Name: Der neuromuskulären Synapse: Mess Synapse Größe, Fragmentierung und Veränderungen der synaptischen Protein Dichte Mit der konfokalen Fluoreszenzmikroskopie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-12-26T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 18 s
Description: Lernen Sie die konfokale Fluoreszenzmikroskopie zur Quantifizierung von Synapsengröße, Fragmentierung und Proteindichte an der neuromuskulären Synapse. Diese Methode ermöglicht objektive Analysen für Neurowissenschaften.

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Diese Arbeit wurde vom National Health and Medical Research Council [570930] unterstützt. Die Bildgebung wurde an der Advanced Microscopy Facility des Bosch-Instituts durchgeführt. Ehemaligen Mitgliedern des Labors, deren Arbeit zitiert wird, wird für ihre Beiträge zur Entwicklung dieser Methoden gedankt.

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<li>Morsch, M., Reddel, S. W., Ghazanfari, N., Toyka, K. V., Phillips, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscle+Specific+Kinase+autoantibodies+cause+synaptic+failure+through+progressive+wastage+of+postsynaptic+acetylcholine+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Muscle Specific Kinase autoantibodies cause synaptic failure through progressive wastage of postsynaptic acetylcholine receptors.</a> Exp Neurol. 237, 237-286 (2012).</li>
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<li>Viegas, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Passive+and+active+immunization+models+of+MuSK-Ab+positive+myasthenia%3A+Electrophysiological+evidence+for+pre+and+postsynaptic+defects%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Passive and active immunization models of MuSK-Ab positive myasthenia: Electrophysiological evidence for pre and postsynaptic defects.</a> Exp Neurol. 234, 506-512 (2012).</li>
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Die Autoren erklären, dass sie keine konkurrierenden finanziellen Interessen haben.

Die hier beschriebenen Protokolle konnten wir zuverlässig messen und zu quantifizieren Veränderungen in den Eigenschaften der NMJ in einer Reihe von Bedingungen, einschließlich der normalen Alterung und Krankheitszuständen. Die für en beschriebenen Methoden stellen NMJ Bilder wird es den Forschern ermöglichen, den Bereich der prä- und postsynaptischen Spezialisierungen und den Bereich der synaptischen Überlappung / Ausrichtung zu vergleichen. Um die relative Intensität der prä- und postsynaptischen Proteine ​​das zweite...

Die neuromuskuläre Verbindung (NMJ) ist die kritische Relais Synapse, die eine Kommunikation zwischen dem Nervensystem und im Skelettmuskel vermittelt. Es wird für alle willkürlichen Bewegungen erforderlich. Die Fluoreszenzmikroskopie ist seit langem verwendet, um die Auswirkungen von Transgenen auf der Maus NMJ 1-3 studieren oder um die Auswirkungen von Alter, Ernährung, Bewegung und Krankheit auf Nagetier NMJs 4-11 vergleichen. Solche Studien haben uns viel über die Physiologie und Pathophysiologie der NMJ gelehrt, aber die verschiedenen Parameter angegeben (zB AChR Bereich Endplatte Fläche, Umfang Länge, Fragmentierung Indizes) machen es oft schwierig, die Ergebnisse dieser Studien zu vergleichen. Es gibt eine steigende Erwartung für die präklinische Forscher in der Lage, um die Reproduzierbarkeit zu demonstrieren, insbesondere in Studien mit Tiermodellen der Krankheit 12 sein. Die hier beschriebenen Protokolle wurden durch eine Reihe von Studien, die entwicklungsbedingten, physiologischen und pathophysiologischen ch sucht verfeinertanges auf die NMJ. Erfordern solche Untersuchungen Messung der Fläche von synaptischen Spezialisierungen an der Maus motorischen Endplatte und die relative Packungsdichte der synaptischen Proteinen innerhalb postsynaptischen Spezialisierungen 13-15. Die Nützlichkeit dieser Verfahren wird durch jüngste Studien in einem Mausmodell von anti-MuSK Myasthenia gravis dargestellt. Tägliche Injektionen von IgG von Anti-Moschus positive Myasthenia gravis Patienten in erwachsenen Mäusen veranlasste sie, innerhalb von 2 Wochen 16 schwach werden. Die konfokale maximale Projektionsbilder von Muskelpartien, die doppelt markierten wurden Synaptophysin (in Nerven Terminals) und postsynaptischen AChRs ergab einen allmählichen Rückgang im Bereich der AChR-Färbung als primäre Veränderung. Wichtig ist der Rückgang war ausreichend, um vergleichbare Rückgänge in der Amplitude des synaptischen Potentiale, Versagen der synaptischen Übertragung und Muskelschwäche 17,18 erklären. Qualitativ ähnliche Ergebnisse wurden von anderen Arbeitsgruppen berichtet10,19. Die gleichen NMJ Meßmethoden seit verwendet worden, um die Auswirkungen der drei Medikamente zur Behandlung von anti-MuSK Myasthenia gravis Beurteilung in diesem Mausmodell 20,21. Sitzende Alterung können zum Verlust der neuromuskulären Verbindungen führen. Die hier beschriebenen Protokolle haben eine altersbedingte Rückgang im Bereich der Nervenendigung Synaptophysin bei motorischen Endplatten zeigte Mäuse Fortschritt ins hohe Alter. Die gleichen Methoden ergab, dass freiwillige Übung konnte weitgehend verhindern, dass die Reduzierung der präsynaptischen Nervenende Bereich 22, im Einklang mit früheren Arbeiten anderer Gruppen 4. Der Verlust der neuromuskulären Verbindungen kommt auch in der SOD1G93A Mausmodell für Amyotrophe Lateralsklerose 9,23. Die genannten Studien zeigen, dass eine Vielzahl von gesundheitlichen Bedingungen kann zu Kürzungen im Bereich der entweder vor oder nach der synaptischen Spezialisierungen an der NMJ führen. Dies kann zu einer Beeinträchtigung der synaptischen Spaß führenction oder vollständigen Verlust der neuromuskulären Verbindung ankündigen. Drei Protokolle beschrieben, die Quantifizierung der Fläche und der Dichte der synaptischen Spezialisierungen ermöglichen. Der Zweck des ersten Protokolls besteht darin, eine praktische und reproduzierbare Bestimmung der Flächen der prä- und postsynaptischen Spezialisierungen und deren Ausrichtung in Säuger NMJs bereitzustellen, unter Verwendung von Fluoreszenzmikroskopie. Zweidimensionale maximale Projektions konfokalen Bildern und Bildanalyse mit NIH ImageJ wird verwendet, um Änderungen im Bereich des Synaptophysin-Färbung (synaptische Vesikel) postsynaptischen AChR und synaptische Überlappungsbereich zu detektieren. Konfokales Abbildungsparameter (Verstärkung und Offset-Pegel) werden für jede NMJ optimiert, um die visuellen Informationen verwendet werden, um den Bereich der synaptischen Spezialisierung erkennen maximieren. Neuromuscular Ausfall kann auch von Änderungen der Dichte des postsynaptischen AChR und / oder andere synaptische Proteine ​​zur Folge haben. Das zweite Protokoll kann angewandt, um Änderungen in der relativen Dichte der postsynaptischen Proteine, nachzuweisenwie Moschus, Rapsyn, dystroglycan, phosphoryliert Src-Kinase phosphoryliert und AChR 18,21. In Myasthenia gravis, ist eine reduzierte Dichte von AChR in der postsynaptischen Membran die unmittelbare Ursache der synaptischen Versagen und Muskelschwäche. Das dritte Protokoll beschreibt ein Fluoreszenz-Resonanz-Energie-Transfer (FRET), um die Veränderungen in der Nähe der benachbarten AChR innerhalb postsynaptischen Membranen 14,15 beurteilen. Diese Methode erkennt Energietransfer zwischen benachbarten AChRs mit fluoreszenz α -Bungarotoxin (BGT) gekennzeichnet. FRET tritt auf, wenn die fluoreszierenden Donor und Akzeptor-Sonden sind weniger als 10 nm auseinander liegen. Dies kann (submikroskopische) Veränderungen in der Dichtheit der AChR Verpackung, die direkt auf die Amplitude der synaptischen Potentiale beziehen können offenbaren. Diese drei Protokolle, in der letzten Dekade raffiniert, bieten ergänzende Maßnahmen der NMJ Integrität in einer konsistenten und reproduzierbar. Verwendung standardisierter Protokolle einnd Parameter sollten Vergleich der Wirkungen von Genen und Umweltmaßnahmen auf die Säugetier NMJ erleichtern.

<table><tbody><tr><td>Konfokales Rastermikroskop</td><td>Leica</td><td>DM 2000 mit&nbsp; TCS SP2 System</td><td>Die meisten konfokalen Rastermikroskope sollten geeignet sein.</td></tr><tr><td></td><td>Zeiss</td><td>LSM 510 Meta&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Leica</td><td>SPE-II</td><td></td></tr><tr><td>Alexa555-a-bungarotoxin (rot-BGT)</td><td>Life technologies</td><td>B35451</td><td>Zur Markierung von AChRs</td></tr><tr><td>Alexa647-&alpha;-bungarotoxin (dunkelrot-BGT)</td><td>Life technologies</td><td>B35450</td><td>Fernrote Fluoreszenz: durch das Okular kaum sichtbar&nbsp;</td></tr><tr><td>Kaninchen-Anti-Synaptophysin</td><td>Life Technologies</td><td>18-0130</td><td>Verschiedene Chargen von Primärantikörpern unterscheiden sich in der effektiven Arbeitsverdünnung</td></tr><tr><td>FITC-Anti-Rapsyn mab1234</td><td>Milipore</td><td>FCMAB134F</td><td>Monoklonaler Antikörper, konjugiert mit FITC</td></tr><tr><td>FITC-Esel Anti-Kaninchen IgG</td><td>Jackson</td><td>711-095-152</td><td>Polyklonale Sekundärantikörper können je nach Quelle und Charge</td></tr> <tr><td>in der Qualität variierenVerbindung mit optimaler Schnitttemperatur (O.T.C.)</td><td>ProSciTech</td><td>IA018</td><td>Kryostat-Einbettungsmatrix zum Einfrieren von Muskeln</td></tr><tr><td>DABCO</td><td>Sigma</td><td>10981</td><td>Einbettmedium, das die Photobleiche von Fluorophoren verlangsamt</td></tr></tbody></table>

der neuromuskulären synapse: mess synapse größe, fragmentierung und veränderungen der synaptischen protein dichte mit der konfokalen fluoreszenzmikroskopie

The Neuromuscular Junction: Measuring Synapse Size, Fragmentation and Changes in Synaptic Protein Density Using Confocal Fluorescence Microscopy

Die neuromuskulären Synapse (NMJ) ist die große, cholinergen Synapse Relais durch die Säugetiermotoneuronen steuern freiwilligen Muskelkontraktion. Bauliche Veränderungen an der NMJ kann bei der Neurotransmission Versagen führen, was zu Schwäche, Atrophie und sogar zum Tod der Muskelfaser. Viele Studien haben untersucht, wie genetische Veränderungen oder Krankheit kann die Struktur der Maus NMJ ändern. Leider kann es schwierig sein, direkt Erkenntnisse aus diesen Studien zu vergleichen, weil sie oft verwendet verschiedene Parameter und analytische Methoden. Drei Protokolle werden hier beschrieben. Der erste verwendet Maximum Intensity Projection konfokalen Bildern, die Fläche der Acetylcholin-Rezeptor (AChR) -reichen messen postsynaptischen Membran-Domänen an der Endplatte und der Fläche der synaptischen Vesikel-Färbung in der darüberliegenden präsynaptischen Nervenende. Das zweite Protokoll vergleicht die relativen Intensitäten der Immunfärbung für synaptische Proteine ​​in der postsynaptischen Membran. Die dritte protocol verwendet Fluorescence Resonance Energy Transfer (FRET), um Veränderungen in der Packung der postsynaptischen AChR an der Endplatte zu detektieren. Die Protokolle sind entwickelt worden, und über eine Reihe von Studien verfeinert. Faktoren, die die Qualität und Konsistenz der Ergebnisse beeinflussen werden diskutiert und normative Daten für NMJs bei gesunden jungen erwachsenen Mäusen zur Verfügung gestellt.

Messung von Synaptic Umgebung am NMJ Jede Schätzung Bereich stützt sich auf die Zeichnung einer Grenz um das Ausmaß der synaptischen Spezialisierungen definieren. Bei gesunden jungen Erwachsenen Muskeln sollten NMJ Bilder gut definierten Grenzen sowohl für AChR und Synaptophysin-Färbung (2A und B) angezeigt werden sollen. Fluoreszenzintensität sowohl für AChR und Synaptophysin steigt scharf an der Grenze zwischen dem peri-synaptischen und sy...

Die neuromuskuläre Verbindung (NMJ) ist in einer Vielzahl von Zuständen verändert, die manchmal in einem synaptischen Versagen gipfeln können. In diesem Bericht werden fluoreszenzmikroskopische Methoden zur Quantifizierung solcher Strukturveränderungen beschrieben.

Der neuromuskulären Synapse: Mess Synapse Größe, Fragmentierung und Veränderungen der synaptischen Protein Dichte Mit der konfokalen Fluoreszenzmikroskopie

The neuromuscular junction (NMJ) is the large, cholinergic relay synapse through which mammalian motor neurons control voluntary muscle contraction. ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, synaptische Parameter, einschließlich der Synapsengröße, der Fragmentierung und der relativen Dichte von Proteinen in der postsynaptischen Membran, objektiv zu quantifizieren. Dies wird erreicht, indem zunächst der interessierende Muskel von den Versuchstieren seziert wird. Als nächstes wird der präparierte Muskel kryogeschnitten und die Schnitte werden mit Immunfärbung für die Fluoreszenzmikroskopie versehen.Dann werden auf Phos Bilder von neuromuskulären Verbindungen aus den verschiedenen Behandlungsgruppen objektiv beprobt und die relative Intensität der Färbung für synaptische Spezialisierungen quantifiziert. Letztlich werden durch die konfokale Mikroskopie reproduzierbare quantitative Messungen der Auswirkungen einer Behandlung oder genetischen Veränderung auf die strukturelle Organisation des neuromuskulären Übergangs gewonnen. Nun, diese Methode bietet standardisierte objektive Protokolle mit konfokaler Mikroskopie, um Veränderungen in der Struktur der neuromuskulären Verbindung in Mausmodellen von Erkrankungen wie Myasthenia gravis und Motoneuron-Krankheit zu bewerten.Im Allgemeinen kann es für Menschen, die diese Methode ausprobieren, schwierig sein, da die unvoreingenommene und objektive Probenahme von NPLS am konfokalen Mikroskop eine Planung erfordert. Die Analyse von NPLS muss auf konsistente und reproduzierbare Weise durchgeführt werden, wobei die Variabilität zwischen den nplate-Parametern von Tier zu Tier dies erschweren kann. Nach der Isolierung der Kryosektion und der Immunfluoreszenzfärbung verblinden die neuromuskulären Verbindungen der Maus oder NJS gemäß dem Textprotokoll die Objektträger, indem sie jeden Objektträger mit einer Zufallszahl markieren, die nur einem zweiten Forscher bekannt bleibt, bis die Quantifizierung der NMJ-Parameter abgeschlossen ist. Legen Sie einen Objektträger auf den Mikroskoptisch und verwenden Sie ein TRIT-C-Filterset, um ihn unter Weitfeldbeleuchtung zu betrachten.Bewegen Sie sich schrittweise von links nach rechts und zurück durch die Felder, bis eine Endplatte im Feld erscheint, bei der die konfokale Lochblende auf 1,0 Airy eingestellt ist, und optimieren Sie mit geringer Laserleistung die Verstärkungs- und Offset-Pegel für trit C red BGT auf der abzubildenden Endplatte. Optimieren Sie anschließend mit dem 488-Nanometer-Laser die angepasste C-Fluoreszenz, die Synaptophysin darstellt, und sammeln Sie dann einen Z-Stapel der Endplatte mit einem Intervall von 0,7 Mikrometern zwischen den einzelnen optischen Scheiben. Speichern Sie die Bilder unter einem Dateinamen, der das Datum der Imaging-Sitzung, den Codenamen der Folie und die Nummer der Endplatte enthält.Wiederholen Sie das soeben gezeigte Probenahme- und Bildgebungsverfahren, bis 20 Endplatten vom Objektträger oder der Probe entnommen wurden. Wiederholen Sie dann den Vorgang für die verbleibenden codierten Objektträger unter denselben konfokalen Einstellungen. Nehmen Sie einige Bilder von der Steuerfolie auf.Verwenden Sie Image J Freeware, um einen Zack zu öffnen und in einem Fluoreszenzkanal ein maximales Projektionsbild vorzubereiten. Speichern Sie die Projektionen als TIF-Dateien mit dem Dateinamen, einschließlich des Bildsitzungsdatums, des Probencodes, der Stirnplattennummer und des Fluoreszenzkanals. Verwenden Sie nun Bild J, um die Z-Projektion zu öffnen.Wählen Sie den Acetylcholinrezeptor oder einen CHR-Bildkanal aus und wählen Sie den Bildtyp acht Bit, um das farbige 24-Bit-RGB-Bild mit dem Polygon-Werkzeug in ein Acht-Bit-Graustufenbild auf dem Bildschirm umzuwandeln. Zeichnen Sie im roten BGT-Fleckenkanal einen groben Umriss um die interessierende Endplatte, wobei Flecken, die nicht von der interessierenden Endplatte stammen, ausgeschlossen werden. Wählen Sie "Schwellenwert für Bildanpassung" aus, um einen minimalen Intensitätsschwellenwert auf das Bild anzuwenden.Passen Sie den Schwellenwert an, um die mit A CHR gefärbten Teile zu isolieren und das umgebende Hintergrundsignal als Unterschwelle auszuschließen. Öffnen Sie dann ein zweites Fenster mit dem originalen Volltonbild zum Vergleich. Um die Schwellenwerteinstellungen zu bestätigen, während der Polygonumriss noch vorhanden ist, wählen Sie im Popup-Menü Analysieren, Partikel analysieren aus.Geben Sie den Größenbereich in Pixelanzahl als 50 bis unendlich an, wodurch die Auswahl winziger Artefakte, die durch elektrisches Rauschen entstehen, vermieden wird. Klicken Sie im Fotomultiplikator auf Partikel analysieren, um ein Fenster mit einer Liste diskreter Überschreitungsschwellenwerte und deren Fluoreszenzintensitätswerte zu erzeugen, die so nummeriert sind, wie sie im Binärbild erscheinen. Kopieren Sie diese Daten in eine beschriftete Tabelle, um die gesamte Stirnplattenfläche zu messen.Wählen Sie innerhalb des Polygons Messung analysieren aus, kopieren Sie die Daten für A-CHR-Flächen und -Intensitäten und fügen Sie sie in eine Tabelle mit beschrifteten Spalten ein. Wechseln Sie zum Synaptophysin-Kanal. Bereiten Sie ein maximales Projektionsbild vor.Wählen Sie einen Interessenbereich aus, und legen Sie den minimalen Intensitätsschwellenwert wie gerade gezeigt fest. Um den Überlappungsbereich zu messen, führen Sie die folgenden Schritte aus. Öffnen Sie die Originaldatei, die die Bilder mit den beiden Kanälen enthält, und wählen Sie Bildstapel aus.Stapeln Sie es in Bilder, um es in zwei separate Bilder aufzuteilen. Wählen Sie mit dem Colokalisierungs-Plugin image J die Option Plugin-Kolokalisierung aus und geben Sie die zuvor aufgezeichneten Schwellenwerte für die Kanäle A CHR und Nerven in das entsprechende Kanalabfragefeld ein. Das Ergebnis ist ein überlappendes Bild in weißen Pixeln.Konvertieren Sie das neu erstellte Überlappungsbild in ein Graustufenformat und wenden Sie einen Schwellenwert auf den Maximalwert an, der nur die weißen Pixel auswählt, die dem Überlappungsbereich der beiden vorherigen Kanäle entsprechen. Notieren Sie in der Tabelle den resultierenden Flächenwert der Kolokalisierung, der den Überlappungsbereich in Pixeln darstellt, und bereiten Sie eine Tabelle mit Daten vor. Stichprobenmittelwerte berechnen und zeichnen Standardabweichungen und Standardfehler als Histogramme oder Streudiagramme.Plotten und plattieren Sie A-CHR-Bereiche als Streudiagramme oder Häufigkeitshistogramme, um vor statistischen Tests zu bestimmen, ob die Daten normalverteilt sind. Öffnen Sie nach der Vorbereitung der Immunfluoreszenzfärbung und der Bildgebung von transversalen Muskelfaserschnitten, wie im Textprotokoll beschrieben, eine Originalbilddatei und wählen Sie beim Betrachten des A-CHR-Kanals Bildstapel in Bilder aus, um die Kanäle zu teilen. Wählen Sie den Bildtyp acht Bit, um das Acht-Bit-Graustufenformat auf den Bildschirm zu konvertieren. Tun Sie dies für beide Fluoreszenzkanäle.Bildstapel auswählen stapelt Bilder zum Stapeln und öffnet einen neuen Stapel aus zwei zuvor getrennten Acht-Bit-Bildern, wodurch mit dem Polygonwerkzeug zwischen den beiden Fluoreszenzkanälen innerhalb eines einzigen Fensters gewechselt werden kann. Ziehen Sie eine Linie eng um die Grenze der A-CHR-Färbung, und wählen Sie Maß analysieren, um die durchschnittliche Intensität für A-CHR innerhalb des eingeschlossenen Bereichs zu messen. Kopieren Sie diesen Wert in eine beschriftete Tabelle, während Sie den Polygonumriss beibehalten.Wechseln Sie zum zweiten Fluoreszenzkanal und wählen Sie Messung analysieren. Dies ergibt die durchschnittliche Färbung für das Protein von Interesse innerhalb des synaptischen Bereichs, der durch die A-CHR-Färbung definiert ist. Wählen Sie einen Bereich, der von sichtbaren Flecken der Endplatte entfernt ist.Wählen Sie dann Messung analysieren aus, um die durchschnittliche Hintergrundfluoreszenzintensität zu messen. Wiederholen Sie die Messung für die anderen Fluoreszenzkanäle und kopieren Sie die Hintergrundwerte in die Tabelle mit den Fluoreszenzwerten. Subtrahieren Sie die durchschnittlichen Hintergrundwerte von den Endplattenwerten, um die korrigierten Intensitäten für A CHR und das interessierende Protein an jeder Endplatte zu erhalten.Teilen Sie schließlich die korrigierten nplate-Intensitätswerte für das interessierende Protein durch die korrigierte BGT-Fluoreszenzintensität, um die hier gezeigten Fluoreszenzintensitätsverhältnisse zu erhalten. Die Fluoreszenzintensität sowohl für A CHR als auch für Synaptophysin steigt an der Grenze zwischen dem synaptischen und dem synaptischen Teil der motorischen Endplatte stark an. Für solche Bilder wird ein minimaler Schwellenwert den A-CHR-reichen oder synaptophysinreichen Bereich der Endplatte leicht isolieren.Wie in dieser Abbildung gezeigt, kann die Färbung der Endplatte für Synaptophysin bei gealterten Mäusen und in einigen Krankheitsstadien weniger intensiv sein. Die Kanten eines CHR-Clusters können verschwommen erscheinen, und es kann ein höheres Maß an zusätzlichen synaptischen Autofluoreszenz-Streudiagrammen geben, die einen beträchtlichen Bereich im A-CHR-reichen Bereich zwischen den Endplatten des vorderen Muskels tibials einer einzelnen Maus zeigen. Nichtsdestotrotz war die durchschnittliche A-CHR-Fläche, basierend auf 15 bis 20 auf Gesichtsendplattenbildern, bei sieben Beispielmäusen ähnlich. In Querschnitten erscheint die Endplatten-achr typischerweise als Sichelform, aber diese Form ist oft unregelmäßig, wie hier dargestellt.Eine Hintergrundfluoreszenz mit geringer Intensität, wie hier auf dem Synaptophysinkanal gezeigt, zeigt normalerweise, ob ein Patch mit A-CHR-Färbung eine einzelne Endplatte oder zwei separate Endplatten darstellt, die sich auf benachbarten Muskelfasern befinden. Darüber hinaus sind viele synaptische Proteine wie Rapson, Moschus und Beta-Distro-Glykan mit einem CHR an der nplate colokalisiert. Bei diesem Verfahren ist es wichtig, dass die Experimentatoren während der Probenahme und Analyse von nplate-Bildern blind für Behandlungs- und Genotypgruppen bleiben.Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie man konfokale Fluoreszenzbilder von neuromuskulären Verbindungen sammelt, probenimmt und analysiert. Letztendlich sollen die Forscher in der Lage sein, verschiedene strukturelle Parameter des nplate zwischen verschiedenen Behandlungsgruppen und Genotypen konsistent und objektiv zu vergleichen.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Neuroscience

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Der neuromuskulären Synapse: Mess Synapse Größe, Fragmentierung und Veränderungen der synaptischen Protein Dichte Mit der konfokalen Fluoreszenzmikroskopie (Video) | JoVE Journal

Der neuromuskulären Synapse: Mess Synapse Größe, Fragmentierung und Veränderungen der synaptischen Protein Dichte Mit der konfokalen Fluoreszenzmikroskopie

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