Name: Technik der Schweineleber Beschaffung und orthotopen Transplantation mit einem Active Porto-Kava-Shunt (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-05-07T13:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 27 s
Description: Lernen Sie die orthotope Lebertransplantation beim Schwein mit einem aktiven Porto-Kava-Jugular-Bypass. Diese Methode verhindert intestinale Stauung und gewährleistet stabile Hämodynamik während des Eingriffs.

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Die Studie wurde durch Forschungsstipendien der Roche Organ Transplant Research Foundation (ROTRF) und Astellas unterstützt. Markus Selzner wurde mit einem ASTS Career Development Award unterstützt. Matthias Knaak wurde durch das Astellas Research Scholarship unterstützt. Wir danken Uwe Mummenhoff und der Familie Birmingham für die großzügige Unterstützung.

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</ol>

Die Autoren haben nichts offenzulegen.

Experimental Schweine OLTx ist ein anspruchsvolles Verfahren für ein Forschungs Einstellung ohne die Intensiv Ressourcen eines klinischen Szenario. Mögliche Komplikationen sind hämodynamische Instabilität, Blutungen, Organ Ischämie, Hypothermie, und Stoffwechsel sowie der Atemwege, Dekompensation. Für jede Arbeitsgruppe, genügt Verfahrens Ausbildung der Operationstechnik 5 als auch das Schwein Anästhesie 14,15 um repräsentative und reproduzierbare Ergebnisse zu erhalten obligatorisch. Vielen technischen Feinheiten sind in der Literatur beschrieben worden, insbesondere in Bezug auf die Gefäßrekonstruktion Phase 5. Die oben beschriebene OLTx Protokoll bietet die erforderlichen Informationen für einen Sekt-Austausch-Modell ähnelt menschlichen OLTx. Die zur Verfügung gestellten Ergebnisse zeigen zuverlässig das Überleben der Tiere und Graft Erholung in beiden HBD und DCD-Modelle. Das Protokoll ist in kurzfristige Überleben Szenarien in Graft Reperfusion expe gebraucht wird,riments zum Beispiel als auch in Langzeitüberleben Modelle wie Toleranzstudien. Ein großes Hindernis von Schweine OLTx ist die relativ schlechte Toleranz Cava und Pfortader Querspann. Splanchnischen Staus während der anhepatischen Phase verursacht venösen Bluthochdruck und Kapillare Schäden, die zu den wichtigsten Darmischämie und hämodynamische Instabilität auf den Punkt eines irreversiblen Schock auch nach Organ Reperfusion 7 führen kann. Da die Hohlvene vollständig in Leberparenchym eingebettet, ist ein Cava erhaltHuckepackVerfahren nicht durchführbar. Die Gesamt Okklusion der Vena Cava im Cava Wiederaufbauphase beeinträchtigt die hämodynamische Stabilität des Schweins. Obwohl einige Berichte zeigen, dass Schweine OLTx während insgesamt Cava und Pfortader Okklusion von weniger als 25 min 16,17 erreicht werden, ist eine porto-cava-Halsschlag Bypass Technik zum Zeitpunkt der Gefäßrekonstruktion der sicherer und praktischer Option 7- 9,18. In thErfahrung e Autoren, ist eine passive porto-Halsschlag Bypass nicht optimal, das Schwein hämodynamisch während der anhepatischen Phase stabil zu halten. Die Bypass-Modell, einschließlich der aktiven Druckverlust beider infrahepatische Cava und Pfortader, ermöglicht ein ruhiges Wiederaufbauphase der suprahepatischen caval und Portal Anastomosen sogar mit erweiterten Klemmzeit aufgrund unvorhergesehener Komplikationen. Im Gegensatz zu früheren Berichten 7 eine Splenektomie nicht zwingend erforderlich, wenn das Portal Bypasskatheter wird entfernt. Sowohl Milz Arterie und Vene sind etwa auf halbem Weg entlang der Länge der Milz Verlassen der proximalen Hälfte ausreichend durchblutet geschlossen. Komplikationen wie Blutungen oder Luftembolie durch Bypass-Abschaltung sind vermeidbar, indem sichergestellt wird, dass der Bypass wird sorgfältig platziert und ordnungsgemäß gesichert. In langfristige Überleben OLTx Experimenten wird die Gallenganganastomose aufgrund seiner hohen Komplikationsrate 19 als eine Schwachstelle. Die Gallengewebe ist sehr zerbrechlich und needs besondere Sorgfalt bei der Handhabung. Viele verschiedene Anastomose Techniken wurden beschrieben 5,19. Eine End-zu-End-Anastomose ist technisch einfach und mit minimalem Komplikationen 19 verbunden. Eine fortlaufende Naht mit einer nicht-schneidenden Nadel darunter große Abschnitte peribiliären Bindegewebe erscheint überlegen einer unterbrochenen Naht. Der Gallengang wird unter unnötige Spannung gesetzt, wenn die einzelnen Maschen der Knopfnaht verknotet werden. Dies kann in Gewebe Tränen und in Folge Galle Lecks führen. Das Nahtmaterial - resorbierbar oder nicht resorbierbar - ist in der Regel nicht von Bedeutung, da ihre begrenzte Lebensdauer, bis das Schwein wird beendet. Für langfristige Überleben Modelle über mehrere Monate, resorbierbares Nahtmaterial - bevorzugt - wie in der menschlichen OLTx. Besondere Sorgfalt muss mit der postoperativen Follow-up genommen werden. Ausreichende Ernährung und Flüssigkeitszufuhr, eine zuverlässige Schmerzlinderung Protokoll und eine richtige ImmunsuppressionRegime sind obligatorisch. Für Langzeitversuche, erscheint Immunsuppression besonders wichtig. Im Vergleich zu anderen Säugetieren, Schweine zeigen eine überraschend geringe immunologische Abstoßung Rate nach OLTx 20,21. Knopfzelle Infiltrationen sind in der zweiten Woche nach der Transplantation maximale und verringern spontan auch ohne Immunsuppression. Die Ablehnung ist nur selten die Todesursache nach Schweine OLTx 22. Aber auch bei der Immunsuppression Protokoll mit der Verwaltung hier genannten Steroide iv und po Calcineurin-Inhibitoren, Transplantatabstoßung wird durch eine leichte Erhöhung der Transaminasen ab etwa 4 Tage nach OLTx angegeben und durch scheinbare Portal Feldrundzellinfiltration bestätigt. Calcineurin-Inhibitoren gegeben entweder po oder iv 23,24 25,26 werden; Beide Methoden haben Nachteile. Auch bei oraler Applikationshilfen, bleibt die tatsächliche Menge Erreichen des Gastrointestinaltraktes schwer fassbar. Auf der anderen Seite, kontinuierlichen iv-Infusion inein Schweinestall mit einer aktiven Tier ist schwierig. Daher muß der iv Applikation in Form eines Bolus, der in hohen Wirkstoffkonzentrationsspitzen zusammen mit potentiellen toxischen Wirkungen führt geführt werden. Dennoch beide Anwendungsverfahren anscheinend langfristige Überleben zu ermöglichen. Ähnlich wie bei einer klinischen Umgebung, wird postoperativen Stress-Ulkus-Prophylaxe empfohlen. Postoperative Blutungen aus Magengeschwüren ist ein häufiges Problem und kann zu einer Leberfunktions 27 bezogen werden. Nach ein paar Fälle von Magen-Darm-Blutungen in beiden OLTx Gruppen begannen die Autoren regelmäßige Prophylaxe mit Pantoprazol und keine gastrointestinalen Blutungen seitdem erleben. Strikte Aufrechterhaltung steriler Bedingungen, intraoperativ, vergleichbar mit den Verhältnissen in einer klinischen Operationsraum und folglich Antibiotikaprophylaxe, verringert das Risiko von infektiösen Komplikationen. Zusammenfassend diesem Artikel provides praktische Informationen für den Aufbau einer Schweine OLTx Programm in einem Forschungs Einstellung. Ausreichend Engagement, Praxis und Teamarbeit ist, um die Lernphase zu verringern, um zuverlässige Ergebnisse zu erzeugen, und um die Kosten und die Anzahl der Versuchstiere zu reduzieren wichtig.

Lebertransplantation (OLTx) ist die einzige Behandlungsoption für Patienten im Endstadium einer Lebererkrankung oder fortgeschrittenem Leberzellkarzinom. In den letzten 25 Jahren hat sich die Zahl der Kandidaten auf der Warteliste nach und nach erhöht und jetzt weit die Anzahl der verfügbaren Transplantate überschreitet. In den meisten Regionen der Transplantation, 20 bis 30% der Patienten auf der Warteliste für eine Lebertransplantation sterben, ohne eine Organtransplantation oder durch Fortschreiten der Krankheit ausgelistet. Strategien, um die Spenderpool zu erhöhen und damit die Anzahl der verfügbaren Transplantate, werden dringend benötigt. Erweiterte Kriterien Organzuteilung, verlängerte Transplantaterhaltung, und die Induktion von Immuntoleranz noch stellen eine große klinische Herausforderung 1-3. Daher ist experimentelle OLTx Forschung entscheidende, um klinische OLTx Praxis zu optimieren. Porcine OLTx ist ein gut etabliertes experimentellen Modell, das menschliche OLTx in vielerlei Hinsicht einschließlich l ähneltiver Größe, Anatomie und Physiologie 4-6. So hat es sich zu einem Standard experimentelle Methode in Forschungsbereichen wie Operationstechniken, Physiologie, Immunologie, Erhaltung und Ischämie-Reperfusionsschaden. Zahlreiche Techniken der Transplantat Beschaffung Empfänger Hepatektomie, und insbesondere eine Gefäßrekonstruktion, wurden in der Literatur 5 beschrieben. Die Wahl der geeigneten Technik variiert je nach Präferenz des Forschers und technische Leistungsfähigkeit. Im Gegensatz zum menschlichen Szenario splanchnic Staus während des anhepatischen Phase repräsentiert ein wichtiges Problem in porcine OLTx. Nachfolgende Darmischämie und kongestive Gefäßschäden kann schwere hämodynamische Instabilität verursachen, zu gefährden das Schwein Überleben und damit den Erfolg des Experiments 7-9. Daher ist eine ausreichende Darm Dekompression verpflichtend, vor allem in weniger technisch verfeinert experimentellen Einstellungen. Unsing eine aktive porto-Kava-Halsschlag Shunt für die Dauer des anhepatischen Phase ist eine zuverlässige Möglichkeit, Darm-Staus zu vermeiden. Das System kann für frühen Reperfusion Experimenten als auch langfristige Überleben Szenarien verwendet werden. Das folgende Protokoll enthält alle Informationen für eine stabile und reproduzierbare Lebertransplantationsmodell in Schweinen, einschließlich Spenderleber Beschaffung, Empfängerbetrieb einschließlich Hepatektomie und End-to-End-Schiff Rekonstruktionstechniken und postoperative Pflege.

<table><tbody><tr><td>Atropinsulfat 15 mg/30 ml</td><td>Rafter 8 Produkte</td><td>238481</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorphin 0,3 mg/ml</td><td>RB Pharmaceuticals LDT</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Cefazolin 1 g</td><td>Pharmaceutical Partners of Canada Inc.</td><td></td><td></td>2237138</tr><tr><td>Cyclosporin Lösung zum Einnehmen 5.000 mg/50 ml</td><td>Novartis Pharmaceuticals Canada Inc.</td><td></td><td></td>2150697</tr><tr><td>Fentanylcitrat 0,25 mg/5 ml</td><td>Sandoz Canada Inc.</td><td></td><td></td>2240434</tr><tr><td>Heparin 10.000 iU/10 ml</td><td>Leo Pharma A/S</td><td>453811</td><td></td></tr><tr><td>Isofluran 99,9 %, 250 ml</td><td>Pharmaceutical Partners of Canada Inc.</td><td></td><td></td>2231929</tr><tr><td>Ketaminhydrochlorid&nbsp; 5000 mg/50 ml</td><td>Bimeda-MTC Animal Health Inc.</td><td></td><td></td>612316</tr><tr><td>Laktat-Ringer" s + 5 % Dextrose, 0,5 l</td><td>Baxter Corporation</td><td>61131</td><td></td></tr><tr><td>Lacteted Ringer" s, 1 L</td><td>Baxter Corporation</td><td>61085</td><td></td></tr><tr><td>Metronidazol 500 mg/100 ml</td><td>Baxter Corporation</td><td>870420</td><td></td></tr><tr><td>Midazolam 50 mg/10 ml</td><td>Pharmazeutische Partner von Canada Inc.</td><td></td><td></td>2242905</tr><tr><td>Pantoprazol 40 mg</td><td>Sandoz Canada Inc.</td><td></td><td></td>2306727</tr><tr><td>Kaliumchlorid 40 mEq/20 ml</td><td>Hospira Healthcare Corporation</td><td>37869</td><td></td></tr><tr><td>Propofol 1.000 mg/100 ml</td><td>Pharmascience Inc.</td><td></td><td></td>2244379</tr><tr><td>Protaminsulfat 50 mg/5 ml</td><td>Pharmazeutische Partner von Canada Inc.</td><td></td><td></td>2139537</tr><tr><td>Kochsalzlösung 0,9%, 1 l</td><td>Baxter Corporation</td><td>60208</td><td></td></tr><tr><td>Natriumbicarbonat 50 mEq/50 ml</td><td>Hospira Healthcare Corporation</td><td>261998</td><td></td></tr><tr><td>Solu-Medrol 500 mg</td><td>Pfizer Canada Inc.</td><td></td><td></td>2367963</tr><tr><td>Tranexamsäure 1.000 mg/10 ml</td><td>Pfizer Canada Inc.</td><td></td><td></td>2064413</tr><tr><td>University of Wisconsin Lösung, SPS-1</td><td>Organwiederherstellungssysteme</td><td>SPS-1</td><td></td></tr><tr><td>Xylocain Endotracheal 10 mg/50 ml</td><td>AstraZeneca</td><td>2003767</td><td></td></tr><tr><td>Appose ULC 35 W Hautklammergerät</td><td>Covidien Kanada</td><td>803712</td><td></td></tr><tr><td>Maxon, 1</td><td>Covidien Kanada</td><td>606173</td><td></td></tr><tr><td>Sofsilk, 0</td><td>Covidien Kanada</td><td>S606</td><td></td></tr><tr><td>Sofsilk, 2-0</td><td>Covidien Kanada</td><td>S405</td><td></td></tr><tr><td>Sofsilk, 3-0</td><td>Covidien Kanada</td><td>S404</td><td></td></tr><tr><td>Surgipro II, 4-0</td><td>Covidien Kanada</td><td>VP581X</td><td></td></tr><tr><td>Surgipro II, 5-0</td><td>Covidien Kanada</td><td>VP725X</td><td></td></tr><tr><td>Surgipro II, 6-0</td><td>Covidien Kanada</td><td>VP733X</td><td></td></tr><tr><td>Katheter i.v, 18 G</td><td>BD Kanada</td><td>381147</td><td></td></tr><tr><td>Cook TPN Katheter, 9,5 Fr</td><td>Cook Medical Company</td><td>C-TPNS-9.5-90</td><td></td></tr><tr><td>PSI Kit für Scheidenkatheter, 8.5 Fr</td><td>Arrow International</td><td>ASK-09803-UHN</td><td></td></tr><tr><td>Infusionspumpenlinie</td><td>Smith Medical ASD Inc.</td><td>21-0442-25</td><td></td></tr><tr><td>Leber-Admin-Set (Spülleitung)</td><td>CardioMed Supplies Inc</td><td>17175</td><td></td></tr><tr><td>Mallinckrodt, Trachealkanüle, 6,5 mm</td><td>Covidien Kanada</td><td>86449</td><td></td></tr><tr><td>Med-Rx Saugverbindungsschlauch</td><td>Benlan Inc.</td><td>70-8120</td><td></td></tr><tr><td>Organtasche</td><td>CardioMed Supplies Inc</td><td>2990</td><td></td></tr><tr><td>Saugspitze</td><td>Tyco Healthcare Group LP</td><td>8888501023</td><td></td></tr><tr><td>Valleylab, Kauterstift</td><td>Covidien Kanada</td><td>E2515H</td><td></td></tr><tr><td>Valleylab, Patientenrückführelektrode</td><td>Covidien Kanada</td><td>E7507</td><td></td></tr><tr><td>Bypass-Anschluss 3/8" x 1/4"</td><td>Raumedic AG</td><td>955083-001</td><td></td></tr><tr><td>Bypass-Verbinder 3/8" x 3/8" Luer-Lock</td><td>Raumedic AG</td><td>955163-001</td><td></td></tr><tr><td>Bypass-Anschluss Y 3/8" x 3/8" x 1/4"</td><td>Raumedic AG</td><td>961360-002</td><td></td></tr><tr><td>Bypass-Schlauch 1/4" x 1/16"</td><td>Raumedic AG</td><td>039505-010</td><td></td></tr><tr><td>Bypass-Schlauch 3/8" x 3/32"</td><td>Raumedic AG</td><td>039535-005</td><td></td></tr><tr><td>Rotaflow Kreiselpumpe</td><td>Maquet-Dynamed</td><td>HC 2821</td><td></td></tr><tr><td>Edelstahl Schlauchschellenring, 5mm</td><td>Oetiker</td><td>16700007</td><td></td></tr><tr><td>Bauchretraktor</td><td>Medite GmbH</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>DE Bakey &ndash; Beck, infrahepatische Cava-Klemme</td><td>Aesculap Inc.</td><td>FB519R</td><td></td></tr><tr><td>Deithrich, Atraumatische Klemme (Pfortader)</td><td>Aesculap Inc.</td><td>FB525R</td><td></td></tr><tr><td>Gregory Bulldog Klemme, gebogen</td><td>Aesculap Inc.</td><td>FB382R</td><td></td></tr><tr><td>Gregory Bulldog Klemme, gerade</td><td>Aesculap Inc.</td><td>FB381R</td><td></td></tr><tr><td>Töpfe &ndash; De Martel, Schere</td><td>Aesculap Inc.</td><td>BC648R</td><td></td></tr><tr><td>Satinsky, suprahepatische Cava-Klemme</td><td>Aesculap Inc.</td><td>FB605R</td><td></td></tr><tr><td>Symmetrische Schlauchschelle</td><td>Codman Instruments</td><td>198010</td><td></td></tr><tr><td>Anästhesiegerät, Optimax</td><td>Moduflex Anästhesiegerät</td><td>SN5180</td><td></td></tr><tr><td>Bypass-Durchflussmesser, HT 110</td><td>Transonic Systems Inc.</td><td></td><td></td>HT110B11106</tr><tr><td>Sonde für Durchflussmesser, H6XL</td><td>Transonic Systems Inc.</td><td>H6Xl689</td><td></td></tr><tr><td>Wärmetherapiepumpe, T/Pumpe</td><td>Gaymar Industries Inc</td><td>TP500-G89D19</td><td></td></tr><tr><td>Infusionspumpe 3.000</td><td>SIMS Graseby LTD.</td><td></td><td></td>SN300050447</tr><tr><td>Isoflurandampf 19.1</td><td>Draeger Medical Deutschland GmbH</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Monitor, Datex AS 3</td><td>Instrumentarium Corp./ Hitachi</td><td>D-VHC14-23-02</td><td></td></tr><tr><td>Rotaflow Zentrifugalantrieb</td><td>Maquet-Dynamed</td><td>952301</td><td></td></tr><tr><td>Rotaflow Konsole</td><td>Maquet-Dynamed</td><td>706035</td><td></td></tr><tr><td>Temperature Therapy Pad</td><td>Gaymar Industries Inc</td><td>TP26E</td><td></td></tr><tr><td>Valleylab Force TX</td><td>Valleylab Inc.</td><td></td><td></td>216151480</tr><tr><td>Beatmungsgerät, AV 800</td><td>DRE Medizinische Geräte</td><td>40800AVV</td><td></td></tr><tr><td>Warm Touch, Patientenerwärmungssystem</td><td>Nellcor/ Covidien Kanada</td><td>5015300A</td><td></td></tr></tbody></table>

technik der schweineleber beschaffung und orthotopen transplantation mit einem active porto-kava-shunt

Technique of Porcine Liver Procurement and Orthotopic Transplantation using an Active Porto-Caval Shunt

Der Erfolg der Lebertransplantation hat zu einem dramatischen Organmangel geführt. Jedes Jahr stirbt eine beträchtliche Anzahl von Patienten auf der Warteliste für Lebertransplantationen, ohne eine Organtransplantation zu erhalten, oder werden aufgrund von Krankheitsfortschritten von der Liste gestrichen. Selbst nach einer erfolgreichen Transplantation bleiben Abstoßungsreaktionen und Nebenwirkungen der Immunsuppression ein großes Problem für das Überleben des Transplantats und die Morbidität der Patienten. 
Experimentelle Tierversuche waren für den Erfolg von Lebertransplantationen unerlässlich und spielen immer noch eine entscheidende Rolle in der Entwicklung der klinischen Transplantationspraxis. Insbesondere das porzine orthotope Lebertransplantationsmodell (OLTx) ist aufgrund seiner großen Ähnlichkeit mit der menschlichen Größe, Anatomie und Physiologie optimal für die klinisch orientierte Forschung. 
Die Dekompression der Darmstauung während der anhepatischen Phase von Schweine-OLTx ist wichtig, um ein zuverlässiges Überleben der Tiere zu gewährleisten. Durch den Einsatz eines aktiven Porto-Kaval-Jugular-Shunts wird eine hervorragende Darmdekompression erreicht. Das System kann sowohl für kurzfristige als auch für langfristige Überlebensexperimente eingesetzt werden. Das folgende Protokoll enthält alle technischen Informationen für ein stabiles und reproduzierbares Lebertransplantationsmodell bei Schweinen einschließlich der postoperativen Tierpflege.

In einem ersten Transplantationsstudie einer Heart-Beating-Donor-Modell (HBD, n = 5) wurde mit einem DCD Modell (n = 10) bis 45 min warmer Ischämie in situ ausgesetzt verglichen. In beiden Gruppen wurden Transplantate auf Eis für 10 Stunden nach der Auftragsvergabe aufbewahrt. In der HBD-Gruppe 100% der Empfänger Schweine überlebten bis zum Ende des Follow-up am Tag 5 nach der Transplantation. In der DCD-Gruppe, nur 50% der Empfänger überlebte Schweine für 5 Tage durch Gerinnungsprobleme oder Stoffwechselentgleisung, als Folge der verminderten postoperativen Leberfunktion. Alle Blutproben wurden aus dem zentralen Venenkatheter gesammelt. Nach der Zentrifugation wurden Serumproben gewonnen und auf hepatozellulären Verletzung (Aspartataminotransferase, AST), Gallenfunktion (Gesamt-Bilirubin und alkalische Phosphatase), und die Leberfunktion (INR) analysiert. 5 - der zeitliche Verlauf eines jeden Markers in den 2 gezeigt ist. <p class="jove_content" ast-werte erreichte ihren h nach stunden u l in der hbd-gruppe und dcd-gruppe p="0,13)" tagen wieder auf fast normale werte. weise wurden die alkalische phosphatase-werte deutlich im vergleich zu hbd gruppe erh w gesamt-bilirubin war stabil mgr mol sie bis zum tag das gro standardabweichung bilirubin-werte zeigt eine eigent heterogenit gallen verletzungen dieser gruppe. inr als marker leberfunktion zeigte einen trend dem ast-werte. werte hergestellt. hatten niedrigere mit einem peak bei zur dcd> Abbildung 1. Schema der porto-Kava-Shunt jugular. Der Bypass ist mit Ringer-Lactat-Lösung gefüllt. Dann wird der Kava-Teil mit einer Schlauchklemme festgeklemmt ist, werden die Halsschlagader und der Milz Teile zu den voreingestellten Katheter angeschlossen ist, wird der Bypass geöffnet und die Kreiselpumpe nach Pfortader Klemm gestartet. Nach Leberresektion ist die Kava-Teil der Bypass eingelegt und in der infrahepatische Hohlvene Stumpf auf die Nierenvenen gesichert, Schädel. Die Schlauchklemme gelöst wird, um caval Dekompression zu ermöglichen, zusätzlich zu dem Portal Dekompression. <img alt="Figur 2" src="/files/ftp_upload/52055/52055fig2.jpg"> Abbildung 2. Aspartat-Aminotransferase (AST) (HBD n = 5, DCD n = 10). AST ist ein empfindlicher Marker der Leberzellschädigung. Der Peak Achterner 24 Stunden in der HBD niedriger als in der DCD-Gruppe, was auf weniger Leber Reperfusionsschaden; die kleinere Standardabweichung zeigt homogenere Ergebnisse in der HBD-Gruppe. <img alt="Figur 3" src="/files/ftp_upload/52055/52055fig3.jpg"> Abbildung 3. Gesamtbilirubin (HBD n = 5, DCD n = 10). Gesamtbilirubin, als Marker der biliäre Clearance und Gallen Integrität, eine stabile und homogene Trend mit Werten unter 10 &amp; mgr; mol / l in der HBD-Gruppe. Das Bilirubin Kurve im DCD Gruppe graduell über die Zeit und zeigt eine hohe Standardabweichung, was darauf hindeutet, Gallenschäden nur in einem Teil der Versuchsgruppe. <img alt="Figur 4" src="/files/ftp_upload/52055/52055fig4.jpg"> Abbildung 4. Die alkalische Phosphatase (HBD n = 5, DCD n = 10). Die alkalische Phosphatase is einen Indikator für Gallen Verletzungen. Die Werte für die HBD-Gruppe sind niedriger als die der DCD-Gruppe, die weniger Gallen Verletzung impliziert. <img alt="Figur 5" src="/files/ftp_upload/52055/52055fig5.jpg"> Abbildung 5. INR (HBD n = 5, DCD n = 10). Ein hoher Wert zeigt INR verminderten Leberfunktion aufgrund der verringerten Freisetzung von Gerinnungsfaktoren. In beiden HBD und DCD Gruppen, kehren die INR-Werte auf normale Werte von 5 Tagen nach der Transplantation, was darauf hindeutet Erholung der Leberfunktion. Die Werte für die HBD-Gruppe erscheinen niedriger.

Experimentelle Tierversuche spielen eine zentrale Rolle bei der Entwicklung der klinischen Transplantationspraxis. Das porzine orthotope Lebertransplantationsmodell (OLTx) ähnelt stark den menschlichen Bedingungen und wird häufig in der klinisch orientierten Forschung eingesetzt. Das folgende Protokoll enthält alle Informationen für ein zuverlässiges porzines OLTx-Modell unter Verwendung eines aktiven Porto-Kaval-Jugular-Shunts.

Technik der Schweineleber Beschaffung und orthotopen Transplantation mit einem Active Porto-Kava-Shunt

The success of liver transplantation has resulted in a dramatic organ shortage. Each year, a considerable number of patients on the liver transplantation ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, eine allogene Lebertransplantation beim Schwein zuverlässig durchzuführen und so eine stabile tierische Hämodynamik sowohl per- als auch postoperativ zu gewährleisten. Dies wird erreicht, indem zunächst ein aktiver portaler kavaler Jugularshunt implementiert wird, bevor die Vena CVA und die Pfortader quergeklemmt werden, um eine Darmstauung während der Implantationsphase zu vermeiden. Anschließend wird eine orthotope Lebertransplantation mittels Cava-Ersatztechnik durchgeführt, beginnend mit der suprahepatischen Kabelanastomose.Dann wird die Pfortader anastomosiert und die Leber reperfundiert. Schließlich wird der portale cavale jugularis Shunt entfernt und die verbleibende Anastomose der vena cva infrahepatis, der Arteria hepatica und des Gallengangs communis abgeschlossen. Letztendlich hat das Schwein die Narkose abgesetzt und postoperativ engmaschig überwacht.Der Hauptvorteil dieser Technik gegenüber bestehenden Methoden wie dem totalen Gefäßverschluss oder der passiven Inanz besteht darin, dass bei dieser speziellen Technik eine Milzstauung während der anabolen Phase vollständig vermieden wird. Auf diese Weise beugen wir venöser Hypertonie und Kapillarschäden vor, die zu einer großen intestinalen Ischämie und hämodynamischen Instabilität führen können. Nach der Entnahme der Leber eines Spenderschweins und der Anästhesie des Empfängerschweins gemäß dem Textprotokoll wurde ein Empfängerschwein in Rückenlage auf einen Operationstisch auf einem Heizkissen gelegt. Nach der Intubation ist anhand der Kappengeometrie zu bestätigen, dass die Pulsoximetrie am Schwanz oder Ohr des Schweins korrekt durchgeführt wurde.Überwachen Sie die Herzfrequenz und die Sauerstoffsättigung. Führen Sie die Seldinger-Technik durch, um einen Mantelinduktor in die linke Vena jugularis externa einzuführen, der später für einen aktiven Jugularbypass des Portalkabels verwendet wird. Nach dem Einführen eines totalen parenteralen Ernährungskatheters in die rechte Vena jugularis externa unter sterilen Bedingungen präparieren Sie die rechte Halsschlagader und legen Sie einen Polypropylenkatheter zur invasiven arteriellen Drucküberwachung ein.Verwenden Sie dann zwei Null-Seidenbinder, um die Arterie zu umgeben, um eine Notfallligatur zu ermöglichen. Führen Sie als Nächstes eine Laparotomie in der Mittellinie durch und setzen Sie einen Bauchretraktor ein, um einen ausreichenden Zugang zum rechten oberen Quadranten zu erhalten. Teilen Sie dann in mittleren Schritten das hepato Zwölffingerdarmband in der Nähe der Leber zwischen den Bändern.Identifizieren, teilen und markieren Sie die Äste der Leberarterie und des Gallengangs. Als nächstes präparieren Sie die Leberarterie in retrograder Richtung bis zur Teilung der Arteria gastroduodenalis. Befreien Sie dann die Pfortader von anhaftendem Gewebe mit Hilfe eines Elektrokauters, mobilisierte Vena CVA aus dem Retroperitoneum auf der rechten Seite, um das Helium der Milz etwa zur Hälfte der Milzlänge freizulegen.Befreien Sie die Milzarterie und die Vene vorsichtig von anhaftenden Bauchfellschichten. Verwenden Sie dann 4 2 0 Seidenbinder, um sowohl die Milzarterie als auch die Vene zu umgeben. Führen Sie einen französischen Schleuseninduktor 8,5 mit zwei zusätzlichen Löchern in der Katheterspitze in die Milzvene ein, die distal zur Pfortader zeigt, mit einem der beiden Nullbinder.Fixieren Sie den Katheter distal an seinem Ansatz und verwenden Sie weitere zwei Nullbinder, um die Vene proximal zum Ansatz zu schließen. Als nächstes füllen Sie Kochsalzlösung in einen Bypass, der aus einem Kreiselpumpenkopf, einem Junularrohr und einem Zufluss aus einem Portalast und einem Kavalast besteht. Setzen Sie eine Schlauchschelle auf das proximale Ende des Kavalschlauchs.Verbinden Sie dann das Portal und die Halsöffnung des Bypasses mit beiden Manteleinführkathetern und verwenden Sie einen Schlauchschellenring aus Metall, um die Verbindung abzudichten. Bringen Sie den Zentrifugalpumpenkopf drei Minuten nach der intravenösen Verabreichung von 1000 Milligramm Texassäure und 10.000 IE Heparin in seine Pumpenposition. Öffnen Sie die Klemmen beider Schleuseneinführkatheter und klemmen Sie die Pfortader quer ein.Als nächstes startest du die Kreiselpumpe mit ca. 1.500 Umdrehungen pro Minute. Dann mit einer Deba Rückenklemme Kreuzklemme, die infrahepatische Vena CVA gerade kranial zu den Nierenvenen. Üben Sie festen Druck auf das Lebergewebe aus, um einen Teil des restlichen Blutes herauszudrücken.Dann wird mit einer Statsky-Klemme die Hohlvene einschließlich eines Zwerchfellrandes mit einer Statsky-Klemme verklemmt, während die Leber verhätschelt wird. Schneiden Sie nun die suprahepatische Vena CVA direkt an ihrer Grenze zum Lebergewebe und schneiden Sie die Pfortader in der Nähe des hepatischen Heliums etwa vier Zentimeter kranial zur infrahepatischen CVA-Klemme. In dieses Loch schneide ein Loch in die Vorderwand der Hohlvene.Positionieren Sie den Stecker der Bypass-Kabelöffnung mit einem Köderverschluss nach vorne mit einem Null-Seidenbinder. Befestigen Sie den Konnektor in der infrahepatischen CVA. Öffnen Sie dann die Schlauchschelle des Kabelzweigs des Bypasses.Öffnen Sie abschließend die infrahepatische CVA-Klemme, um zusätzlich zum vorhandenen portalen Jugularbypass einen Kabeljugularbypass zu ermöglichen. Nachdem Sie die Drehzahl der Pumpe auf etwa 2.500 Umdrehungen pro Minute erhöht haben, bestätigen Sie, dass der Bypass-Abfluss auf der Halsschlagaderseite zwischen 900 und tausend Millilitern pro Minute liegt. Unter Verwendung von vier monofilen Polypropylen-Nähten.Verschließen Sie alle drei Vena phrenicus oste osteos auf der Empfängerseite am Sup-Leber-CVAs-Öffnungsstich. Doppelarmige vier Null-Monofilament-Polypropylen-Nähte innen, außen in beiden Ecken des SUP-Leber-CVA auf der Empfängerseite. Nachdem Sie das Spenderorgan in die Bauchhöhle gelegt haben, schneiden Sie die CVA der Spendervene S an die Empfängerseite an.Machen Sie mit den Innennadeln der Eckstiche der Empfängerseite einen Innen-Außen-Eckstich an jeder Seite des superhepatischen Spender-CVA. Sobald sich Empfänger und Spender Österreich angenähert haben, binden Sie beide Enden der linken Naht. Dann mache einen äußeren Innenstich der Kava-Rückwand des Empfängers neben der Krawatte und fahre über die Rückwand.Im Idealfall die Kava-Wand abwenden, mit der restlichen Naht von der linken Ecke über die Vorderwand laufen. Binden Sie dann die beiden Nähte zusammen, die für die Rück- und Vorderwand verwendet werden. Nach dem Trimmen der Donorpfortader auf eine geeignete Länge verwenden Sie sechs nullmonofile Polypropylennähte, um eine End-to-End-Pfortader-Anastomose durchzuführen, wie gerade kurz vor Fertigstellung der Vorderwand gezeigt, verwenden Sie eine weitere bündige Leitung, um das Lumen der infrahepatischen Hava zu intubieren, und verwenden Sie einen Liter Kochsalzlösung bei Raumtemperatur.Spülen Sie die UW-Lösung über die infrahepatische Hava-Pfortader aus. Schließen Sie als Nächstes die Anastomose ab und binden Sie die Nähte, so dass etwa 0,5 Zentimeter Wachstumsfaktor übrig bleiben. Setzen Sie dann eine weitere Deba-Rückenklemme auf die infrahepatische ZVA des Spenders.Öffnen Sie die hepatische CVA-Klemme S und prüfen Sie, ob sie blutet. Öffnen Sie dann die Portalklemme, um die Leber zu reperfundieren, klemmen Sie die Empfängerseite der infrahepatischen Hohlvene wieder ein und setzen Sie eine Schlauchschelle auf den Kabelteil des Bypasses. Nachdem Sie die Kreiselpumpe gestoppt haben, schneiden Sie die Kabelbinder des Kabelsteckers ab und entfernen Sie ihn.Das restliche Blut aus dem Bypass wird dem Schwein über den Jugularkatheter wieder zugeführt. Schließen Sie nun die Klemme, den Jugularkatheter, und trennen Sie den Bypass. Nach der Verabreichung von 100 Milligramm Protaminsulfat zur Antagonisierung eines Heparins verwenden Sie fünf monofile Nullnähte, um eine End-to-End-Anastomose des infrahepatischen ZVA durchzuführen.Auch hier wurde die infrahepatische untere CVA reperfundiert, indem beide Klemmen gelöst wurden. Nachdem Sie ein Aortenpflaster um den Zöliakie-Rumpf des Spenders geschnitten haben, setzen Sie eine Bulldoggenklemme auf die Arteria hepatica communis proximal zum Übergang der Arteria gastroduodenalis. Sobald die Leberarterie mit Heparin gespült wurde, verwenden Sie sechs monofile Polypropylen-Nähte an den Anesti os.Der arterielle Osteo wird von Ende zu Ende in einer laufenden Fallschirmtechnik durchgeführt, dann wird die Reperfusion durch Öffnen zuerst der distalen und dann der proximale Bulldoggenklemmen mit 2 6 0 monofilen Nähten durchgeführt. Verwenden Sie die Lauftechnik, um den Gallengang von einem Ende zum anderen zu betäuben. Entfernen Sie nach der Überprüfung auf Blutstillung den Scheideneinführkatheter aus der Milzvene.Verwenden Sie die beiden verbleibenden Bänder, um die proximalen und distalen Enden mit dem monofilen resorbierbaren Nahtmaterial der Größe eins zu verschließen. Schließe die Bauchdecke. Verwenden Sie zum Schluss entweder einen Hautstapler oder zwei Nullnähte, um die Haut zu schließen.Für die postoperative Versorgung ist das Textprotokoll zu beachten. In unserer ersten Transplantationsstudie überlebten 100 % der Empfängerschweine, die Lebern von einem herzschlagenden Spender oder HBD erhielten, bis zum Ende der Nachbeobachtungszeit fünf Tage nach der Transplantation. Allerdings schafften es nur 50 % der Schweine, die nach dem Kreislauftod oder DCD Lebern von Spendern erhielten, zur fünftägigen Nachuntersuchung von Blutproben aus hepatozellulären Verletzungen.Die Gallen- und Leberfunktion zeigte, dass der ST-Spiegel in beiden Gruppen nach 24 Stunden einen Höhepunkt erreichte. Das war in der DCD-Gruppe deutlich höher als in der HCD-Gruppe und nach fünf Tagen wieder fast normale Werte. In ähnlicher Weise waren, wie in dieser Grafik gezeigt, die alkalischen Phosphatasewerte in der DCD-Gruppe nach 36 Stunden im Vergleich zur HBD-Gruppe, wie hier gezeigt, deutlich erhöht.Während das Gesamtbilirubin in der HPD-Gruppe stabil war, stieg es in der DCD-Gruppe bis zum fünften Tag allmählich an und zeigt eine hohe Standardabweichung, die nur bei einem Teil der Versuchsgruppe auf eine Gallenschädigung hindeutet. In dieser Abbildung zeigte die INR als Marker für die Leberfunktion einen ähnlichen Trend wie die A ST-Werte, die nach 24 Stunden ihren Höhepunkt erreichten und wieder auf nahezu normale Werte zurückkehrten. Nach fünf Tagen Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie Sie einen aktiven venösen venösen Bypass während einer orthotopen Schweinelebertransplantation verwenden.Auf diese Weise sorgen wir für stabile und optimale Bedingungen während des gesamten Eingriffs.

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Research

Forschung

JoVE Journal

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Medizin

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