Effizienten Gentransfer in Küken Netzhäute für primäre Zellkulturstudien: Eine Ex-ovo Elektroporation Ansatz

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, eine hocheffiziente Plasmid- und Transfektion von Netzhautzellen zu erreichen, um funktionelle genetische Studien in primären Netzhautkulturen zu ermöglichen. Dies wird erreicht, indem zunächst Hühnerembryonen im Stadium 27 des Hamburger- und Hamilton-Systems entnommen werden. Eine geeignete Inszenierung ist entscheidend, um eine optimale Effizienz zu erreichen.

Der zweite Schritt besteht darin, die embryonalen Augen zu präparieren und das pigmentierte Epithel der Netzhaut zu entfernen, wodurch die neurale Netzhaut freigelegt wird. Als nächstes wird der Netzhautbecher in eine mit Plasmidlösung gefüllte Kammer gestellt. Anschließend wird es unter optimierten Bedingungen mit Hilfe von einfach zu konstruierenden, speziell angefertigten Elektroden einer Elektroporation unterzogen.