Name: Bau von Dampfkammern verwendet, um Mäuse zu Alkohol Expose Während der Equivalent aller drei Trimester der Human Development (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-07-13T15:00:00.000+00:00
Duration: 15 min 27 s
Description: Erfahren Sie den Bau von Alkohol-Dampfkammern für Mäuse, um fetale Alkoholexposition über alle drei Trimenons zu simulieren. Diese Methode ermöglicht präzise Kontrolle der Blutalkoholwerte bei trächtigen Mäusen und Jungtieren.

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Unterstützt vom National Institutes of Health gewährt R01-AA015614, AA014973-R01, T32-AA014127 und K12-GM088021. Die Autoren danken Samantha L. Blomquist für technische Unterstützung und Drs. Kevin Caldwell und Donald Partridge für das Manuskript und Video kritische Bewertung.

Alle Tier-Verfahren wurden von der Universität von New Mexico-Health Sciences Center Institutional Animal Care und Verwenden Committee genehmigt. 1. Vapor Chamber Versammlung <ol><li> Cut Polycarbonat-Platten mit einer Kreissäge oder Stichsäge auf die Abmessungen in dem Video für oben, unten, vorne, hinten, seitlich und Tür (Abbildung 1 und Tabelle 1). </li><li> Mit einer Kreissäge oder Stichsäge, schneiden Sie eine Öffnung 8 cm hoch und 16 cm breit in der Mitte der Frontplatte. </li><li> Messen und markieren Sie die Löcher für die Klavierband auf die 18-Zoll von 10-Zoll-Polycarbonatplatten, die die Tür der Kammer werden wird. </li><li> In der Tür bohren Gegenwanne Löcher mit einem 5/16 Zoll-Bohrer, und mit einem 3/16 Zoll-Bohrer, bohren Sie das Loch für die Schrauben. Achten Sie darauf, Gegenkörper Löcher auf der Innenseite der Tür für die Schraubenköpfe zu bohren. </li><li> Bereiten Sie die Polycarbonat-Platten für das Schweißen. </li><li> Montieren hernt, Rücken und Seitenteile auf der Bodenplatte mit Weld-on # 16. </li><li> Verschließen Sie alle Lücken zwischen den Platten mit Weld-on # 16. </li><li> Bringen Sie die obere Panel mit Weld-on # 16. </li><li> Verwenden Sie Schraubzwingen oder Schwer Text Bücher, alles an Ort und Stelle zu halten, während die Schweißnähte zu heilen. </li><li> Befestigen eines 1 Zoll durch eine 12-Zoll-Stück Polycarbonat auf der Frontplatte 1 Inch unterhalb der Öffnung für die Befestigung des Türscharniers. </li><li> Lassen Sie mindestens 24 Stunden für Weld-on zu heilen. </li><li> Schneiden Sie zwei Stücke von PEX-Schlauch 12 cm lang und 1 Stück 1 Zoll langen PEX-Schlauch. </li><li> Mit einer 5/16 Bohrer ein Loch bohren, in jeder der 12-Zoll-PEX-Schlauch ca. 1 bis 2 cm von einem Ende. </li><li> Befestigen 2 x 12 Zoll PEX Schlauch mit einer 3/8 Zoll-T-Stück mit den Löchern von dem Stecker. </li><li> Verschließe die offenen Enden des PEX Schläuche mit 3/8 inch-Stecker. </li><li> Befestigen Sie den Klavierband an der Frontplatte und Tür mit 4-40 Maschinenschrauben und Muttern. </li><li> Mit der Tür als ein Führer, marche die Löcher für die Klavierband erforderlich auf die 1 inch-Abstandshalter auf der Vorderseite der Kammer. </li><li> Mit einem 3/16 Zoll-Bohrer, bohren die Löcher in der Frontplatte für den Klavierband. </li><li> Schließen Sie die Tür und Klavierband an der Frontplatte mit 4-40 Maschinenschrauben und Muttern. </li><li> Bauen Sie die Schnellspanner nach dem Video mit einer Unterlegscheibe und Mutter auf jeder Seite des Auslegers angezeigt. </li><li> Mark und Bohrer 3/16 Zoll Löcher für den Schnellspannern auf der Frontplatte und befestigen Knebelklemmen mit 4-40 Maschinenschrauben und Muttern. </li><li> Add 3/8 Zoll Gummidichtungslippendichtungen an der Innenseite der Tür. </li><li> Mit einer 5/8 Zoll langweilig Bohrer, bohren Sie ein Loch in der Mitte der oberen Platte für die Einlassöffnung. </li><li> Bohren Sie ein 1/2 Zoll Loch im Boden / Mitte der Rückwand für die Austrittsöffnung. </li><li> Montieren Sie die Austrittsöffnung, indem Sie den Gewindeteil des 3/8 Zoll Wanddurch Adapter durch die Rückwand der Dampfkammer, in der Austrittsöffnung Loch. Bringen Sie die Mutter von derinnerhalb der Kammer in Position zu halten. </li><li> Entfernen Sie die Schutzabdeckung aus Polycarbonat-Platten. </li><li> Befestigen Sie die 1-Zoll-Stück von PEX-Schlauch an den T-Verbinder und die Kraft der PEX-Schlauch durch das Loch in der Decke der Kammer von innen. </li><li> Bringen Sie ein 3/8 Zoll 90 Ellenbogen an die Spitze der 1-Zoll-PEX-Schlauch von außen. HINWEIS: Bohren Sie ein 1/2 Zoll Loch in der Tür und legen Sie eine 1/2 Zoll Dichtung Septen in das Loch. </li><li> Wiederholen Sie die Schritte 1 bis 22 für die Luftkammer nur steuern. </li></ol> 2. Rack und Luftzufuhranordnung <ol><li> Wenn Platzierung der Kammern auf der in der Materialliste genannten Warenkorb / Rack, montieren den Wagen nach den Anweisungen des Herstellers. </li><li> Mit Ersatz Muttern und Schrauben, befestigen ein Reststück von Polycarbonat mit der Zahnstange, um die Volumenstromregler halten. </li><li> Überall auf dem Schrott Stück Polycarbonat, markieren und Bohrer 3/4 Zoll Löcher für die Luftaufsichtsbehörden und Regulatoren zu befestigen mit den Mutternzur Verfügung gestellt. </li><li> Befestigen 3/8 Zoll Wanddurch Adapter an den Eintritts-und Austrittsöffnungen der Luftmengenregler. </li><li> Montieren Sie den Ethanol-Kolben mit Belüftungsstein, # 8 Stopper und Schnell In-Line-Steckverbinder. </li><li> Verwendung von 3/8 Inch Tygon-Schlauch, verbinden die Durchflussreglern mit der Luftpumpe und Ethanol Kolben wie in Fig. 1 gezeigt. </li><li> Für die einzige Luftkammer, befestigen die Austrittsöffnung des Luftstromreglers mit dem Einlass 3/8 Zoll Ellbogen 90 mit 3/8 Zoll Tygon-Schlauch, wie in Fig. 1 gezeigt. </li></ol><img alt="Figur 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51839/51839fig1highres.jpg" width="500"> 1. Schematische Darstellung der Anordnung der Dampfkammern. Ein T-Verbinder mit dem rauscharmen Luftpumpe angebracht. Eine Seite des T-Verbinders ist direkt an einen Volumenstromregler für die Luft nur Dampfkammer verbunden ist. Die anderen side wieder aufgeteilt und an zwei verschiedenen Volumenstromregler, einer für Luft und einen für Ethanol beigefügt. Die Luftkammer ist direkt mit dem Regler verbunden, wie gezeigt. Für die Ethanoldampf Kammer wird ein Volumenstromregler auf der Belüftungsstein in flüssigem Ethanol in der Filterkolben eingetaucht ist. Der Seitenarm-Port der Saugflasche ist mit dem Ausgang des Luftregler verbunden, wie angegeben. Das fusionierte Ethanoldampf und Luft wird dann zu dem Einlaß des Ethanoldampfkammer verbunden ist. Die Austrittsrohre (nicht gezeigt) an einer Lüftungsöffnung in dem Raum verbunden. 3. Testen Vapor Chambers und Stellen Ethanol Levels <ol><li> In 600 ml 190 Proof Ethanol zu der Filterflasche, legen Sie die Belüftungs Stein und Haken bis zu Rohr an dem Seitenarm des Kolbens Einlass. </li><li> Schließen Kammertüren und wiederum auf die Luftpumpe. </li><li> Volumenstromregler einstellen, so dass etwa halb so viel Luft durch die Flüssigkeit Alkohol als Luft ist es mit gemischt fließt. AdjusT die Luft nur Luftstrom zur kombinierten Strom des Alkohols und der Luftkammer Ethanol. </li><li> Kammern ermöglichen, für mindestens 30 min äquilibrieren gelassen, bevor die Messung der Luftethanolkonzentration. </li><li> Messen Sie Luft Ethanol-Konzentration durch Extraktion 5 ml Luft mit einer 18G Nadel und einer 60-ml-Spritze durch das Septum. Verdünnen, dass die Probe mit der Raumluft, indem Sie den Kolben wieder auf 60 ml (1.12 Verdünnung). Messen Sie Luft Ethanol Ebene mit Alkoholtester gemäß den Anweisungen des Herstellers. Die Verdünnung der Kammerluft benötigt wird, um Alkoholdampf Ebenen innerhalb des Erfassungsbereichs des Alkohol erzielen. HINWEIS: Bei Verwendung von verschiedenen Ebenen der Alkohol-Exposition die Verdünnung muss unter Umständen angepasst werden. </li><li> Als Ausgangspunkt, wie nötig, um eine Luftalkoholkonzentration von etwa 4,5 bis 5 g / dl (g verdampften Alkohol pro dl Luft) zu erreichen passen Sie die Volumenstromregler. </li></ol> 4. Tierzucht <ol><li> Gruppenhaus Weibchen C578BL / 6 Mäusen (2-3 Monate alt) für mindestens 1 Woche, um Eierstockzyklen synchronisieren. </li><li> Individuell Haus männlichen C57BL / 6 Mäuse (2-5 Monate alt) für mindestens 2 Wochen. </li><li> Nach der Synchronisierung, setzen Sie ein einzelnes Weibchen mit einem Männchen für 5 Tage bis zur Paarung zu ermöglichen. </li><li> Nach der Paarung, entfernen Männchen und Weibchen Haus individuell und legen Sie sie in die Kammern. </li></ol> 5. Pre-und Post-Natal Ethanol Vapor Belichtungs <ol><li> Expose schwanger Dämme Ethanoldampf für 4 Stunden pro Tag ab 10 Uhr während des Licht-Zyklus (Licht an von 6.00 bis 06.00 Uhr), außer dem Tag der Geburt bis zum Tod zu verhindern pup. </li><li> Wiegen Dämme an Schwangerschafts-Tag (G) 5, G13-G14, G20 und G18-Schwangerschaften zu überwachen; Bettwäsche wurde an den Tagen, dass Frauen wurden gewogen, um die Handhabung zu minimieren geändert. </li><li> Jeder Tag ersetzen, das Essen für die Ethanol-exponierten Gruppen Verbrauch von Pellets mit jeder in sie aufgenommen Ethanol zu vermeiden. </li><li> Am TagGeburt keine Tiere aussetzen. Nach der Geburt setzen die Dämme und Welpen für 4 Stunden pro Tag ab 10 Uhr von P1-P12. </li><li> Wiegen Welpen auf P2, P8, P12, P25 und; und Bettzeug wechseln auf P8 und P12 zusätzliches Handling zu minimieren. </li><li> Unmittelbar nach der letzten Exposition (P12), übertragen Sie die Käfige zu einem Standard-Tierhaltungsraum. </li></ol>

Die Autoren haben nichts zu offenbaren.

Hier beschreiben wir detailliert die Methoden für den Bau von Dampfinhalationskammern. Materialien und Werkzeuge erforderlich sind, um die Kammern zu bauen sind leicht von einer Reihe von kommerziellen Anbietern und die Schritte zur Konstruktion der Kammern sind relativ unkompliziert. Das System, das wir hier beschreiben keine Inline-Rückschlagventile enthalten, um den Rückfluss und Vermischung zu verhindern. Wir konnten keine nachweisbare Ethanol in der Luft zu messen nur Kammern was darauf hindeutet, dass wir keine Mi...

Trinken während der Schwangerschaft kann den Fötus schädigen, was zu anhaltenden Veränderungen in vielen Organen und Systemen, die die Lebensqualität für die betroffenen Menschen und ihre Familien deutlich verringern. Es wird geschätzt, dass ca. 10-30% der Frauen trinken während der Schwangerschaft in den USA, mit 1-8% in einer Binge drinking Muster 1,2. Die Palette der Wirkungen von Ethanolexposition während der fetalen Entwicklung hergestellt wird kollektiv als fetale Alkohol-Spektrum-Störungen (FASDs) bekannt. Aktuelle Schätzungen zeigen, dass FASDs sind ein großes Gesundheitsproblem mit einer Prävalenz so hoch wie 2-5% in den USA drei. Je schwerer Manifestation FASDs ist Fetale Alkoholsyndrom (FAS), die durch Wachstumsverzögerung, kraniofaziale Anomalien, neurologisch und Defizite, einschließlich Lernschwierigkeiten gekennzeichnet ist. Die Prävalenz von FAS wurde geschätzt, 0,2-0,7% in der US 3 sein. Die derzeit verfügbaren Behandlungen für FASDs sind nur teilweise wirksamund Entwicklung von effektiveren Behandlungen wird durch die schlechte Verständnis der zellulären und molekularen Grundlagen dieses komplexen Spektrum von Erkrankungen beschränkt. Daten aus dem National Birth Defects Prevention Study (NBDPS) zeigen, dass schwangere Frauen am häufigsten während des 1. Trimesters trinken, vor der Schwangerschaft festgestellt worden ist, gefolgt von der Abstinenz während der späteren Stadien der Schwangerschaft 2. Die NBDPS auch festgestellt, dass die zweithäufigste Muster von Ethanolkonsum während der Schwangerschaft trinken geht durch alle Trimester der Schwangerschaft 2. Die Gründe dafür sind mangelnde Bewusstsein über die potenziell schädlichen Auswirkungen von Ethanol fetalen Exposition (selbst bei niedriger Dosierung), begrenzter Zugang zu Schwangerschaftsvorsorge, positive Geschichte für neuropsychiatrische Störungen und Missbrauch oder Abhängigkeit von Ethanol 4. Interessanterweise berichtete die NBDPS, dass die dritthäufigste Konsummuster beteiligt Abstinenz während der 1 <sup&gt; Und 2. Trimester während des 3. Trimesters, wenn es oft angenommen wird, dass das Trinken ist sicher, weil Organogenese wurde größtenteils abgeschlossen, gefolgt von Verbrauch. Allerdings ist das 3. Trimester eine Zeit der hohen Anfälligkeit für Ethanol-induzierten Schäden des Nervensystems, denn dies ist eine Zeit, in neuronalen Schaltkreisen zu unterziehen tiefe Verfeinerung 2. Die NBDPS identifiziert andere, weniger häufige Muster des Alkoholkonsums während der Schwangerschaft auftreten, einschließlich Verbrauch während der 1. und 2. Trimester, gefolgt von Enthaltsamkeit während des 3. Trimenon 2. In einem Versuch, die verschiedene Muster von Ethanolkonsum bei schwangeren Frauen beobachtet Modell, eine Anzahl von Entwicklungsethanolexposition Paradigmen wurden mit verschiedenen Tierarten festgelegt, an Ratten und Mäusen am üblichsten 5,6. Die Dauer der Schwangerschaft bei diesen Tieren in der Regel lasts ca. 3 Wochen, die an der 1. und 2. Trimester der Schwangerschaft beim Menschen entspricht. Viele Nager Studien haben die Auswirkungen der verschiedenen Dosen und Muster der Ethanolexposition während dieser Zeit bewertet. Beispiele für die Verfahren und Ratten häufig verwendet, um Ethanol zu verwalten schwangeren Mäusen die Verabreichung über flüssige Ernährung 7,8, Zugabe von Ethanol zum Trinkwasser 9,10, freiwillige Trink von Saccharin gesüßt Lösungen 11, 12 Magensonde, Dampf Inhalation 13 und subkutane oder intraperitoneale Injektion 14. Die Ergebnisse dieser Studien haben mehrere der in den Menschen mit FASDs beobachteten Defizite rekapituliert, was zeigt, dass die Exposition während der frühen Stadien der Schwangerschaft ist ausreichend, um über neuronale Schaltkreise des Gehirns (in 6,15 bewertet) beschädigen. Versuche mit Nagetieren haben auch gezeigt, daß während der Belichtung entspricht der 3. </sup&gt; Trimester der Schwangerschaft beim Menschen, die in etwa den ersten 1-2 Wochen der postnatalen Leben in Ratten und Mäusen deutlich die Entwicklung des Gehirns beeinträchtigen. Exposure in diesem Zeitraum hat sich durch die Gabe von Ethanol zu neonatalen Ratten oder Mäuse modelliert. Ethanol hat auf diese Tiere mit einer Vielzahl von Methoden, einschließlich Fütterung über Gastrostomie bei künstlich aufgezogenen Tieren 16-18, intragastrischen Intubation 19, 20 subkutane Injektion, Inhalation und Dampf 21,22 verabreicht. Diese Studien haben überzeugend gezeigt, dass das Gehirn Wachstumsschub ist eine Zeit der hohen Anfälligkeit für die Auswirkungen auf die Entwicklung von Ethanol 6. Wie oben erwähnt, trinken während aller Trimester der Schwangerschaft ist ein häufiges Muster von Ethanolkonsum bei Frauen zwei. Allerdings haben vergleichsweise wenige Studien die Auswirkungen dieser Expositionsmuster anhand von Tiermodellen untersucht. Einige dieser Studien haben advantag genommene von großen Tieren, wo das 3. Trimester-Äquivalent tritt in utero nicht der neonatalen Periode wie in dem Fall von Ratten und Mäusen. Diese Tiermodelle sind nicht-menschlichen Primaten 23,24 und Schafe 25-27. Allerdings sind diese Tiermodellen nicht weit verbreitet in FASDs Forschung, teilweise wegen der hohen Kosten und die Notwendigkeit für spezialisierte Einrichtungen. Nagetiere wurden häufiger verwendet, um die Wirkung von all-Trimester Ethanolexposition auf die fetale Entwicklung 5 charakterisieren. Meerschweinchen haben in dieser Hinsicht aufgrund ihrer umfassenden pränatalen Entwicklung und Gemeinsamkeiten in der Hirnreifung dem des Menschen besonders vorteilhaft 28,29 gewesen. Mit Meerschweinchen, war es möglich, die Wirkung von Ethanol Exposition in utero, die das Äquivalent Entwicklungszeit des menschlichen 3. Trimester umfasst charakterisieren. Die vergleichsweise hohen Kosten dieser Tiere sowie die relativ lange Dauer der Schwangerschaft(~ 67 Tage), ihre Verwendung zu einigen Laboratorien, die auf FASDs Forschung beschränkt. Wegen ihrer Wirtschaftlichkeit und den breiten Einsatz in der biomedizinischen Forschung, haben Forscher Ratten verwendet, um die Exposition zu Ethanol in allen Trimester der Schwangerschaft zu modellieren. In ersten Studien wurden die Ratten während der Schwangerschaft über flüssige Ernährung gefolgt von der Verabreichung von Ethanol über Gastrostomie künstlich aufgezogen Neugeborenen (postnatalen Tag (P) 10.1), was zu Spitzenblutethanolkonzentrationen (BEC) in den Staudämmen von 0,08 g / dl ausgesetzt und in der Welpen 0,16 g / dl. Dieses Paradigma verursacht dauerhafte Veränderungen im Sehnerv Myelinisierung und die Zahl der Bergmann Gliazellen Fasern im Kleinhirn 30-32 reduziert. Ebenso Maier und Mitarbeiter mit künstlichen Haltungsbedingungen über intragastrischen Intubation, gefolgt von Neugeborenen-Verwaltung während eines Teils des 3. Trimesters Äquivalent (P4-9) 33,34 verabreicht Ethanol, schwanger zu Ratten-Muttertiere in einer Binge artig. PEAK Mutter und Welpen BECs waren 0,3 g / dl bei beiden Schwangerschafts Tag 20 und P6. Das All-Trimester Exposition Paradigma führte zu Wachstumsverzögerungen, die deutlich größer ist als bei Jungtieren während ausgewählter Perioden der Schwangerschaft ausgesetzt 33 beobachtet wurde. Zusätzlich Ratten zu Ethanol während des gleichen für alle Trimester ausgesetzt zeigte eine Reduktion in der Anzahl der Purkinje und Granulatzellen, die größer ist als die bei Tieren während anderer Perioden 34 ausgesetzt wurde beobachtet. Ermäßigungen in Hippocampus-Zellzahlen wurden auch mit diesem Paradigma berichtet, aber diese Effekte scheinen eine Folge der Exposition während des 3. Trimester-Äquivalent 35 in erster Linie sein. Eine Methode, die Ethanol-Verwaltung beinhaltet über intragastrischen Magensonde zu beiden trächtigen Ratten und neugeborenen Mäusen wurde auch verwendet, um alle Trimester Exposition 36 modellieren. Diese Methode, die BECs von 0,13 g / dl bei den Muttertieren (Schwangerschafts Tag 17) und 0,24 g / dl bei P6 Welpen, induziert lon ergabg anhaltende Veränderungen in der Monoamin-Neurotransmitter-Spiegel im Hippocampus und Hypothalamus, und erhöhten Expression der DNA-Methyltransferasen und Methyl-CpG-Bindungsprotein 2 im Hippocampus 37,38. Mit einer ähnlichen Exposition Paradigma (BEC = 0,14 bis 0,2 g / dl bei Dämmen und 0,2 g / dl bei Jungtieren), 39 wurde eine Zunahme der Zahl der neuen unreifen Nervenzellen im Gyrus dentatus von erwachsenen Ratten Gil-Mohapel et al., Dass kann ein Ausgleichsmechanismus, um Ethanol-induzierten neuronalen Schäden oder eine Änderung bei der Reifung von Erwachsenen geboren Neuronen darstellen. Die Ermittler haben auch versucht, alle Trimester Ethanolexposition zu modellieren, indem Dämme über flüssige Nahrung oder Wasser sowohl während der Schwangerschaft und Stillzeit 9,40 trinken. Allerdings ist der Nutzen der Freilegung der Welpen über die Muttermilch begrenzt, weil es typischerweise zu niedrig pup BECs (zB 0,002 bis 0,05 g / dl, 41,42). Mäuse wurden auch verwendet extensively um die Wirkungen der Entwicklungsethanolexposition zu charakterisieren. Dieses Tiermodell teilt viele der oben für die Ratten-Tiermodell beschrieben, mit dem zusätzlichen Vorteil, die viele Stärken genetisch veränderte Mausstämme sind vorhanden 5. Mäuse wurden erfolgreich eingesetzt, um die Auswirkungen von Ethanol in der 1., 2. oder 3. Trimester der Schwangerschaft 43,44 charakterisieren. Doch die Auswirkungen der Exposition auf alle Trimester diesen Tieren nicht gut aus, da es technisch schwieriger zu Mäusen während der äquivalent zu allen Trimestern der Schwangerschaft aussetzen. Zum Beispiel künstliche Aufzucht und Magensonde, die in Ratten erfolgreich eingesetzt wurden, erfordern spezielle Verfahren bei Mäusen 45. Nach bestem Wissen unseren Erkenntnissen nur eine Studie hat bisher versucht, die Wirkung aller Trimester Ethanolexposition mit Mäusen zu studieren; Diese Tiere wurden zu Ethanol-Lösung im Trinkwasser ausgesetzt During Schwangerschaft und Stillzeit 46. Maternal BECs waren 0,07 g / dl und Welpen BECs wurden nicht bestimmt, aber erwartet, dass ein Bruchteil der in Dämmen sein. Hier beschreiben wir ein neues Modell für alle Trimenon Ethanol Exposition von Mäusen, wo Alkohol an beide schwanger Dämme und Neugeborenen über Dampfinhalationskammern verabreicht. Dampfkammern wurden auf der Grundlage einer früheren Design-47 gebaut. Wir bieten detaillierte Anleitung, wie man die Inhalation Kammern zu bauen und führen Sie die Belichtungsverfahren. Wir bieten auch Informationen über die BECs, die erreicht werden können und die Auswirkungen der Exposition auf pup Überleben und Wachstum.

<table><tbody><tr><td>Polycarbonat 1/4" klar 48" x 24"</td> <td>McMaster-Carr</td><td>8574K23</td><td>10</td></tr><tr><td>Moosgummi Kolbendichtung 3/8" b x 7/32" h</td><td>McMaster-Carr</td><td>93085K67</td><td>10 ft</td></tr><tr><td>Anschweißen #16</td><td>McMaster-Carr</td><td>7515A11</td><td>3</td></tr><tr><td>Klavierscharnier 12" lang</td><td>McMaster-Carr</td><td>1658A11</td><td>2 x 1 ft</td></tr><tr><td>Niederhalter Standard</td><td>McMaster-Carr</td><td>5126A26</td><td>8</td></tr><tr><td>PEX Schlauch 1/2"</td> <td>McMaster-Carr</td><td>51275K88</td><td>10 ft</td></tr><tr><td>T-Stück mit Widerhaken (Schwarz) Stück 10</td><td>McMaster-Carr</td><td>5463K608</td><td>1</td></tr><tr><td>Steckverschraubung mit Widerhaken (Schwarz) Stück 10</td><td>McMaster-Carr</td><td>5462K79</td><td>1</td></tr><tr><td>Rohrverschraubung mit Widerhaken (Schwarz) Stück 10</td><td>McMaster-Carr</td><td>5463K596</td><td>1</td></tr><tr><td>3/8" Durchgangsadapter, Rohr auf Gewinderohr</td><td>McMaster-Carr</td><td>5463K851</td><td>1</td></tr><tr><td>Phillips Maschinenschraube 4-40</td><td>McMaster-Carr</td><td>91772A112</td><td>1</td></tr><tr><td>Maschinenschraube Sechskantmutter 4-40</td><td>McMaster-Carr</td><td>90480A005</td><td>1</td></tr><tr><td>Einbau-Durchflussmesser 2-20</td><td>McMaster-Carr</td><td>41945K76</td><td>3</td></tr><tr><td>KOLBEN, FILTER 1.000 ml 6/PACK</td><td>VWR</td><td>89001-800</td><td>arabische Ziffer</td></tr><tr><td>Präzisionsdichtung Septen</td><td>VWR</td><td>89084-490</td><td>1</td></tr><tr><td>VWR Schwarz Gummistopfen #8 1-Loch</td><td>VWR</td><td>59581-367</td><td>1</td></tr><tr><td>ROHR TYGON R3603 3/8X9/16 50'VWR</td><td></td> <td>89068-556</td><td>1</td></tr><tr><td>ROHR TYGON R3603 1/4X11/16 50'VWR</td><td></td> <td>89068-502</td><td>1</td></tr><tr><td>Belüfterstein P2120</td><td>VWR</td><td>32573-007</td><td>1</td></tr><tr><td>3/8" T-Verbinder Pk von 20</td><td>VWR</td><td>46600-060</td><td>1</td></tr><tr><td>VWR Trennschalter konisch Pk von 10</td><td>VWR</td><td>46600-110</td><td>1</td></tr><tr><td>3/8 Schlauch Tülle Ventil Inline-Kupplung</td><td>Colder Products Company</td><td>HFCD17612</td><td>1</td></tr><tr><td>Luftpumpe mittlere Kapazität</td><td>LMI Hersteller</td><td>DB60L</td><td>1</td></tr><tr><td>Nexelate Drahtregal 36 "B x 24" T x 63 "H</td><td>Globale</td><td>industrielle T9A990135</td><td>1</td></tr><tr><td>Vorbaurollen Set mit (4) 5" Polyurethan Rad</td><td>Global Industrie</td><td>T9A500591</td><td>1</td></tr></tbody></table>

bau von dampfkammern verwendet, um mäuse zu alkohol expose während der equivalent aller drei trimester der human development

Construction of Vapor Chambers Used to Expose Mice to Alcohol During the Equivalent of all Three Trimesters of Human Development

Alkoholexposition in der Entwicklung kann in einer Konstellation von morphologischen und Verhaltensauffälligkeiten, die kollektiv als Fetal Alcohol Spectrum Disorders (FASDs) bekannt sind, führen. Am schwersten Ende des Spektrums ist Fetale Alkoholsyndrom (FAS), gekennzeichnet durch Wachstumsverzögerung, kraniofaziale Dysmorphien und Neuropsychologische Defizite. Studien mit Tiermodellen, einschließlich Nagetiere, haben viele molekularen und zellulären Mechanismen in der Pathophysiologie beteiligt FASDs erläutert. Ethanol Verwaltung, schwanger zu Nagetieren wurde verwendet, um die Exposition des Menschen während der ersten und zweiten Trimester der Schwangerschaft zu modellieren. Dritten Trimester Ethanolkonsum bei Menschen wurde mit neonatalen Nagern modelliert. Allerdings haben einige Studien an Nagetieren die Wirkung der Ethanolexposition während der äquivalent zu allen drei Trimester der Schwangerschaft beim Menschen, ein Muster der Exposition, die häufig bei schwangeren Frauen aus. Hier zeigen wir, wie man Dampfkammern aus leicht zu bauen obtainable Materialien, die jeweils Platz für bis zu sechs Standard-Maus-Käfigen. Wir beschreiben eine Dampfkammer Paradigma, das verwendet werden kann, um Muster der Exposition gegenüber Ethanol bei minimaler Handhabung während aller drei Trimester. Unsere Studien zeigen, dass schwangere Dämme entwickelt signifikante metabolische Toleranz zu Ethanol. Allerdings hat neugeborenen Mäusen nicht entwickeln metabolischen Toleranz und die Anzahl der Föten, Gewicht Fötus, der Plazenta Gewicht, Anzahl der Jungtiere / Wurf, die Anzahl der toten Welpen / Wurf Welpen und Gewicht wurden durch Ethanolexposition nicht signifikant beeinflusst. Ein wichtiger Vorteil dieses Paradigma ist die Anwendbarkeit auf Studien mit genetisch modifizierten Mäusen. Zusätzlich minimiert dieses Paradigma Umgang mit den Tieren, eine große verwechseln in fetalen Alkohol-Forschung.

2A zeigt, dass sowohl schwangeren Mäusen und neonatalen Nachkommen wurden relativ stabil Ethanoldampfkonzentration in den Kammern ausgesetzt. Dies lag zwischen 4-6 g / dl. 2B zeigt die in den schwangeren Mäusen als Funktion der Zeit erreicht BECs. BECs wurden mit einem Standard-Alkohol-Dehydrogenase-Assay auf Basis 48 gemessen. Am G5, stieg schnell auf BECs ~ 60 mM 2 Stunden nach Beginn der Exposition und ihren Höhepunkt am Ende der 4 Stunden Belichtungszeit. BECs allmählich ...

Wir zeigen den Aufbau der Alkoholdampf Kammern mit leicht verfügbaren Materialien, die gleichzeitig beherbergen 6 Mäusekäfige. Wir beschreiben weiter ihre Verwendung in einem Mausmodell der fetalen Alkohol-Exposition entspricht allen 3 Trimester der Schwangerschaft beim Menschen. Dieses Paradigma macht Tieren während der Trächtigkeit und postnatalen Tag 1-12.

Bau von Dampfkammern verwendet, um Mäuse zu Alkohol Expose Während der Equivalent aller drei Trimester der Human Development

Exposure to alcohol during development can result in a constellation of morphological and behavioral abnormalities that are collectively known as Fetal ...

In diesem Video zeigen wir Ihnen, wie man Alkoholdampfkammern konstruiert und zusammenbaut. Wir werden auch ein Paradigma der Alkoholinhalation beschreiben, das Maas während des Äquivalents aller drei Trimester der menschlichen Entwicklung freilegt. Die Kammern sind hochgradig an den gewünschten Blutalkoholspiegel oder Expositionsparadigmen anpassbar.Unser Kammerdesign kann bis zu sechs Mauskäfige in Standardgröße beherbergen, in denen Mäuse Zugang zu Futter und Wasser haben. Dieses Paradigma führt sowohl bei trächtigen Mäusen als auch bei Welpen ohne die Verwendung von Rosol zu relativ hohen Blutalkoholspiegeln. Wir hören aus dem Labor von Fernando Valenzuela an der Universität von New Mexico.In diesem Video demonstrieren wir den Zusammenbau von Polycarbonat-Ethanol-Dampfkammern und beschreiben ihre Verwendung in einem Mausmodell für alle drei Trimester der fetalen Alkoholexposition. Jeder, der über grundlegende Tischlerkenntnisse verfügt, wird in der Lage sein, die Kammern zu konstruieren, und die Abmessungen können an die individuellen Bedürfnisse angepasst werden. Die Kammern können während der gesamten Exposition in der Tieranlage untergebracht werden und minimieren den Stress im Zusammenhang mit dem Transport und der Handhabung der Tiere.Aufgrund von Unterschieden in den Entwicklungsstadien wurde die Ethanolverabreichung an trächtige Nagetiere verwendet, um die Exposition des Menschen während des ersten und zweiten Trimesters zu modellieren, während die Ethanolverabreichung an Neugeborene zur Modellierung der Exposition im dritten Trimester verwendet wurde. Diese Kammern sind so konzipiert, dass sie mehrere Mäusekäfige gleichzeitig beherbergen und trächtige Muttertiere sowie Neugeborene, die bei ihrer Mutter untergebracht sind, freilegen. Zu den Vorteilen dieses Paradigmas der Alkoholexposition gehören die Möglichkeit, alle drei Trimester der Entwicklung nachzuahmen, die Reduzierung des Stresses für trächtige Muttertiere und Welpen sowie die Flexibilität bei der Kontrolle über die Höhe der Ethanolexposition.An fünf einzelnen 24 x 48 Zoll großen Stücken mit einer Dicke von einem Viertelzoll messen und markieren durchsichtige Polycarbonatplatten die angegebenen Abmessungen für oben, unten, vorne, hinten, Seiten und die Tür. Diese Abmessungen ergeben eine Kammer von 32 Zoll Breite, 22 Zoll Tiefe und 14 Zoll Höhe. Eine Kammer dieser Größe bietet ausreichend Platz für sechs Standard-Mäusekäfige mit den Maßen 11 1/2 Zoll mal siebeneinhalb Zoll mal fünfeinhalb Zoll Höhe.Es ist wichtig, sich daran zu erinnern, dass dies nur eine einzige Kammer bietet, und dieser Vorgang muss wiederholt werden, um zwei identische Kammern zu erhalten, eine Kammer für die Alkoholexposition und eine Kammer für die kontrollierte Exposition an der Luft. Die Polycarbonatplatten können mit einer Kreissäge geschnitten werden, die mit einem Sägeblatt mit 80 Zähnen ausgestattet ist, oder mit einer Stichsäge, die mit einem speziellen Sägeblatt aus Kunststoff oder Plexiglas ausgestattet ist. Schneiden Sie die Polycarbonatplatten auf die gemessenen Abmessungen zu und achten Sie dabei so gut wie möglich, um gerade Schnitte zu gewährleisten.Dadurch werden die Lücken während des Montageprozesses reduziert, sobald alle Teile geschnitten sind. Messen Sie ein acht x 16 Zoll großes Rechteck in der Mitte der Frontplatte, um eine Öffnung für die Tür zu schaffen. Bohren Sie mit einem drei Acht-Zoll-Bohrer ein Loch in die Innenseite jeder Ecke.Die Löcher werden verwendet, um die Vorrichtungs-Unterklinge durch die Polycarbonatplatte einzuführen und die Öffnung wegzuschneiden. Bei Verwendung einer Kreissäge kann ein Tauchschnitt durchgeführt werden. Möglicherweise sind ein paar Rückschnitte erforderlich, um die Kanten in der Nähe der Ecken zu reinigen.Sobald alle Kanten geschnitten sind, kann das Mittelstück entfernt werden und Sie haben eine Öffnung in der Frontplatte. Um mit dem Zusammenbau der Tür zu beginnen, markieren Sie die Löcher, die zum Befestigen des Klavierscharniers an der Tür benötigt werden. Mit einem 16. Zoll Bohrer, der Senklöcher an den Markierungen bohrt, nehmen diese Senklöcher den Kopf der Schraube auf und sollten nur auf halber Höhe durch die Polycarbonatplatte gebohrt werden.Schließen Sie mit drei 16-Zoll-Bohrern die Löcher durch das Blech ab, indem Sie die Senklöcher als Leitfaden für die Montage verwenden. Entfernen Sie etwa zwei Zoll der Schutzhülle der Polycarbonatplatten, um das Schweißen der Teile zu ermöglichen. Der Montageprozess kann schnell vonstattengehen, daher kann es hilfreich sein, die untere, hintere, vordere und seitliche Seite auszulegen, bevor die Teile zusammengeschweißt werden.Verwenden Sie zum Schweißen des Polycarbonats die schnell abbindende Schweißnaht auf 16 Lösungsmittelzement. Um mit der Montage zu beginnen, fügen Sie eine großzügige Schweißnaht an der Unterkante des Seitenteils hinzu. Wischen Sie alle Schweißtropfen sofort mit einem Papiertuch ab.Legen Sie die Seite mit Hilfe auf das untere Stück. Montieren Sie den Rest der Wände am Boden der Kammer. Denken Sie daran, dass bei den angegebenen Abmessungen die Seitenteile zwischen die Vorder- und Rückseite passen.Sobald die Wände zusammengebaut sind, füllen Sie alle Lücken zwischen den Fugen von innen mit dem Weldon. Um die Oberseite der Kammer zu befestigen, füge eine großzügige Menge Weldon an der Oberseite jeder Wand hinzu. Setzen Sie die obere Platte auf die Wände, und richten Sie die Kanten aus.Verwenden Sie Stangenklemmen, um alles an Ort und Stelle zu halten, während die Schweißnaht aushärtet. Alternativ können während des Aushärtungsprozesses schwere Lehrbücher verwendet werden, um sicherzustellen, dass die Tür bündig an der Außenseite der Kammer aufliegt. Ein ein Zoll mal 12 Zoll großes Stück Polycarbonat muss einen Zoll unter der Öffnung an die Frontplatte geschweißt werden.Das Scharnier wird an diesem Abstandshalter befestigt und ermöglicht es der Tür, die Kammer abzudichten. Um den Einlassschlauch zu konstruieren, schneiden Sie zwei Stücke eines halben Zoll Polyethylenschlauchs mit einer Länge von 12 Zoll ab. Schneiden Sie auch ein 1-Zoll-Stück Polyethylenschlauch ab, um den verdampften Alkohol- oder Luftbohrer abzugeben.Ein Loch von fünf 16 Zoll etwa einen Zoll vom Ende jedes der 12 Zoll großen Stücke Polyethylenschlauch entfernt. Montieren Sie das Luftzufuhrsystem mit zwei Drei-Achtel-Zoll-Steckern und einem Drei-Achtel-Zoll-T-Stecker. Stellen Sie sicher, dass die Löcher, die Sie in den Polyethylenschlauch gebohrt haben, am weitesten vom T-Anschluss entfernt sind.Befestigen Sie das Klavierscharnier an der Tür und stellen Sie sicher, dass die Senklöcher nach oben zeigen. Befestigen Sie das Klavierscharnier mit vier 40er Schrauben und Muttern an der Tür. Nehmen Sie die Tür als Leitfaden und markieren Sie die Löcher für das Klavierscharnier an dem 1-Zoll-Abstandshalter an der Frontplatte mit einem 16-Zoll-Bohrer.Bohren Sie die Löcher in die Frontplatte, um die Tür mit vier Schrauben und Muttern der Maschine 40 zu befestigen. Befestigen Sie die Tür und das Klavierscharnier an der Frontplatte. Mit einem Schraubenschlüssel festziehen.Montieren Sie den Halter. Schnellspanner wie abgebildet. Markieren Sie die Löcher des Schnellspanners an der Frontplatte mit der Tür als Führung.Wiederholen Sie dies für zwei Schnellspanner entlang der Oberseite und einen auf jeder Seite der Tür mit einem drei 16-Zoll-Bohrer. Bohren Sie die Löcher für die Schnellspanner. Befestigen Sie die Schnellspanner mit vier Schrauben und Muttern der Maschine 40.Ziehen Sie die Muttern an der Innenseite der Kammer mit einem Schraubenschlüssel fest, um eine luftdichte Kammer zu gewährleisten. Schneiden Sie drei Achtel Zoll breite Gummidichtung entlang der Kante der Tür ab und befestigen Sie sie. Wenn die Tür geschlossen ist, bildet die Glühbirne einen luftdichten Verschluss zwischen der Tür und der Frontplatte der Kammer.Markieren Sie die Mitte der oberen Platte, um mit einem fünf Acht-Zoll-Bohrer eine Einlassöffnung für die Kammer zu erstellen. Bohren Sie das Loch für die Einlassöffnung. Erstellen Sie eine Auslassöffnung, indem Sie ein halbes Zoll Loch in die untere Mitte der Rückwand bohren.Setzen Sie einen Drei-Zoll-Durchgangswandadapter in den Ausgangsanschluss ein und befestigen Sie ihn von der Innenseite der Kammer. In diesem Stadium kann die Schutzhülle entfernt werden. Installieren Sie das Zuluftsystem von außen durch das Loch in der oberen Platte.Führen Sie einen drei acht Zoll 90-Grad-Winkel ein Bohren Sie ein halbes Zoll Loch in die Vorderseite der Tür. Führen Sie dann eine Dichtungssepten von einem halben Zoll in das Loch ein. Dieser dient als Anschluss zur Messung des Ethanoldampfes.Zu diesem Zeitpunkt ist das Schneiden und Bohren abgeschlossen und die Kammern können gereinigt werden. Montieren Sie das Gestell und platzieren Sie die beiden Kammern und das Luftpub auf dem Gitter. Um das Luftstromsystem zu organisieren, befestigen Sie ein Reststück Polycarbonat an der unteren Schale, das verwendet werden kann, um Luftstromregler zu montieren, Markierung und Bohrgriff für die drei Luftstromregler in das Schrottstück aus Polycarbonat.Befestigen Sie die Luftstromregler mit den mitgelieferten Muttern am Polycarbonat. Befestigen Sie an jedem Anschluss des Reglers für die Ethanol-Dampfkammer einen Drei-Zoll-Wandadapter. Ein Luftstromregler steuert die Luftmenge, die durch den flüssigen Alkohol gesprudelt wird, und einer steuert die Luftmenge, die mit dem verdampften Alkohol vermischt wird.Die letzte steuert die Luftmenge für die zweite reine Luftkammer. Setzen Sie die Alkoholflasche wie abgebildet zusammen. Mit drei Acht-Zoll-Rohren.Montieren Sie das Luftzufuhrsystem wie im Diagramm dargestellt mit T- oder Y-Verbindern, um die Leitungen zu teilen. Eine einzige Pumpe sorgt für einen ausreichenden Luftstrom sowohl für die reinen Luftsteuerkammern als auch für die Alkoholkammern. Verbinden Sie drei Acht-Zoll-Rohre mit den Auslassöffnungen.600 mil eines 90-prozentigen Ethanols werden in den Kolben gegeben und an das System angeschlossen. Um den Gehalt an Ethanoldampf zu testen, verwenden Sie eine Spritze und eine Nadel, um fünf mil Luft durch das Septin zu ziehen. Entfernen Sie die Nadel und verdünnen Sie die Luftprobe um eins bis 12, indem Sie die Spritze auf bis zu 60 ml ziehen.Mit Raumluft wird die Luft langsam durch den Alkoholtester gedrückt, um die Ethanoldämpfe zu messen. Die Gehalte an verdampftem Ethanol sollten für jedes einzelne System mit den Blutalkoholwerten von Tieren korreliert werden. Sobald sich die Kammern in der Tierhaltung befinden, denken Sie daran, die Kammern direkt in das Belüftungssystem des Raumes zu entleeren.Zwei bis drei Monate alte weibliche Mäuse wurden mindestens eine Woche lang in Gruppenhaltung gehalten, während zwei bis fünf Monate alte männliche Mäuse zwei Wochen lang einzeln untergebracht wurden. Weibliche Mäuse wurden fünf Tage lang mit einzeln untergebrachten Männchen gepaart, um die Paarung zu ermöglichen. Nach der Paarung wurden die Weibchen von den Männchen getrennt, einzeln in einem neuen Käfig untergebracht und in die Dampfkammern gesetzt.Die Tiere wurden vier Stunden pro Tag Ethanol ausgesetzt. Während des Lichtzyklus von G fünf bis G 20. Die Weibchen wurden regelmäßig gewogen, um die Trächtigkeit zu überwachen.Die Tiere wurden am Tag der Geburt nicht exponiert, um den Tod der Welpen zu vermeiden. Am ersten postnatalen Tag wurden die Welpen und Mütter wieder in die Kammern zurückversetzt und bis nach der Geburt exponiert. Die Welpen am Tag 12 wurden regelmäßig gewogen, um das Wachstum zu überwachen.Um die Dampfinhalation zu starten, platzieren Sie den Ort. Die einzeln untergebrachten trächtigen Mütter geben sowohl den Alkohol als auch die Luft nur ab. Kammern schließen und versiegeln die Türen.Fügen Sie den Flüssigethanolkolben hinzu, schließen Sie ihn an das System an und schalten Sie die Pumpe ein. Die Luftstromregler steuern die Menge an Luft, die in das flüssige Ethanol gelangt, und wie viel Luft mit dem Ethanoldampf vermischt wird. Das Verhältnis von Ethanoldampf und Luft steuert den endgültigen Ethanoldampfgehalt in den Kammern.Der Luftstrom wird nur auf den kombinierten Luftstrom von Ethanol und Luft eingestellt. Nach der Einwirkung des Ethanoldampfes wird das Lebensmittel verändert, um das Chow zu entfernen, das möglicherweise verdampftes Ethanol aufgenommen hat. Die Kammertüren sowohl in der Alkohol- als auch in der Nur-Luft-Kammer sind gesprungen, um den Luftaustausch mit dem Raum zu ermöglichen.In diesem Video haben wir gezeigt, wie man Ethanol-Dampfkammern zusammenbaut, und ein Maus-Alkoholdampf-Inhalationsparadigma beschrieben, das Tiere während aller drei äquivalenten menschlichen Trimester exponiert. Der Alkoholdampfgehalt kann leicht angepasst werden, um niedrige oder hohe Blutalkoholwerte zu modellieren. Einer der Vorteile dieser Kammern besteht darin, dass die Kammern groß genug sind, um mehrere Käfige an einem bestimmten Punkt unterzubringen.Auf diese Weise können die Tiere während der gesamten Exposition in den Kammern untergebracht werden. Dies minimiert den Stress, der dem Tier durch die Handhabung oder den Transport entsteht. Darüber hinaus kann dieses Paradigma an jedes Trimester von Interesse und/oder Expositionsniveau während des Baus angepasst werden.Es ist wichtig, dass alle Schnitte gerade und rechtwinklig sind, um eine luftdichte Kammer beim Schweißen der Polycarbonatstücke zu gewährleisten. Es ist wichtig, schnell und effizient zu handeln, da die Schweißnähte schnell trocknen. Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie in der Lage sein, Ihre eigenen Dampfinhalationskammern zu bauen.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Medicine

Medizin

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