In-vitro-Analyse Myd88-vermittelte zelluläre Immunantwort gegen das West-Nil-Virus-Infektion Mutantenstamm

Das übergeordnete Ziel dieser Studie ist die Einführung von zwei auf Durchflusszytometrie basierenden immunologischen Assays zur Messung der zellvermittelten Immunantwort auf eine West-Nil-Virusinfektion im in vitro T-Zell-Priming-Assay für dendritische Zellen oder dcs, die von mit dem West-Nll-Virus infizierten Mäusen gereinigt wurden. Eine Co-Kultur mit naiven CFSE-markierten T-Zellen, die aus OT zwei transgenen Mäusen in Gegenwart von Eizellenpeptid gereinigt wurden. Die Proliferationsreaktion der T-Zellen wird dann durch Durchflusszytometrie in einem Labor der Biosicherheitsstufe zwei in dem modifizierten intrazellulären Zytokin-Färbeassay PLE-Zyten von mit dem West-Nil-Virus infizierten Mäusen analysiert, A ex vivo mit West-Nil-spezifischen Peptiden in einem Mikrozentrifugenröhrchen stimuliert und dann die Zelle für die intrazelluläre Zytokinproduktion aufrechterhalten und im Röhrchen durch Durchflusszytometrie im Labor der Biosicherheitsstufe zwei analysiert.

Letztendlich können diese Methoden verwendet werden, um die Rolle spezifischer Signalwege bei der Aktivierung von T-Zellen bei mit dem West-Nil-Virus infizierten Tieren zu untersuchen, und sie verkürzen die Leistungszeit in Einrichtungen der Biosicherheitsstufe drei erheblich. Obwohl diese Methode einen Einblick in die zelluläre Immunität des westlichen N-Virus geben kann, kann sie auch auf andere Erreger der Biosicherheitsstufe drei für den In-vitro-T-Zell-Priming-Assay angewendet werden. Beginnen Sie mit der Isolierung von Milzzellen aus Wildtyp C 57 schwarz sechs A, meine D acht acht Knockout-Mäuse, die mit dem West-Nil-Virus geimpft wurden, und kontrollieren Sie nicht infizierte Tiere mit Anti-CD 11 C-Magnetkügelchen gemäß den Anweisungen des Herstellers.