Isolierung und Verwendung von Rinder Abschnitte A. und V. mesenterica als Bioassay für Vasoaktivität im Dünndarm Testen

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, Querschnitte von mesenterialen Arterien und Venen von Rindern in einem Multim-Graphen zu isolieren, um experimentelle Verbindungen auf ihre Vasoaktivität untersuchen zu können. Dies wird erreicht, indem zunächst eine mesenteriale Gewebeprobe des Tieres entnommen wird. Im zweiten Schritt wird die Probe gereinigt und die Gefäße werden geschnitten.

Als nächstes werden die Schnitte montiert und auf dem Myotransplantat äquilibriert. Im letzten Schritt werden die isolierten Gefäße den interessierenden Verbindungen ausgesetzt. Letztendlich kann dieser Arterien- und Venen-Bioassay verwendet werden, um die Vasoaktivität der Verbindungen und die Auswirkungen, die sie auf den Blutfluss in den mesenterialen Blutgefäßen der Rinder haben, zu bewerten.

Der Hauptvorteil dieser Technik im Vergleich zu bestehenden Methoden wie der Messung des Blutflusses in vivo besteht darin, dass mit dieser Technik das Gewebe eines einzelnen Tieres mehreren Verbindungen gleichzeitig ausgesetzt werden kann. Obwohl diese Methode Einblicke in ein sehr spezifisches Tiersyndrom geben kann, das eine Vasokonstriktion wie Schwingel, Toxikose oder Ergotismus verursachen kann, kann sie auch auf andere Szenarien angewendet werden, die für die Forscher von Interesse sein könnten, wie z. B. Arzneimittel, die entwickelt werden, oder Naturprodukte. Darüber hinaus könnte es nicht nur auf das Gefäßsystem von Rindern, sondern auch auf das Gefäßsystem aller anderen Säugetierarten angewendet werden.

Nachdem Sie die Blutgefäße aus dem mesenterialen Gewebe entfernt haben, legen Sie die Gewebeprobe mit einer Pinzette auf eine Schnittfläche und tauchen Sie sie teilweise in eiskalte Crebs Henzel Hens Aite Puffer. Dann seziert eine Irisschere mit Juwelier, Pinzette und Geräusch vorsichtig das Fett und das Bindegewebe, das die Gefäße umgibt. Nachdem du die Arterie und die Vene abgetrennt hast, identifiziere die Gefäßöffnung an einem Ende des Abschnitts und greife vorsichtig mit der Pinzette nach der Faszie, die das Gefäß umgibt.

Schieben Sie dann die Spitze der Schere unter die erhabene Faszie, um mit der Schere parallel zum Gefäß einen Schnitt zu machen. Schneiden Sie nach dem ersten Schnitt beide Seiten des Gefäßes ab, um das Fett und das Bindegewebe weiter zu lösen und das Gefäß zu reinigen. Legen Sie die gereinigten Blutgefäße in ein frisches Röhrchen Krebs Henzel Lichtpuffer und lagern Sie das Röhrchen bis zu 24 Stunden bei vier Grad Celsius.

Wenn Sie fertig sind, verwenden Sie einen Gewebeschneider, um konsistente Querschnitte des interessierenden Gefäßes in der gewünschten Anzahl von Zwei-Millimeter-Abschnitten zu erhalten, und untersuchen Sie dann jeden Abschnitt mit einer 12,5-fachen Vergrößerung, um sicherzustellen, dass jede Probe keine Anomalien, Äste, Ventile oder oberflächliche Schäden aufweist, die während des Dissektions- und Reinigungsprozesses entstanden sind. Lagern Sie die akzeptablen geschnittenen Gefäßteile in Krebs Henzel Lichtpuffer getaucht bei vier Grad Celsius für bis zu 30 Minuten. Führen Sie dann die Stützen vorsichtig durch das Lumen jeder Probe ein und verwenden Sie den Mikropositionierer am Myotransplantat, um die Spannung allmählich zu erhöhen, um das Gefäß auf das Myotransplantat zu montieren.

Achten Sie darauf, dass die Gefäße nicht über einen Messwert von zwei bis drei Gramm hinausgehen. Sobald alle Kammern abgedeckt sind, saugen Sie den Puffer aus jeder Kammer ab und füllen Sie sie mit fünf Millilitern frischem Puffer auf. Nachdem sich die Gefäßabschnitte 1,5 Stunden lang äquilibriert haben, um eine stabile Ruhespannung von einem Gramm bei 500 Mikrolitern 1,32 molaren Kaliumchlorid auf eine Endkonzentration von 0,12 molar auf die 5,5 Milliliter Lösung zu erreichen, badet das Gefäß

Stellen Sie die Spannung nicht manuell ein, da die maximale Reaktion auf das Kaliumchlorid zur Normalisierung der Behandlungsdaten verwendet wird, ersetzen Sie die Lösung in 15-Minuten-Intervallen durch frischen Krebs Henzel Lichtpuffer, bis die Spannung wieder auf den Ausgangswert von einem Gramm zurückgekehrt ist. Sobald die Spannung wieder auf den Ausgangswert zurückgekehrt ist, geben Sie die Standards in 25 Mikroliter-Aliquoten gemäß dem Versuchsprotokoll in jede Kammer. Wenn die letzte Norm hinzugefügt wurde, starten Sie einen Neun-Minuten-Timer.

Am Ende der Inkubation wird der Puffer der Behandlung aus den Kammern entnommen und in jede Kammer fünf Milliliter frischer Puffer gegeben. Starten Sie dann nach Abschluss einen 2,5-Minuten-Timer und wiederholen Sie diese 2,5-minütige Spülung. Ein zweites Mal am Ende der zweiten Spülung die Kammern ansaugen.

Nachdem Sie erneut frischen Puffer hinzugefügt haben, starten Sie einen Ein-Minuten-Timer, um den Countdown bis zum Beginn der zweiten Standardausgabe zu zählen. Wie in den hier dargestellten neunminütigen Inkubationszeiten beobachtet, gibt es inkrementelle Anstiege in der Reaktion auf die Standards, dass mit zunehmenden Konzentrationen der Behandlung die Kaliumchloridzugabe am Ende des Experiments unerlässlich ist, da sie die Lebensfähigkeit des Gewebes bestätigt. Dieser Bioassay kann verwendet werden, um die Vasoaktivität der experimentellen Verbindungen an den Blutgefäßen, die den Dünndarm mit Nährstoffen versorgen, sowie an den Blutgefäßen, die die aufgenommenen Nährstoffe abtransportieren, zu bewerten.

Zum Beispiel wurde in diesem Experiment kein Unterschied in den arteriellen oder venösen kontraktilen Reaktionen nach einer Behandlung mit fünf Hydroxytryptaminen beobachtet. Umgekehrt war die kontraktile Reaktion der Vena mesenterica auf die steigenden Konzentrationen von Noradrenalin größer als die der Arteria mesenterialis. Nach diesem Verfahren konnte die Methode weiter modifiziert werden, um Agonisten oder Antagonisten in den Puffer aufzunehmen, die für den Forscher von besonderem Interesse waren.

Dies würde es den Forschern ermöglichen, die Beteiligung sehr spezifischer Rezeptoren und die Mechanismen hinter den während des Myo-Experiments beobachteten Gefäßreaktionen besser zu verstehen. Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie man Blutgefäße sammelt, verarbeitet und isoliert. Für ein mein Experiment.