Riech Assays für Mausmodelle für Neurodegenerative Disease

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, die Geruchsfunktion bei Mäusen zu beurteilen. Dies wird erreicht, indem die Mäuse zunächst in eine Nahrungsbeschränkung oder in Einzelhaltung gesetzt werden. Der zweite Schritt besteht darin, die olfaktorischen Reize vorzubereiten, den Testraum einzurichten und die Mäuse an den Testbereich zu gewöhnen, damit die Tests durchgeführt werden können.

Führen Sie als Nächstes die Testverfahren an den Mäusen durch und analysieren Sie die Daten, die auf dem Video aufgezeichnet wurden. Letztendlich können diese Tests zur Messung der Geruchsfähigkeit in genetischen Mausmodellen für neurodegenerative Erkrankungen und in klinischen Medikamentenstudien zur Erprobung potenzieller Therapien verwendet werden. Obwohl Riechdefizite bei neurodegenerativen Erkrankungen gut dokumentiert sind, wird der Geruchssinn in vielen Krankheitsmodellen nicht routinemäßig gemessen.

Daher ist es unser Ziel, eine Reihe von Tests zusammenzustellen, um mehrere Aspekte des Geruchssinns und der Maus zu messen, die leicht in ein Experiment implementiert werden können. Diese Tests können dazu beitragen, Schlüsselfragen im Zusammenhang mit dem Zusammenhang zwischen neurodegenerativen Erkrankungen, Pathologie und Geruchssinn zu beantworten und das therapeutische Potenzial neuartiger Wirkstoffe zu identifizieren. Um diesen Vorgang zu beginnen, geben Sie der Maus ein bis zwei Pellets, die täglich während des Tests verwendet werden.

Notieren Sie dann mindestens zwei Tage vor dem Test das Gewicht der Maus und dann die Nahrung, die an allen Testtagen auf 90 % ihres Körpergewichts beschränkt ist. Gewöhnen Sie die Maus vor dem Test eine Stunde lang, indem Sie den Heimkäfig nur mit einem oberen Filterdeckel in den Testraum stellen. Füllen Sie während der Besiedlung einen sauberen Käfig mit sauberer Einstreu bis zu einer Höhe von drei Zentimetern und achten Sie darauf, dass die Einstreu gleichmäßig im Käfig verteilt ist.

Vergraben Sie ein gesüßtes Getreidepellet 0,5 Zentimeter unter der Einstreu im Testkäfig, so dass es nicht sichtbar ist. Setzen Sie danach die Maus aus ihrem Heimatkäfig in den Testkäfig um und setzen Sie einen Filterdeckel auf den Käfig. Beginnen Sie, fünf Minuten mit einem Timer herunterzuzählen.

Stoppe den Timer, wenn die Maus das Pellet entdeckt und anfängt, es zu fressen. Wenn die Maus das Kügelchen nicht innerhalb von fünf Minuten findet, beenden Sie den Versuch und notieren Sie eine Punktzahl von 300 Sekunden für diese Maus. Schiebe das Pellet auf die Oberseite der Einstreu, damit die Maus es fressen kann.

Bringen Sie die Maus nach der Prüfung in ihren Heimatkäfig zurück. Leeren Sie nun die Einstreu aus dem Testkäfig und reinigen Sie den Käfig mit Reinigungslösung. Wiederholen Sie den Vorgang für jede Maus und wechseln Sie die Handschuhe vor und nach jeder Maus.

Geben Sie der Maus dann gerade genug Nahrung, um 90% des Körpergewichts zu halten. Führen Sie den Test am zweiten bis fünften Tag auf die gleiche Weise wie am ersten Testtag durch, vergraben Sie das Pellet jedoch bei jedem Versuch an einer anderen Stelle im Käfig. Am sechsten Tag legen Sie das Pellet, anstatt es unter die Einstreu zu tragen, auf die Einstreu.

Notieren Sie in diesem Schritt die Zeit, die die Maus benötigt, um das Pellet zu finden und zu fressen. Legen Sie fünf Blöcke mit den Bezeichnungen A bis E für 24 Stunden in den sauberen Mauskäfig. Entfernen Sie am nächsten Tag und eine Stunde vor dem Test die Wasserflasche und den Futterbehälter und geben Sie alle fünf Blöcke aus dem Käfig zusammen mit einer Handvoll Einstreu in eine Plastiktüte, die mit der Identifizierung des Tieres beschriftet ist.

Gewöhnen Sie das Tier dann vor dem Test eine Stunde lang an seinen Heimkäfig ohne den Futterbehälter und die Blöcke für eine Stunde. Ordnen Sie nun alle Mäusekäfige auf einem Tisch mit einem Abstand von mindestens 10 Zentimetern zwischen den Käfigen an. Beschriften Sie dann die Karte mit den wichtigen Versuchsdetails und nehmen Sie das Etikett zwei bis drei Sekunden lang auf Video auf.

Entfernen Sie die Blöcke A bis D aus der Plastiktüte mit der Mauskennzeichnung und platzieren Sie sie so in der Mitte des Käfigs, dass sie auf der Videokamera gut sichtbar sind. Achten Sie darauf, dass zwischen den Blöcken etwa ein Zentimeter Abstand ist. Setzen Sie nun den Filterdeckel wieder auf den Käfig.

Starten Sie den Timer und das Videoband für 30 Sekunden. Stoppen Sie die Aufzeichnung nach 30 Sekunden. Entfernen Sie die Blöcke aus dem Käfig und platzieren Sie sie zwischen den Versuchen außerhalb des Käfigs.

Wechseln Sie die Handschuhe und gehen Sie dann zur nächsten Maus über. Tun Sie dies für insgesamt sechs Versuche für jede Maus und stellen Sie sicher, dass es ein Intervall von etwa fünf Minuten zwischen den Versuchen gibt. Entfernen Sie beim siebten Versuch Block D aus seinem eigenen Käfig und fügen Sie Block E aus dem Käfig einer anderen Maus hinzu.

Wenn die Maus also den Blöcken A, B und C aus ihrem eigenen Käfig ausgesetzt ist und Block E aus dem Käfig einer anderen Maus im Laborbuch, dessen Block E jede Maus ausgesetzt ist, und die alternative Platzierung des Blocks E.In dem Käfig jeder Maus, nehmen Sie 30 Sekunden lang auf Video auf. Nach den sieben Versuchen bringen Sie das Tier mit seinen ursprünglichen Käfiggenossen in ein neues, sauberes Messgerät zurück. Reinigen Sie die im Test verwendeten Blöcke mit einem milden Reinigungsmittel und Wasser und lassen Sie sie für die Verwendung an der Luft trocknen. In späteren Tests ist der Gewöhnungsentwöhnungstest auf ähnliche Weise wie der Blocktest durchzuführen.

Anstatt jedoch Blöcke zu verwenden, die den Geruch einer Maus haben, verwenden Sie Taschentuchpatronen mit Watte, die mit verschiedenen Extraktpaaren parfümiert ist. Gewöhnen Sie sich dann an die Maus im Testraum. Bereiten Sie die parfümierten Taschentuchpatronen in einem separaten Raum vor.

Lege einen kleinen Wattebausch in eine saubere Patrone und füge dann fünf Mikroliter Extrakt zur Watte hinzu. Schnappen Sie die Oberseite der Patrone über die Baumwolle und legen Sie sie in eine spezielle Schachtel oder Tasche, die mit diesem Duft beschriftet ist. Wechseln Sie die Handschuhe zwischen dem Umgang mit Düften.

Befolgen Sie dann die Verfahren im Blocktest mit 1 Cent, einer Taschentuchpatrone für die ersten sechs Versuche und dem zweiten Cent einer Taschentuchpatrone für den siebten Versuch. Diese Abbildung zeigt die Latenz, um das Pellet im Wildtyp und die A TP 13 A mit zwei Knockout-Mäusen im vergrabenen Pellet-Test zu finden. Diese Abbildung zeigt die Zeit beim Schnuppern des neuen Blockblocks E im Blocktest zwischen dem Wildtyp und den beiden Knockout-Mäusen ATP 13 A.

Und das ist inzwischen das Schnüffeln einer anerkannten Patrone in Wildtyp-Mäusen in sechs Versuchen und die Einführung einer Patrone mit dem neuartigen Duft im siebten Versuch im Gewöhnungstest. Bei der Durchführung dieser Testbatterie ist es wichtig, daran zu denken, alle Maßnahmen zu ergreifen, um alle Geruchsreize von außen zu reduzieren. Wechseln Sie Ihre Handschuhe immer so oft wie möglich und vermeiden Sie das Tragen von Parfüm oder Parfüm.

Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie Sie die Geruchsfunktion und Mausmodelle für neurodegenerative Erkrankungen mit dieser Batterie einfacher Tests beurteilen können.