Name: Sublinguale Immuntherapie als Alternative zum Schutz vor akuten Atemwegsinfektionen ausgelöst werden (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-08-30T14:00:00.000+00:00
Duration: 16 min 56 s
Description: Erfahren Sie, wie sublinguale Immuntherapie die angeborene Immunantwort in der Lunge stärkt und Mäuse vor tödlicher Pneumokokken-Pneumonie schützt. Diese Methode bietet eine sichere Alternative zur intranasalen Verabreichung.

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Wir danken Dr. Jean-Claude Sirard vom Zentrum für Infektion und Immunität von Lille, Institut Pasteur de Lille-Frankreich, für die freundliche Bereitstellung des gereinigten Flagellins und Dr. Teresa Camou, Direktorin des Nationalen Referenzlabors des Gesundheitsministeriums von Uruguay für die freundliche Bereitstellung des Pneumokokkenstamms. 
Die Autoren möchten Herrn Diego Acosta und Herrn Ignacio Turel von BichoFeo Producciones-Uruguay ihre Anerkennung für ihr Engagement und ihre harte Arbeit während der gesamten Videoproduktion und -ausgabe aussprechen. 
Diese Arbeit wurde durch die Zuschüsse PR_FCE_2009_1_2783 und BE_POS_2010_1_2544 der Nationalen Agentur für Forschung und Innovation, ANII aus Uruguay, dem Programm für die Entwicklung der Grundlagenwissenschaften, PEDECIBA von Uruguay und der Sektoralen Kommission für wissenschaftliche Forschung, CSIC-Universidad de la República, Uruguay, unterstützt.

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Die Autoren haben nichts offenzulegen.

Sublinguale Verabreichung von therapeutischen Mitteln ist ein nützliches Mittel, um die Immunreaktion in den Atemtrakt modulieren bewährt. Der Hauptvorteil der Schlitz zur Behandlung von Erkrankungen der Atemwege ist, dass es keine direkte Bereitstellung von Verbindungen in die Lungen oder die Nasenlöcher, wobei sicherer als Behandlungen auf die intranasale Verabreichung 31. Sublinguale Immuntherapie verwendet werden, um die Immunantwort auf unterschiedliche Weise modulieren, entweder zur Induktion von regulatorischen Reaktionen, die die Symptome der allergischen Entzündung und Asthma zu lindern kann 32 oder transiente Aktivierung der angeborenen Immunmechanismen zu induzieren, um akute Lungeninfektionen zu behandeln, wie hier dargestellt. Das Maus-Modell in diesem Video dargestellt ist eine bequeme Methode zum Screening von verschiedenen Verbindungen als therapeutische Mittel zur geschnitten. Dieses Tiermodell bietet ein nützliches Mittel, um die Auswirkungen zu ermittelnder Schlitz in der Lunge Immunantwort als auch in anderen Organen (zB., Lymphknoten oder entfernten Schleimhautstellen), die nicht durch die Verwendung von in vitro-Modellen nachgeahmt werden kann. Obwohl es mehrere Arbeiten, die Ergebnisse mit sublingualen Immuntherapie gewonnen werden, detaillierte Methoden für die Verfahren der sublingualen Verabreichung haben noch nicht verfügbar gemacht worden. Zusätzlich kann das Modell für die Bewertung der sublingualen Impfstoffe Ziel, systemische als auch lokale Schutz der Atemwege übertragen werden. Wie in der begleitenden Video gezeigt, ist die sublinguale Verabreichung von Verbindungen ein einfaches Verfahren, das einfach und ohne die Notwendigkeit von umfangreichen Ausbildung durchgeführt werden kann. Typischerweise wird eine Person beherrschen Tier Handhabung erfordern 1 h bis SLIT in einer Gruppe von 10 Mäusen mit injizierbaren Anästhetika, wie in diesem Protokoll beschrieben durchzuführen. Wenn Pneumokokken Herausforderung wird ebenfalls durchgeführt, werden 90 zusätzliche Minuten zur Vorbereitung werdenDie Bakteriensuspension und führen intranasale Herausforderung der Tiere. Die hier vorgestellten FACS Protokolle ermöglichen eine bequeme Charakterisierung der Auswirkungen der SLIT am lokalen Standort der Verwaltung, Lymphknoten sowie deren Auswirkungen auf die Zelldynamik der Lunge. Separate Analyse der bronchoalveolären Inhalt und Lungenparenchym ist wichtig, um die Atemwege &quot;Immun Wohnsitz und Infiltrieren Zelltypen von denen, die im Gewebe bleiben diskriminieren. Analyse der BAL Inhalt ermöglicht die Untersuchung von Alveolarmakrophagen Umsatz sowie die Dynamik von Zellen Rekrutierung in die Alveolen durch verschiedene Behandlungen induziert, zB., PMN, Eosinophile, Monozyten. BAL kann auch verwendet werden, um die Anwesenheit von sezernierten Zytokine und Chemokine durch Enzyme-linked Immunosorbent Assay (ELISA) oder den Nachweis von IgA-Antikörper sekretiert nach sublingualer Impfung ausgelöste bewerten. Untersuchung der Lunge Gewebewird Charakterisierung von anderen Zelltypen, klassisch dendritischen Zellen, T-Zellen und B-Zellen zu ermöglichen. Vorbereitung der BAL-Proben und Lymphknoten für FACS-Analyse ist einfach. Nach der Probenahme werden in der Regel 60 Minuten benötigt, um den Färbungsprotokoll für 10-20 Proben abzuschließen. Im Gegensatz dazu wird die Isolation von Zellen aus Lungen oder sublingual Gewebe mehr Zeit erfordern, da die Verdauung der extrazellulären Matrix ist nicht erforderlich. Absorption des therapeutischen Mittels durch sublinguale geliefert durch Verfolgung von fluoreszierend oder radioaktiv markierte Moleküle mit in vivo-Bildgebungssysteme behandelt werden. Sublinguale Immuntherapie ist eine attraktive Methode effektiv induzieren Immunreaktionen in den Atemwegen als auch systemisch verwendet werden können, zu behandeln oder zu verhindern Atemwegserkrankungen. Aufklärung der Mechanismen, die die Aktivierung vs Toleranz der Immunreaktion in den Atemtrakt nach SLIT is entscheidend für das rationale Design von neuen therapeutischen Strategien, die allein oder in Kombination mit verfügbaren Behandlungen gegen verschiedene Erkrankungen der Atemwege verwendet werden könnte, zu ermöglichen.

Das übergeordnete Ziel dieser Arbeit ist es, die Vorteile der sublingualen Immuntherapie für die Behandlung von akuten Atemwegsinfektionen (ARI) zu veranschaulichen und die Vorteile dieses Verabreichungsweges im Vergleich zu anderen Verabreichungswegen, nämlich intranasal, darzustellen.
ARI verursachen jedes Jahr Millionen von Todesfällen, insbesondere bei Kindern unter fünf Jahren. Streptococcus pneumoniae ist nach wie vor einer der wichtigsten ätiologischen Erreger der bakteriellen Lungenentzündung bei Säuglingen und älteren Menschen1,2. Die wichtigste verfügbare Behandlung beruht auf dem Einsatz von Antibiotika, aber es treten ständig resistente Stämme auf3,4.
SLIT induziert breite Reaktionen auf systemischer und auch mukosaler Ebene, insbesondere in den Atemwegen5. Es hat sich als wirksam gegen Influenza-Infektionen erwiesen und fördert einen langfristigen Schutz durch die Produktion humoraler und zellulärer Reaktionen6,7. Darüber hinaus wurde gezeigt, dass die prophylaktische Behandlung mit bakteriellen Lysaten, die auf sublingualem Weg verabreicht wurden, die Verschlimmerung der chronisch obstruktiven Bronchitis beiälteren Menschen reduzierte 8 und wiederkehrende Atemwegsinfektionen bei Kindern verhinderte9. SLIT wird häufig zur Behandlung von Allergien und Asthma eingesetzt. Klinische Studien hatten nicht nur seine Wirksamkeit bei der Modulation der Immunantwort in den Atemwegen gezeigt, sondern auch seine Sicherheit10. Trotz des wachsenden Interesses von Pharmaunternehmen und Forschern an SLIT bleiben die Mechanismen, die an der Induktion von Immunantworten der Schleimhaut nach sublingualer Verabreichung von Verbindungen beteiligt sind, unklar. In jüngster Zeit wurde die Aufmerksamkeit auf die Mechanismen gerichtet, die die Toleranz im Zusammenhang mit der Desensibilisierung von Allergenen fördern. Es wurde vermutet, dass residente und rekrutierte Zellen an der sublingualen Mukosa, wie dendritische Zellen und Makrophagen, die Toleranz nach SLIT11-13 fördern können. Dendritische Zellen der Mundschleimhaut können IFN-gamma- und IL-10-produzierende T-Helferzellenfördern 11 sowie in die distale Genitalschleimhaut rezirkulieren und CD8+ T-Zellen fördern14. Es ist jedoch wenig über die Auswirkungen von SLIT auf angeborene Zellen oder seine Fähigkeit, die Beseitigung von Krankheitserregern bei akuten Atemwegsinfektionen zu verbessern, bekannt.
Die natürliche Kontrolle einer Pneumokokkeninfektion in der Lunge hängt stark von der effizienten und schnellen Aktivierung der lokalen angeborenen Abwehrkräfte ab. Wir haben bereits gezeigt, dass die Erhöhung der angeborenen Immunität der Lunge durch eine intranasale Einzeldosis von Flagellin (FliC), einem TLR5- und NLRC4-Agonisten, 75-100% der Mäuse schützt, die mit einer tödlichen Dosis eines klinischen Isolats von Streptococcus pneumoniae Serotyp 1 konfrontiert wurden. Es wurde gezeigt, dass dieser Schutz von der lokalen Rekrutierung von GR1+-Zellen (wahrscheinlich polymorphkernige Neutrophile, PMNs) und nicht von Antikörpern, B- oder T-Zellen abhängt15. 
Flagellin ist die strukturelle Komponente des bakteriellen Flagellums. In seiner monomeren Form wird es von zwei Pathogen Recognition Receptors (PRRs) erkannt, TLR5, das extrazelluläres FliC16 erkennt, und NLRC4/NAIP5 Inflammasom, das intrazelluläres Flagellinnachweist 17,18. Wenn FliC von den PRRs erfasst wird, wird eine wichtige Entzündungsreaktion ausgelöst. Wir und andere haben gezeigt, dass die Instillation von gereinigtem FliC aus Salmonella enterica serovar Typhimurium in die Lunge eine schnelle Produktion von Chemokinen und Zytokinen antreibt, insbesondere wenn sie vom Lungenepithel erkannt werden, die wiederum die Rekrutierung von Immunzellen in die Atemwege, hauptsächlich PMNs15,19-21, orchestrieren. Obwohl vorübergehend, könnte die erhebliche neutrophile Infiltration, die nach der nasalen Verabreichung von FliC in die Atemwege stattfindet, ein Problem darstellen, wenn klinische Therapien für den menschlichen Gebrauch entwickelt werden. Eine übermäßige Entzündung kann sich nachteilig auf die Lungenfunktion auswirken. Darüber hinaus wurde gezeigt, dass die intranasale Verabreichung von immunstimulierenden Molekülen eine Gesichtslähmung und/oder Hirntoxizität verursachen kann22-24. 
Die sublinguale Immuntherapie bietet im Vergleich zur intranasalen Immuntherapie eine sicherere Alternative zur Modulation der Immunantwort in den Atemwegen. Es ist nicht-invasiv, schmerzlos, einfach und hat eine gute Patienten-Compliance25. Darüber hinaus kann es, wie bereits erwähnt, Schutzreaktionen in der Atemwegsschleimhaut induzieren, ohne die Risiken, die mit der direkten intranasalen oder intrapulmonalen Verabreichung von Formulierungen verbunden sind. Der sublinguale Weg könnte alternativ verwendet werden, um Moleküle zu verabreichen, die große Auswirkungen auf das Immunsystem der Lunge haben, sich aber als toxisch erwiesen haben oder bei intranasaler Verabreichung große Entzündungen hervorrufen. Neben diesen Vorteilen haben Formulierungen für die sublinguale Immuntherapie niedrigere Herstellungskosten, da nicht-sterile Produkte auf diesem Weg geliefert werden können und ein endotoxischer Schock für SLIT kein Problem darstellt. Auf der anderen Seite ist es erwähnenswert, dass höhere Dosen der immunstimulierenden Verbindungen im Vergleich zu denen, die auf intranasalem oder parenteralem Wege verwendet werden, notwendig sind, um eine Immunantwort in der Lunge zu induzieren. Auch bei der Verwendung des Mausmodells von SLIT werden hochkonzentrierte Lösungen benötigt, da die anatomische Stelle, an der die Formulierungen abgelagert werden, klein ist. 
Basierend auf unseren zuvor veröffentlichten Daten haben wir ein Schutzmodell entwickelt, das eine sublinguale Immuntherapie mit Flagellin als Modell-Immunstimulans verwendet. Wir zeigten, dass eine Einzeldosis Flagellin ein Überleben von 60% gegen invasive Pneumokokken-Pneumonie induzierte, die durch den Serotyp-1-Stamm verursacht wurde, während alle Mäuse in der Kontrollgruppe innerhalb von 5 Tagen an einer Infektion starben. Die durchflusszytometrische Analyse zeigte, dass nach sublingualer Behandlung mit Flagellin eine höhere Anzahl von PMN in die Atemwege geschützter Tiere rekrutiert wird, was darauf hindeutet, dass diese Zellen an dem durch die sublinguale Immuntherapie induzierten Schutzmechanismus beteiligt sein könnten. 
Dieses Video zeigt im Detail, wie man eine sublinguale Immuntherapie durchführt und auch, wie man relevantes Gewebe aus der sublingualen Schleimhaut gewinnt, Lymphknoten sowie Lungen und Atemwege entwässert, um weitere Analysen durchzuführen. Darüber hinaus wird die allgemeine Technik der Zellvorbereitung für die FACS-Analyse veranschaulicht und kurz gezeigt, wie Streptococcus pneumoniae-Suspensionen hergestellt werden und wie intranasale Infektionen bei Mäusen durchgeführt werden, um das akute Infektionsmodell aufzubauen.

<table><tbody><tr><td>Ketaminlösung (50 mg/ml)</td><td>Pharma Service, Uruguay</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Xilacin-Lösung (2 %)</td><td>Portinco S.A., Uruguay</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sterile 1 ml Spritze</td><td>Modern, Uruguay</td> Steril 27 G Nadel Modern, Uruguay <td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640</td><td>General Electric Health Care</td><td>E15885</td><td></td></tr><tr><td>Fötales Rinderserum</td><td>ATCC</td><td>302020</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin/Streptomycin-Lösung</td><td>SIGMA</td><td>P4333</td><td></td></tr><tr><td>Steriles PBS ohne Ca2+/Mg2+</td><td>PAA</td><td>H21002</td><td></td></tr><tr><td>Typ-I-Kollagenase</td><td>Life Technologies/Gibco</td><td>17100017</td><td></td></tr><tr><td>Desoxyribonuklease I (DNAse-I)</td><td>SIGMA</td><td>D4513</td><td></td></tr><tr><td>Dispase</td><td>Life Technologies/Gibco</td><td>17105041</td><td></td></tr><tr><td>PerCP-Cy5.5 konjugierter Ratten-Anti-Maus-IgG2b Anti-CD11b</td><td></td><td></td><td>BD-550993-Klon M1/70</td></tr><tr><td>APC konjugierter Hamster Anti-Maus-IgG1 anti-CD11c</td><td>BD-550261</td><td></td><td>Klon HL3&nbsp;</td></tr><tr><td>APC-Cy7 konjugierte Ratte Anti-Maus IgG2a gegen Ly6G</td><td>BD</td><td>560600</td><td>Klon 1A8</td></tr><tr><td>Sterile Kochsalzlösung</td><td>Laboratorio Farmaco Uruguayo, Uruguay</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tryptische Soja-Agar</td><td>BD Difco, Frankreich</td><td>236950</td><td></td></tr><tr><td>Defibriniertes Schafblut</td><td>Biokey, Uruguay</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sterile Petrischalen</td><td>Greiner</td><td>633180</td><td></td></tr><tr><td>p10 Pipette</td><td>Gilson</td><td>F144802</td><td></td></tr><tr><td>p20 Pipette</td><td>Eppendorf</td><td>3120000097</td><td></td></tr><tr><td>p200 Pipette</td><td>Gilson</td><td>F123601</td><td></td></tr><tr><td>p200 Pipette</td><td>Capp</td><td>C200</td><td></td></tr><tr><td>p200 Pipette</td><td>Eppendorf</td><td>3120000054</td><td></td></tr><tr><td>p1000 Pipette</td><td>Eppendorf</td><td>3120000062</td><td></td></tr><tr><td>Sterilfilterspitzen p10</td><td>Greiner</td><td>771288</td><td></td></tr><tr><td>Sterile Filterspitzen p200</td><td>Greiner</td><td>739288</td><td></td></tr><tr><td>Sterile Filterspitzen p1000</td><td>Greiner</td><td>750288</td><td></td></tr><tr><td>Vortex</td><td>BIOSAN</td><td>V1-plus</td><td></td></tr><tr><td>Edelstahl Feinpinzette &nbsp;</td><td>SIGMA</td><td>Z168785/Z168777</td><td>Gebogene und gerade</td></tr><tr><td>Verbandszange</td><td>SIGMA</td><td>F4392</td><td>Länge 8 Zoll</td></tr><tr><td>Mikro-Präparierzange</td><td>SIGMA</td><td>F4017</td><td>Gerade &</td></tr><tr><td>Mikro-Präparierzange</td><td>SIGMA</td><td>F4142&nbsp;</td><td>gekrümmt</td></tr><tr><td>Mayo Schere</td><td>SIGMA</td><td>Z265993&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Skalpell</td><td>SAKIRA MEDICAL</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sterile Biopsie Stanze & Oslash; 3mm</td><td>Stiefel Laboratories Ltd.</td><td>2079D</td><td>5 mm Durchmesser kann auch verwendet werden</td></tr><tr><td>Sterile 1,5 ml Röhrchen</td><td>Deltalab</td><td>200400P</td><td></td></tr><tr><td>Sterile 15 ml Röhrchen</td><td>Greiner</td><td>188271</td><td></td></tr><tr><td>Sterile 50 ml Röhrchen</td><td>Greiner</td><td>227261</td><td></td></tr><tr><td>Sterile serologische Pipetten 5 ml</td><td>Greiner</td><td>606160</td><td></td></tr><tr><td>Sterile serologische Pipetten 10 ml</td><td>Greiner</td><td>607160</td><td></td></tr><tr><td>Sterile serologische Pipetten 25 ml</td><td>Greiner</td><td>760180</td><td></td></tr><tr><td>Biologische Sicherheitswerkbank, Klasse II</td> Thermo <td>Scientific</td><td>1300 Serie, Typ A2</td><td></td></tr><tr><td>Mikroisolator&nbsp; Rack-RAIR</td><td>&nbsp; IsoSystem&nbsp;</td><td>76144W</td><td>Super&nbsp; Maus&nbsp; 1800 AllerZone&nbsp;</td></tr><tr><td>Gekühlte Mikrozentrifuge</td><td>Eppendorf</td><td>Legend Micro 21R</td><td></td></tr><tr><td>Mikrozentrifuge</td><td>Heraeus</td><td>Biofuge-pico</td><td></td></tr><tr><td>Zentrifuge</td><td>Thermo Scientific</td><td>Sorval ST40R</td><td></td></tr><tr><td>CO2 Inkubator&nbsp;</td><td>Thermo Scientific</td><td>Modell&nbsp; 3111</td><td></td></tr><tr><td>Sterile Dünnspitzen-Pasteurpipetten</td><td>Deltalab</td><td>D210022</td><td></td></tr><tr><td>Sterile Pasteurpipetten</td><td>Deltalab</td><td>200007</td><td></td></tr><tr><td>Sterile 24-Well-Platte</td><td>Greiner</td><td>662160</td><td></td></tr><tr><td>Trypanblaue Lösung&nbsp;</td><td>Life Technologies</td><td>T10282</td><td></td></tr><tr><td>Automatischer Zellzähler - Countess</td><td>Life Technologies</td><td>C10227&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Countess Cell Counting Chamber Slides</td><td>Life Technologies</td><td>C10312</td><td></td></tr><tr><td>Durchflusszytometrie-Röhrchen</td><td>BD</td><td>343675</td><td></td></tr><tr><td>Durchflusszytometer - FACS Canto-II</td><td>BD</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Real Time PCR Instrument - Rotor Gen Q oder ABI 7900</td><td>Qiagen / Applied Biosystems</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Trizol Reagenz</td><td>Life Technologies</td><td>15596-026</td><td>Molekular </td></tr><tr><td>DNAse-I</td><td>Life Technologies</td><td>18068-015</td> DNAse-I-Puffer <td>in Molekularbiologie-Qualität</td></tr><tr><td>10X</td><td>Life Technologies</td><td>18068015</td><td></td></tr><tr><td>EDTA 25 mM</td><td>Life Technologies</td><td>18068015</td><td></td></tr><tr><td>Ultra-Pure</td> Water <td>Life Technologies</td><td>10977</td> RNAse <td>Out in Molekularbiologie-Qualität</td></tr><tr><td></td><td>Life Technologies</td><td>100000840</td><td>Molekularbiologie Grade</td></tr><tr><td>Random Hexamer Primer</td><td>Life Technologies</td><td>N8080127</td><td>Molekularbiologie Grade</td></tr><tr><td>M-MLV-RT Puffer</td><td>Life Technologies</td><td>18057-018</td><td>Molekularbiologie Grade</td></tr><tr><td>M-MLV-RT enzime</td><td>Life Technologies</td><td>28025-021</td><td>Molekularbiologie</td></tr><tr><td>Grade QuantiTect Syber Green PCR Kit</td><td>Qiagen</td><td>204143</td><td></td></tr><tr><td>Molekularbiologie Spezifische Primer&nbsp;</td><td>Lebenstechnologien</td><td></td><td>Molekularbiologie Grad</td></tr></tbody></table>

sublinguale immuntherapie als alternative zum schutz vor akuten atemwegsinfektionen ausgelöst werden

Sublingual Immunotherapy as an Alternative to Induce Protection Against Acute Respiratory Infections

Der sublinguale Weg wird häufig verwendet, um kleine Moleküle in den Blutkreislauf zu bringen und die Immunantwort an verschiedenen Stellen zu modulieren. Es wurde gezeigt, dass es effektiv humorale und zelluläre Reaktionen an systemischen und mukosalen Stellen, nämlich der Lunge und dem Urogenitaltrakt, induziert. Die sublinguale Impfung kann den Schutz vor Infektionen der unteren und oberen Atemwege fördern; Es kann auch die Toleranz gegenüber Allergenen fördern und Asthmasymptome lindern. Die Modulation der Immunantwort der Lunge durch sublinguale Immuntherapie (SLIT) ist sicherer als die direkte Verabreichung von Formulierungen auf intranasalem Weg, da sie keine direkte Abgabe potenziell schädlicher Moleküle in die Atemwege erfordert. Im Gegensatz zur intranasalen Verabreichung werden Nebenwirkungen, die mit Hirntoxizität oder Gesichtslähmung einhergehen, durch SLIT nicht gefördert. Die Immunmechanismen, die SLIT zugrunde liegen, sind noch schwer fassbar und seine Verwendung zur Behandlung akuter Lungeninfektionen ist noch nicht erforscht. Daher ist die Entwicklung geeigneter Tiermodelle von SLIT erforderlich, um seine potenziellen Vorteile weiter zu erforschen. 
Diese Arbeit zeigt, wie die sublinguale Verabreichung von Therapeutika bei Mäusen durchgeführt wird, um ihre Fähigkeit zum Schutz vor akuter Pneumokokken-Pneumonie zu bewerten. Technische Aspekte des Umgangs mit der Maus während der sublingualen Inokulation, der genauen Identifizierung der sublingualen Schleimhaut, der drainierenden Lymphknoten und der Isolierung von Gewebe, bronchoalveolärer Lavage und Lunge werden veranschaulicht. Die Protokolle für die Vorbereitung von Einzelzellsuspensionen für die FACS-Analyse werden ausführlich beschrieben. Weitere nachgelagerte Anwendungen zur Analyse der Immunantwort werden diskutiert. Technische Aspekte der Präparation von Streptococcus pneumoniae, des Inokulums und der intranasalen Provokation von Mäusen werden ebenfalls erläutert.
SLIT ist eine einfache Technik, die das Screening von Kandidatenmolekülen zur Modulation der Immunantwort der Lunge ermöglicht. Parameter, die den Erfolg von SLIT beeinflussen, hängen mit der Molekülgröße, der Anfälligkeit für den Abbau und der Stabilität hochkonzentrierter Formulierungen zusammen.

Sublinguale Immuntherapie erfolgreich zur Lunge Immunantwort zu modulieren. Wir haben gezeigt, dass eine Einzeldosis von Flagellin, das TLR5 und NLRC4 Agonist kann eine signifikante Hochregulation der mRNA induzieren die Chemokine CXCL1, CCL20 und das Zytokin IL-6 im Vergleich zu Kochsalzlösung behandelten Kontrollen kodiert. Fach Induktion der mRNA-Spiegel erreichte bei 8 h nach SLIT und zurück zum Basisspiegel nach 20 h (Abbildung 1). Allerdings, wenn SLIT wurde 2 Stunden vor intranasale Infektion mit S. Pneumoniae durchgeführt, Ebenen und IL-6 mRNA CXCL1 blieb deutlich sogar 24 Stunden nach der SLIT hochreguliert im Vergleich zu nicht behandelten Tieren (Abbildung 2). Analyse der Zellpopulationen in BAL und Lungengewebe durch FACS zeigte, dass die Tiere mit FliC durch sublinguale behandelt hatte Anzahl von Neutrophilen in die Atemwege in der Lunge Gewebe (3) angehoben, jedoch nicht. Abbildung 4 dargestellt, SLIT mit Flagellin gefördert Schutz und erhöhte Überlebens gegen akute Pneumokokken-Lungenentzündung. <img alt="Figur 1" fo:content-width="6.7in" src="/files/ftp_upload/52036/52036fig1highresV2.jpg" width="680"> Abbildung 1. Kinetik der Transkriptionsprofils der Lunge nach der sublingualen Immuntherapie mit Flagellin. Acht bis 10 Wochen alte BALB / c-Mäuse (n = 4) wurden mit 10 ug des Flagellin-oder Kochsalzlösung durch sublinguale unter Anästhesie behandelt. Lungen wurden zu verschiedenen Zeitpunkten gesammelt und Nukleinsäurekonservierungs platziert. Gesamt-RNA-Extraktion durchgeführt und cDNA synthetisiert. mRNA-Spiegel wurden durch Echtzeit-PCR mit spezifischen Primern in Tabl aufgeführt ausgewertetE 1. Die relative Quantifizierung wurde nach ACt Methode mit actb mRNA-Spiegel für die Normalisierung durchgeführt. Die Ergebnisse werden als fache Steigerung im Vergleich zu Kochsalzlösung behandelten Gruppe als Median ± SEM dargestellt. Sternchen zeigen statistisch signifikante Unterschiede (p &lt;0,05) nach Mann-Whitney-Test berechnet. Ergebnisse sind repräsentativ für 2 unabhängige Experimente. <img alt="Figur 2" fo:content-width="6.2in" src="/files/ftp_upload/52036/52036fig2highresV2.jpg" width="660"> Transkriptionsprofils Figur 2. Lungen während Pneumokokkenpneumonie nach sublingualer Immuntherapie mit Flagellin Acht bis 10 Wochen alte BALB / c-Mäuse (n = 4 n = 7 für Kontrollgruppe und behandelte Gruppe). Wurden mit 10 ug des Flagellin-oder Kochsalzlösung durch die behandelte sublinguale unter Narkose. 2 h später wurden die Mäuse intranasal mit der minimalen letalen Dosis (MLD) Bewirken 10 gefordert0% Mortalität einer klinischen Isolat von S. pneumoniae-Serotyp 1 E1585 entsprechend 4x10 5 CFU / 50 ul. Lungen wurden gesammelt von 24 Stunden nach der Herausforderung und Nukleinsäurekonservierungsmittel gelagert, bis RNA-Extraktion und cDNA-Synthese durchgeführt. Echtzeit-PCR durchgeführt (siehe Primer Liste in Tabelle 1) und relative Quantifizierung wurde nach ACt Methode mit actb mRNA-Spiegel für die Normalisierung durchgeführt. Die Ergebnisse werden als fache Steigerung im Vergleich zu Kochsalzlösung behandelten Gruppe als Median ± SEM dargestellt. Sternchen zeigen statistisch signifikante Unterschiede (p &lt;0,05) nach Mann-Whitney-Test berechnet. <img alt="Figur 3" fo:content-width="6.5in" src="/files/ftp_upload/52036/52036fig3highresV2.jpg" width="680"> Abbildung 3. Analyse der polymorphkernigen Neutrophilen (PMN) Rekrutierung in Lunge und der Atemwege Gewebe nach SLIT. Acht bis10 Wochen alt BALB / c-Mäuse (n = 4) wurden mit 10 ug von Flagellin oder Kochsalzlösung durch sublinguale unter Anästhesie behandelt. 2 Stunden später wurden die Mäuse durch intranasale Route mit der MLD von S. herausgefordert pneumoniae Serotyp 1 E1585. 24 Stunden nach der Herausforderung, BAL wurde durchgeführt, und die Lungen wurden für die FACS-Analyse verarbeitet. PMN wurden als Ly6G hoch / CD11b hoch / CD11c negativen Zellen identifiziert und basierend auf der FCS-SSC-Profil. Die Ergebnisse sind als Prozentsatz der PMN bezüglich der Gesamtzellzahl in BAL oder der Lunge exprimiert. Balken stellen Median ± SEM. Sternchen zeigen statistisch signifikante Unterschiede (p &lt;0,05) nach einem Wege Mann-Whitney-Test berechnet. <img alt="Figur 4" fo:content-width="5.3in" src="/files/ftp_upload/52036/52036fig4highresV2.jpg" width="530"> Abbildung 4. SLIT mit Flagellin schützt Mäuse gegen akute Pneumokokken-Lungenentzündung. S. herausgefordert pneumoniae Serotyp 1 E1585. Überlebensrate wurde täglich bewertet. Kaplan-Meier-Kurven wurden nach Log-Rank (Mantel-Cox) Test verglichen. Sternchen zeigen statistisch signifikante Unterschiede (p &lt;0,05) .Results Vertreter von 2 unabhängigen Experimenten. <table align="center" border="1" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody align="center"><tr><td> Name </td><td> Sequenz 5'-3 ' </td><td> PCR Produktlänge (bp) </td></tr><tr><td> mB-actin_F </td><td> GCTTCTTTGCAGCTCCTTCGT </td><td rowspan="2"> 68 </td></tr><tr><td> mB-actin_R </td><td> CGTCATCCATGGCGAACTG </td></tr><tr><td>mCCL20_F </td><td> TTTTGGGATGGAATTGGACAC </td><td rowspan="2"> 69 </td></tr><tr><td> mCCL20_R </td><td> TGCAGGTGAAGCCTTCAACC </td></tr><tr><td> mCXCL1_F </td><td> CTTGGTTCAGAAAATTGTCCAAAA </td><td rowspan="2"> 84 </td></tr><tr><td> mCXCL1_R </td><td> ACGGTGCCATCAGAGCAGTCT </td></tr><tr><td> mIL-6_F </td><td> GTTCTCTGGGAAATCGTGGAAA </td><td rowspan="2"> 78 </td></tr><tr><td> mIL-6_R </td><td> AAGTGCATCATCGTTGTTCATACA </td></tr><tr><td> mTNFalpha_F </td><td> CATCTTCTCAAAATTCGAGTGACAA </td><td rowspan="2"> 63 </td></tr><tr><td> mTNFalpha_R </td><td> CCTCCACTTGGTGGTTTGCT </td></tr><tr><td> mCxcl2_F </td><td> CCCTCAACGGAAGAACCAAA </td><td rowspan="2"> 72 </td></tr><tr><td> mCxcl2_R </td><td> CACATCAGGTACGATCCAGGC </td></tr></tbody></table> Tabelle 1. Liste Primer für Echtzeit-PCR-Analyse verwendet. Spezifische Primer-Sequenzen für die qPCR-Analyse verwendet. Vorwärts und Rückwärts-Primer für Maus actb werden Cccl20, CXCL1, IL-6, TNFa und CXCL1 als 5'-3'-Sequenzen präsentiert und erwartete Produkt Länge in Basenpaaren (bp) angegeben.

Die vorliegende Arbeit veranschaulicht die Zweckmäßigkeit der sublingualen Immuntherapie, um die angeborene Immunantwort in der Lunge zu verstärken und Schutz vor akuter Pneumokokken-Pneumonie bei Mäusen zu bieten.

Sublinguale Immuntherapie als Alternative zum Schutz vor akuten Atemwegsinfektionen ausgelöst werden

Sublingual route has been widely used to deliver small molecules into the bloodstream and to modulate the immune response at different sites. It has been ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, die sublinguale Immuntherapie zu nutzen, um die angeborene Immunantwort in der Lunge zu verstärken und den Schutz vor tödlicher Pneumokokken-Pneumonie zu verbessern. Bei der Maus besteht der erste Schritt darin, eine Lösung mit dem immunstimulierenden Wirkstoff Flag in die sublinguale Schleimhaut der anästhesierten Maus zu verabreichen. Dann wird eine Suspension, die eine tödliche Dosis eines genetischen Stammes der Streptokokken-Pneumonie enthält, durch intranasale Wurzel an anästhesierte Mäuse instilliert, die zuvor mit Flatline oder Kochsalzlösung als Kontrolle behandelt wurden.Die Bronchobilarlage wird durchgeführt, um die Subpopulation zu analysieren, die die Atemwege infiltriert, und das Lungengewebe wird verarbeitet, um eine Einzelzellsuspension für die phänotypische Charakterisierung der Zellpopulation zu erhalten. Durch die multiparametrische Durchflusszytometrie können auch Unterkieferlymphknoten, akzessorische Unterkieferlymphknoten sowie sublinguales Gewebe zur Durchführung einer Durchflusszytometrie oder einer anderen nachgelagerten Analyse verarbeitet werden. Zellpopulationen, die in die Atemwege eindringen.Die Lunge oder sublinguale Schleimhaut kann durch Immunphänotypisierung und multiparametrische Durchflusszytometrie identifiziert werden. Die Immunaktivierung in verschiedenen Geweben nach sublingualer Immuntherapie kann auch durch Untersuchung des Transkriptionsprofils mittels Echtzeit-PCR analysiert werden. Willkommen im Labor für Impfstoffforschung am Department für Biotechnologie, wir weisen die School of Medicine der Universität U.Eines der Hauptinteressen unseres Labors ist es, neue Strategien zur Immunintervention gegen Atemwegsinfektionen zu entwickeln. Der internationale Weg wurde erfolgreich für die Verabreichung von immunstimulierenden Mitteln zur Behandlung oder Vorbeugung von Lungeninfektionen oder anderen Theologien eingesetzt.Wir haben gezeigt, dass die intranasale Verabreichung von Lin, der Bestandteil des bakteriellen Gels, wirksam eingesetzt werden kann, um eine anhaltende Lungeninfektion zu verhindern, die durch STO-Mäuse verursacht wird. Obwohl die intranasale Wurzel normalerweise eine niedrige Dosis des Therapeutikums erfordert und eine starke Reaktion in den Atemwegen hervorruft, hat sie einige Nachteile, wie die Möglichkeit einer Toxizität des Zentralnervensystems und einer Faszienlähmung, die mit der Absorption von immunstimulierenden Verbindungen über die Oratoriumsnerven verbunden ist. Daher haben wir ein Modell der UAL-Immuntherapie als Alternative zur Induktion einer schützenden Immunität gegen Pneumokokken-Pneumonie entwickelt.Die sublinguale Immuntherapie bietet eine sicherere Alternative im Vergleich zur intranasalen Installation. Es ist nicht-invasiv, schmerzlos und einfach. Obwohl es möglicherweise höhere Dosen eines Therapeutikums erfordert, kann es zur Verabreichung von NA oder pharmazeutischen Produkten verwendet werden, um letztendlich die Immunantwort in der Länge zu modulieren.Wir zeigen Ihnen nun, wie Sie eine sublinguale Verabreichung bei Mäusen mit Schmeicheleien als Therapeutikum durchführen können. Eine subin-Immuntherapie mit schmeichelhafter Immuntherapie kann Mäuse schließlich vor einer tödlichen intranasalen Herausforderung mit einer Streptokokken-Pneumonie schützen, indem sie eine angeborene Immunantwort in der Lunge auslöst. Wir werden uns auch mit der Charakterisierung der Länge und der angeborenen Reaktion während der Infektion und nach sublingualer Immuntherapie unter Verwendung von Flowy Geometry und real-time PCR befassen.Abschließend zeigen wir Ihnen, wie Sie lokale Graining-Lymphknoten und sublinguales Gewebe für die weitere Analyse sammeln können. Nach der Herstellung der Lösung des zu testenden Stimulans anästhesieren Sie die Tiere, indem Sie 200 Mikroliter der Ketamin-OSI-Lösung durch interperitoneale Injektion Pet, die Lösung, die das Immunstimulans enthält, in einem maximalen Volumen von 10 Mikrolitern verabreichen. Nehmen Sie dann die Maus mit der linken Hand und halten Sie sie mit Daumen und Zeigefinger mit der freien Hand fest.Legen Sie die geschlossene Pinzette vorsichtig unter die Zunge und halten Sie sie an Ort und Stelle. Nehmen Sie mit dem Mittel- und Ringfinger die Pipette und verabreichen Sie die Lösung auf den Mundboden und die dorsale Seite der Zunge. Entfernen Sie die Pinzette und lassen Sie das Maul drei bis fünf Minuten ruhen, bevor Sie es wieder in den Käfig einsetzen.Hauptmerkmale dieser Technik sind das Gesamtvolumen, das zur Behandlung der Tiere verwendet wird, und die Anästhesie. Die geringe Größe der Mäuse in der Mundhöhle begrenzt das maximale Volumen, das auf das sublinguale Verhältnis aufgebracht werden kann, auf 10 Mikroliter. Sobald die Dosis festgelegt ist, müssen Sie die Konzentration der Probe auf dieses maximale Volumen einstellen.Größere Volumina können zu unerwünschtem Schlucken oder Ansaugen der Lösung führen. Die Anästhesie ist entscheidend, um ein Verschlucken zu vermeiden und das Eindringen der Substanzen durch das Epithel zu ermöglichen. Wir raten Ihnen, die Inhalation nicht zur Anästhesie zu verwenden, da die Mäuse zu früh aufwachen.Beachten Sie, dass einige injizierbare Anästhetika bei Mäusen Speichelfluss auslösen können. In diesem Fall verwenden Sie ein kleines Stück Passung oder Papier, um den übermäßigen Speichelfluss zu beseitigen, bevor Sie die Lösung mit dem Therapeutikum auftragen, die Dosis des Therapeutikums sollte angepasst werden, um seine Wirkung zu maximieren, und es wird dringend empfohlen, mehrere Dosen zu testen. Wenn Sie Ihre Verbindung zuvor über die intranasale Wurzel verwendet haben, wäre eine fünf- bis zehnmal höhere Dosis ein guter Ausgangspunkt für den Test.Testen Sie Ihr Therapeutikum anhand der sublingualen Wurzel. Es ist zu beachten, dass die Resorption durch das Epithel begrenzt ist Größe des Moleküls auftauen Ein Aliquot des zuvor vorbereiteten Arbeitsbestandes von Streptokokken-Lungenentzündung mit bekannter bakterieller KBE-Zahl fünf Minuten lang bei 2.500 Gs zentrifugieren und das Supernat verwerfen In einem Milliliter Kochsalzlösung suspendieren und zentrifugieren. Werfen Sie den Überstand wieder ab und ruhen Sie sich dann aus.Suspendieren Sie das Pellet in dem entsprechenden Volumen steriler Kochsalzlösung, um eine Suspension von viermal 10 bis fünf KBE in 50 Mikrolitern zu erhalten, was der minimalen bakteriellen Dosis des verwendeten partikulären Serotyps entspricht, die eine 100%ige Mortalität in der Glühbirne verursacht. Mäuse nehmen 50 Mikroliter der Bakteriensuspension und träufeln das Gesamtvolumen vorsichtig in die Nasenlöcher einer zuvor anästhesierten Maus. Halten Sie die Maus zwei Minuten lang aufrecht und lassen Sie sie weitere zwei Minuten in dorsaler Position ruhen. Nach der Herausforderung bestätigten Sie die KBE-Zahlen in der Bakteriensuspension, indem Sie die Suspension seriell zehnfach verdünnten und auf Blut aufbrachten.Agarplatte: Über Nacht bei 37 Grad mit 5% CO2-Schleim inkubieren. Kolonien von Ethno können durch das für alpha-hämolytische Bakterien charakteristische grüne alo unterschieden werden. Zählen Sie die koloniebildenden Einheiten und registrieren Sie die Verwendung der Challenge-Dosis.Nachdem Sie das Tier eingeschläfert haben, öffnen Sie die Brusthöhle bis zum Hals. Machen Sie einen Schnitt entlang der Vorderbeine, um die Luftröhre und den sublingualen Bereich freizulegen. Identifizieren Sie die Lymphknoten des Unterkiefers.Diese erscheinen in der Regel als weißliche, ovale Strukturen, die über den Speicheldrüsen sitzen. Ziehen Sie mit der feinen Kurvenzange das sublinguale Gewebe vorsichtig nach oben und legen Sie die dorsale Seite des Mundbodens frei. Entnehmen Sie die Lymphknoten des Unterkiefers, indem Sie sie mit der Zange mit der dünnen Spitze vorsichtig nach oben ziehen, um sie aus dem Gewebe zu lösen.Legen Sie sie in ein Röhrchen, das C-R-P-M-I oder Nukleinsäure-Konservierungslösung gemäß dem nachgeschalteten Verfahren enthält. Das würde später durchgeführt werden. Identifizieren Sie nun die kleineren Lymphknoten, die sich auf beiden Seiten des Rachens tiefer befinden und nehmen Sie sie heraus.Dies sind die akzessorischen Unterkieferlymphknoten. Öffnen Sie die Brusthöhle, um die Lunge freizulegen und den Thymus zu entfernen. Schneiden Sie die untere Binna CVA ab und entfernen Sie den Überschuss an Blut mit einem saugfähigen Gewebe, um die Bronchospülung durchzuführen.Legen Sie zuerst die Luftröhre frei. Machen Sie dann mit einem Skalpell einen kleinen Schnitt und führen Sie eine dünne Spitze ein. Peppe zuvor mit einem Milliliter PBS ohne Calcium, Magnesium plus einem Millimolar EDA gefüllt: Vorsichtig einträufeln und das Gesamtvolumen mindestens dreimal aspirieren.Anschließend wird die Zellsuspension aspiriert und in ein steriles 1,5-Milliliter-Röhrchen überführt. Perfusionieren Sie die Lunge, indem Sie fünf Milliliter PBS ohne Kalzium, Magnesium plus ein millimolares EDTA in den rechten Ventrikel des Herzens injizieren, um alle roten Blutkörperchen und Immunzellen zu eliminieren, die in den Blutgefäßen der Lunge vorhanden sind. Wenn die Perfusion korrekt durchgeführt wurde, ändert sich die Lungenfarbe von rosa zu weiß.Entfernen Sie das Herz, nehmen Sie die Perfund-Lungen und legen Sie sie je nach nachgeschalteter Analyse in ein vollständiges Medium oder eine Nukleinsäure-Konservierungslösung. Wenn Sie die Zellpopulation in der sublingualen Schleimhaut analysieren möchten, isolieren Sie den Kopf des Tieres, entfernen Sie die Speicheldrüsen und befestigen Sie Weichgewebe. Machen Sie auf jeder Seite des Mundes einen Schnitt bis zum Unterkiefergelenk und trennen Sie den unteren Kiefer zusammen mit der Zunge und dem Mundboden.Ziehe mit einer stumpfen Rattenzahnzange die Zunge nach oben und mache einen Schnitt an der Stelle, an der der Zungengrund auf den Mundboden trifft. Dieser Bereich bildet die sublinguale Schleimhaut. Schneiden Und entfernen Sie die Zunge mit einem Biopsiestanzer, einer Pinzette und einer Schere.Schneiden Sie das sublinguale Schleimhautgewebe aus und legen Sie es in eine saubere Röhre. Übertragen Sie die Lunge auf eine 24-Well-Platte und zwar mit einer sauberen Schere. Fügen Sie einen Milliliter Aufschlussmedium hinzu, pipettieren Sie mehrmals auf und ab und inkubieren Sie nach der Inkubation 40 Minuten lang bei 37 Grad und 5 % CO2.Pipettieren Sie auf und ab, um sicherzustellen, dass die meisten Zellen aus dem Gewebe gelöst wurden. Die Zellsuspension auf ein 40-Mikromesh-Zellsieb geben und mit fünf Millilitern PBA waschen. Fünf Millimolare EDTA-Zentrifuge bei 2.500 GS fünf Minuten.Reus: Suspendieren Sie Zellen in einem Milliliter Fax-EDTA, bestehend aus PBS ohne Kalzium, Magnesium, einem millimolaren EDTA und 1% fetalem Boing-Serum. Nehmen Sie eine QU und verdünnen Sie die Zellen mit Trip und Blau zweifach und zählen Sie die Reus-Suspendzellen auf eine Konzentration von zweimal 10 auf die sieben Zellen pro Milliliter und fügen Sie 50 Mikroliter pro Röhrchen hinzu. Geben Sie 50 Mikroliter einer zweifachen Antikörpermischung in jedes Röhrchen für die immunphänotypische Analyse.30 Minuten im Dunkeln auf Eis inkubieren, nachdem Sie dreimal mit Fakten gewaschen haben. EDTA resuspendiert die Zellen in 200 Mikrolitern Fakten EDTA und analysiert in einem Zytometer, das gleiche Verfahren kann verwendet werden, um die Zellpopulation in sublingualem Gewebe zu analysieren, indem Verdauungsmedien verwendet werden, die diesen Raum enthalten. Kollagenase und DS one sublinguale Immuntherapie unter Verwendung von gereinigter Flatline, einem Agonisten von TLR fünf und LC vier, induzierten eine signifikante Hochregulierung der mRNA-Spiegel von Chemokinen und Zytokinen, die an der Rekrutierung von Neutrophilen in der Lunge beteiligt sind.Dies wurde auch während der Infektion beobachtet. Die Rekrutierung von PMN in die Lunge wurde durch Durchflusszytometrie bestätigt. Die sublinguale Behandlung mit TLR-Fünf-Agonisten korrelierte mit einem erhöhten Überleben der Tiere und einem Schutz vor Pneumokokken-Pneumonie.Wir haben gezeigt, dass die sublinguale Immuntherapie ein wirksames Mittel ist, um den Schutz der Leitungen vor invasiver PNE-Pneumokokken-Pneumonie zu induzieren. Dies wurde durch die sublinguale Installation von lain erreicht, einem Schneider-Fünf-Agonisten, der nicht durch histopneumonie produziert wird. Die sublinguale Installation der lain induzierten Hochregulation des Chemokins C Xcl L in den Leitungen sowie die Infiltration von Neutrophilen.Eine Art von Zellen, die für die Eliminierung von Pneumokokken, der sublingualen Immuntherapie mit TLR-Agonisten, entscheidend ist, könnte zur Behandlung von Infektionen allein oder in Kombination mit aktuellen Therapien wie der Antibiotikabehandlung eingesetzt werden, um die Ausbreitung von Bakterien und die Entwicklung schwerer Infektionsformen zu verhindern. Die sublinguale Wurzel kann auch zur Verabreichung von Impfstoffen verwendet werden und hat sich als wirksam bei der Induktion einer mukosalen sowie systemischen schützenden Immunität erwiesen. Diese Strategie ist vor allem bei Atemwegsinfektionen und insbesondere bei Bro-Pneumonien von Interesse, da sie nicht nur die Grunderkrankung verhindern könnte, sondern auch die Asalbesiedlung, die die Bakterien beim Eintrittssport blockiert.Insgesamt glauben wir, dass der sublinguale Weg eine attraktive Alternative ist, um neue Strategien zur Behandlung oder Vorbeugung von Atemwegsinfektionen zu entwickeln. Wir empfehlen Ihnen, diese Technik auszuprobieren.

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Die intranasale Verabreichung von rekombinantem Influenza Vaccines in chimären Maus-Modelle zu Mucosale Immunität Studieren

Wir demonstrieren das Verfahren zur intratrachealen Inokulation von Haemophilus influenzae in die unteren Atemwege von Mäusen. Dies ist ein sehr nützliches Werkzeug, um Signalwege zu untersuchen, die die Entzündung der Atemwege in Mausmodellen regulieren.

Intratracheale Verabreichung von<em&gt; Haemophilus influenzae</em&gt; In Mausmodelle zur Untersuchung Atemwegsentzündung

Wir beschreiben hier die Methodik, die zum Vergleich der schützenden Wirksamkeit und der Immunantwort der Lunge, die durch intranasale und subkutane Immunisierung mit BCG im Mausmodell induziert wird. Unsere Ergebnisse zeigen die Vorteile der Lungenimpfung und deuten auf eine Rolle der IL17-vermittelten Reaktion beim impfinduzierten Schutz hin.

Die protektive Wirksamkeit und pulmonale Immunantwort nach subkutaner und intranasale BCG Verabreichung an Mäuse

Beschrieben, ist die Vorbereitung von Antigenen liposomalen Nanopartikeln und ihre Verwendung in anregenden B-Zell Aktivierung in Vitro und in Vivo. Konsistente und robuste Antikörperantworten führte zur Entwicklung eines neuen Modells der Erdnuss-Allergie. Das Protokoll zur Erzeugung von Antigenen Liposomen kann auf verschiedene Antigene und Immunisierung Modelle ausgedehnt werden.

Antigenen Liposomen für Generation krankheitsspezifische Antikörper

Hier präsentieren wir eine elegante Protokoll für in Vivo Evaluierung der Impfstoff Wirksamkeit und Host Immunantworten. Dieses Protokoll kann für Impfstoff-Modelle, die studieren, virale, bakterielle oder parasitäre Erreger angepasst werden.

Bewertung der Wirt-Pathogen-Antworten und Wirksamkeit des Impfstoffes bei Mäusen

Hier wird ein Schrittweiseverfahren vorgestellt, um akute Lungenverletzungen bei Mäusen durch direkte intratracheale Lipopolysaccharid-Instillation zu induzieren und FACS-Analysen von Blutproben, Bronchoalveolar-Spülflüssigkeit und Lungengewebe durchzuführen. Minimale Invasivität, einfache Handhabung, gute Reproduzierbarkeit und Titration der Schwere der Erkrankung sind Vorteile dieses Ansatzes.

Induzieren akute Lungenschädigung bei Mäusen durch direkte intratracheale Lipopolysaccharid-Instillation

Dieser Artikel beschreibt und demonstriert die Verabreichung von intranasalen Impfstoffen und die Sammlung von Milch von stillenden Kaninchen (Oryctolagus cuniculus) als Mittel zur Beurteilung der Schleimhautimmunität in einem translational geeigneten Modell der mütterlichen Immunisierung.

Intranasale Immunisierung und Milchsammlung in Studien zur mütterlichen Immunisierung bei neuseeländischen Weißen Kaninchen (Oryctolagus cuniculus)

In dieser Studie wurde eine nicht-invasive endotracheale Instillationstechnik demonstriert, die ALI bei Ratten unter Verwendung eines einfachen Laryngoskops entwickelt, um eine präzise LPS-Abgabe an die Lunge sicherzustellen. Das LPS wird über ein Endotrachealrohr mit einem Laryngoskop eingebaut. Das Ausmaß der Lungenverletzung wird zu mehreren Zeitpunkten bewertet.

Nicht-invasive endotracheale Verabreichung von Lipopolysaccharid zur Auslösung akuter Lungenschäden bei Nagetieren

Erfahren Sie, wie sublinguale Immuntherapie die angeborene Immunantwort in der Lunge stärkt und Mäuse vor tödlicher Pneumokokken-Pneumonie schützt. Diese Methode bietet eine sichere Alternative zur intranasalen Verabreichung.

Sublinguale Immuntherapie als Alternative zum Schutz vor akuten Atemwegsinfektionen ausgelöst werden

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