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DOI: 10.3791/52199-v
Mahdieh Tabatabaei Shafiei1, Catalina M. Carvajal Gonczi1, Mohammed Samiur Rahman2, Ashley East3, Jonathan François3, Peter J. Darlington1,3
1Department of Biology,Centre for Structural and Functional Genomics, PERFORM Centre, Concordia University, 2Department of Chemistry and Biochemistry,Centre for Structural and Functional Genomics, PERFORM Centre, Concordia University, 3Department of Exercise Science,Centre for Structural and Functional Genomics, PERFORM Centre, Concordia University
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Die periodische Säure-Schiff-Färbung ist eine Technik, die den Polysaccharidgehalt von Geweben sichtbar macht. Dieser Artikel zeigt das periodische Säure-Schiff-Färbeprotokoll, das für die Anwendung auf mononukleären Zellen des peripheren Blutes angepasst ist, die aus menschlichem venösem Blut gereinigt wurden. Solche Proben werden für Lymphozyten und andere weiße Blutkörperchen des Immunsystems angereichert.
Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, den Glykogengehalt von mononukleären Zellen des peripheren Blutes sichtbar zu machen. Dies wird erreicht, indem zunächst P-BMCs aus menschlichem Vollblut mittels Dichtegradientenzentrifugation isoliert werden. Der zweite Schritt besteht darin, Probenschnitte vorzubereiten, indem die Blutzellen verschmiert oder pipettiert und dann mit Fixierlösung behandelt werden, gefolgt von einem anschließenden Waschen für eine Negativkontrolle.
Die Hälfte des Objektträgers wird in Amylaselösung getaucht, die Glykogenpolymere auflöst, gefolgt von einer Wäsche. Nun werden die Proben mit periodischer saurer Lösung gefärbt und anschließend gewaschen. Der letzte Schritt besteht darin, das Reagenz der Schicht hinzuzufügen, gefolgt von einer Wäsche.
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