Name: Whole-Mount-Imaging von Mouse Embryo Sinnes Axon Projektionen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-12-09T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 37 s
Description: Erfahren Sie ein optimiertes Whole-Mount-Imaging-Protokoll zur Visualisierung sensorischer Axonprojektionen in Maus-Embryonen. Diese Methode ermöglicht die schnelle Bewertung nociceptiver Axonwachstumsphänotypen bei genetisch veränderten Mäusen.

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Die Autoren danken Dr. Louis Reichardt für die TrkA taulacZ Mäusen und Dr. Annette Markus für aufschlussreiche Diskussionen und Anregungen. Diese Arbeit wurde durch Mittel aus dem Startup-Burke-Stiftung sowie Whitehall-Stiftung Forschungsstipendium 2010-08-61, ein Forschungsstipendium von Wings for Life Foundation (WFL-US-028/14) unterstützt wird, gewähren ZB1-1102-1 von der Christopher &amp; Dana Reeve Foundation, und Zuschüsse 1R01EY022409 und 3R01EY022409-01S1 vom National Eye Institute, zu JZ. KJO ist ein Goldsmith Kerl.

Hinweis: Alle Verfahren mit dem NIH Leitfaden für die Benutzung und Pflege von Labortieren entsprechen. Das Tier Protokoll wurde von der IACUC am Weill Cornell Medical College zugelassen. 1. Gewebepräparation <ol><li> Euthanize timed-Schwangerschaft Frauen durch Genickbruch 15. Präparieren embryonalen E16 - E18 Embryonen aus timed-Schwangerschaft Weibchen und Ort Embryonen einzeln in die Wells einer 6-Well-Platte, mit kalter phosphatgepufferter Salzlösung (PBS) gefüllt. </li><li> Spülen Embryonen in kaltem PBS. </li><li> Entfernen eines kleinen Teils der Amnionmembran des Embryos und in eine vorbereitete Proteinase K-Lösung für die nachfolgende Genotypisierung. Alternativ, wenn die Amnionmembran verloren geht, nehmen Sie einen kleinen Teil der Spitze des Embryos Schwanz und ihn in Proteinase K-Lösung </li><li> Poke Löcher in die Haut rund um den Embryo mit Insektenstifte (mindestens 100 pro Seite). </li><li> Entfernen PBS und langsam frisch 2% Paraformaldehyd (PFA),pH 7,4, zum Brunnen. </li><li> Schütteln für 2 h bei 4 ° C. </li><li> Embryonen zweimal Spülen in PBS und lagern in PBS bei 4 ° C bis zur Färbung. </li></ol> 2. Genotypisierung <ol><li> Tauchen Amnionmembranen oder Embryo Schwänze in Proteinase K Mischung gemäß den Anweisungen des Herstellers. </li><li> Inkubiere bei 56 ° C für 10 min. </li><li> Extrahieren DNA unter Verwendung eines kommerziell erhältlichen DNA-Reinigungskits. </li><li> Nehmen 0,5 ul der gesamten 200 ul gereinigte genomische DNA-Lösung, kombiniert mit 0,5 &amp; mgr; l von jeder der genspezifischen Sense- und Antisense-Primer (10 &amp; mgr; M), 2 &amp; mgr; l dNTP-Mix (2,5 mM dATP, dCTP, dGTP und dTTP) , 0,2 ul Taq-Polymerase (5 U / ul) und 2 ul PCR-Puffer (10x), fügen H 2 O auf ein Gesamtvolumen von 20 ul. HINWEIS: Die Primersequenzen sind wie folgt (Tabelle 1): TrkA: TrkA_F: GCG GGC GCC GCC GCG ATG, TrkA_R: GAA GCC GCC TGC GCG GCT CTG CCA GGG TG; PCR fragment Länge: 400 Basenpaare (bp). Bax: In5R: GTT GAC CAG AGT GGC GTA GG, Ex5F: TGA TCA GAA CCA TCA TG, NeoR: CCG CTT CCA TTG CTC AGC GG; PCR-Fragment Längen: Wildtyp, 304 bp; Bax null, 507 bp. TauLacZ: lacZup: ACA ACG TCG TGA GTG GGA AAA, lacZdown: ATC AAC ATT AAA TGT GAG CGA G; PCR-Fragment-Längen: 360 bp. </li><li> Führen einer PCR mit dem folgenden Programm für TrkA: Schritt 1: 1 min bei 95 ° C, Stufe 2: 10 sec bei 95 ° C, Stufe 3: 20 sec bei 68 ° C, Stufe 4: 30 sec bei 72 ° C. Wiederholen Sie die Schritte 2-4 für 40 Zyklen. <ol><li> Für LacZ und Bax, führen eine PCR nach folgendem Programm: Schritt 1: 1 min bei 95 ° C, Stufe 2: 10 sec bei 95 ° C, Stufe 3: 1 min bei 54 ° C, Schritt 4: 1 min bei 72 ° C, wiederholen Sie die Schritte 2-4 für 35 Zyklen. </li></ol></li><li> Run PCR-Proben auf einem 2% Agarosegel bei 100 V in 1x Tris-Acetat-EDTA-Puffer für 20 min mit einer Spur-DNA-Leiter, um Fragmentlängen abzuschätzen. </li><li> Analysieren Embryonen für die Anwesenheit von Wildtyp-TrkA, TRKA-tauLacZ und Bax Nullallele. Die Genotypen der experimentellen Embryonen TrkA taulacZ / WT: Bax - / - und TrkA taulacZ / taulacZ: Bax - / - in Abhängigkeit von den experimentellen Fragen. Embryonen ohne die tauLacZ Reporter negativ für axonalen Färbung sein und kann daher dazu dienen als Negativkontrollen, um den Färbeprozess zu kalibrieren. </li></ol> 3. Embryo Färbung <ol><li> Verwenden eines kommerziellen Kits zur LacZ-Färbung mit einigen Änderungen, wie unten in den Abschnitten 3.2 - 3.8. Hier verwenden Sie die Millipore-Kit. </li><li> Tauchen Embryonen in Puffer A für mindestens 1 h bei Raumtemperatur vorsichtig schütteln. </li><li> Direkt tauchen Embryonen in Puffer B für mindestens 15 min bei Raumtemperatur vorsichtig schütteln. </li><li> Während Embryonen werden in Puffer A / B, vorwärmen Tissue Basislösung bei 37 ° C. Verwenden Sie 5 ml Gewebebasislösung pro Embryo. </li><li> Während Embryonen in Puffer A / B, bereiten Sie frisches 5-bromo- 4- Chlor- 3- indolyl α-D-galactopyranosid (X-gal) bei einer Konzentration von 40 mg / ml in 100% Dimethylsulfoxid (DMSO). </li><li> Verdünne X-gal in die vorgewärmte Tissue Basenlösung mit einer Konzentration von 1 mg / ml und 5 ml X-gal / Tissue Basismischung auf eine Glasszintillationsröhrchen. </li><li> Übertragen Embryonen auf ein Glasszintillationsröhrchen enthaltende X-gal / Tissue Basismischung. Seal Deckel mit Parafilm und bei 37 ° C über Nacht, Prüfen auf Vorhandensein von Bläue. </li><li> Postfix Embryonen mit frischen 4% PFA, pH-Wert 7,4. Schütteln 4 Stunden bei 4 ° C. </li><li> Embryonen zweimal Spülen in kaltem PBS. </li></ol> 4. Tissue Dehydration und Clearing <ol><li> Ort Embryonen in 50% Methanol / 50% PBS Gemisch 30 min bei Raumtemperatur in den Glasphiolen Schütteln. </li><li> Weiterhin in 75% Methanol / 25% PBS für 30 Minuten bei Raumtemperatur dehydriert, in Glasfläschchen schüttelnd. </li><li> Weiterhin in 90% entwässern Methanol / 10% PBS 30 Minuten lang bei Raumtemperatur in Glasfläschchen schüttelnd. </li><li> Weiter in 100% Methanol für 30 min (2x) bei Raumtemperatur zu entwässern, in Glasfläschchen schüttelnd. </li><li> Während Embryonen Dehydratisierung, bereiten ein 1: 1 (v: v) Mischung aus Benzoylperoxid Alkohol und Benzoylbenzoat. HINWEIS: Benzoyl Alkohol und Benzoylbenzoat ist giftig. </li><li> Tauchen Embryonen in 1: 1 (v: v) Mischung aus 100% Methanol: 100% BABB für 15 min. Benutzen Glas nur, weil die BABB wird Kunststoff auflösen. </li><li> Tauchen Embryonen in 100% BABB völlig klar, dass die Gewebe und X-Gal-Färbung in der gelöscht Embryo sichtbar zu machen. HINWEIS: Bild so schnell wie möglich, weil die X-gal-Färbung mit der Zeit verblassen. </li></ol> 5. Ganze Berge Imaging <ol><li> Stabilisierung des Embryos, in 100% BABB getaucht, an den entsprechenden Winkel für die Fotografie mit Metallzangen. Beleuchten Sie mit einer Kombination aus bis-Licht und unter Lichtlichtquellen. </li><li> Erwerben Sie Bilder mit einem Binokularmit einer Digitalkamera ausgestattet. Nehmen Sie mehrere Hellfeldaufnahmen an fünf aufeinander folgenden Brennebenen 0,5 mm, die entlang der Z-Achse. Belichtungszeiten und Blendenstufen können nach Beleuchtung und Kameradaten variieren und müssen für jedes Setup optimiert werden. </li><li> Verwenden Sie Standard-Bildverarbeitungs-Software, um Overlay-Bilder verarbeiten und Fotomontagen. </li></ol>

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<li>Mercer, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+endogenous+oncogenic+V600EB-raf+induces+proliferation+and+developmental+defects+in+mice+and+transformation+of+primary+fibroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+research%22%5BJournal%5D)">Expression of endogenous oncogenic V600EB-raf induces proliferation and developmental defects in mice and transformation of primary fibroblasts.</a> Cancer research. 65, 11493-11500 (2005).</li>
<li>Tronche, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disruption+of+the+glucocorticoid+receptor+gene+in+the+nervous+system+results+in+reduced+anxiety%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+genetics%22%5BJournal%5D)">Disruption of the glucocorticoid receptor gene in the nervous system results in reduced anxiety.</a> Nature genetics. 23, 99-103 (1999).</li>
<li>Madisen, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+toolbox+of+Cre-dependent+optogenetic+transgenic+mice+for+light-induced+activation+and+silencing%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">A toolbox of Cre-dependent optogenetic transgenic mice for light-induced activation and silencing.</a> Nat Neurosci. 15, 793-802 (2012).</li>
<li>Feng, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+Neuronal+Subsets+in+Transgenic+Mice+Expressing+Multiple+Spectral+Variants+of+GFP%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Imaging Neuronal Subsets in Transgenic Mice Expressing Multiple Spectral Variants of GFP.</a> Neuron. 28, 41-51 (2000).</li>
<li>Schmidt, H., Rathjen, F. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DiI-labeling+of+DRG+neurons+to+study+axonal+branching+in+a+whole+mount+preparation+of+mouse+embryonic+spinal+cord%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">DiI-labeling of DRG neurons to study axonal branching in a whole mount preparation of mouse embryonic spinal cord.</a> J Vis Exp. , (2011).</li>
</ol>

Die Autoren erklären, dass es keine konkurrierenden Interessen gibt.

Die oben beschriebene X-gal Färbeverfahren embryonaler TrkA taulacZ Mäusen erlaubt die schnelle und präzise Visualisierung Fern Axon in der intakten Fest Embryo. Aufgrund der Bax null Hintergrund diese Mäuse ermöglichen die Untersuchung von Signalmechanismen, die sowohl Axon Wachstum und Überleben von Neuronen beitragen können. Paarung mit transgenen oder Knockout-Mäuse von Interesse ermöglicht die umfassende Beurteilung der axonalen Phänotypen und kann als nützlicher Leitfaden für zukünftig...

Gründung der genauen neuronalen Netzen ist eine komplexe Entwicklungsprozess wesentlich für die Funktion des Nervensystems. Störung in diesem Verfahren führt zu neuronalen Funktionsstörungen, die in menschlichen neurologischen Erkrankungen 1-3 gebracht wurde. Um die zugrunde liegenden molekularen Mechanismen der Axon Wachstum und Ziel Innervation bei Säugetieren zu untersuchen, haben wir ein Protokoll, um die axonalen Bahnen der TrkA-exprimierenden sensorischen Neuronen mit einer Kombination von zwei genetisch veränderten Mauslinien zu visualisieren entwickelt. TrkA ist ein Rezeptor für den Nervenwachstumsfaktor NGF und ein Funktionsmarker nozizeptiven sensorischen Neuronen 4. TrkA ist stark in nozizeptiven Neuronen während der frühen Entwicklung ausgedrückt und vermittelt NGF-abhängige Überleben von Neuronen, das Wachstum von Axonen, Verzweigung und Ziel Innervation 5-9. In TrkA taulacZ Mäusen wird die Wildtyp-TrkA-Gen von einem taulacZ Ausdruck c ersetztassette 10, derart, dass die axonale Morphologie putative TrkA-positive Neurone kann durch β-Gal (X-gal) Anfärben 11 visualisiert werden. Mit einem heterozygot TrkA taulacZ / WZ-Linie, können wir Faktoren, die zu regulieren oder zu stören die Entwicklung der sensorischen afferenten Projektionen in vivo kann zu untersuchen. Außerdem ist TrkA Expression in homozygoten TrkA taulacZ / taulacZ Mäusen, die daher verwendet werden können, um das Wachstum der Axone zu fördern Mechanismen in Abwesenheit von NGF / TrkA Signalisierungs beurteilen abwesend. Seit nozizeptiven Neuronen hängt von NGF / TrkA Signalisierung nicht nur für das Wachstum von Axonen, sondern auch für das Überleben, setzen wir einen weiteren Mauslinie, ohne die pro-apoptotische Bax-Gens, die Apoptose in embryonalen DRG-Neuronen hemmen, retten sie vor Zelltod, die sonst ist in Abwesenheit von TrkA Signalisierungs beobachtet. Das Bax - / - Hintergrund 12 ermöglicht somit die Molekular Dissektion von Signalwegen, die speziell beeinflussen Axonwachstum 7-9,13-15. In TrkA - / -: Bax - / - Mäuse, DRG-Neuronen überleben, aber sensorischen afferenten Innervation der Haut vollständig abgeschafft 14,15. Wir können selektiv aktiviert Signalwege auf ihre jeweiligen Beiträge zur Entwicklung von Axon Projektionen zu bestimmen. Der Nutzen dieser Methode ist, dass sie die Beurteilung der Änderungen im Wachstum der Nervenfasern Phänotypen, wenn verschiedene genetische Veränderungen werden auf die TrkA taulacZ / taulacZ gezüchtet: Bax - / - oder TrkA taulacZ / WT: Bax - / - Hintergründe.

<table><tbody><tr><td>PFA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P6418</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Life Tech</td><td>10010-023</td><td></td></tr><tr><td>Spüllösung A</td><td>Millipore</td><td>BG-6-B</td><td></td></tr><tr><td>Spüllösung B</td><td>Millipore</td><td>BG-7-B</td><td></td></tr><tr><td>Grundlösung für Gewebeflecken</td><td>Millipore</td><td>BG-8-C</td><td></td></tr><tr><td>X-gal</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B4252</td><td></td></tr><tr><td>Glas-Szintiallationsfläschchen</td><td>Kimble Chase</td><td>74500-20</td><td></td></tr><tr><td>Inkubator</td><td>Labline</td><td>Modell 120</td><td></td></tr><tr><td>Insektenstifte</td><td>FST</td><td>26000-30</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D8418</td><td></td></tr><tr><td>6-Well-Schale</td><td>USA Scientific</td><td>CC7672-7506</td><td></td></tr><tr><td>Primer</td><td>IDT</td><td>kundenspezifische DNA-Primer</td><td></td></tr><tr><td>Takara dNTP-Gemisch</td><td>Takara</td><td>4030</td><td></td></tr><tr><td>Takara LA Puffer</td><td>Takara</td><td>RR002A</td><td></td></tr><tr><td>Takara LA Taq</td><td>Takara</td><td>RR002A</td><td></td></tr><tr><td>PCR-Maschine</td><td>Bio-Rad</td><td>DNA Engine Dyad</td><td></td></tr><tr><td>Benzylalkohol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B-1042</td><td></td></tr><tr><td>Benzylbenzoat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B-6630</td><td></td></tr><tr><td>Präpariermikroskop</td><td>Leica</td><td>M205A</td><td></td></tr><tr><td>Kamera</td><td>Leica</td><td>DFC310FX</td><td></td></tr><tr><td>Ringlicht</td><td>Leica</td><td>MEB110</td><td></td></tr><tr><td>Photoshop</td><td>Adobe</td><td>Photoshop 4.0</td><td></td></tr></tbody></table>

whole-mount-imaging von mouse embryo sinnes axon projektionen

Whole-mount Imaging of Mouse Embryo Sensory Axon Projections

Die Visualisierung der in voller Länge neuronalen Projektionen in Embryonen ist wesentlich für ein Verständnis, wie Säugetier neuronale Netze entwickeln zu gewinnen. Hier beschreiben wir eine Methode, um in situ zu markieren eine Teilmenge der Hinterwurzelganglien (DRG) Axon ihrer phänotypischen Eigenschaften beurteilen mit mehreren genetisch manipulierte Mauslinien. Die TrkA-positive Neurone nociceptor Neuronen, für die Übertragung von Schmerzsignalen gewidmet. Wir nutzen eine TrkA taulacZ Mauslinie, die Flugbahnen aller TrkA-positiven peripheren Axonen im intakten Mausembryo zu kennzeichnen. Wir züchten ferner den TrkA taulacZ Schnur auf eine Bax null Hintergrund, die im Wesentlichen aufhebt neuronale Apoptose, um wachstumsbedingte stellen unabhängig von möglichen Wirkungen von genetischen Manipulationen auf das neuronale Überleben zu beurteilen. Anschließend werden gentechnisch veränderte Mäuse von Interesse mit der TrkA Taul gezüchtetlacZ / Bax Nulllinie und sind dann bereit für die Studie unter Verwendung der hierin beschriebenen Techniken. Diese Präsentation enthält detaillierte Informationen über Maus Zuchtpläne, Genotypisierung bei der Dissektion, Gewebevorbereitung, Färbung und Clearing zur Visualisierung von voller Länge axonalen Bahnen ganz-mount Vorbereitung zu ermöglichen.

Die Genotypen von TrkA WT / taulacZ: Bax - / - und TrkA taulacZ / taulacZ: Bax - / - Embryonen können eindeutig durch Standard-PCR Genotypisierung bestimmt werden (Abbildung 1). X-Gal-Färbung zeigt detaillierte periphere axonale Verzweigungen subkutan in konventionell gefärbten Embryonen (Figuren 2, 3a), und während der Embryo nach Gewebe Clearing (3b, 4). / - - Linie mit Mäusen, die kon...

Wir präsentieren hier ein optimiertes Protokoll zur Genotypisierung, Färbung und Vorbereitung fötaler Mäuse für die Bildgebung von peripheren Nozizeptoren-Axonprojektionen im gesamten Tier, als effektive Methode zur Beurteilung sensorischer Axonwachstumsphänotypen bei der Entwicklung gentechnisch veränderter Mäuse.

Whole-Mount-Imaging von Mouse Embryo Sinnes Axon Projektionen

The visualization of full-length neuronal projections in embryos is essential to gain an understanding of how mammalian neuronal networks develop. Here we ...

Das übergeordnete Ziel des folgenden Experiments ist es, sensorische Axonwachstumsphänotypen in sich entwickelnden fötalen Mäusen effektiv zu bewerten. Dies wird erreicht, indem zunächst Tre a Tau laxy Reportermäuse richtig gezüchtet und genotypisiert werden, so dass in einem zweiten Schritt nachgeschaltete Färbeassays durchgeführt werden können. Die Mausembryonen werden fixiert und gefärbt, um die Visualisierung der sensorischen Axonprojektionen im gesamten Tier zu ermöglichen.Anschließend werden die Embryonen dehydriert und gereinigt, um die tief liegenden Axonvorsprünge, die sonst nicht sichtbar wären, vollständig sichtbar zu machen. Die Ergebnisse zeigen, dass diese Methoden ein wirksames Mittel sind, um embryonale nozizeptive Axonwachstumsphänotypen schnell zu beurteilen. Unter Verwendung des Track a Tau Lae-Reporters kann diese Methode dazu beitragen, Schlüsselfragen auf dem Gebiet des sensorischen Axonwachstums zu beantworten, indem sie es Forschern ermöglicht, ihr interessierendes Gen auf den Spur eines tlac Z-Hintergrunds zu kreuzen und nach Veränderungen der phänotypen des sensorischen Axonwachstums zu suchen.Die Implikationen unserer Technik erstrecken sich auf die Thera

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Source: Liau, E. S. et al. Visualisierung der motorischen Axonnavigation und Quantifizierung der Axon-Arborisierung in Mausembryonen mittels Lichtblatt-Fluoreszenzmikroskopie. J. Vis. (2018). Dieses Video zeigt die Verwendung von Lichtblatt-Fluoreszenzmikroskopie zur Abbildung von Motoneuronenprojektionen und Axonverzweigungen in transgene Mausembryonen. Es beschreibt die Schritte bei der Probenvorbereitung, der Bildgebung und der 3D-Rekonstruktion axonaler Verzweigungen zur Beurteilung des...

Visualisierung von Motoneuronenprojektionen und Axonverzweigungen mit Hilfe der Lichtblatt-Fluoreszenzmikroskopie

Quelle: Jeong, S. Visualisierung des axonalen Projektionsmusters embryonaler Motoneuronen in Drosophila. J. Vis. Exp. (2017)Dieses Video zeigt die Visualisierung von axonalen Projektionen in Drosophila Embryonen. Die Immunmarkierung von Motoneuronen, die präzise Dissektion zur Freilegung neuronaler Strukturen und die differentielle Interferenzkontrastmikroskopie zeigen zusammen eine detaillierte neuronale Architektur, wobei die axonalen Projektionsmuster hervorgehoben werden.

Visualisierung axonaler Projektionsmuster embryonaler Motoneuronen in Drosophila

Neurale Vorläufer Mitose ist ein kritischer Parameter der Neurogenese. Viel von unserem Verständnis der neuralen Vorläufer Mitose basiert auf der Analyse von festen Gewebe basiert. Live-Bildgebung in der embryonalen Hirnschnitten ist eine vielseitige Technik zur Mitose mit hoher zeitlicher und räumlicher Auflösung in einer kontrollierten Umgebung zu beurteilen.

Live-Imaging der Mitose in der Entwicklung von embryonalen Maus-Cortex

Säugetier-Haut enthält eine Vielfalt von Strukturen - wie Haarfollikel und Nervenenden - das charakteristische Muster der räumlichen Organisation zu zeigen. Die Analyse der Haut als flache Halterung nutzt die Vorteile der 2-dimensionalen Geometrie dieses Gewebe voller Dicke hochauflösende Bilder der Strukturen der Haut zu produzieren.

Wohnung Berg-Imaging von Mäusehaut und ihre Anwendung auf die Analyse von Mustern und die Haarfollikel Sinnes Axon Morphologie

Diese Arbeit beschreibt eine Standard-Immunhistochemie-Methode zur Visualisierung von Motor-Neuronen-Projektionen von späten Stadium-16 Drosophila Melanogaster Embryonen . Die gefilterte Präparation von festen Embryonen, die mit FasII-Antikörper gefärbt wurden, bietet ein leistungsfähiges Werkzeug, um die Gene zu charakterisieren, die für die motorische Axon-Pathfindung und die Zielerkennung während der neuronalen Entwicklung erforderlich sind.

Visualisierung des axonalen Projektionsmusters der embryonalen motorischen Neuronen in<em&gt; Drosophila</em

Hier beschreiben wir ein Protokoll zur Visualisierung von Motoneuron-Projektion und Axon Arborization in transgenen Hb9::GFP -Maus-Embryonen. Nach Immunostaining für Motoneuronen verwendeten wir Fluoreszenz lichtblattmikroskopie Bild Embryonen für anschließende Quantitative Analyse. Dieses Protokoll gilt für andere Neuron Navigation Prozesse in das zentrale Nervensystem.

Visualisierung von motorischen Axon Navigation und Quantifizierung der Axon Arborization In Mausembryonen mit Fluoreszenz-Lichtblattmikroskopie

Hier beschreiben wir eine Vorgehensweise für Gewebe, clearing, fluoreszierende Kennzeichnung und umfangreiche Darstellung der Maus Hirngewebe, die dadurch ermöglicht die Visualisierung der dreidimensionalen Organisation der Zelltypen der Großhirnrinde.

Groß angelegte dreidimensionale Bildgebung der zelluläre Organisation in der Maus Neocortex

Die Kombination von Transmissions-Elektronenmikroskopie und in der Gebärmutter Transduktion ist ein leistungsfähiger Ansatz für das Studium der morphologischer Veränderungen in den feinen Ultrastruktur des Nervensystems während der Entwicklung. Diese kombinierte Methode ermöglicht tiefe Einblicke in Änderungen in Strukturdetails Neuroplastizität in Bezug auf ihre topographische Darstellung zugrunde liegen.

Bewertung der Ultrastrukturforschung Neuroplastizität Parameter nach In Utero Transduktion von Entwicklungsländern Mausgehirn und Rückenmark

Dieses Protokoll soll zeigen, wie man ein DNA/DOTAP-Gemisch in Augenknospen von eintägigen Xenopus laevis Embryonen mikroinjiziert und wie man einzelne grüne fluoreszierende Proteine (GFP) abbilden und rekonstruieren kann, die optische axonale Lauben in tektalen Midhirnen von intakte, lebende Xenopus Kaulquappen.

Mikroinjektion von DNA in Augenknospen in Xenopus laevis Embryonen und Bildgebung von GFP Expressing Optic Axonal Arbors in Intact, Living Xenopus Tadpoles

Während der Entwicklung der Großhirnrinde stammen Neuronen und Gliazellen aus der ventrikulären Zone, die den Ventrikel auskleidet, und wandern zur Gehirnoberfläche. Viele Gene sind an diesem Prozess beteiligt. Dieses Protokoll stellt die Technik für die Zeitraffer-Bildgebung von migrierenden Neuronen und glialen Vorläuferzellen vor.

Zeitraffer-Bildgebung von migrierenden Neuronen und glialen Vorläuferzellen in embryonalen Hirnschnitten von Mäusen

Diese Studie präsentiert einen in-vivo-Zwei-Photonen-Bildgebungsansatz zur Visualisierung der Strukturen von Axonterminals mit niedriger Schwelle von Mechanorezeptoren (LTMR) in der Vorderpfotenhaut von Mäusen. Durch wiederholte, hochauflösende Bildgebung einzelner Axone bietet diese Methode eine neue Grundlage, um die Struktur und Funktion des kutanen Sinneskreises während der Entwicklung und bei Erwachsenen zu untersuchen.

Intravitale Zwei-Photonen-Bildgebung der Morphologie des berührungssensorischen Axons in der Maushaut

Erfahren Sie ein optimiertes Whole-Mount-Imaging-Protokoll zur Visualisierung sensorischer Axonprojektionen in Maus-Embryonen. Diese Methode ermöglicht die schnelle Bewertung nociceptiver Axonwachstumsphänotypen bei genetisch veränderten Mäusen.

Whole-Mount-Imaging von Mouse Embryo Sinnes Axon Projektionen

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