Name: Der Ischiasnerv cuffing Modell von neuropathischen Schmerzen bei Mäusen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-07-16T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 9 s
Description: Erfahren Sie das Cuffing-Modell des Nervus ischiadicus zur Untersuchung neuropathischer Schmerzen bei Mäusen. Diese Methode ermöglicht die Bewertung mechanischer Allodynie und die Testung von Behandlungen wie Nortriptylin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Diese Arbeit wurde vom Centre National de la Recherche Scientifique (Vertrag UPR3212), der Universität von Straßburg und von einem NARSAD Young Investigator Grant des Rätsel &amp; Behavior Research Foundation (bis IY) unterstützt. Veröffentlichung Kosten werden von der Neurex Netzwerk (Programm Interreg IV Oberrhein) unterstützt.

Protokolle wurden von der &quot;comité d&#39;éthique en matière d&#39;Expérimentation animale de Strasbourg&quot; (CREMEAS) genehmigt worden. 1. Baseline-Messung von Paw Widerrufsrecht Schwellenwerte <ol><li> Lassen Sie die Maus an die Tieranlagen für mindestens 10 Tage vor Beginn der Testverfahren zu gewöhnen bis 2 Wochen. </li><li> Gewöhnen die Mäuse an den von-Frey-Test Set-up und an die, die in Abschnitt 4 beschrieben sind, von-Frey-Verfahren. </li><li> Vor der Operation, bewerten die mechanischen Pfotenrückzugsschwellen mit von-Frey-Filamenten, wie im Abschnitt 4.3 beschrieben. Hinweis: Wiederholen Sie den Vorgang an unterschiedlichen Tagen, bis mindestens drei aufeinanderfolgende Werte stabil sind Pfotenrückzugsschwellen erhalten. </li><li> Ordnen der Mäuse zu den verschiedenen Versuchsgruppen so, dass diese Gruppen nicht zunächst Pfotenrückzugsschwellen unterscheiden. </li></ol> 2. Chirurgie Verfahren für Cuff Implantatiauf <ol><li> Wiegen Sie das Tier. Hinweis: Mouse Körpergewicht über 20 g für die unten beschriebene Manschette Einsetzen Verfahren. </li><li> Betäuben dem Tier eine intraperitoneale Injektion von 4 ml / kg einer Mischung aus Ketamin (17 mg / ml) und Xylazin (2,5 mg / ml) in 0,9% NaCl, die etwa 45 min von Anästhesie bietet. </li><li> Prüfen Sie die Abwesenheit von Pfote Reflexe durch Kneifen eine Hinterpfote mit einer Pinzette und überprüfen Sie die Abwesenheit von Augenreflexe, um sicherzustellen, dass das Tier vollständig betäubt wird. </li><li> Rasieren Sie das rechte Bein vom Knie bis zur Hüfte mit einem elektrischen Rasierer. </li><li> Bewerben Schutz Auge flüssiges Gel für die Augen mit einem Wattestäbchen. </li><li> Legen Sie das Tier an seiner linken Seite und legen Sie den rechten Hinterschenkel in einem kleinen Kissen und Aufrechterhaltung der rechte Hinterschenkel, um das Kissen mit Klebeband. </li><li> Desinfizieren Sie den Bereich Chirurgie mit Chlorhexidin und 70% Ethanol mit Gaze oder Wattestäbchen. </li><li> Finden Sie die Oberschenkelknochen mit dem Zeigefinger und machen eineEinschnitt von ungefähr 0,5 cm, parallel zur Ober-und ca. 1,5 mm anterior zum Femur. </li><li> Trennen Sie die Muskeln in der Nähe des Oberschenkelknochens mit zwei autoklaviertem Sticks. Hinweise: Niemals die Muskeln. Normalerweise trennen sich die Muskelschichten einfach und ohne Blutungen und der Ischiasnerv ist dann sichtbar. Im Falle von Blutungen, eine sterile Wattestäbchen, um das Blut aufzufangen. </li><li> Legen Sie zwei autoklaviert-Sticks unter dem Ischiasnerv, seine Hauptniederlassung aussetzen, und Hydrat der Nerv mit einer sterilen physiologischen Lösung (0,9% NaCl). </li><li> Halten Sie die vorbereitete sterile 2 mm Abschnitt von Split PE-20-Polyethylenschlauch (Manschette), 0,38 mm ID / OD 1,09 mm, mit Hilfe eines spitzen Stahl-Stick und eine Bulldogge Klemme. <ol><li> Legen Sie die spitzen Stahl-Stick in die Manschette, die leicht zu öffnen wird. </li><li> Mit der Manschette seitliche Öffnung, legen Sie die Bulldogge an einem Ende der Manschette und parallel zu der Manschette. Drehen Sie die Bulldogge (180 °), so dass es die Manschette durch die haltenSeite, die entgegengesetzt zu der seitlichen Öffnung ist. Schließen Sie die Bulldogge und entfernen Sie den spitzen Stahl-Stick. Hinweis: Die Rotation wird durchgeführt, um zu ermöglichen, hält auf der Manschette in einer optimierten Position zum Einsetzen wird die Klemmbull hilft auch, um die Manschette teilweise geöffnet zu halten. Das Modell und die Größe der Klammer bull kritisch sind für diesen Schritt des Verfahrens. </li></ol></li><li> Eine zweite Versuchs halten die zwei Stöcke unter den Nerv und vorsichtig trennen die Stöcke, die den Zugang zu einem Teil der Ischiasnerv, der um 4 mm lang ist zu erleichtern. </li><li> Legen Sie die 2 mm Manschette um den Hauptzweig des Ischiasnervs ab, indem Sie den Teil der Manschette, die distal der Bulldogge um den Teil des Nerven, die proximal der Hüfte ist. </li><li> Schließen der Manschette leicht durch Ausüben von Druck auf die beiden distalen Seiten mit einer Zange ohne Quetschen oder Änderung der Form des Rohres. Drehen Sie die Manschette um sicherzustellen, dass sie richtig geschlossen ist. </li><li> Naht der rasierten Hautschicht Witzh chirurgischen Knoten. </li><li> Platzieren Sie die Maus auf der linken Seite in einem sauberen Käfig. Halten Sie es unter der Wärmelampe, bis die Maus wach ist. </li><li> Fügen Sie Zusatz Wasser und legen Sie etwas Futter direkt im Käfig. </li></ol> 3. Chirurgie Verfahren für die Sham-Kontrollen <ol><li> Wenden Sie dieselbe Operation Verfahren wie oben zu Schritt 2,9, dann folgen mit Stufen 2,15-2,17 beschrieben ab Schritt 2.1. Für Scheinkontrollen, lassen Sie die Schritte von 2,10 bis 2,14, die einzige Sorge, die Manschette Insertion. </li></ol> 4. Von-Frey-Testing <ol><li> Legen Sie die Mäuse in klaren Einzelboxen (7 cm x 9 cm x 7 cm) mit Löchern, auf einem erhöhten Lochplatte aus glattem Edelstahl (1 mx 50 cm, 5 mm Perforationen Kreis mit 2,5 mm Perforation zwischen Grenzen). Hinweis: Bis zu 12 Mäuse können gleichzeitig auf diesem Set-up getestet werden. Operierten Tiere können den Tag nach der Operation getestet werden. Allerdings sind 3 Tage Erholung empfohlen, die Überempfindlichkeit nach der Operation beobachtet verringernSchein-Kontrollen. </li><li> Lassen Sie die Tiere für 15 Minuten vor der Prüfung zu gewöhnen. </li><li> Wenden Sie die von Frey Filamente auf der Fußsohle jeder Hinterpfote in einer Reihe von aufsteigenden Kräfte. Hinweise: Die von Frey Filamente sind aus Kunststoff Haare von kalibrierten Durchmessern. Sie sind 5 cm lang und sind an Hand-Applikatoren fixiert. Die Geschwindigkeit des Faden Anwendung kann das Ausmaß der Biegung und der Dauer der Anwendung der Schwellenwerte, die mit diesem Test 3 erhaltenen beeinflussen. Bei dem vorliegenden Verfahren in Mäusen, die Filamente, die die am häufigsten verwendet werden, sind 0,16, 0,4, 0,6, 1, 1,4, 2, 4, 6, 8 und 10 g. <ol><li> Tragen Sie die gewählte Filament auf die Fußsohle des linken Pfote, bis der Faden gerade biegt. Wiederholen Sie den Vorgang drei vor fünf Mal hintereinander, und dann das gleiche zu tun, um die rechte Pfote. Sobald der Faden auf beiden Pfoten getestet, testen Sie die nächste Tier. Hinweise: Vermeiden Pfote Seitenränder, die empfindlicher sein. Die erwartete Antwort ist eine PfoteRückzug, plötzliche Zucken oder Pfote leckt. Betrachten wir die Antwort als positiv, wenn mindestens drei erwarteten Antworten von fünf Studien beobachtet. Eine gegebene Pfote immer drei Mal getestet, aber die vierte und die fünfte Studien durchgeführt werden, wenn nur 1 oder 2 Antwort (en) war (en) in den ersten drei Tests beobachtet. In C57BL/6J-Mäusen, starten Sie die Tests vor der Operation mit dem 1,4 g Filaments. Nach der Operation beginnen die Tests mit dem 0,4 g Filaments. Wenn eine positive Antwort mit der ersten getestet Faden beobachtet sich, ein Filament geringere Kraft (statt mehr) in Schritt 4.3.2. </li><li> Die gleiche Faden zu den nächsten Tieren nach dem Verfahren 4.3.1. Sobald alle Tiere getestet werden, starten wieder auf dem ersten Tier mit dem nächsten Faden der größeren Kraft. Wiederholen Sie den Vorgang, bis alle Mäuse eine positive Antwort. Hinweise: Test jedes Tier bis zwei aufeinander folgende Filamente eine positive Antwort. Betrachten Sie das Gramm Wert der unteren Faden, die eine positive Antwort als die Pfote Witz gabhdrawal Schwellenwert für dieses Tier. </li></ol></li></ol>

Die Autoren erklären, dass sie keine finanziellen Interessen konkurrieren.

Die &quot;Manschette&quot;-Modell wurde zunächst in Ratten entwickelt, um eine standardisierte und reproduzierbare chronische Verengung Verletzungen mit der Implantation mehrere Manschetten um den Ischiasnerv 6 zu erhalten. Es wurde dann modifiziert, um eine einzige Manschette 7,8 implantieren, auch wenn einige Forschungsgruppen noch mit mehreren Manschetten Einsetzen 19-22. Es wurde dann auf 9,23 Mäusen, die die Möglichkeit, transgene Tiere verwenden geöffnet angepasst. Die Manschette ist in der Regel 2 mm lang, aber andere Längen sind auch in 22 Ratten eingesetzt. Der Polyethylenschlauch ist von der Art: PE-20 in Mäusen, 9 und PE-60 oder PE 24,25 7,8,26,27-90 bei Ratten. Die mechanische Allodynie ist mit von Frey Haare gemessen. In diesem Test können die absoluten Werte für Pfotenrückzugsschwellen auf der Oberfläche, auf der das Tier steht 28 oder von der Dauer der Fadenbiege 3 abhängen, aber diese Faktoren nichtauf die Detektion des neuropathischen Allodynie. Die &quot;Manschette&quot;-Modell ist von Interesse für das Studium der neuropathischen Schmerzmechanismen. Es wurde verwendet, um morphologische Veränderungen in markhaltigen und marklosen Fasern 6,29 und funktionelle Veränderungen in sensorischen Neuronen, Primärafferens und Rücken Neuronen 19,21,22,30-35 studieren. Demonstration, dass es erlaubt Glia-Aktivierung und eine zentrale Schalt in neuronalen Anion Gradienten in Veränderungen in der Aktivität und in den Reaktionen der spinalen nozizeptiven Neuronen und Allodynie bei neuropathischen 24,36-38 teilnehmen. Der Einfluss von Glutamat-Rezeptoren 7,39-41, der Opioid-Rezeptoren 16,42-45 und Nikotinrezeptoren 46 wurde auch in diesem Modell untersucht. Ein weiteres Interesse des Modells ist seine Reaktion auf die aktuellen Behandlungen von neuropathischen Schmerzen, dh., Gabapentinoids und Antidepressiva. Ähnlich wie bei klinischen Beobachtungen: gabapentinoids anzuzeigen sowohl einen akuten kurzer Dauer analgetische Wirkung bei hoher Dosis und eine verzögerte nachhaltige Linderung der Aktion, die nach ein paar Tagen der Behandlung, trizyklische Antidepressiva und selektive Serotonin-und Noradrenalin-Wiederaufnahme-Hemmer haben keine akute schmerzstillende Wirkung bei relevanten Dosis beobachtet wird, aber sie zeigen eine anhaltende Linderung verzögert Aktion, die 1 bis 2 Wochen der Behandlung und der selektiven Serotonin-Wiederaufnahmehemmer Fluoxetin erfordert, ist unwirksam 16. Das Modell ist daher angemessen, den zugrunde liegenden molekularen Mechanismus dieser Behandlungen 16-18,44,45,47, die neue therapeutische Ziele offenbaren kann bei Patienten 48-51 testen zu studieren. Schließlich kann das Modell auch die Untersuchung der anxiodepressive Folgen von neuropathischem Schmerz. Klinisch beeinflussen diese Folgen etwa ein Drittel der Patienten, neuropathische Schmerzen, sind aber weniger präklinisch untersucht als die sensorischen Aspekte des Schmerzes. In diesem Modell wird eine zeitabhängige Entwicklung von Angstzuständen und Depressionen artigensive-like Phänotypen vorhanden ist 52 und die damit verbundene Mechanismus kann so angesprochen werden. Die standardisierten Bündchen und Verfahren in diesem Mausmodell von neuropathischen Schmerzen führen zu niedrigen interindividuelle Variabilität für die mechanische Allodynie. Die Möglichkeit, gentechnisch veränderte Tiere 17,18,44-47,52, die lang anhaltende Allodynie zu verwenden, die Antwort auf die klinisch verwendeten Behandlungen und die zeitabhängige Entwicklung der anxiodepressive Symptome machen dieses Modell für die entsprechende Untersuchung der verschiedenen Aspekte und Folgen von neuropathischen Schmerzen und ihre Behandlungen, die bereits wertvolle Informationen zu diesem Forschungsgebiet gebracht haben.

Neuropathischem Schmerz meist chronisch und entsteht als Folge einer Verletzung oder einer Erkrankung des somatosensorischen Systems. Maladaptive Änderungen in verletzten sensorischen Neuronen und nozizeptiven entlang der gesamten Bahn innerhalb des zentralen Nervensystems beteiligt in diesem Komplex Syndrom. Verschiedene Modelle wurden bei Nagetieren für das Studium von neuropathischen Schmerzen und ihre Behandlungen 1-3 entwickelt. Basierend auf bekannten Ursachen, die Modelle von neuropathischen Schmerzen zielen auf Nachahmung der in der Diabetes beobachtet Polyneuropathie, die Verletzungen der peripheren Nerven, die zentralen Verletzungen, die Trigeminusneuralgie, die Neuropathien in Folge der Chemotherapie, der Post-Zoster-Neuralgie, etc. Verschiedene Modelle der peripheren Nervenverletzungen bei Nagetieren konzentrieren sich auf den Ischiasnerv. Diese Modelle sind abhängig von einer Druck-und / oder ein Abschnitt dieser Nerv. Tatsächlich bietet der Ischiasnerv relativ einfache Operation und ermöglicht Tests, die auf Pfotenrückzugsreflexe. Die models der chronischen Nervenkompression gehören beispielsweise: die chronische Verengung Verletzungen (CCI) 4,5, den Ischiasnerv cuffing 6-9, die teilweise Ischiasnerv Ligation (PSL) 10, die Spinalnerven-Ligation (SNL) 11, oder die gemeinsame peronaeus 12 Ligation. Models als &quot;verschont Nervenverletzung&quot; (SNI) bezeichnet werden, auch weit verbreitet. Sie bestehen aus einem festen Ligation und Axotomie von zwei der drei Endäste des Ischias-Nervs, während der dritte Zweig intakt bleibt 13-15. Die verschiedenen Modelle von neuropathischen Schmerzen, die den Ischiasnerv zielen, führen zu einer chronischen mechanischen Allodynie (a nozizeptiven Reaktion auf eine normalerweise nicht-nozizeptiven Reiz) auf den verletzten Hinterpfote. Hier die detaillierte Chirurgie Verfahren für die &quot;Manschette Modell&quot; von neuropathischen Schmerzen bei Mäusen beschrieben. Es besteht in der Implantation eines Polyethylen-Manschette um den Hauptzweig des Ischiasnervs 6-9. The Verwendung von Frey Filamente wird ebenfalls beschrieben. Diese Filamente erlauben die Beurteilung der mechanischen Allodynie, die eine lang anhaltende nozizeptiven Symptom bei diesem Modell vorhanden ist.

<table><tbody><tr><td>PE-20 Polyethylen-Schlauch</td><td>Harvard Apparat</td><td>PY2-59-8323</td><td>Vor der Operation gespalten</td></tr><tr><td>Ketamin</td><td>Centravet</td><td>IMA004</td><td></td></tr><tr><td>Xylazin HCl</td><td>Sigma</td><td>X1251</td><td>Frisch vorbereitet vor der Operation</td></tr><tr><td>Ocry-Gel</td><td>Centravet</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Zange</td><td>FST</td><td>11003-12</td><td>52,5 mm gerade</td></tr><tr><td>Bulldog-Klemme</td><td>FST</td><td>p130 18038-45</td><td></td></tr><tr><td>Lochblech</td><td>CTTM</td><td></td><td></td></tr><tr><td>von Frey Filamente</td><td>Bioseb</td><td>NC-12775</td><td></td></tr></tbody></table>

der ischiasnerv cuffing modell von neuropathischen schmerzen bei mäusen

The Sciatic Nerve Cuffing Model of Neuropathic Pain in Mice

Neuropathischem Schmerz entsteht als Folge einer Verletzung oder einer Erkrankung des somatosensorischen Systems. Dieses Syndrom ist unpassenden Änderungen in verletzten sensorischen Neuronen und nozizeptiven entlang des gesamten Weges innerhalb des zentralen Nervensystems. Es ist in der Regel chronisch und schwierig zu behandeln. Um neuropathischen Schmerzen und ihre Behandlungen zu untersuchen, wurden verschiedene Modelle in Nagetieren entwickelt. Diese Modelle stammen aus bekannten Ursachen, so reproduzieren peripheren Nervenverletzungen, Zentral Verletzungen und Stoffwechsel-, Infektions-oder Chemotherapie bedingten Neuropathien. Murine Modelle von peripheren Nervenverletzungen oft Ziel der Ischiasnerv, die leicht zugänglich ist und ermöglicht nozizeptiven Tests an der Hinterpfote. Diese Modelle beruhen auf einer Kompression und / oder einem Abschnitt. Hier die detaillierte Chirurgie Verfahren für die &quot;Manschette Modell&quot; von neuropathischen Schmerzen bei Mäusen beschrieben. In diesem Modell ist eine Manschette aus PE-20-Polyethylenschlauch standardisierter Länge (mm 2) einseitig irund um den Hauptzweig des Ischiasnervs mplanted. Es induziert einen lang anhaltenden mechanischen Allodynie, dh. Eine nozizeptive Reaktion auf einen normalerweise nicht-nozizeptiven Reiz, der durch die Verwendung von Frey Filamenten ausgewertet werden kann. Neben der detaillierten Operation und Testverfahren sind das Interesse dieses Modell für die Untersuchung von neuropathischem Schmerz Mechanismus für die Untersuchung von neuropathischen Schmerzen und Sinnes anxiodepressive Aspekte und für die Untersuchung von neuropathischen Schmerzbehandlungen diskutiert.

Die Daten sind angegeben als Mittelwert ± SEM. Statistische Analysen wurden durchgeführt unter Verwendung von Multi-Faktor-Varianzanalyse (ANOVA) oder ungepaarten t-Tests in Übereinstimmung mit dem experimentellen Design. Für diese Analysen wurden die Sham und Cuff Chirurgie Gruppen sowie die Kochsalzlösung gegen medikamentöse Behandlungen wie zwischen den Gruppen Faktoren berücksichtigt. Gegebenenfalls wurden wiederholt Maßnahme Analysen für die Zeitverlaufsdaten verwendet. Die Post-hoc-Vergleiche wurden mit dem Duncan-Test. Statistische Signifikanz wurde bei p &lt;0,05 betrachtet. Bei Verwendung der Verfahren, die oben beschrieben sind, die Manschette Implantation führt zu einer ipsilateralen Allodynie wie in Fig. 1 dargestellt. Sobald die Maus an den Testverfahren gewöhnt sind, die Werte für Pfotenrückzugsschwellen in der Von-Frey-Test stabil über die Zeit und nicht von der Operation an sich betroffen, wie in Sham Tieren dargestellt. Es sollte jedoch seindarauf hingewiesen, dass eine vorübergehende postoperative Allodynie können in der Regel in Sham-Mäusen beobachtet werden. Wenn solche Allodynie vorhanden ist, gibt die Pfotenrückzugs Reaktion auf die Grundlinie nach ein paar Tagen nach der Operation. In Cuff Mäusen ist die ipsilaterale Allodynie bereits vorhanden ist am ersten Tag nach der Operation und ist für mehr als 2 Monate gehalten (siehe 9 und 1; F8, 344 = 29,5, p &lt;0,001). Die Manschette Allodynie bleibt ipsilaterale in C57BL/6J Mäusen, wenn es von dem von-Frey-Test wie oben beschrieben bestimmt, aber unter anderen Bedingungen eine Gegenwart Allodynie auf der kontralateralen Pfote können ebenfalls beobachtet werden 8. Die absoluten Werte für die Baseline sind in der Regel zwischen 4 und 6 g in C57BL/6J-Mäusen, aber die Testprotokoll kann diese Werte beeinflussen. Trizyklische Antidepressiva gehören klinische First-Line-Behandlung von neuropathischen Schmerzen. In diesem Modell, das trizyklische Antidepressivum Nortriptylin (5 mg / kg, intraperitoneale, zweimal täglich) relieves neuropathischen Allodynie nach ca. 2 Wochen der Behandlung, wie in Fig. 2 dargestellt ist (F7, 91 = 15,3, p &lt;0,001; post-hoc: (CuffNor = Sham)&gt; CuffSal bei p &lt;0,001 an den Tagen 29 bis 34). Bei dieser Dosis keine akute analgetische Wirkung des Antidepressivums beobachtet 16,17. Um die anhaltende Schmerzlinderung, die bei Patienten, die solche Medikamente vorhanden ist, zu imitieren, können die Mäuse vor der Morgen Verabreichung des Arzneimittels nicht erst nach geprüft werden. Ein solches Verfahren ermöglicht eine Bewertung der Langzeitwirkung von früheren Tagen der Behandlung grundiert. In diesem Fall erfordert es 1 bis 2 Wochen nach der Behandlung eine dauerhafte Linderung des neuropathischen Allodynie beobachten. Wenn die Behandlung unterbrochen wird, wird ein Rückfall in der Regel innerhalb von 3 bis 4 Tage 18 beobachtet. Neben einigen Antidepressiva, gabapentinoids sind die anderen der ersten Wahl für die Behandlung neuropathischer Schmerzen. Gabapentin hat eine akute und vorübergehende analgetische Wirkung in diesem Modell 16, aber es zeigt auch eine verzögerte und lon<html> g anhalt antiallodynische Wirkung beim Testen des Tieres pro Tag vor der Verabreichung des Arzneimittels (3, p &lt;0,001). Diese Aktion ist schneller als mit Antidepressiva. <img alt="Figur 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51608/51608fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51608/51608fig1.jpg" /> Abbildung 1. Mechanische Pfotenrückzugsschwellen in der Manschette Modell von neuropathischen Schmerzen bei Mäusen. Erwachsene männliche C57BL/6J Mäuse wurden an den von-Frey-Verfahren gewöhnt, bis eine stabile Basislinie erhalten (die Basislinie am Punkt 0 auf der Grafik dargestellt). Beide Pfoten wurden getestet. Die Manschette Mäuse zeigen ipsilateralen mechanischer Allodynie als durch die abgesenkten Pfotenrückzugsschwellen (n = 10 pro Gruppe) zeigte. tp_upload/51608/51608fig2.jpg &quot;/&gt; Abbildung 2. Verzögerte antiallodynische Wirkung von trizyklischen Antidepressiva. Nach zwei Wochen nach der Operation erhielten die Mäuse intraperitoneale Behandlung zweimal täglich (morgens und abends) entweder mit 0,9% NaCl oder 5 mg / kg Nortriptylin-Hydrochlorid (n = 5 oder 6 pro Gruppe ). Die von Frey-Test wurde vor der Morgen Behandlung getan. Mit diesem Verfahren wird eine verzögerte antiallodynische Wirkung von Nortriptylin beobachtet, die etwa 12 Tagen Behandlung erfordert. <img alt="Fig. 3" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51608/51608fig3highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51608/51608fig3.jpg" /> Abbildung 3. Antiallodynische Wirkung einer gabapentinoid. Nach drei Wochen nach der Operation erhielten die Mäuse intraperitoneale Behandlung zweimal täglich (morgens und abends) entweder mit 0,9% NaCl oder 10 mg / kg Gabapentin (n = 5 pro Gruppe). Die von Frey-Test wurde vor der Morgen Genuss getanment. Mit diesem Verfahren wird eine verzögerte und anhaltende antiallodynische Wirkung von Gabapentin beobachtet. Daten werden vor Beginn der Behandlung und am 6. Tag der Behandlung dargestellt.

Neuropathische Schmerzen sind die Folge einer Verletzung oder Erkrankung des somatosensorischen Systems. Die &quot;Manschette Modell&quot; von neuropathischen Schmerzen bei Mäusen besteht aus der Implantation einer Polyethylen Manschette um den Hauptzweig des Ischiasnervs. Mechanische Allodynie wird mit Hilfe von Frey Filamente getestet.

Der Ischiasnerv cuffing Modell von neuropathischen Schmerzen bei Mäusen

Neuropathic pain arises as a consequence of a lesion or a disease affecting the somatosensory system. This syndrome results from maladaptive changes in ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, ein Mausmodell für neuropathischen Schmerz nach einer Kompression eines peripheren Nervs zu etablieren. Nach der chirurgischen Vorbereitung des Tieres wird der Hauptast des Nervus ischiadicus freigelegt und ein Polyethylen-Cuff um den Nerv platziert. Anschließend wird die Wunde verschlossen.Um die Empfindlichkeit der Pfote zu testen, werden die Mäuse in durchsichtige Kästen über eine perforierte Stahlplatte gesetzt. Eine Reihe von zunehmend stärkeren Von-Frey-Filamenten wird dann auf die Pfote aufgebracht, bis das Tier konsistent auf den Druck reagiert. Letztendlich kann das Vorhandensein einer lang anhaltenden, ipsilateral zur operierten Pfote auftretenden mechanischen Allodynie beobachtet werden, indem die aus dem Von-Frey-Test gewonnenen mechanischen Schwellenwerte über die Zeit aufgetragen werden.Dieses Modell kann helfen, zentrale Fragen im Schmerzbereich zu beantworten, beispielsweise die Mechanismen, die neuropathischen Schmerzen zugrunde liegen. Es kann außerdem verwendet werden, um aktuelle Therapien zu untersuchen, neue therapeutische Wirkstoffe zu testen oder die anxiodepressiven Folgen neuropathischer Schmerzen zu erforschen. Eine visuelle Demonstration dieser Methode ist jedoch entscheidend, da die Implantation des Cuffs ein Schritt ist, der ohne visuelle Unterstützung schwer zu erklären ist.Um die mechanische Schwelle für das Pfotenzurückziehen zu bewerten, stellen Sie die Mäuse zunächst zur Eingewöhnung in klare Einzelkästen auf eine perforierte Stahlplatte; bis zu 12 Tiere können parallel getestet werden. Verwenden Sie von-Frey-Fäden. Diese Kunststoffhärchen mit kalibrierten Durchmessern sind an einem handgehaltenen Applikator befestigt.Beim Biegen übt jedes Filament einen Druck aus, der proportional zu seinem Durchmesser ist. Bei Mäusen liegen die am häufigsten verwendeten Filamente zwischen 16 und 10&nbsp;g. Beginnen Sie mit dem geringsten Druck.Beim Messen der Schwellenwerte zur Untersuchung der Mäuse den Faden an die linke Hinterpfote anlegen, bis sich die Fäden zu verbiegen beginnen. Vermeiden Sie die seitlichen Ränder der Pfote, die empfindlicher sein können. Das Tier reagiert auf die Anwendung des Fadens.Wenn die Pfote zurückschreckt oder zurückgezogen wird, die Applikation zwei weitere Male wiederholen; wenn das Tier auf alle drei Applikationen reagiert, die andere Pfote testen. Andernfalls die Filamente insgesamt fünfmal applizieren, bevor die andere Pfote getestet wird. Jede Maus nacheinander mit dem ausgewählten von-Frey-Filament testen und den Vorgang dann mit dem nächsten Filament wiederholen.Wenn ein Tier dreimal auf denselben Filament reagiert, gilt dies als positives Ergebnis. Wenn aufeinanderfolgende Filamente positive Werte ergeben, wird der Test an dieser Pfote abgebrochen. Die Reizschwelle für das Pfotenwegziehen ist der niedrigere der beiden Gramm-Werte für eine gegebene Maus.Diese Werte können zwischen den beiden Pfoten variieren. Wiederholen Sie diesen Vorgang täglich, bis mindestens drei aufeinanderfolgende Schwellenwerte stabil sind. Fahren Sie anschließend mit der Operation fort.Notieren Sie das Gewicht des Tieres, das über 20 Gramm liegen sollte, und betäuben Sie das Tier mit Ketamin und Xylazin. Überprüfen Sie das Fehlen von Pfoten- oder Augenreflexen. Tragen Sie mit einem Tupfer ein schützendes Gel auf die Augen auf.Rasieren Sie dann das rechte Bein vom Knie bis zur Hüfte. Positionieren Sie dann das Tier mit dem rechten Hinterbein auf einem kleinen Kissen und sichern Sie dieses Bein mit Klebeband. Desinfizieren Sie die freigelegte Haut mit Chlorhexidin und 70 %igem Ethanol.Beginnen Sie mit der Palpation, um den Femur zu finden. Führen Sie dann einen 0,5 cm langen Schnitt parallel zum Femur etwa 1,5 Millimeter hinter dem Femur durch. Trennen Sie nun mit sterilen Stäbchen die Muskulatur in der Nähe des Femurs, schneiden Sie diese jedoch nicht durch.Der Hauptast des Nervus ischiadicus sollte sichtbar gemacht werden. Bei Blutungen unbedingt mit einem Tupfer abtupfen, um Scheinkontrollen zu gewährleisten. Damit ist der chirurgische Eingriff für die Mäuse, die einen Cuff erhalten sollen, abgeschlossen.Platzieren Sie zwei Stäbchen unter den Ischiasnerv, um den Hauptast des Nervs freizulegen. Geben Sie einen Spritzer physiologischer Kochsalzlösung hinzu, um den Nerv zu hydratisieren. Greifen Sie nun eine geteilte Manschette mit einem spitzen Stahlstäbchen und einer Bulldog-Klemme. Danach die Aderklemme einsetzen und um 180 Grad drehen, sodass sie die Manschette gegenüber der seitlichen Öffnung der Manschette hält. Nun die Aderklemme schließen und den spitzen Stab entfernen. Anschließend lässt man einen Assistenten die beiden Stäbe unter dem Nerv halten und vorsichtig auseinanderziehen.Um Zugang zum Nerv zu ermöglichen, setzen Sie die zwei Millimeter dicke Manschette um den Hauptast des Nervus ischiadicus. Beginnen Sie damit, den distal zur Bulldog-Klemme liegenden Teil der Manschette über den proximal zur Hüfte verlaufenden Nervenabschnitt zu schieben. Schließen Sie die Manschette anschließend vorsichtig mit einer Pinzette, um sicherzustellen, dass sie korrekt geschlossen ist.Drehen Sie es um. Entfernen Sie nun die Stäbe und nähen Sie die Haut verschlossen. Unter Verwendung chirurgischer Knoten überführen Sie die Maus in ihren sauberen Heimkäfig, wobei Sie die Maus auf ihre linke Seite legen.Halten Sie es mit der Wärmelampe warm, bis es aufwacht. Fügen Sie zusätzliches Futter und Wasser im Käfig hinzu, damit sich die Maus selbst versorgen kann. Die Tiere können am Tag nach der Operation auf verminderte Withdrawal-Schwellenwerte getestet werden, es ist jedoch besser, drei Tage zu warten, um die postoperative Hypersensitivität bei diesem Verfahren zu verringern.Mäuse mit Cuff-Implantat zeigen eine ipsilaterale Allodynie über zwei Monate hinweg im Vergleich zu Sham-kontrollierten Tieren. Die Behandlung der Mäuse mit fünf Milligramm pro Kilogramm Nortriptylin, einem trizyklischen Antidepressivum, zweimal täglich lindert die neuropathische Allodynie nach etwa zwei Wochen Behandlung.Wenn die Behandlung unterbrochen wurde, erlitten die Mäuse normalerweise innerhalb von drei bis vier Tagen einen Rückfall. Dieses Modell reagiert auch empfindlich auf eine weitere Behandlung neuropathischer Schmerzen mit Gabapentinoiden. Nach dem Ansehen dieses Videos sollten Sie gut verstehen, wie man den Hauptast des Ischiasnervs bei anästhesierten Mäusen findet und eine Hülle darum einbringt.In diesem Modell für neuropathische Schmerzen ermöglicht der one fray Test zudem die Beurteilung der mechanischen Schwellenwerte und die Untersuchung von Arzneimittelreaktionen.

the-sciatic-nerve-cuffing-model-of-neuropathic-pain-in-mice

Research

Forschung

JoVE Journal

Medicine

Medizin

Die Verschont Nerve Injury Tiermodell wird hier als ein Maus-Modell von peripheren neuropathischen Schmerzen nach einer partiellen Denervation der Ischiasnerv durch Läsion der Tibia-und N. peronaeus Filialen beschrieben, so dass die verbleibenden Nervus suralis intakt. Verhaltensmodifikation durch mechanische Allodynie wird durch von Frey Filamente quantifiziert.

Die Verschont Nerve Injury (SNI) Modell induzierte mechanische Allodynie in Mäusen

Aufgrund der Einfachheit des chirurgischen Eingriffs und der robusten Verhaltensauffälligkeiten, ist eine chronische Verengung der Ischiasnerv eines der herausragenden Tiermodellen des neuropathischen Schmerzes. Innerhalb von 24 Stunden nach der Operation wird Schmerzen Überempfindlichkeit gegründet und kann quantitativ gemessen werden mit Hilfe eines von Frey Aesthesiometer (mechanische Prüfung) und plantar Analgesie Meter (Thermal-Test).

Chronische Verengung des Ischiasnerv und Schmerzen Überempfindlichkeit Testing in Ratten

In diesem Video entwickeln wir ein in vivo Mausmodell für die perineurale Invasion, indem wir Bauchspeicheldrüsenkrebszellen in den Ischiasnerv injizieren. Dieses Modell hilft, das Ausmaß der Invasion zu quantifizieren und die Wechselwirkungen zwischen Krebszellen und Nerven zu untersuchen.

Maus-Perineurales Invasionsmodell: Generierung eines In-vivo-Modells zur Simulation einer perineuralen Invasion im Ischiasnerv der Maus

Die tibiale Nervendurchtrennung Modell ist ein gut verträgliches, validiert und reproduzierbares Modell der Skelettmuskelatrophie. Das Modell chirurgische Protokoll beschrieben und in C57Black6 Mäusen nachgewiesen.

Tibialisnerv Durchtrennung - ein standardisiertes Modell für Denervation-induzierte Skelettmuskelatrophie in Mice

Die modifizierte Operation ist eine vereinfachte Methode für das Modell der Nervenverletzung von Mäusen oder Ratten, die nur eine Ligatur und einen Schnitt erfordern, um sowohl den Nervus peroneus als auch den Nervus suralis zu verletzen.

Modifiziertes Modell der Chirurgie der Nervenverletzung bei neuropathischen Schmerzen bei Mäusen

Der mechanische Konfliktvermeidungsassay wird als nichtreflexives Auslesen der Schmerzempfindlichkeit bei Mäusen verwendet, um affektiv-motivationale Reaktionen in einer Vielzahl von Mausschmerzmodellen besser zu verstehen.

Mechanischer Konfliktvermeidungstest zur Messung des Schmerzverhaltens bei Mäusen

Die partielle Ligatur des Ischiasnervs induziert lang anhaltende chronische neuropathische Schmerzen, die durch übertriebene Reaktionen auf thermische und mechanische Reize gekennzeichnet sind. Dieses Mausmodell für neuropathische Schmerzen wird häufig verwendet, um innovative Therapien zur Schmerzbehandlung zu untersuchen. Dieser Artikel beschreibt detailliert das chirurgische Verfahren zur Verbesserung der Standardisierung und Reproduzierbarkeit.

Partielle Ischiasnervligatur: Ein Mausmodell für chronische neuropathische Schmerzen zur Untersuchung der antinozizeptiven Wirkung neuartiger Therapien

Wir stellen ein Protokoll für die Verwendung von Fu's subkutanem Needling in einem chronischen Verengungsverletzungsmodell vor, um Ischiasnervschmerzen bei Ratten zu induzieren.

Wirksamkeit von Fu's subkutanem Needling bei Ischiasnervenschmerzen: Verhaltens- und elektrophysiologische Veränderungen in einem Rattenmodell mit chronischer Verengungsverletzung

Eine chronische Einschnürungsverletzung des distalen Nervus infraorbitalis bei Mäusen führt zu Veränderungen des spontanen Verhaltens (erhöhte Aktivität bei der Gesichtspflege) und des nozifensiven Verhaltens als Reaktion auf taktile Stimulation (Überempfindlichkeit auf von-Frey-Haarstimulation), die Anzeichen von anhaltenden Schmerzen und Allodynie sind und als Modell für trigeminale neuropathische Schmerzen dienen.

Chronische Einschnürungsverletzung des distalen Nervus infraorbitalis (DIoN-CCI) bei Mäusen zur Untersuchung von trigeminalen neuropathischen Schmerzen

Dieses Protokoll stellt ein reproduzierbares Rattenmodell vor, das sensorische Nerven verwendet, um menschliche Neuromschmerzen nachzuahmen und chirurgische Behandlungen zu bewerten, und bietet ein wertvolles Werkzeug für die translationale Neuromforschung.

Neuartiges chirurgisches Nagetiermodell zur Untersuchung von Behandlungsmöglichkeiten für Neuromschmerzen mit gezielter Muskelreinnervation durch den Nervus saphenus

Erfahren Sie das Cuffing-Modell des Nervus ischiadicus zur Untersuchung neuropathischer Schmerzen bei Mäusen. Diese Methode ermöglicht die Bewertung mechanischer Allodynie und die Testung von Behandlungen wie Nortriptylin.

Der Ischiasnerv cuffing Modell von neuropathischen Schmerzen bei Mäusen

Weitere Videos entdecken