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DOI: 10.3791/51806-v
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DNA-Reparaturwege sind wichtig für die Erhaltung der genomischen Integrität und Mutation verhindert und Krebs. Das Ziel des Protokolls ist es, genomische Instabilität durch direkte Beobachtung von Chromosomenaberrationen in Metaphase-Spreads Quantifizierung von Maus-B-Zellen unter Verwendung von Fluoreszenz-in situ-Hybridisierung (FISH) für Telomer-DNA-Wiederholungen.
Das übergeordnete Ziel des folgenden Experiments ist es, die genomische Instabilität in B-Lymphozyten der Maus zu quantifizieren. Dies wird erreicht, indem zunächst die B-Zellen für die primäre Zellkultur isoliert werden. Als nächstes werden die Zellen fixiert, was die Vorbereitung der Metaphasenausbreitungen erleichtert.
Schließlich wird eine Telomer-PNA-Fischuntersuchung zur Visualisierung der fluoreszenzmarkierten Telomere durchgeführt. Letztendlich kann das Ausmaß verschiedener Arten von Chromosomenaberrationen durch Fluoreszenzmikroskopie quantifiziert werden. Die Auswirkungen dieser Technik können unser Verständnis der DNA-Reparaturwege erweitern, da sie dazu beitragen kann, Gene zu identifizieren, die die genomische Stabilität in unseren Zielmausmodellen fördern.
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