und / oder Perforin als Mechanismen der CD4-T-Zell-vermittelte Herzabstoßung zu definieren, wenn überhaupt,. Dies wurde durch die außerordentliche Vielfalt von Mausstämmen, die heute verfügbar sind, ermöglicht. Die Ergebnisse zeigen, dass die direkte Ablehnung der Herztransplantate durch CD4 Effektor-T-Zellen erfordert die Alternative Beitrag von Graft Fas-Expression und T-Zell-Perforin-Expression. Nach unserem Wissen ist dies der erste Nachweis, dass zytolytische Aktivität von CD4 T-Zellen können eine obligate Rolle für die Primär akuten Transplantatabstoßung in vivo zu spielen. 1.jpg &quot;/&gt; . Abbildung 1 Perforin und Fas vertreten Pflicht und parallele Wege der CD4-T-Zell-vermittelte Herz Ablehnung B6, B6 PFPKO (Perforin knock-out) und B6 gld (Fas-Ligand-defizienten) CD4-T-Zellen wurden verwendet, um B6 Lappen rekonstruieren - / - Empfänger von C3H Wildtyp-oder Fas-defizienten lpr C3H Herztransplantate. Entfernung von allein Fas (♦, p = NS vs Steuer Wt C3H + B6 CD4-T-Zellen) von den Spenderherzen oder Entfernung Perforin oder allein von den CD4-T-Zellen (■, p = NS vs Steuer Wt C3H + B6 CD4-T- Zellen) nicht aufhebt Ablehnung. Interessanterweise ist die Entfernung von FasL von Effektor-T-Zellen CD4 hat Verzögerungs Abstoßung signifikant (●, p &lt;0,02 vs Wt C3H + B6 CD4-T-Zellen, p &lt;0,01 vs Wt C3H + B6 PFPKO CD4-T-Zellen, und p &lt;0,01 vs . C3H lpr B6 + CD4-T-Zellen). Allerdings wurden die meisten Allografts noch abgelehnt (4 von 5). Deutlich die gleichzeitige Entfernung von Spender Fas und CD4-T-Zell Perforinvollständig aufgehoben Ablehnung (○, p &lt;0,002 vs Steuer Wt C3H + B6 CD4-T-Zellen, Wt C3H + B6 PFPKO CD4-T-Zellen und C3H lpr B6 + CD4-T-Zellen). Diese Aufhebung war deutlich robuster als das Individuum Entfernung von CD4 T-Zell-FasL (○, p &lt;0,003 vs Steuer Wt C3H + B6 gld CD4-T-Zellen). Von Grazia et al 10. Nachdruck mit freundlicher Genehmigung.

Das Manuskript beschreibt die erforderlich sind, um die heterotopen Herztransplantation in der Maus führen Sie die Schritte.

Murine Heterotope Heart Transplant-Technik

It is now over forty years since this technique was first reported by Corry, Wynn and Russell. Although it took some years for other labs to become ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, eine murine heterotopische Herztransplantation durchzuführen und den Zustand des transplantierten Organs zu beurteilen. Dies wird erreicht, indem zunächst sorgfältig das Herz des Spenders entnommen wird. Im zweiten Schritt wird der Transplantationsort im Empfänger chirurgisch präpariert, um ausreichend Platz für die Einpflanzung des Spendergewebes zu schaffen.Anschließend erfolgt die Transplantation des Spenderherzens durch Anlage arterieller und venöser Anastomosen. Im letzten Schritt wird vor der Verschließung des Empfängers die Blutstillung an den vaskulären Nähten überprüft. Letztendlich kann die Gesundheit des Transplantats durch tägliche Palpation überwacht werden, um die Auswirkungen verschiedener Faktoren auf das Überleben des Spendertransplantats zu beurteilen.Die visuelle Demonstration dieser Methode ist entscheidend, da die Anastomoseschritte schwer zu erlernen sind. Die Nahtspannung muss genau richtig sein, um Leckagen und Durchblutungsverengungen zu vermeiden. Um das Spenderherz zu entnehmen, immobilisieren Sie zunächst das anästhesierte Spender Tier mit Vier-Punkt-Haltevorrichtungen. Nachdem das Fell abgeschnitten wurde, die Haut mit Alkohol abwischen. Nachdem die Haut präpariert wurde, einen Querschnitt direkt unterhalb des Zwerchfells anlegen. Um die Bauchhöhle zu öffnen, das Zwerchfell hinter der Rippenansatzstelle durchtrennen.Erweitern Sie eine Vollwandinzision, schneiden Sie die hintere seitliche Brusthöhle beidseits des Brustkorbs auf, isolieren Sie die untere Hohlvene (Vena cava inferior, IVC) und führen Sie dann einen lockeren Faden aus 5-0-seidigem Nahtmaterial um die IVC nahe ihrer Mündung ein. Injizieren Sie 1 cm³ einer vier Grad Celsius kalten, heparinisierten Kochsalzlösung über die IVC in das rechte Vorherzkammer und ligieren Sie das Gefäß mit dem 5-0-seidigen Faden, anschließend durchtrennen.Danach die rechte obere Vena cava nach analoger Weise ligieren und nähen, das Herz vorsichtig zur rechten Seite des Tieres hin rollen und die linke obere Vena cava isolieren und ligieren, wodurch die linke Arteria pulmonalis freigelegt wird. Danach das Herz unter einem feuchten Mulltuch fixieren und das Thymusgewebe stumpf vom Hauptstamm der Arteria pulmonalis, den Ästen der linken und rechten Arteria pulmonalis sowie vom aufsteigenden Aortenbogen ablösen. Den Aortenbogen vorsichtig von dem umgebenden Gewebe lösen und anschließend mit einer Mikroschere die Aorta proximal zur rechten Arteria brachiocephalica durchtrennen, bis sich zwischen dem Herzen und der Durchtrennungsstelle der Aorta keine Seitenäste mehr befinden.Dieser Abschnitt des Aortenbogens bildet die arterielle Manschette für den Implantationsprozess. Danach wird die Aortenmanschette kaudal umgestülpt, um den Pulmonalarterienstamm sowie die linke und rechte Pulmonalarterienasten freizulegen. Anschließend werden die linken und rechten Äste der Pulmonalarterie stumpf so weit wie möglich vom Herzen entfernt aus dem umgebenden Gewebe präpariert.Teilen Sie den Lungenarterienstamm so weit distal wie möglich direkt proximal zur Aufzweigung, um die venöse Manschette für den Implantationsvorgang zu bilden. Danach binden Sie eine Seidennaht (5-0) um die Basis des Herzens. Durchtrennen Sie sie an der Basis und überführen das entfernte Gewebe in Kochsalzlösung bei vier Grad Celsius.Die gesamte Erntezeit beträgt etwa 10 bis 15 Minuten, um das Spenderherz zu implantieren. Nach der Anästhesie und Immobilisierung des Empfängertiers die Haut mit Povidon-Jod abwischen und dazwischen mit Alkohol oder steriler Wasser ausspülen. Dies dreimal wiederholen und anschließend den Operationsbereich steril abdecken.Danach beginnen Sie das Verfahren, indem Sie einen zwei Zentimeter langen medianen vertikalen Bauchschnitt anlegen. Um in die Bauchhöhle einzudringen, ziehen Sie den Darm nach kranial und führen das Gewebe nach außen auf die Brust, wobei Sie es in sterile Gaze wickeln, die mit steriler Kochsalzlösung angefeuchtet ist. Isolieren Sie anschließend die Aorta abdominalis und die Vena cava inferior unterhalb der Nierengefäße und legen Sie vier achtzehn-Litzen-Baumwollbinden um das Gewebe oberhalb und dann unterhalb der Anastomosestelle an.Identifizieren Sie alle im Operationsfeld befindlichen Lendenarterien und ligieren Sie diese mit 10 T Nylon. Nähen Sie zunächst die untere Baumwollschleife und danach die obere, um etwas Blut in der Aorta zurückzuhalten, was die Aortenautotomie erleichtert. Nach dem Sichern der Knoten dringen Sie mit einer Nadel der Größe 30 Gauge in das Lumen der Aorta ein.Verwenden Sie dann feine Mikroscheren, um den Schnitt entlang der Längsachse des Gefäßes gerade bis auf eine Länge von etwa zwei Millimetern zu verlängern. Bringen Sie nun eine 10-0-Nylon-Naht an. Führen Sie einen Halte-Stich in die Aorta des Spenders und in den unteren Winkel des Schnittes in der Aorta des Empfängers ein, um eine Seiten-End-Anastomose der Aorta des Spenders mit der Aorta des Empfängers herzustellen.Nachdem die Naht gebunden wurde, platzieren Sie eine zweite 10-0-Nylon-Naht gegenüber der ersten in der Spenderaorta und in der oberen Ecke des Schnitts sowie in der Bauchaorta und binden Sie auch diese Naht. Sobald die zweite Naht positioniert ist, führen Sie eine fortlaufende Naht von der oberen zur unteren Seite in der Seitenwand der Aorta aus, wobei Sie darauf achten, die Intima zusammenzuführen und sie an der zuvor platzierten Haltenaht zu befestigen. Anschließend nähen Sie die mediale Seite in fortlaufender Weise und binden sie, wobei die erste und letzte Naht jeder Seite so nah wie möglich an den Haltenähten angebracht werden.Streben Sie an, drei gleichmäßig verteilte Nähte zwischen diesen beiden zu setzen, sodass insgesamt fünf Nähte entstehen. Um dann eine endoseitliche Anastomose der Spender-Lungenarterie mit der Empfänger-V. cava inferior herzustellen, punktieren Sie zunächst die V. cava inferior mit einer 30-Gauge-Nadel und verlängern anschließend mit feinen Mikroscheren den Schnitt etwa zwei Millimeter entlang der Längsachse des Gefäßes in gerader Linie. Danach befestigen Sie die Spender-Lungenarterie mit einer 10er-Nylonnaht an der unteren Ecke des Schnitts in der V. cava inferior. Platzieren Sie eine zweite 10-ohm-Nylonnaht gegenüber der ersten in der Spenderarterie und der oberen Ecke des Schnittes in der abdominalen V. cava und verknoten Sie sie. Führen Sie anschließend eine Lauftunnelnaht zwischen der Arteria pulmonalis und der V. cava durch und verknoten Sie sie, wobei die erste und letzte Naht auf jeder Seite so nah wie möglich an den Haltefäden platziert werden. Streben Sie an, fünf gleichmäßig verteilte Nähte zwischen diesen beiden zu setzen, was insgesamt sieben Nähte ergibt.Lösen Sie nun die distalen vier OTT-Baumwollbinden, um den venösen Fluss wiederherzustellen. Sobald die Hämostase der venösen Anastomose beobachtet wurde, lockern Sie allmählich die proximalen vier OTT-Baumwollbinden und überprüfen Sie die arterielle Anastomose auf Hämostase. Wenn beide Anastomosen als sicher gelten, entfernen Sie die Baumwollbinden vom Maus, bringen Sie den Darm zurück in die Bauchhöhle und schließen Sie die Bauchwand in zwei Schichten mit Seidensilk 5-0.Verabreichen Sie im Rahmen der Flüssigkeitsersatztherapie beim Schließen des Bauchs einen ein Milliliter großen Bolus aus steriler, warmer physiologischer Kochsalzlösung intraperitoneal und injizieren Sie 0,8 Milliliter physiologische Kochsalzlösung subkutan. Schließlich wird die Transplantatfunktion durch tägliche transabdominale Palpation überprüft, wobei die Maus wie für eine intraperitoneale Injektion fixiert wird. Anschließend wird die Spitze eines Zeigefingers vorsichtig gegen die Bauchwand gedrückt, um die Pulsstärke und Regelmäßigkeit des Transplantats zu beurteilen.Weisen Sie der Palpationsqualität eine Punktzahl von vier bei normaler Amplitude und Frequenz bis hin zu null bei einem nicht schlagenden, abgestoßenen Transplantat zu. Diese chirurgische Technik erleichtert sowohl einfache Untersuchungen zum Überleben von Transplantaten als auch komplexe experimentelle Protokolle. Beispielsweise wurde in diesem repräsentativen Experiment die Beteiligung von schnellen und/oder Perforin-abhängigen Mechanismen bei der von CD4-positiven T-Zellen vermittelten Herztransplantatabstoßung untersucht.Die Ergebnisse zeigen, dass die direkte Abstoßung der Herzallografts durch CD4-positive Effektor-T-Zellen die alternative Beteiligung der schnellen Graft-Expression und der T-Zell-Perran-Expression erfordert, was erstmals darauf hinweist, dass zytolytische Aktivität durch CD4-positive T-Zellen eine obligate Rolle bei der primären akuten Allograft-Abstoßung in vivo spielen kann. Nach dem Anschauen dieses Videos sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie Sie die Nähte in Ihrer Anastomose platzieren, um ein gesundes, schlagendes Herztransplantat zu erzielen.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Medicine

Medizin

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Murine Heterotope Heart Transplant-Technik

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