Name: Facial Nerve Axotomie bei Mäusen: Ein Modell zur Motoneuron Reaktion auf eine Verletzung Studieren (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-02-23T15:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 11 s
Description: Lernen Sie die Axotomie des Nervus facialis bei Mäusen, um Motoneuron-Reaktionen auf periphere Nervenverletzungen zu untersuchen. Dieses standardisierte Verfahren ermöglicht reproduzierbare Ergebnisse für therapeutische Ansätze.

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Diese Arbeit wird von NIH RO1 NS 40433 (K.J.J.) finanziert.

Alle Geschäfte durchgeführt werden von der Indiana University School of Medicine Institutional Animal Care und Verwenden Committee genehmigt und befolgt, National Institute of Health Richtlinien. 1. Operationstechnik <ol><li> Pflegen aseptische Technik bei diesem Verfahren, indem sie sterile Handschuhe, Instrumente, und ein steriles Operationsfeld nach NIH-Richtlinien 25. Sterilisieren Instrumente vor Beginn der Operation durch Autoklavieren ihnen (siehe Tabelle der spezifischen Reagenzien / Ausrüstung für die komplette Liste). Verwenden Sie eine Glasperlen Sterilisator Werkzeuge während der Operation zu sterilisieren. </li></ol> 2. Anästhesie und Vorbereitung <ol><li> Anesthetize die Maus in einem Anästhesie-Box mit einer Mischung aus 0,9 l / min Sauerstoff und 2,5% Isofluran mit einem veterinär Isofluran Verdampfersystem. Stellen Sie sicher, dass die Maus nicht zu Veränderungen in der Körperposition, bevor es dem Auspacken zu reagieren. </li><li> Bewerben Augensalbe auf die mouse in die Augen, um sie vor dem Austrocknen zu schützen. </li><li> Schalten Sie den Gasstrom aus der Box an den Nasenkegel. Platzieren Sie die Maus direkt auf seiner linken Seite auf einer erhitzten Unterlage mit einem Operationsfeld und absorbierende Papierbank mit der Nase und den Mund innerhalb des Kegels bedeckt. Die Maus Atemrhythmus und bewerten fortlaufend zu überwachen und anzupassen Isofluran Ebenen nach Bedarf (zwischen 2,5 bis 3% Isofluran), ein angemessenes Niveau der Narkose zu halten und verwenden die Zehe Prise Reflex auf insgesamt Sedierung bestätigen. </li></ol> 3. Chirurgische Vorgehensweise <ol><li> Ausrichten und konzentrieren das Stereoskop mit dem OP-Feld. Passen Sie den Nasenkegel und kleben Sie es nach unten, so dass es am Rand des Gesichtsfeldes positioniert ist. </li><li> Mit der Maus, der auf der linken Seite, kleben Sie den Rand des rechten Ohr auf die Bugnase, Freilegung der Bereich hinter dem Ohr, wo der Schnitt gemacht werden. Stellen Sie sicher, dass die hintere Ohrvene fährt horizontal über das Ohr. Man beachte, dass die korrekte Platzierung ter Tier- und Taping des Ohres sind von entscheidender Bedeutung, um die Gesichtsnerven schnell zu finden. </li><li> Befeuchten Sie das Fell auf und hinter dem Ohr mit 70% Ethanol und rasieren die Operationsstelle mit einer Rasierklinge oder Skalpell. Vorbenetzung das Fell macht Rasieren leichter in dieser anatomischen Lage. </li><li> Reinigen der Haut mit einer Jodlösung, wie Betadine chirurgischen Scheuer (7,5% Povidon-Iod), gefolgt von 70% Ethanol. Wiederholen Sie diese Reinigung noch zweimal, um den Bereich gründlich zu desinfizieren. </li><li> Um festzustellen, wo der Schnitt zu machen, verfolgen Sie die hinteren Ohrvene aus dem Ohr nach kaudal auf den Bereich hinter dem Ohr Vorsprung. Mit Federschere, einen 4 mm Schnitt 2-3 mm hinter dem Vorsprung. </li><li> Präparieren durch das subkutane Fett und Bindegewebe mit stumpf. Vermeiden Sie direkte Schneiden mit der Schere, weil die Blutgefäße oder Muskelgewebe leicht beschädigt werden könnte. </li><li> Wenn die Blutung auf, Druck auf die Operationsstelle mit einem sterilen Wattestäbchenfür mindestens 30 sec. Wenn bedeutende Flüssigkeitsverlust auftritt, injizieren die Maus intraperitoneal mit bis zu 0,5 ml steriler 0,9% iger Kochsalzlösung unter Verwendung einer 25 oder 27 G-Nadel. </li><li> Verwenden Sie mehrere wichtige Sehenswürdigkeiten, die N. accessorius, Gehörgang, und vorderen M. digastricus (siehe unten), um die Gesichtsnerven zu lokalisieren. Sezieren um diese Landmarken, bis die Zweige des Gesichtsnervs visualisiert werden. Der Nerv wird als bedeutender solid weiß Struktur angezeigt, wenn es aufgedeckt wird und eine Schicht aus Faszie haftet sie an die zugrunde liegenden Strukturen. <ol><li> Finden Sie die N. accessorius, die aus dem kaudalen Teil des Schädels reist, um die Trapezmuskel innervieren, sobald das subkutane Fett und Bindegewebe wurden seziert. Der Gesichtsnerv ist tief mit dem N. accessorius. </li><li> Finden Sie die knorpeligen Gehörgang, die strahlend weißen aussieht und rostral des Gesichtsnerven zu sehen. </li><li> Finden Sie die Muskelbauch des vorderen M. digastricus, der oben auf und c liegtaudal des Gesichtsnervs. </li></ol></li><li> Wenn die Hauptzweige des Gesichtsnervs visualisiert, Spuren sie dorsal ihrer Herkunft aus den Foramen stylomastoideum finden. Mit feiner Spitze Dumont Pinzetten # 5/45 um die Operationsstelle offen zu halten, zu fördern die Federscherenspitzen nach dem Pfad des Nervs, und bewegen Sie die Zange dorsal um den neu erweiterten Bereich offen zu halten. </li><li> Visualisieren Sie die Stamm des Facialis mit dem Jochbein, bukkale, und Randkieferzweige an dieser Stelle. HINWEIS: Die zeitliche Niederlassung wird näher an das Foramen finden. Die Randkiefernervenäste in die oberen und unteren Teil näher an der Backe, damit diese Nervenäste nicht auf dieser Ebene sichtbar sein. <ol><li> Bei Durchführung einer Nervendurchtrennung, Stabilisierung des Nerven vorsichtig mit der feinen Spitze Pinzette und schneiden Sie die Nerven mit den Feder Schere. Vermeiden Sie die Anwendung zu viel Traktion auf die Nerven mit der Zange avulsing den Nerv aus dem Hirnstamm zu verhindern. Drückendie Stümpfe voneinander entfernt oder ausgeschnitten und ein Abschnitt des distalen Nerv zu entfernen, um sicherzustellen, dass keine Wiederverbindung auftreten kann. </li><li> Bei Durchführung einer Quetschverletzungen, verwenden Dumont # 5/45 Pinzette, um den Nerv für 30 Sekunden mit konstantem Druck, alle Axone trennen, wiederholen Sie diesen Andrang in einem zweiten Winkel senkrecht zur ersten Quetschstelle zu komprimieren. Vermeiden Sie die Anwendung unterschiedliche Mengen an Druck während der 30 Sekunden zu vernichten, da sonst die Verletzung inkonsistent zwischen den Tieren sein. </li></ol></li></ol> 4. Schließen und Wiederherstellung <ol><li> Positionieren Sie das Fett und die Muskeln in den darunterliegenden Strukturen. </li><li> Näherungsweise die Kanten des Einschnitts und schließen Sie die Wunde mit einem 7,5 mm Wundklammer. Nahtmaterial oder Klebstoff sind auch für den Wundverschluss akzeptabel. Postoperative Schmerz kann zu diesem Zeitpunkt zur Verfügung gestellt werden. </li><li> Entfernen Sie das Band von Ohr die Maus. Schalten Sie die Isofluran Fluss und damit die Maus, um reinen Sauerstoff für 30 Sekunden zu atmen, um 1 Min. PlAss der Maus in einem leeren Käfig ohne Einstreu aus der Narkose zu erholen. </li><li> Wenn die Maus wieder, verfolgen Sie sein Verhalten für bestätigende Anzeichen von Gesichtslähmung. Die Schnurrhaare werden gelähmt und abgewinkelt zurück in Richtung der Wange sein, wird die Nase abgewichen werden, und das Auge wird nicht als Reaktion auf einen Luftstoß blinken. </li><li> Haustieren gemeinsam nach der Operation, wenn sie weiblich sind. Vermeiden männlichen Mäusen gemeinsam, weil sie sind aggressiver und neigen dazu, Gewalt zu entfernen Wundklammern ihres cagemate, die Infektion führt. Bereitzustellen postoperativen Schmerz zu dieser Zeit, falls erforderlich. </li><li> Überwachen die Mäuse einmal am Tag über mehrere Tage nach der Operation, um sicherzustellen, dass keine Infektion oder andere Komplikation tritt postoperativ. Entfernen Wundklammern 7-10 Tage nach der Operation, wenn sie nicht auf eigene Faust zurückgegangen. </li><li> Bewerben Schmieraugensalbe in das betroffene Auge täglich Hornhautkomplikationen zu vermeiden, sei es, bis das Auge Blinkreflex ist neuabgedeckt oder bis Euthanasie. </li></ol>

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Die Autoren haben nichts offenzulegen.

Der entscheidende Schritt für dieses Protokoll ist die richtige Positionierung der Maus, bevor mit der Operation begonnen wird. Wenn die Maus nicht flach auf der Seite liegt, das Ohr nicht im richtigen Winkel abgeklebt wird oder der Schnitt an einer falschen Stelle gemacht wird, wird es viel schwieriger, den Gesichtsnerv zu finden. Wenn diese Technik gemeistert wird, dauern Operationen nur wenige Minuten pro Maus. 
Zum Verschließen der Wunde können entweder Nähte, Kleber oder Wundklammern verw...

Viele periphere Nervenverletzung Modelle existieren, aber eine, die sich für das Studium der Motoneuronen steht, ist der Gesichtsnerv Axotomie Modell. Der Gesichtsnerv, der auch als Hirnnerven VII bekannt, ihren Ursprung in der Pons und innerviert die mimische Muskulatur 1,2. In diesem chirurgischen Protokoll wird die Gesichtsnerven bei seinem Austritt aus der Foramen stylomastoideum ausgesetzt und geschnitten bzw. zerkleinert. Der Schweregrad der Nervenverletzung kann im Anschluss an die Sunderland 3 Klassifikationen, die die Verletzungen auf der Grundlage der Unversehrtheit der Axone, Endoneurium, Perineurium und Epineurium unterscheidet, das Bindegewebe Schichten, die nacheinander um die Axon Bündel zu wickeln sind, klassifiziert werden. Im Quetschverletzung (Axonotmesis) werden die Axone durchtrennt, aber das Perineurium und Epineurium erhalten bleiben. Komplette funktionelle Wiederherstellung von Gesichtsnervenquetschung tritt in etwa 11 Tage, weil die intakten Nervenscheide dient als Kanal, in dem die Axone wieder nachwachsen 4,5. Auf dieAndererseits ist in der Schnittverletzung (Neurotmesis), die Axone und alle 3 Bindegewebsschichten durchtrennt, und der gesamte distale Nerven muss nachwachsen zu Muskulatur Innervation wiederherzustellen. Chirurgische Wiederverbindung der Epineurium wird häufig in menschlichen Patienten mit Nervendurchtrennung Verletzungen durchgeführt, aber die Erholung Ergebnisse sind selten optimal. Weitere Studien sind erforderlich, um zu verstehen, warum der Nerv nicht zu seinem Ziel wieder wachsen und welche Therapien eingesetzt zur Verbesserung und Beschleunigung der Regenerationsprozess werden. Es gibt viele Vorteile, um das Studium Nervenverletzung mit dem Gesichtsnerv Axotomie Modell. Erstens ist die Gesichtsnerven Axotomie Verfahren schnell, einfach und sehr gut reproduzierbar; und die daraus resultierende Lähmung der Gesichtsmuskeln hat keine Auswirkungen auf Vitalfunktionen und ist gut mit dem Tier toleriert. Da dies eine Hirnnervenverletzungsmodell, das Studium der Motoneuronenzellkörpern wird vereinfacht, da die Motoneuronen befinden sich in einer relativ homogenen Bevölkerung in the Gesichts motorischen Kern in der Pons. Die Bevölkerung ist auf der Grundlage der subnuklearen Muster innerhalb des Gesichts motorischen Kern abweichen, da gibt es sieben Unterkernen jeweils spezifisch für eine bestimmte Gruppe von Muskeln innervieren, so subnuklearen Unterschiede in Reaktion auf Axotomie kann Auswirkungen Ergebnisse 2,6,7. Ein großer Vorteil der Gesichtsnervenverletzung Modell ist, dass die unaxotomized Seite kann als gekoppeltes interne Kontrolle dienen, weil der Nerv innerviert ist hochsymmetrisch und es gibt kein Übersprechen zwischen den Gesichts motorischen Kernen 8. Ein weiterer Vorteil der Verwendung dieses chirurgischen Verfahrens ist das Fehlen einer direkten Trauma des ZNS oder Störung der Blut-Hirn-Schranke 9. Komplikationen wie starke Blutungen und Infektionen sind selten, mit diesem Verfahren. Eine Vielzahl von Analysen können durchgeführt werden, um die physiologische Reaktion auf eine Nervenverletzung zu bewerten. Die Erholung des Auges Lidschlussreflexes und Whisker-Aktivität kann als Verhaltens verwendet werdenMaß für die funktionelle Erholung 10,11. Video-Aufzeichnung der Tasthaare Tätigkeit ist derzeit der leistungsstärkste Verfahren zum Nachweis von Wiederherstellung von Gesichtsnerven Innervation 12,13. Nach Euthanasie kann histologische Untersuchung des Hirnstamms zu den Motoneuronen Zellkörper im Gesichts motorischen Kern durchgeführt werden. Der Gesichts motorischen Kern ist in sieben Unterkernen, jeder für bestimmte Gesichtsmuskeln unterteilt, so dass für Differenz Prüfung der Antworten auf Verletzungen 2,6. Gesichtsmotoneuronen können gezählt werden, um das Überleben der Zelle zu quantifizieren oder die Immunhistochemie verwendet werden, um Biomarker und spezifische Zellpopulationen 14 zu identifizieren. Der Gesichts motorischen Kern exakt mit Laser-Capture für die molekulare Analyse der zellulären Antwort auf Nervenverletzung 15,16 mikrodissektiert werden. Auswirkungen des Gesichtsnervs Axotomie kann im motorischen Kortex 17,18 analysiert werden. Auch kann der Nerv seziert Waller-Degeneration zu untersuchen 19 oderAxonregeneration 20, und die Muskeln können entfernt werden, um neuromuskulären Endplatten 21 zu studieren. Der Gesichtsnerv Axotomie kann auch verwendet werden, um die zugehörigen zentralen und peripheren Gliazellen 22 studieren, Zielmuskulatur 21, und die Reaktion des Immunsystems 23 werden. Obwohl viel bei der Untersuchung des Gesichtsnervs Axotomie-Modell 24 durchgeführt worden ist, wird eine weitere Studie von peripheren Nervenverletzungen erforderlich, weil Nervenschädigung ist ein bedeutendes Problem für die Patienten und die gegenwärtigen Behandlungen nicht zu optimalen Ergebnissen führen. Dieses Modell ist ein leistungsfähiges Werkzeug für die Untersuchung der physiologischen Reaktion auf eine Nervenverletzung und um die Wirksamkeit von Nervenregeneration Therapien.

<table><tbody><tr><td>Stereomikroskop</td><td>Leica</td><td>M60</td><td></td></tr><tr><td>Beschriftungsband</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-952</td><td></td></tr><tr><td>Vannas-T&uuml; Bingen Federschere - gerade/scharf/8,5 cm/5 mm Schneide</td><td>Fine Science Tools</td><td>15003-08</td><td>Vor Gebrauch sterilisieren</td></tr><tr><td>Dumont #5/45 Pinzette - Standardspitzen/abgewinkelt 45°/Dumoxel/11 cm</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-35</td><td>Vor Gebrauch sterilisieren</td></tr><tr><td>Michel-Nahtklammern - 7,5 mm x 1,75 mm</td><td>Fine Science Tools</td><td>12040-01</td><td>Im Protokoll als "Wundclip" bezeichnet, vor Gebrauch sterilisieren</td></tr><tr><td>Hagenbarth Cross Action Wund-Clip-Applikator 5"</td><td>George Tiemann & Co</td><td>160-910</td><td>Wird verwendet, um einen Wundclip anzubringen, vor Gebrauch zu sterilisieren</td></tr><tr><td>Michel-Nahtclip-Applikator und -Entferner - Für 7,5-mm-Clips</td><td>Fine Science Tools</td><td>12029-12</td><td>Wird verwendet, um einen Wundclip zu entfernen</td></tr><tr><td>0,9% Natriumchlorid-Injektion, USP</td><td>Hospira</td><td>0409-4888-10</td><td></td></tr><tr><td>Betadine, 16 oz, mit Spender</td><td>Fisher Scientific</td><td>19-027132</td><td></td></tr><tr><td>70% Ethanol</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Glasperlen-Sterilisator</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

facial nerve axotomie bei mäusen: ein modell zur motoneuron reaktion auf eine verletzung studieren

Facial Nerve Axotomy in Mice: A Model to Study Motoneuron Response to Injury

Ziel des chirurgischen Protokolls ist es, die Gesichtsnerven, die die Gesichtsmuskulatur innerviert, bei seinem Austritt aus der Foramen stylomastoideum aussetzen und geschnitten bzw. zermahlen, um periphere Nervenverletzung zu induzieren. Vorteile dieser Operation sind seine Einfachheit, hohe Reproduzierbarkeit und der fehlenden Wirkung auf die Lebensfunktionen oder Mobilität aus den nachfolgenden Gesichtslähmung, was zu einem relativ milden Operationsergebnis im Vergleich zu anderen Nervenverletzung Modellen. Ein wesentlicher Vorteil der Verwendung eines Hirnnervenverletzung Modells ist, dass die Motoneuronen befinden sich in einem relativ homogenen Population im Gesichts motorischen Kern in der Brücke, die Vereinfachung der Untersuchung der Motoneuronenzellkörpern. Aufgrund der symmetrischen Art der Gesichtsnerv innerviert und das Fehlen von Übersprechen zwischen den Gesichts motorischen Kernen kann der Betrieb einseitig mit der unaxotomized Seite als gekoppeltes interne Kontrolle dient geführt werden. Eine Vielzahl von Analysen können postoperativ zu beurteilen, durchgeführt werdens die physiologische Reaktion, deren Einzelheiten über den Rahmen dieses Artikels. Zum Beispiel kann die Wiederherstellung der Muskelfunktion als Verhaltens Marker für reinnervation dienen oder die Motoneurone quantifiziert, um das Überleben der Zellen gemessen werden. Zusätzlich können die Motoneuronen genau mittels Laser Mikrodissektion für die molekulare Analyse eingefangen werden. Da der Gesichtsnerven Axotomie ist minimal-invasiv und gut verträglich, kann es zu einer Vielzahl von gentechnisch veränderten Mäusen verwendet werden. Auch kann diese Operation Modell verwendet, um die Wirksamkeit des peripheren Nervenverletzung Behandlungen zu analysieren. Gesichtsnervenverletzung liefert ein Mittel für die Untersuchung nicht nur Motoneuronen, sondern auch die Reaktionen des zentralen und peripheren glial Mikroumgebung, das Immunsystem, und Ziel Muskulatur. Der Gesichtsnervenverletzung Modell ist ein weithin akzeptiertes periphere Nervenverletzung Modell, das als ein leistungsfähiges Werkzeug für die Untersuchung Nervenverletzung und Regeneration dient.

Nach der Gesichtsnerv Axotomie durchgeführt wird, tritt Motoneuronenverlust als Folge der Verletzung. Motoneuronenüberleben nach der Verletzung hängt von vielen Faktoren, wie Geschlecht, Alter der Tiere zum Zeitpunkt der Operation und den Zeitpunkt, zu dem die Motoneuron zählt fertig sind, und der Moran und Graeber Überprüfung 24 und Jinno und Yamada Rezension 22 beide zusammenzufassen Motoneuron Überlebensdaten. Typischerweise werden etwa 86% der Motoneuronen überleben 28 Tage nach der Axotomie <s...

Wir präsentieren ein chirurgisches Protokoll, das detailliert beschreibt, wie eine Schnitt- oder Quetschaxotomie am Gesichtsnerv in der Maus durchgeführt wird. Die Axotomie des Gesichtsnervs kann eingesetzt werden, um die physiologische Reaktion auf Nervenverletzungen zu untersuchen und therapeutische Techniken zu testen.

Facial Nerve Axotomie bei Mäusen: Ein Modell zur Motoneuron Reaktion auf eine Verletzung Studieren

The goal of this surgical protocol is to expose the facial nerve, which innervates the facial musculature, at its exit from the stylomastoid foramen and ...

Das allgemeine Ziel dieses Verfahrens besteht darin, den Nervus facialis zu exponieren, um periphere Nervenschäden zu untersuchen. Der Nervus facialis entspringt im Pons der Hirnregion und tritt über das Foramen stylomastoideum aus dem Schädel aus; anschließend verzweigt sich der Nerv in seine Hauptäste.Nach Freilegung wird der Nerv an seinem Austritt aus dem stylomastoidealen Foramen exzisiert. Zwei wichtige Orientierungspunkte helfen, den Nervus facialis zu lokalisieren. Der erste ist der Gehörgang, der aus perlmuttartigen, knorpeligen Platten besteht, die durch eine dünne Membran verbunden sind.Der andere ist der vordere Bauch des Musculus digastricus, der über dem Nerv und dessen Austritt aus dem Foramen stylomastoideum liegt. Nach einer Verletzung des Nervus facialis kann der Wissenschaftler verschiedene Faktoren untersuchen, wie beispielsweise den Tod von Motoneuronen oder die Genexpression. Das Modell der Nervus-facialis-Verletzung ist eines der am besten charakterisierten Modelle für periphere Nervenverletzungen. Die Vorteile dieser Technik liegen in ihrer Einfachheit, hohen Reproduzierbarkeit und der fehlenden Auswirkung auf lebenswichtige Funktionen infolge der anschließenden Gesichtslähmung. Außerdem kann aufgrund der hochgradig symmetrischen Beschaffenheit des Nervensystems die nicht verletzte Seite als gepaarte interne Kontrolle für Ihre Experimente dienen. Um die Anwendung aseptischer Techniken während des gesamten Verfahrens sicherzustellen, sollten alle Instrumente autoklaviert sein und ein Glasperlensterilisator bereitstehen, um die Instrumente zwischen den Eingriffen zu sterilisieren.Bereiten Sie den chirurgischen Tisch vor, indem Sie ein saugfähiges Polster über eine Heizplatte legen, das Mikroskop aufbauen und die Nasenkonne aufstellen, sodass sie mit dem Rand des Sichtfelds ausgerichtet ist. Nach der Anästhesie der Maus stellen Sie sicher, dass die Maus auf Manipulationen keinerlei körperliche Reaktion zeigt, einschließlich eines Zehenquetschens. Danach leiten Sie den Gasfluss von der Anästhesiekammer zur Nasenkonne um und tragen ein ophthalmisches Salbe auf.Platzieren Sie die Maus in Seitenlage auf chirurgischen Auflagen mit einer darunterliegenden Heizplatte. Überwachen Sie kontinuierlich die Atmung des Tieres und passen Sie den Fluoreszenz-ISO-Fluss bei Bedarf an, um die Anästhesie aufrechtzuerhalten. Um die Operationsstelle freizulegen, befestigen Sie das rechte Ohr mit Klebeband am Nasenkegel.Die hintere Ohrvene sollte über das Ohr verlaufend sichtbar sein. Danach die Behaarung mit 70 % Ethanol benetzen und die Stelle rasieren. Nach dem Entfernen der Behaarung die Haut gründlich mit drei abwechselnden Abreibungen mit Jod und 70 % Ethanol reinigen, wobei die Stelle gründlich gereinigt sein sollte.Führen Sie die Operation fort. Achten Sie darauf, den Mund seitlich exakt auszurichten, sodass die Ohrvene horizontal verläuft. Dies erleichtert das Auffinden des Gesichtsnervs erheblich.Um die Position des ersten Einschnitts zu bestimmen, verfolgen Sie die Vena auricularis posterior vom Ohr aus zur Region hinter dem Ohrfortsatz. Führen Sie dann mit einer Feder-Schere einen vier Millimeter langen Einschnitt zwei bis drei Millimeter hinter dem Fortsatz durch, um Lehrzwecken zu dienen. Dieser Einschnitt wird erweitert, um die darunterliegende Anatomie freizulegen.Führen Sie nun eine stumpfe Dissektion des subkutanen Fettgewebes und der Faszie durch. Blutgefäße und Muskulatur können leicht durch die Schere beschädigt werden. Tritt Blutung auf.Üben Sie mit einem sterilen Wattestäbchen mindestens 30 Sekunden lang Druck aus. Wenn ein erheblicher Flüssigkeitsverlust aufgetreten ist, injizieren Sie mit einer 25- oder 27-Gauge-Nadel bis zu einem halben Milliliter Kochsalzlösung intraperitoneal. Lokalisieren Sie nun den Nervus facialis anhand der markanten Orientierungspunkte.Der Nervus accessorius liegt oberflächlich zum Gesichtsnerv und ist sichtbar, wie er vom kaudalen Abschnitt des Schädels verläuft. Um den Musculus trapezius zu versorgen, identifizieren Sie den knorpeligen Gehörgang. Er ist perlweiß und liegt kaudal zum Gesichtsnerv.Der Gesichtsnerv verläuft um den knöchernen Teil des Gehörgangs herum. Anschließend identifizieren Sie den Muskelbauch des vorderen Bauches des M. digastricus, der oberhalb und seitlich neben dem Gesichtsnerv liegt. Präparieren Sie unterhalb dieser Struktur, um den Gesichtsnerv freizulegen.Es handelt sich um eine feste, weiße Struktur, die an einer darunterliegenden Faszienschicht anhaftet. Identifizieren Sie die Hauptäste des Nervus facialis und verfolgen Sie sie dorsal bis zu ihrer Herkunft aus dem Foramen stylomastoideum.Verwenden Sie feine Pinzetten, um die Stelle offen zu halten, während Sie mit der Spitze der Feder-Schere entlang des Verlaufs des Nervus facialis dissezieren. Der knöcherne Facialisbogen für Raymond kann mit der Pinzette ertastet werden. Identifizieren Sie nun den Stamm des Nervus facialis, um den Nerv zu quetschen.Drücken Sie mit der feinen Pinzette 30 Sekunden lang mit konstantem Druck zusammen. Dadurch werden alle Axone durchtrennt. Wiederholen Sie anschließend die Kompression in senkrechtem Winkel für weitere 30 Sekunden.Halten Sie den Druck zwischen den Experimenten konstant. Nachdem nun die relevanten anatomischen Landmarken identifiziert wurden, werde ich die verfeinerte chirurgische Technik demonstrieren. Nutzen Sie einen kleineren Schnitt, verfolgen Sie die Vena auricularis posterior vom Ohrkamm bis zum Bereich hinter der Ohranhänge, und führen Sie einen vier Millimeter langen Schnitt zwei bis drei Millimeter hinter der Anhöhe durch.Schneiden Sie nun stumpf durch das subkutane Fettgewebe und die Faszie unter Verwendung der drei Orientierungspunkte, dem Nervus accessorius, dem Gehörgang und dem vorderen Bauch des Musculus digastricus. Legen Sie den Nervus facialis frei. Verfolgen Sie den Nervus facialis in Richtung des Foramen stylomastoideum, um den Nervus-facialis-Stamm zu erreichen, durchtrennen Sie den Nerv, fixieren Sie ihn vorsichtig mit einer feinen Pinzette und schneiden Sie ihn mit einer Schere durch.Vermeiden Sie es, zu viel Zug auf den Nerv auszuüben, da dieser sonst vom Hirnstamm abreissen könnte. Bewegen Sie anschließend die Stümpfe auseinander oder entfernen Sie ein Segment des Nervs, wobei sichergestellt werden muss, dass keine Wiederanastomose erfolgen kann. Schliesslich überprüfen Sie den Nerv sorgfältig und bestätigen, dass dieser vollständig durchtrennt ist.Nach der Exsodomy, bringen Sie das Fett und die Muskeln in ihre ungefähre Position zurück. Schließen Sie dann die Wunde mit einer 7,5 Millimeter Wundklammer, Clip-Nähten oder Cyanoacrylat-Kleber. Falls erforderlich, verabreichen Sie zu diesem Zeitpunkt Analgetika, schalten Sie die Anästhesie aus und bringen Sie die Maus in einen leeren Käfig ohne Einstreu zurück.Während sich das Tier erholt, untersuchen Sie es auf Anzeichen einer Gesichtslähmung, bei der die Schnurrhaare gelähmt sind. Wenn diese nach hinten zur Wange hin ausgerichtet sind, erscheint die Nase abweichend verformt, und das Auge reagiert nicht mit einem Lidschlag auf einen Luftzug. Falls das Tier weiblich ist, stellen Sie es nun mit einem anderen Weibchen zusammen.Wenn jedoch das männliche Tier allein untergebracht wird, bis die Lidfunktion zurückkehrt, täglich ein thalamisches Salbe auftragen, um Hornhautkomplikationen vorzubeugen. In der Zwischenzeit die Maus auf Anzeichen einer Infektion oder anderer Komplikationen überwachen, bis die Operationsstelle verheilt ist. Es gibt erhebliche Unterschiede beim Verlust von Motoneuronen nach Exsodomy, abhängig vom Alter und genetischen Hintergrund der Mäuse; bei Wildtyp-Tieren, die im Alter von acht Wochen einen Nervus-facialis-Durchtrennungsschnitt erhalten.Etwa 86 % der Motoneurone überleben bis zum 28. Tag nach der Postexotomie. Es wurde ein signifikant stärkerer Zellverlust im SOD1-Mausmodell der amyotrophen lateralen Sklerose sowie in der immunodefizienten Rekombinations-aktivierenden Gen-2-Knockout-Maus mit Laser-Kapatur beobachtet.Mittels Mikrodissektion wurde Material aus dem Nervus-facialis-Kern isoliert. Der gesamte Nervus-facialis-Kern konnte gewonnen werden. Alternativ konnten die Teilkerne separat gesammelt werden.Die Technik zeichnet sich durch hohe Präzision aus. Motorische Neuronen können einzeln erfasst werden, und der verbleibende Neuro-Pill kann anschließend ebenfalls zur Analyse gesammelt werden. Die quantitative PCR diente zur Untersuchung der Genexpression in den Teilproben des medialen ventralen Teilkerns, dargestellt durch die gestrichelte Linie, und des lateralen ventralen Teilkerns, dargestellt durch die durchgezogene Linie. Dabei wurde die Expression von vier Genen gemessen, die mit der Nervenregenerationsreaktion assoziiert sind.Es wurden einige Unterschiede zwischen den Teilkernen dieser Strukturen gefunden. Die Expression von Gap 43 wies den größten Unterschied zwischen den Teilkernen auf. Sobald diese Technik beherrscht ist, kann die Operation innerhalb von nur wenigen Minuten abgeschlossen werden.Es ist wichtig, daran zu denken, das Tier korrekt zu positionieren, den Einschnitt an der richtigen Stelle anzulegen und die anatomischen Landmarken zur Lokalisation des Nervus facialis zu nutzen. In der Kopf-Hals-Region ist es leicht, die Orientierung zu verlieren; falls Sie sich unsicher sind, lokalisieren Sie einfach den knorpeligen Gehörgang und verfolgen Sie ihn nach posterior, um den Nervus facialis zu finden.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Medicine

Medizin

Die Verschont Nerve Injury Tiermodell wird hier als ein Maus-Modell von peripheren neuropathischen Schmerzen nach einer partiellen Denervation der Ischiasnerv durch Läsion der Tibia-und N. peronaeus Filialen beschrieben, so dass die verbleibenden Nervus suralis intakt. Verhaltensmodifikation durch mechanische Allodynie wird durch von Frey Filamente quantifiziert.

Die Verschont Nerve Injury (SNI) Modell induzierte mechanische Allodynie in Mäusen

Dieses Video zeigt ein chirurgisches Protokoll an einem Rattenmodell, das die Schritte von der Anästhesievorbereitung bis zur Einleitung einer Gesichtsnervenverletzung detailliert beschreibt. Dieses Protokoll ist nützlich für die Untersuchung der Nervenregeneration und chirurgischer Techniken in der medizinischen Forschung.

Induktion einer Verletzung des Gesichtsnervs in einem Rattenmodell

Quelle: Olmstead, D. N., et al., Axotomie des Gesichtsnervs bei Mäusen: Ein Modell zur Untersuchung der Reaktion von Motoneuronen auf Verletzungen. J. Vis. Exp. (2015). Dieses Video zeigt das Verfahren der Gesichtsnervenquetschung an einer Maus, bei dem durch stumpfe Dissektion durch wichtige Orientierungspunkte der Stamm des Nervus facialis am Foramen stylomastoideus freigelegt wird. Eine Pinzette wird dann verwendet, um den Nervenstamm zu komprimieren, was zu axonalen Schäden führt und die...

Durchführung einer Crush-Axotomie am Gesichtsnerv in einem Mausmodell

Quelle: Dalkin, W., et al. Die Methode zur Verletzung des Nervus fibularis: Ein zuverlässiger Assay zur Identifizierung und zum Test von Faktoren, die neuromuskuläre Verbindungen reparieren. J. Vis. Exp. (2016)Dieses Video zeigt ein chirurgisches Verfahren zur Induktion einer Fibulausverletzung bei einer Maus, um die Regeneration der neuromuskulären Verbindung (NMJ) zu untersuchen. Bei diesem Verfahren wird der Nervus fibularis freigelegt, kontrollierter Druck ausgeübt, um eine Verletzung...

Induktion einer Verletzung des Nervus fibularis bei einer Maus zur Untersuchung der Regeneration neuromuskulärer Verbindungen

Die tibiale Nervendurchtrennung Modell ist ein gut verträgliches, validiert und reproduzierbares Modell der Skelettmuskelatrophie. Das Modell chirurgische Protokoll beschrieben und in C57Black6 Mäusen nachgewiesen.

Tibialisnerv Durchtrennung - ein standardisiertes Modell für Denervation-induzierte Skelettmuskelatrophie in Mice

Dieses Protokoll beschreibt einen reproduzierbaren Ansatz zur Gesichtsnervenchirurgie im Rattenmodell, einschließlich Beschreibungen verschiedener induzierbarer Verletzungsmuster.

Gesichtsnervenchirurgie im Rattenmodell zur Untersuchung der axonalen Hemmung und Regeneration

Das Ziel dieses Protokolls ist es, ein orofaziales Muskelfibrosemodell zu etablieren. Der Vergleich der Histologie zwischen Mäusen, Kaumuskel und Tibialis-Vordermuskel nach Erfrierverletzung bestätigte eine Kaumuskelfibrose. Dieses Modell wird die weitere Untersuchung des Mechanismus erleichtern, der der orofazialen Muskelfibrose zugrunde liegt.

Einfrierverletzung im Kaumuskel der Maus zur Etablierung eines orofazialen Muskelfibrosemodells

Hier stellen wir ein Protokoll vor, das in vivo Elektroporation und Denervierung des kranialen Musculus levator auris longus (LAL) kombiniert. Dieses Verfahren ermöglicht es, die mögliche Rolle von Muskelproteinen bei der Regeneration der neuromuskulären Synapse zu untersuchen.

Kombinierte In vivo Elektroporation und kurzfristige Reinnervation des kranialen Levator Auris Longus Skelettmuskel

Ein Mausmodell für Ventilator induzierte Lungenschädigung ist ein wichtiges Instrument, um eine akute Lungenversagen...

Pressure Controlled Ventilation zu Acute Lung Injury in Mäusen zu induzieren

Atemversagen ist die häufigste Todesursache nach einer zervikalen Rückenmarksverletzungen. Nachdem eine reproduzierbare, messbare und verlässliche präklinischen Tiermodell der Atemversagen durch eine teilweise zervikalen Verletzungen induziert wird helfen, die Atemwege und des anschließenden nicht-respiratorischen Neuroplastizität zu verstehen und ermöglichen die Prüfung vermeintlichen Reparaturstrategien.

Einem Mausmodell der zervikalen Rückenmarksverletzung zu Post-läsionaler Atemneuroplastizität Studieren

Lernen Sie die Axotomie des Nervus facialis bei Mäusen, um Motoneuron-Reaktionen auf periphere Nervenverletzungen zu untersuchen. Dieses standardisierte Verfahren ermöglicht reproduzierbare Ergebnisse für therapeutische Ansätze.

Facial Nerve Axotomie bei Mäusen: Ein Modell zur Motoneuron Reaktion auf eine Verletzung Studieren

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