Entwicklung eines IFN-γ ELISPOT-Assay zu beurteilen, Varicella-Zoster-Virus-spezifische Zellvermittelte Immunität nach Nabelschnurblut-Transplantation

Das übergeordnete Ziel des folgenden Verfahrens ist es, die IFN-Gamma-Produktion auf Einzelzellebene zu detektieren, um die zellvermittelte Immunantwort gegen das Varizella-Zoster-Virus oder VZV zu bewerten. Dies wird erreicht, indem zunächst die Wells einer 96-Well-Alley-Spotplatte mit monoklonalen IFN-Gamma-Capture-Antikörpern beschichtet werden. Im zweiten Schritt werden die Zellen plattiert und mit dem VZV-Antigen stimuliert.

Als nächstes werden die Zellen entnommen und das eingefangene IFN-Gamma mit einem Detektionsantikörper markiert, schließlich die IFN-Gamma-Produktion und das Ausmaß und die Qualität der zellvermittelten Immunantworten, die gegen BZV gerichtet sind, können quantifiziert werden. Der Hauptvorteil dieser Technik gegenüber bestehenden Methoden wie PMHC, Tremor und intrazellulärer Zytokinfärbung besteht darin, dass Interferon-Gamma verwendet wird. Ein Spot ist ein robuster, reproduzierbarer und informativer Assay, der an venösen Blutproben mit relativ einfachen Geräten wie Inkubatoren, Zentrifugen und Dissektionsmikroskopen durchgeführt werden kann.