Facial Nerve Axotomie bei Mäusen: Ein Modell zur Motoneuron Reaktion auf eine Verletzung Studieren

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist die Exodomisierung des Gesichtsnervs, um die Schädigung des peripheren Nervs zu untersuchen. Der Nervus facialis entspringt in den Pons des Hirnstamms und verlässt den Schädel über den Griffel. Foramen mastoide, der Nerv, verzweigt sich dann in seine Hauptbestandteile.

Einmal freigelegt, wird der Nerv an seinem Austritt aus dem Foramen stylo mastoide exautotomisiert. Zwei wichtige Orientierungspunkte helfen bei der Lokalisierung des Gesichtsnervs. Der erste ist der Gehörgang, der aus perlweißen Knorpelplatten besteht, die durch eine dünne Membran verbunden sind.

Der andere ist der vordere Bauch des Musculus digastricus, der auf dem Nerv und seinem Ausgang aus dem Foramen stylo mastoidus liegt. Nachdem der Gesichtsnerv verletzt wurde, kann der Wissenschaftler mehrere Faktoren untersuchen, wie z. B. den Tod von Mo-Neuronen oder die Genexpression. Das Modell der Gesichtsnervenverletzung ist eines der am besten charakterisierten Modelle für periphere Nervenverletzungen.

Vorteile dieser Technik sind ihre Einfachheit, hohe Reproduzierbarkeit und die geringe Wirkung auf die Vitalfunktionen durch die anschließende Gesichtslähmung. Darüber hinaus kann die unverletzte Seite aufgrund der hochsymmetrischen Natur des Nervensystems als gepaarte interne Kontrolle für Ihre Experimente dienen. Um die Verwendung aseptischer Techniken während dieses Verfahrens beizubehalten, stellen Sie sicher, dass alle Werkzeuge autoklaviert sind und ein Glasperlensterilisator vorbereitet ist, um die Werkzeuge zwischen den Vorgängen zu sterilisieren.

Bereiten Sie den Operationstisch vor, indem Sie ein saugfähiges Pad über ein Heizkissen legen, das Mikroskop aufstellen und den Nasenkegel so abkleben, dass er mit dem Rand des Gesichtsfelds ausgerichtet ist. Stellen Sie nach der Betäubung der Maus sicher, dass die Maus nicht physisch auf Manipulationen reagiert, einschließlich eines Zehenkneifens. Übertragen Sie dann den Gasstrom aus der Anästhesiekammer auf den Nasenkonus und tragen Sie die Thalamussalbe auf.

Positionieren Sie die Maus auf der linken Seite über chirurgischen Pads mit einem beheizten Pad darunter. Überwachen Sie kontinuierlich die Atmung des Tieres und passen Sie den ISO-Fluorfluss nach Bedarf an, um die Anästhesie aufrechtzuerhalten. Um die Operationsstelle freizulegen, kleben Sie das rechte Ohr an den Nasenkonus.

Die Vena auricularis posterior sollte durch das Ohr verlaufen. Als nächstes befeuchten Sie das Fell mit 70% Ethanol und rasieren Sie das Sehvermögen. Reinigen Sie die Haut nach dem Entfernen des Fells mit drei abwechselnden Peelings aus Jod und 70 % Ethanol und reinigen Sie das Auge gründlich.

Fahren Sie mit der Operation fort. Achten Sie darauf, den Mund senkrecht auf die Seite zu legen, wobei die Ohrvene horizontal verläuft. Dadurch wird das Auffinden des Gesichtsnervs viel einfacher.

Um die Position des ersten Schnitts zu bestimmen, verfolgen Sie die Vena auricularis posterior vom Ohr verhätschelt bis zum Bereich hinter dem Ohrvorsprung. Machen Sie dann mit einer Federschere einen vier Millimeter großen Schnitt, zwei bis drei Millimeter hinter der Ausstülpung zu Lehrzwecken. Dieser Schnitt wird vergrößert, um die darunter liegende Anatomie freizulegen.

Nehmen Sie nun eine stumpfe Dissektion des Unterhautfettgewebes und der Faszien vor. Blutgefäße und Muskeln können leicht durch eine Schere beschädigt werden. Wenn Blutungen auftreten.

Üben Sie mit einem sterilen Wattestäbchen mindestens 30 Sekunden lang Druck aus. Wenn ein erheblicher Flüssigkeitsverlust aufgetreten ist, injizieren Sie bis zu einem halben Milliliter Kochsalzlösung intraperitoneal mit einer 25- oder 27-Gauge-Nadel. Lokalisieren Sie nun den Gesichtsnerv anhand der wichtigsten Orientierungspunkte.

Der Nervus accessorius spinalis liegt oberflächlich zum Nervus facialis und ist zu sehen, wie er vom verhätschelten Teil des Schädels ausgeht. Um den Trapezmuskel zu innervieren, identifizieren Sie den knorpeligen Gehörgang. Er ist perlweiß und rostral zum Gesichtsnerv zu sehen.

Der Gesichtsnerv wickelt sich um den verwöhnten Teil des Gehörgangs. Identifizieren Sie dann den Muskelbauch des vorderen Digastricus-Muskels, der auf dem Gesichtsnerv liegt und sich an ihn schmiegt. Präparieren Sie unter dieser Struktur, um den Gesichtsnerv freizulegen.

Es handelt sich um eine feste weiße Struktur, die auf einer Schicht der darunter liegenden Faszien haftet. Identifiziere die Hauptäste des Gesichtsnervs. Verfolgen Sie sie dorsal bis zu ihrem Ursprung aus dem Foramen stylo mastoide.

Halten Sie die Stelle mit einer feinen Pinzette offen, während Sie mit der Spitze der Federschere entlang des Gesichtsnervenpfads präparieren. Der knöcherne Mastoid von Raymond kann mit der Pinzette ertastet werden. Identifizieren Sie nun den Stamm des Gesichtsnervs, um den Nerv zu zerquetschen.

Mit der feinen Pinzette 30 Sekunden lang bei konstantem Druck zusammendrücken. Dadurch werden alle Axone durchtrennt. Wiederholen Sie dann die Kompression in einem senkrechten Winkel für weitere 30 Sekunden.

Halten Sie den Druck zwischen den Experimenten konstant. Nachdem nun die relevanten anatomischen Orientierungspunkte identifiziert wurden, werde ich die verfeinerte Operationstechnik demonstrieren. Verfolgen Sie mit einem kleineren Schnitt die Vena auricularis posterior vom Ohr verhätschelt bis zum Bereich hinter dem Ohrvorsprung und machen Sie einen Schnitt von vier Millimetern, zwei bis drei Millimeter hinter der Protuberanz.

Präparieren Sie nun stumpf das subkutane Fett und die Faszien unter Verwendung der drei Orientierungspunkte, des Nervus accessorius spinalis, des Gehörgangs und des vorderen Bauches des Musculus digastricus. Legen Sie den Gesichtsnerv frei. Verfolgen Sie den Gesichtsnerv zurück in Richtung des Foramen stylo mastoide, um den Stamm des Gesichtsnervs zu erreichen, um den Nerv zu durchtrennen, stabilisieren Sie ihn sanft mit einer feinen Zange und schneiden Sie mit einer Schere.

Vermeiden Sie es, zu viel Zug auf den Nerv auszuüben, da er sonst aus dem Hirnstamm austreten kann. Verschieben Sie dann die Stümpfe auseinander oder entfernen Sie ein Segment des Nervs, um sicherzustellen, dass keine erneute Verbindung stattfinden kann. Untersuchen Sie zum Schluss den Nerv sorgfältig und bestätigen Sie, dass er vollständig durchtrennt ist.

Nach der Ex-Sodomie bringen Sie das gesamte Fett und die Muskeln in ihre ungefähre Position zurück. Verschließen Sie dann die Wunde mit einer 7,5 Millimeter großen Wunde, Clip-Nähten oder Cyanacrylatkleber. Falls erforderlich, wenden Sie zu diesem Zeitpunkt Analgetika an, schalten Sie die Anästhesie aus und setzen Sie die Maus in einen leeren Käfig ohne Einstreu zurück.

Während sich das Tier erholt, untersuchen Sie es auf Anzeichen einer Gesichtslähmung, die Schnurrhaare sind gelähmt. Wenn sie zur Wange hin abgewinkelt sind, erscheint die Nase abgelenkt und das Auge blinzelt nicht als Reaktion auf einen Luftstoß. Wenn das Tier nun weiblich ist, bringen Sie es mit einem anderen Weibchen unter.

Aber wenn der Mann ihn alleine beherbergt, bis die Augenblinzelfunktion zurückkehrt, tragen Sie täglich Thalamussalbe auf, um Hornhautkomplikationen zu vermeiden. Überwachen Sie in der Zwischenzeit die Maus auf Anzeichen einer Infektion oder anderer Komplikationen, bis die Operationsstelle verheilt ist. Es gibt signifikante Unterschiede beim Verlust von Motoneuronen nach Ex-Sodomie, basierend auf dem Alter und dem genetischen Hintergrund der Mäuse bei Wildtyp-Tieren, die im Alter von acht Wochen eine Gesichtsnervendurchtrennung erhalten.

Etwa 86% der Motoneuronen überleben nach 28 Tagen. Postex-Otomy. Es wurde ein signifikant höherer Zellverlust im SOD-1-Mausmodell einer myotrophen Lateralsklerose sowie im immundefizienten rekombinationsaktivierenden Gen zwei Knockout-Maus-Lasercapture beobachtet.

Die Mikrodissektion wurde verwendet, um Material aus dem motorischen Kern des Gesichts zu isolieren. Der gesamte motorische Kern des Gesichts konnte erfasst werden. Alternativ könnten die Unterkerne getrennt gesammelt werden.

Die Technik ist sehr präzise. Motoneuronen können einzeln erfasst werden und auch die verbleibende Neuropille kann für die anschließende Analyse gesammelt werden. Die quantitative PCR wurde verwendet, um die Genexpression in den Subnukleusproben des ventralen medialen Subkerns zu untersuchen, die als gestrichelte Linie dargestellt sind, und des ventralen lateralen Subkerns, der als Expression der durchgezogenen Linie von vier Genen gemessen wurde, die mit der Nervenregenerationsreaktion assoziiert sind.

Es wurden einige Unterschiede zwischen den Unterkernen dieser gefunden. Die Expression von Lücke 43 zeigte den größten Unterschied zwischen den Unterkernen. Sobald diese Technik beherrscht wird, kann die Operation in nur wenigen Minuten abgeschlossen werden.

Es ist wichtig, daran zu denken, das Tier richtig zu positionieren, den Schnitt an der richtigen Stelle vorzunehmen und die anatomischen Orientierungspunkte zu verwenden, um den Gesichtsnerv zu lokalisieren. Es ist leicht, sich in der Kopf- und Halsregion zu verirren, wenn Sie sich also verloren fühlen, lokalisieren Sie einfach den knorpeligen Gehörgang und verfolgen Sie ihn nach hinten, um den Gesichtsnerv zu finden.