Optimierte Ex-ovo Züchtung von Hühnerembryonen zu fortgeschrittenen Entwicklungsstadium

Das übergeordnete Ziel dieser Methode ist es, eine optimierte X-Ovo-Kulturtechnik für Hühnerembryonen vorzustellen, die es ermöglicht, die Embryonalentwicklung vom Hamburger und Hamilton-Stadium 19 über die späten Entwicklungsstadien bis hin zum Stadium 40 zu beobachten. Diese Methode ist nützlich für Studenten in einem entwicklungsbiologischen Labor sowie für Forscher, die den Hühnerembryo als Modellorganismus verwenden möchten, um diese X-Ovo-Kulturmethode einzurichten. Zuerst werden die Eier vorbereitet.

Die Eier wurden etwa dreieinhalb Tage lang bei 37 Grad Celsius und 40 % Luftfeuchtigkeit bebrütet, was in etwa dem Hamburger und dem Hamilton-Stadium 19 entspricht. Die Eier werden vorbereitet, indem sie mit 70%igem Ethanol besprüht werden, so dass der Embryo beim Aufbrechen der Schale nicht kontaminiert wird. Nachdem die Eier besprüht wurden, lassen Sie sie kurz trocknen.

Während die Feuchtigkeitskammer vorbereitet wird, besteht die Feuchtigkeitskammer aus einem Ziploc-Behälter. Der erste Schritt beim Bau der Feuchtigkeitskammer besteht darin, eine ein bis zwei Zentimeter dicke Schicht saugfähiger Polsterung hinzuzufügen. In diesem Fall wischen Sie Kim ab, obwohl auch Schichten aus Baumwollpolsterung verwendet werden können.

Diese Schicht aus saugfähiger Polsterung passt in den Boden des hier gezeigten Ziploc-Behälters. Sobald die absorbierende Schicht an Ort und Stelle ist, werden etwa 150 Milliliter destilliertes Wasser in den Boden des Behälters gegossen. Der Großteil dieses Wassers sollte von der Polsterung aufgenommen werden.

Die Feuchtigkeitskammer ist nun fertig und kann zur Seite gestellt werden. Ein kleines, steriles Einsatzboot wird verwendet, um den Embryo zu wiegen, wenn er aus der Schale genommen wird. Das Wegboot misst aufgrund der Ausrichtung der Eier im Inkubator 8,8 Zentimeter im Quadrat, der Embryo befindet sich auf der Oberseite des Eies und daher sollte die Schale auf der gegenüberliegenden Seite geknackt werden.

Die Schale wird dann vorsichtig geknackt und das Ei ganz nah an das Wegboot gelegt. In einer sanften Bewegung wird die Eizelle auseinandergezogen und der Embryo sanft in das Boot entlassen. Der Embryo wird dann untersucht, um sicherzustellen, dass das Joch noch intakt ist und dass der Embryo lebensfähig ist, wie hier mit einem sichtbaren Herzschlag und ohne offensichtliche Anomalien.

Als nächstes fügen wir dem Embryo ein Antibiotikum hinzu, um die Infektion zu bekämpfen. Penicillin-Streptomycin in einer Konzentration von 5.000 Einheiten Penicillin und fünf Milligramm Streptomycin pro Mil wird zugeteilt, um die Häufigkeit des Auftauens durch Frost zu minimieren. Ereignisse. 40 Mikroliter werden aus dem Aliquot entnommen und mit einer Pipette zum umgebenden Albumin gegeben.

Nun ist der Embryo bereit, vorsichtig in die Feuchtigkeitskammer gelegt zu werden. Sobald sich der Embryo in der Feuchtigkeitskammer befindet, erhält er einen Deckel, um eine Kontamination zu verhindern. Ein quadratischer Petrischalendeckel von neuneinhalb Quadratzentimetern wird über das Boot gelegt.

Es ist darauf zu achten, dass sich keine Feuchtigkeit am Rand des Wegbootes befindet, damit sich zwischen der Petrischale und dem Wegboot keine Dichtung bildet, die den Sauerstoff für den Embryo einschränken würde. Um die Feuchtigkeitskammer zu vervollständigen, wird dann ein Deckel auf den Ziploc-Behälter gelegt. Es werden jedoch nur zwei Ecken des Deckels in Position gedrückt, so dass die anderen Ecken offen bleiben und der Luftstrom zum Embryo gelangen kann.

Sobald die Feuchtigkeitskammer fertig ist, wird sie in einen 37-Grad-Inkubator gelegt, damit sich der Embryo nach viereinhalb Tagen weiter entwickeln kann. Die Feuchtigkeitskammer kann aus dem Inkubator entnommen werden und der Embryo kann etwa im Stadium 34 beobachtet werden. Zu diesem Zeitpunkt können die Schüler den Embryo einschließlich des Gefäßsystems, des großen Auges und der Gliedmaßenknospen leicht beobachten.

Der Embryo kann weiter unter einem Präpariermikroskop beobachtet werden, und es können fortgeschrittenere Forschungen durchgeführt werden, wie z. B. embryonale Manipulationen. Nachdem der Embryo in diesem Stadium beobachtet wurde, kann er in einen 37-Grad-Inkubator zurückgebracht werden und würde sich mindestens bis zum Stadium 40 weiterentwickeln, was einer 14-tägigen Inkubation entspricht. Zusammenfassend lässt sich sagen, dass diese Methode die Optimierung der Kultivierung von Kükenembryonen außerhalb der Eierschale zeigt.

Es bietet den Studenten die Möglichkeit, die Entwicklung von Hühnerembryonen in einer geschäftigen Laborumgebung zu beobachten, und bietet Forschern darüber hinaus Zugang zu Embryonen, wenn sie Manipulationen durchführen.