Name: Erwerb von qualitativ hochwertigen digitalen Video Drosophila Larven und Verhalten der Erwachsenen aus einer seitlichen Perspektive (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-10-04T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min
Description: Lernen Sie eine einfache Mikroskopiemethode zur Aufnahme hochwertiger digitaler Videos von Drosophila-Mutantenphänotypen aus lateraler Perspektive. Diese Technik ist an verschiedene Stereomikroskopsysteme anpassbar.

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Die Autoren möchten sich Alexandra Opie für technische Hilfe und Unterstützung, James Barton für die Bereitstellung von Video-Erzählung anerkennen und Ramona Flatz und Joellen Sweeney für im zugehörigen Video erscheinen. Diese Arbeit wurde von der MJ Murdock Charitable Trust (Grant No 2012205 zu JED) unterstützt.

1. Die Stereomikroskopsystem Anmerkung: Obwohl dieses Protokoll einfach an praktisch jedem Stereomikroskopsystem mit der Fähigkeit zum Erfassen Video in einer Digitalkamera gekoppelt ist, werden die Details von der in unserem Labor verwendet (Tabelle Materialien / Equipment) System. <ol><li> Erwerben Sie digitale Videos mit einer trinokularen Stereomikroskop zu einem kommerziellen Digitalkamera gekoppelt ist. </li><li> Zur Kopplung des kommerziellen Digitalkamera an den trinokularen Anschluss des Stereo-Mikroskop, entfernen Sie die ½x C-Mount-Anschluss der Photozelle des Stereomikroskops und ersetzen Sie es mit einem 1X C-Mount. </li><li> Montieren Sie eine Digitalkamera Koppler (43 mm Gewinde) an die 1X C-Mount. </li><li> Halterung zwei Abwärts-Ringe, 58 mm bis 48 mm und 48 mm bis 43 mm, zu der Kamera-Koppler, um die Verbindung von der Digitalkamera Koppler an einem Linsenadaptersatz für die digitale Kamera brücken. </li><li> Montieren Sie die Digitalkamera an den Objektiv-Adapter-Kit. </li><li> Erwerben Video mit dem Mikroskop Vergrößerung und optischen Zoom der Digitalkamera-Set für eine kombinierte Vergrößerung von ca. 12x (30 Bilder pro Sekunde, 640 x 480 Pixel). Hinweis: Die Vergrößerung des Stereomikroskops muss in Übereinstimmung mit der neu rekonfiguriert 1X C-Mount-Anschluss des trinokularen kompensiert werden. </li></ol> 2. Imaging Drosophila Dritte Larvenstadium <ol><li> Band ein Permanent-Marker auf die schwarze Tischplatte von einem Stereomikroskop mit einer digitalen Kamera gekoppelt, so dass die Seite der Marker Kappe nimmt etwa ⅓ auf ¼ der vertikalen Bereich der in der Kamera LCD-Monitor beobachtet Blick. Verwenden Sie Marker Spitzen wie die Bühne, um Larven Bildgebung durchzuführen, weil sie in einer Auswahl von Farben, die Farbcode verwendet werden kann und differenzieren die Genotypen von Larven, die abgebildet sind. </li><li> Grenzen den Bereich der in der Digitalkamera LCD-Monitor auf der Oberfläche des Markers oben beobachtet Ansicht mit einer feinen SpitzeMarker. </li><li> Wählen Sie einen dritten Larvenstadium zu Bild. Die Kriterien für die Auswahl der dritten Larvenstadium war Körperlänge Austritt aus der Nahrungsmittelquelle während des Larven Phase des Lebenszyklus, die Anwesenheit von vorderen und hinteren Luftlöcher, und die Struktur der Unterkiefer Haken des Mundvorrichtung 11. Stellen Sie sicher, die Larve ist sauber durch Waschen Sie es gründlich in Wasser. </li><li> Beleuchten den Permanentmarker obersten Stufe von oben mit Licht aus einem Glasfaser-Beleuchtungssystem. Stellen Sie den Winkel des einfallenden Lichts, um eine optimale Ausleuchtung sorgen. </li><li> Fokussieren Sie das Mikroskop auf dem Rand des Permanentmarker Spitze. Beginnen Erfassen digitaler Video. </li><li> Legen Sie die Larve auf der Seite der Marker Kappe ca. 75 ° von der vertikalen Achse, etwas außerhalb des Blickfeldes, mit dem vorderen der Larve zugewandten Sichtfeld (Abbildung 1). Hinweis: Die Platzierung der Larve auf der Seite des Markers Kappe ermöglicht die Kamera auf Bewegung thE-Larve aus einer seitlichen Perspektive. Es hilft, die Larve mit Wasser feucht zu halten, damit sie nicht herunterfallen die Seite der Marker Kappe. Vorsicht ist jedoch, nicht zu viel Wasser, wie übermäßige Mengen werden der Larve halten, wie es über das Feld kriecht. </li><li> Sanft zu stoßen und prod die Larve mit einem kleinen Pinsel, um sie zu zwingen, in das Blickfeld zu kriechen. Geduld, da die Larven nur selten zusammenarbeiten und müssen oft an den Ausgangspunkt zurückgebracht werden viele Male, bevor sie gerade über das Feld zu kriechen. </li><li> Rekord ca. 10-15 min ununterbrochenen digitalen Videomaterial und Pflanzen und entfernen Sie alle unnötigen Material nach der Übernahme mit digitalen Video-Editing-Software. </li></ol> 3. Imaging Erwachsene Drosophila <ol><li> Legen Sie eine einzelne erwachsenen Drosophila in einer Wegwerf 1,5 ml Polystyrol spektroskopischen Küvette. Hinweis: CO 2 Betäubung von erwachsenen Drosophila unmittelbar vor einer BehavtensAnalyseProtokoll kann Ergebnisse 12 beeinträchtigen. Es wird empfohlen, dass erwachsene Drosophila eine 24-Stunden-Zeitraum gegeben, um von CO 2 Betäubung erholen, bevor Sie in einem Verhaltenstest 13 werden. </li><li> Stecken Sie das Ende der Küvette mit einem kleinen Wattebausch. Sicherstellen, dass der Wattebausch ist fest genug, um die große Kappenraum besetzen verpackt und beschränkt die Fliege auf das reduzierte Volumen Fach der Küvette. </li><li> Setzen Sie die Küvette auf der weißen Tischplatte von einem Stereomikroskop und richten das reduzierte Volumen Fach der Küvette mit dem Gebiet der in der Digitalkamera LCD-Monitor beobachtet Blick. </li><li> Beleuchten die Küvette von oben mit Licht aus einem Lichtwellenleiter-Beleuchtungssystem. Stellen Sie den Winkel des einfallenden Lichts, um eine optimale Ausleuchtung sorgen. </li><li> Fokus des Mikroskops und beginnen Erfassung digitaler Video. </li><li> Rekord ca. 30-45 min ununterbrochenen digitalen Videomaterial und Pflanzen und entfernen Sie alle unnötigenVideo nach dem Erwerb mit digitalen Video-Editing-Software. </li></ol>

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</ol>

Die Autoren haben erklärt, dass keine Interessenkonflikte bestehen.

Drosophila melanogaster &#39;s Stärke als ein Modellsystem für die Untersuchung Funktion des Nervensystems stammt weitgehend aus der Konvergenz der mächtigen genetische Werkzeuge zur Verfügung, und die breite Palette von robusten Verhaltenstests entwickelt. Hier präsentieren wir Ihnen eine einfache und allgemein zugänglich Mikroskopietechnik für den Erwerb von qualitativ hochwertigen digitalen Video von Drosophila Erwachsenen-und Larven Lokomotive Phänotypen aus einer seitlichen Perspektive. Wir haben ...

Die gemeinsame Fruchtfliege Drosophila melanogaster ist eine leistungsfähige experimentelle Modellsystem zur Untersuchung der Funktion des Nervensystems 1-3. Evolutionären Erhaltung der Struktur und Funktion des Nervensystems beim Menschen, als auch einfache genetische Manipulation und eine Vielzahl von genetischen Werkzeugen macht Drosophila die Premiere Organismus der menschlichen neurodegenerativen Erkrankungen 4 modellieren. Gen-Mutationen, die Funktionsstörungen des Nervensystems verursachen führen oft in lebensfähigen Mutanten Larven und adulte Drosophila mit eingeschränkter Fortbewegung. In Nervensystem Mutanten beobachteten Phänotypen sind reduzierte Geschwindigkeit der Fortbewegung, anomale Koordination und spastischen Bewegungen bei Erwachsenen, als auch Defizite in peristaltische Kontraktion der Muskulatur der Körperwand und teilweise Lähmung der Larven. Diese Phänotypen in der Entwicklung von Hochdurchsatz-genetischen Screens und Fortbewegung Assays Mutante Larven 5 ausgenutzt, 6 und Erwachsenen 7-10 Drosophila bei der Quantifizierung der Fortbewegung Wertminderung und die Identifizierung für die Funktion des Nervensystems notwendigen Gene abzielen. Während diese Ansätze sind äußerst nützlich für die Quantifizierung Larven und Erwachsenen Lokomotive Verhaltensweisen, versagen sie auf qualitative Informationen über die einzelnen spezifischen abweichendes Verhalten zu vermitteln. Zum Beispiel, während Mutante dritten Larvenstadium kann die Fortbewegung veränderten Parameter in einem Verhaltenstest zeigen, kann es unklar sein, wenn dies das Ergebnis von Veränderungen in rhythmischen Kontraktionen während der Schlauch Crawling Zyklus, allgemeine Mangel an Koordination oder teilweise Lähmung der hinteren Körper Wandmuskulatur. Hier beschreiben wir eine einfache und allgemein zugänglich Mikroskopietechnik für den Erwerb von qualitativ hochwertigen digitalen Video von Drosophila Erwachsenen-und Larven Lokomotive Phänotypen aus einer seitlichen Perspektive. Digitale Videosignale von einer seitlichen Perspektive erworben erlaubt die direkte Beobachtung und Analyse der feinen Unterschiede in Locomotive Verhaltensweisen von einem aussageSeitenAnsicht Orientierung.

<table><tbody><tr><td>Trinokulares Stereozoom-Mikroskop</td><td>Olympus Corporation</td><td>SZ6145TR</td><td>&frac12; C-Mount wurde entfernt und durch 1X C-Mount</td></tr><tr><td>1X C-Mount</td> ersetzt <td>Leeds Precision Instruments</td><td>LSZ-1XCMT2</td><td></td></tr><tr><td>Digitalkamera-Koppler (43 mm Gewinde)</td><td>Qioptiq Imaging Solutions</td><td>25-70-10-02</td><td></td></tr><tr><td>58 mm bis 48 mm Step-Down-Ring</td><td>B& H Video</td><td>GBSDR5848</td><td></td></tr><tr><td>48 mm bis 43 mm Abwärtsring</td><td>B& H Video</td><td>GBSDR4843</td><td></td></tr><tr><td>Objektivadapter Kit für Canon G10</td><td>LensMateOnline.com</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Canon PowerShot G10 Digitalkamera</td><td>Canon U.S.A., Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1,5 ml Spektroskopische Polysteren-Küvette</td><td>Denville Scientific</td><td>U8650-4</td><td></td></tr></tbody></table>

erwerb von qualitativ hochwertigen digitalen video drosophila larven und verhalten der erwachsenen aus einer seitlichen perspektive

Acquisition of High-Quality Digital Video of Drosophila Larval and Adult Behaviors from a Lateral Perspective

Drosophila melanogaster ist eine leistungsfähige experimentelle Modellsystem zur Untersuchung der Funktion des Nervensystems. Gen-Mutationen, die Funktionsstörungen des Nervensystems verursachen produzieren häufig lebensfähigen Larven und Erwachsene, die Fortbewegung defekt Phänotypen, die schwierig ist, ausreichend mit Text beschreiben oder vollständig mit einem einzigen fotografischen Bild darstellen, sind zu haben. Aktuelle Modi des wissenschaftlichen Publizierens, unterstützen jedoch die Vorlage von digitalen Video-Medien als ergänzendes Material, ein Manuskript zu begleiten. Hier beschreiben wir eine einfache und allgemein zugänglich Mikroskopietechnik für den Erwerb von qualitativ hochwertigen digitalen Video beider Drosophila Larven und erwachsene Phänotypen aus einer seitlichen Perspektive. Video der Larven und erwachsene Fortbewegung aus einer Seitenansicht ist von Vorteil, weil sie die Beobachtung und Analyse der feinen Unterschiede und Variationen in abweichenden Lokomotive Verhaltensweisen. Wir haben erfolgreich die Technik zur Visualisierung und Quantifizierung aberrant kriechen Verhaltensweisen in Drittlarvenstadium, zusätzlich zu Erwachsenen Phänotypen und Verhaltensweisen einschließlich Pflege.

Wir haben erfolgreich diese Technik zur Erfassung und Quantifizierung der Larven Verhaltensphänotyp mit Verlust der Funktion des Gens Stathmin (Figur 2) 14 verbunden. Das Gen kodiert für ein Stathmin Mikrotubuli regulatorisches Protein, das Tubulindimeren Partitionen von Pools von löslichen Tubulin und Mikrotubuli bindet und fördert ihre Demontage 15,16. Stathmin Funktion ist erforderlich, um die Integrität des Mikrotubuli in den Axonen von peripheren Nerven ...

Hier beschreiben wir eine einfache und allgemein zugänglich Mikroskopietechnik, um hochwertige digitale Video von Drosophila Erwachsenen-und Larven Phänotypen aus einer seitlichen Perspektive zu erwerben.

Erwerb von qualitativ hochwertigen digitalen Video Drosophila Larven und Verhalten der Erwachsenen aus einer seitlichen Perspektive

Drosophila melanogaster is a powerful experimental model system for studying the function of the nervous system. Gene mutations that cause dysfunction of ...

Die derzeitigen Formen des wissenschaftlichen Publizierens unterstützen die Einreichung von digitalen Videodateien als ergänzendes Material zu einem Manuskript. Diese Videodateien werden häufig verwendet, um dem Leser qualitative Informationen zu vermitteln, die leichter zu beobachten sind, als sie in einem Text oder auf einem einzelnen Foto beschrieben werden. Hier skizzieren wir eine einfache Methode zur Erfassung von qualitativ hochwertigem digitalem Video von Drosophila-Mutanten-Phänotypen aus der lateralen Perspektive. Obwohl dieses Protokoll leicht an praktisch jedes Stereomikroskopsystem angepasst werden kann, das mit einer Digitalkamera gekoppelt ist, mit der Fähigkeit, Videos aufzunehmen, werden Details über das System bereitgestellt, das wir in unserem Labor verwenden.Wir nehmen unser Video mit einem Olympus SZ 61 Okular-Stereomikroskop auf, das mit einer kommerziellen Canon G 10 Digitalkamera gekoppelt ist. Die halbe XC-Montierung des Fototubusanschlusses des Stereomikroskops wurde durch eine XC-Montierung neu konfiguriert. An der einen XC-Halterung wurde eine Digitalkamerakupplung montiert.An der Kamerakupplung wurden zwei Abwärtsringe 58 Millimeter bis 48 Millimeter un

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Forschung

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Neuroscience

Neurowissenschaften

Die Untersuchung der komplexen Bewegungsapparat Verhalten...

Hochauflösendes Video Tracking von Locomotion in Adult Drosophila melanogaster

Dieses Papier zeigt die Verwendung eines schnellen konfokalen Mikroskop, um Bildzelle Verhalten direkt durch die Puppenhülle. Nach dem Verlassen der Puppenhülle intakt ist, erlaubt dieses Verfahren die Beobachtung und Messung von dynamischen Zellprozesse im Stadium der Drosophila-Entwicklung, die schwer direkt zu studieren.

Imaging Durch die Puppenhülle von<em&gt; Drosophila melanogaster</em

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Dieses Protokoll ist für die Bildgebung und Analyse der Dynamik der Zellorientierung und des Gewebewachstums in der Drosophila-Bauchepithelie konzipiert, während die Fruchtfliege einer Metamorphose unterzogen wird. Die hier beschriebene Methodik kann auf die Untersuchung verschiedener Entwicklungsstadien, Gewebe und subzellulärer Strukturen in Drosophila oder anderen Modellorganismen angewendet werden.

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Hier wird ein Protokoll zur Mikroinjektion und gleichzeitigen Abbildung mehrerer Drosophila-Embryonen während der embryonalen Entwicklung mit einem plattenbasierten, hochinhaltigen Imager vorgestellt.

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Drosophila melanogaster-Larven bieten ein ideales Modellsystem, um die Mechanismen der axonalen Transport innerhalb Larven segmentalen Nerven zu untersuchen. Mit diesem Verfahren können 3 rd Larvenstadium, die verschiedene Mutationen zu Wildtyp-Larven verglichen werden.

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