Name: Synthesemethoden für Asymmetric Ferrocen abgeleitete Bio-Konjugat-Systemen über Festphasen-Resin-basierte Methodik (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-03-12T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 7 s
Description: Lernen Sie die Festphasensynthese asymmetrischer Ferrocen-Biotin-Biokonjugate zur Immobilisierung auf Goldoberflächen. Diese Methode ermöglicht einfache Reinigung und effektive Oberflächenhaftung für Biosensor-Anwendungen.

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KG wurde von der RA Welch Foundation Zuschuss P-1760 unterstützt, TCU Andrews Institut für Mathematik und Pädagogik der Naturwissenschaften (KG), TCU Forschung und Kreativität Aktivität Grant (KG) und TCU SERC Grant (bis JHS).

1. Synthese von Biotin-Fc-cystein (1) <ol><li> Festphasenverfahren zur Herstellung von harzgebundenen 1. <ol><li> Zeigen Biotin beladene Harz (250 mg, 0,145 mmol) in eine Fritten Spritze und quellen des Harzes durch die Aufstellung Dimethylformamid (5 ml) und Schütteln der Spritze auf einen Laborschüttler für 20 min. Vertreiben die Lösung und wiederholen Dimethylformamid Schwellungen noch einmal. </li><li> Entfernen Sie die Fmoc-Schutzgruppe durch Zugabe von 6.4 ml 20% Piperidin in Dimethylformamid mit der Spritze, gefolgt von 10-15 Minuten schütteln. Wiederholen Sie den Entschützungsverfahren mit etwa 4-6 ml Piperidin. Methanol (1: 1), 3x Methanol: Dichlormethan (1: 1) mit einer Sequenz von 3x Dimethylformamid, 3x Dimethylformamid Waschen des Harzes, 3x Dichlormethan, ~ 5 ml. Machen einen Ninhydrintest (+) auf eine kleine Proben (~ 10) der Kügelchen eine erfolgreiche Entfernung der Schutzgruppe durch die Anwesenheit von blau nach Erhitzen zu bestätigen. </li><li> Mix eine Lösung, die 1&#39;-Fmoc-amino-ferrocen-1-carbonsäure(203,3 mg, 0,4350 mmol), 1-Hydroxybenzotriazolhydrat (58,8 mg, 0,413 mmol), Diisopropylcarbodiimid (0,0673 ml, 0,435 mmol), Diisopropylethylamin (0,0757 ml, 0,435 mmol) und eine 4: 1 Mischung von Dichlormethan und Dimethylformamid. Zeichnen Sie diese in den Fritten Spritze und schütteln auf einem Laborschüttler 6 Stunden. Dann vertreiben die Lösung aus der Spritze und wasche wie früher beschrieben. </li><li> Führen Sie den Ninhydrintest (-), wie oben beschrieben, um die Kopplung zu bestätigen. Der Ninhydrin-Test immer noch nützlich für die Bestätigung Kopplungs trotz der orange Farbe der Kügelchen von der Befestigung der Eisen enthaltende Einheit abgeleitet ist. </li><li> Dann Entfernen der Fmoc-Gruppe, die durch die Zugabe von 20% igem Piperidin in Dimethylformamid und wie oben beschrieben gewaschen. Der Ninhydrin-Test (+) verwendet werden, um Fmoc Entfernen zu bestätigen. </li><li> Wird eine Lösung aus Fmoc-Cys (Trt) -OH zusammen (254,8 mg, 0,4350 mmol), 1-Hydroxybenzotriazolhydrat (58,8 mg, 0,4125 mmol), Diisopropylcarbodiimid (0,0673 ml, 0,4350mmol), Diisopropylethylamin (0,0757 ml, 0,4350 mmol) und eine 4: 1-Mischung von Dichlormethan und Dimethylformamid. Fügen Sie diese Cysteinkopplung Cocktail die Fritte Spritze und schütteln für 6 Stunden. Waschen unter Verwendung des zuvor beschriebenen Protokolls. </li><li> Bestätigen Koppeln mit der Ninhydrin-Test (-), gefolgt von der Entfernung der Fmoc-Komponente mit 20% Piperidin und Waschen. Den freien terminalen Amins mit dem Ninhydrintest (+). </li></ol></li><li> Die Spaltung von 1 von dem Harz. <ol><li> Machen Sie eine Lösung von TFA (9,45 ml), Wasser (0,25 ml), 1,2-Ethandithiol (0,25 ml) und Triisopropyl Silan (0,1 ml), ist es an der Spritze hinzufügen und leicht schütteln 4 Stunden. </li><li> Sammle den erhaltenen rotbraune Lösung in ein Eppendorf-Röhrchen und verdampfe das TFA langsam unter Verwendung eines Luftstroms. </li><li> Hinzufügen kaltem Diethylether (~ 15 ml) zu dem Eppendorf-Röhrchen zur Ausfällung 1, die leichtem Rühren bildet. Trennen Sie das Produkt durch Zentrifugation (1 g, 5 min). THenne Wiederholungszyklen Diethylether Waschungen (~ 60 ml Gesamtvolumen) und Zentrifuge 1 als rot / braunen Feststoff zu erhalten. </li></ol></li></ol> 2. Charakterisierung und Analyse von 1 <ol><li> Zu bestätigen, dass die Identität der Verbindung und in Figur 2 unter Verwendung von 1 H (16 Abtastungen) und 13 C-NMR (512 Abtastungen) in deuteriertem Methanol (300 ul) und ESI-MS-Analyse gezeigt Zusammensetzung übereinstimmt. Erwarten Sie die folgenden Ergebnisse: 1 H-NMR-Spektrum (CD 3 OD) δ / ppm: 1,407 bis 1,684 (m, 6H), 2,245 (t, 2H), 2,665-3,150 (m, 12H), 4,015 (t, 1H), 4.104 (d, 2H ), 4,274 (q, 1H), 4.426 (d, 2H), 4.479 (q, 1H), 4,595 (t, 1H) und 13 C-NMR-Spektrum (CD 3 OD) δ / ppm: 24,644 (CH 2), 25,472 (CH 2), 28,051 (CH 2), 28.300 (CH2), 35,474 (CH 2), 38.698 (CH2), 39,241 (CH 2), 39,717 (CH 2), 55,340 / 55,538 (Cp-Ring), 60,286 (CH), 61,964 (CH), 62,521 / 62,821 (Cp-Ring), 66,038 / 66,170 (Cp-Ring), 69,153 / 69,328 (Cp-Ring), 71,468 / 71,593 (Cp-Ring), 76,466 (CH), 171,770 (C = O), 175,361 (C = O). ESI-MS (m / z): Gefunden: 639,00 [1 + Na] +, Theoretische: 639,1 [1 + Na] + und HR-MS (m / z): Gefunden: 617,2049 [1 + H] +, Theoretisch: 617.1622 [1 + H] +. </li><li> Eine HPLC, Elementaranalyse, die Zusammensetzung der isolierten 1 bestätigen. Durchführung HPLC Chromatogramme unter Verwendung einer C8-Umkehrphasensäule mit 100% MeOH bei einer Fließgeschwindigkeit von 0,5 ml / min. Hinweis: HPLC-Retentionszeiten waren: 3,198-4,674 min. </li></ol> 3. Immobilisierung von 1 auf einer Goldoberfläche <ol><li> Cut Polymer besicherten Gold-Folien in Quadrate von ~ 0,25 in 2. </li><li> Füllen eines 50 ml Becherglas mit DI-Wasser-Lösung von 1 (~ 1 mm). </li><li> Fügen Sie den Gold Folie, um das Becherglas geben und mit einem Uhrglas. Alleow die Glasobjektträger zu O / N bei RT inkubieren ohne Bewegung. </li><li> Entfernen Sie die Gold Folie aus der Lösung und lassen Sie es an der Luft trocknen. </li><li> Erhalten rasterelektronenmikroskopische Aufnahmen mit einem Rasterelektronenmikroskop (oder Äquivalent) an immobilisiertes Beobachten 1. </li></ol>

Die Autoren haben nichts offenzulegen.

Die Synthese von asymmetrischen Ferrocenderivate ist eine Herausforderung in Lösung. Beispielsweise versucht 1 herzustellen, in Lösung in Folge geringen Ausbeuten an dem gewünschten Produkt (weniger als 20%). Ebenso Reaktionen unter Verwendung 1&#39;-amino-Ferrocencarbonsäure (sans Fmoc) und Harz gebundenen Biotins in unlöslichen Produkt konsistent mit dem polymerisierten Produkt durch Baristic et al. und minimale Produkt. 47 Dies wird weiter durch Ferrocen kompliziert und s...

Biosensoren sind kleine Vorrichtungen, die biomolekulare Erkennungstechnologie zu verwenden, wie die Plattform für die selektive Analyse und sind für ihre Spezifität, Geschwindigkeit und kostengünstige verwendet. Elektrochemische Biosensoren zum Nachweis von Biomolekülen sind an der Spitze dieses Feldes aufgrund ihrer Einfachheit, Wirtschaftlichkeit und hohe Empfindlichkeit. 1,3 Die allgemeine Anatomie dieser Sensoren ist eine Elektrode mit einem Erkennungsmolekül ausgestattet spezifisch für die biologischen Marker von Interesse . Bindung des Biomarkers durch die Erkennungsmolekül führt zu einer lokalen Änderung des Potentials oder Stroms, der durch eine einfache Messung erfasst werden können. Um die Erkennungsgruppe stammen aus Enzymen reichen, 4-8 Antikörper, 9-12 ganze Zellen, 13-16 Rezeptoren 17-20 21-23 Peptide und DNA 24 und sind weitgehend auf größere, biologische Moleküle konzentriert. 25-28 Forschung Bemühungen in diesem Bereich haben sich hauptsächlich auf Immun whe konzentriertRe ein Immunglobulin mit einem Redox-aktiven Kern immobilisiert (zB Ferrocen) und verwendet, um einen Antikörper von Interesse zu detektieren. Diese Studien wurden von klinischen Anwendungen aufgrund der schlechten Präzision und Zeitaufwand von den Komplikationen, die sich aus der Nutzung von Antigen / Antikörper stammen ausgeschlossen. 1,3 Wachsende Aufmerksamkeit auf den Nachweis von kleinen Molekülen (weniger als 1 kg / mol) der biomedizinischen Schwerpunkt , Ernährung und Umwelt Interesse neben der nationalen Sicherheit. 29 Die bekanntesten Beispiele für Biosensoren sind Selbsttest Zuckermessgeräte, die Siebdruck Enzymelektroden zu einer Taschenformat amperometrischen Meter gekoppelt haben. Diese Systeme verwenden typischerweise einen coulometrischen Methode, wo die Gesamtmenge an Ladung von der Glucoseoxidationsreaktion erzeugt wird, über einen Zeitraum gemessen. Marktfähige Geräte sind tragbar, robust und in der Hand gehalten, um den Einsatz leicht für die breite Bevölkerung zu machen. Redox-Tags wie Ferrocen sind necessary, um die elektrochemische Detektion von Biomarkern oder kleinen Molekülen in Lösung zu bieten, da die meisten Biomarker sind nicht eigenelektrochemisch aktiv. 30-38 Ferrocen eine metallorganische Molekül, das einen Goldstandard für Elektrochemie, die es eine ausgezeichnete Wahl für die Integration in elektrochemischen Biosensoren macht. Ferrocen-basierte Redox-aktive Spezies wurden bereits große Aufmerksamkeit auf der Grundlage der Ferrocen Kern haben erhielt aufgrund ihrer geringen Größe, gute Stabilität, bequem synthetischen Zugang, einfache chemische Modifikation, relativen Lipophilie und Einfachheit der Redox-Tuning. 3,30-42 Kleine Moleküle intensiv als Detektoren von Metallionen und kleine Moleküle verwendet. 32-38,43 Systeme Targeting größeren Spezies wie Biomoleküle die Anbringung von großen Antikörper oder Immunoglobuline, Ferrocen-Derivate, die auf einer elektrochemischen Oberflächen eingebettet wurden verwendet. 1,3,39 44 In jedem Fall ist das Potential und Strom intensiviertty der Fe-III / Fe II Redoxpaar wurde auf molekulare Kopplung verändert wird, wodurch eine neue spektroskopische Griff, das die Anwesenheit des Analyten Molekül. Diese Änderung ergibt sich aus der umfangreichen Überlappung zwischen dem pi-Systems der Cyclopentadienylringe und den Eisen d-Orbitale auftritt. Wenn das pi-Systems geändert wird, dh, derivatisiert oder umgesetzt wird, dann wird die Bahn-Wechselwirkung wird wiederum Veränderung. Dies wird die Fe Kern beeinflussen und kann als eine Verschiebung des Potentials des Fe-III / Fe II Paar beobachten. 40,45,46 Diese Eigenschaften machen ein solches System attraktiv zur Verwendung als ein Quantifizierungsmittel in einer elektrochemischen Immunoassay oder Biosensor. Um spezifisch für Biosensor Kapazitäten Ferrocen Systeme erzeugen ist es optimal, ein Cp-Ring mit dem Bio-Rezeptor spezifisch für ein Zielmolekül zu modifizieren und nutzen die anderen Cp Ring als Molekular Haltegurt an die elektrochemische Auslese oder elektrode (Abbildung 1). Synthese dieser asymmetrischen Ferrocenderivate wird durch Nebenreaktionen und die Bildung von auf intermolekulare Vernetzung gebildet dimere und polymere Spezies in Frage. 47 ist jedoch Kopplungschemie Herstellung einer Amidbindung der direkteste Weg zu einfachen Derivaten des Ferrocens mit biologischen Komponenten, wie beispiels bereitzustellen Peptide und deren Metaboliten. Daher können Festphasenverfahren zuerst in den 1950er Jahren von Merrifield für die Peptidsynthese entwickelt, um metallorganische Verbindungen Ferrocen verwendet werden. Durch die Verwendung des orthogonal substituiert 1&#39;-Fmoc-amino-ferrocen-1-carbonsäure-Molekül, ein System, das ein Ferrocen-Rezeptoreinheit (Biotin), elektroAuslese (Ferrocen) und Immobilisieren-Linker-Komponente (Cystein) enthalten kann, hat gebaut und hier detailliert beschrieben. Die Synthese dieser Bio-Konjugat wird ebenso diskutiert wie Beweise für die Immobilisierung auf einer Goldoberfläche. Diese Arbeit Vertrets der ersten Präsentation eines Systems von Biotin, Ferrocen und einer Aminosäure zur Immobilisierung auf einer Goldoberfläche besteht.

<table><tbody><tr><td>Biotin Novatag Resin</td><td>NovaBiochem</td><td>8550510001</td><td></td></tr><tr><td>TORVIQ 10 ml Luer-Lock-Frittenspritze</td><td>Fisher</td><td>NC9299151</td><td></td></tr><tr><td>Piperidin</td><td>Acros</td><td>P/3520/PB05</td><td></td></tr><tr><td>Ninhydrin-Test</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>60017-1ea</td><td></td></tr><tr><td>1'-Fmoc-amino-ferrocen-1-carbonsäure</td><td>Omm Scientific</td><td>Sonderbestellung</td><td></td></tr><tr><td>N,N&prime; -Diisopropylcarbodiimid</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D125407-5G</td><td></td></tr><tr><td>Fmoc-Cys(Trt)-OH</td><td>Novabiochem</td><td>8520080025</td><td></td></tr><tr><td>Trifluoressigsäure</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T5408</td><td></td></tr><tr><td>1,2-Ethanedithiol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>2930</td><td></td></tr><tr><td>Triisopropylsilan</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>233781</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf Röhrchen (20 ml)</td><td>Jede Quelle</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Methanol</td><td>Jede Quelle</td><td></td><td>Trocken mit Molekularsieben vor der Verwendung & Lagerung in einer 100 ml Medienflasche für eine einfache Verwendung</td></tr><tr><td>Dichlormethan</td><td>Jede Quelle</td><td></td><td>Trocken mit Molekularsieben vor der Verwendung & Lagerung in einer 100 ml Medienflasche für eine einfache Verwendung</td></tr><tr><td>Dimethylformamid</td><td>Jede Quelle</td><td></td><td>vor Gebrauch mit Molekularsieben trocknen & Zur einfachen Verwendung in einer 100-ml-Medienflasche</td></tr><tr><td>aufbewahren Zentrifugieren Sie</td><td>jede Quelle</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

synthesemethoden für asymmetric ferrocen abgeleitete bio-konjugat-systemen über festphasen-resin-basierte methodik

Synthetic Methodology for Asymmetric Ferrocene Derived Bio-conjugate Systems via Solid Phase Resin-based Methodology

Früherkennung ist ein Schlüssel zur erfolgreichen Behandlung der meisten Krankheiten, und ist vor allem dann wichtig für die Diagnose und Behandlung von vielen Arten von Krebs. Die am häufigsten verwendeten Techniken sind bildgebende Verfahren wie Kernspintomographie (MRT), Positronen-Emissions-Topographie (PET) und Computertomographie (CT) und sind optimal für das Verständnis der physikalischen Struktur der Krankheit, kann aber nur einmal alle vier durchgeführt werden 6 Wochen durch die Verwendung von bildgebenden Mittel und die Gesamtkosten. Vor diesem Hintergrund ist die Entwicklung der &quot;Point of Care&quot; Techniken wie Biosensoren, die das Stadium der Erkrankung und / oder Wirksamkeit der Behandlung in der Praxis des Arztes zu bewerten und tun dies in einer angemessenen Zeitspanne, würde Behandlungsprotokolle zu revolutionieren. 1 Wie ein Mittel, um zu erforschen Ferrocen Biosensoren zum Nachweis von biologisch relevanten Molekülen 2 wurden Methoden entwickelt, um Ferrocen-Biotin hierin beschriebenen Bio-Konjugaten. Dieser Bericht wird auf einer Biotin-Ferrocen-Cystein-System, das auf einer Goldoberfläche immobilisiert werden können, konzentrieren.

Das Harz-gebundenen Form von 1 ist in 2 gezeigt. Die kovalente Bindung des Ferrocen-Komponente führt zu einem orangen Farbton mit den Harzperlen, die persistent mit kontinuierlichen Waschen und indikativ für einen immobilisierten eisenhaltigen Komplex ist, um die Eisenaufnahme im Gegensatz durch die PEG-Komponente des Harzkügelchens. Die harzfreien Form 1 ist in der Farbe der Harzkügelchen identisch. Nach der Entfernung der Verbindung aus den Harzperlen, die Reinheit un...

Die Synthese asymmetrischer Ferrocenspezies ist mit Lösungstechniken eine Herausforderung. Dieser Bericht konzentriert sich auf die Methoden zur Herstellung eines Ferrocen-Biotin-Biokonjugats unter Verwendung einfacher und sauberer Reaktionen, die durch Festphasensynthese durchgeführt werden. Es wurde gezeigt, dass der Einbau einer Thiolateinheit die Fähigkeit zur Immobilisierung auf Goldoberflächen verleiht.

Synthesemethoden für Asymmetric Ferrocen abgeleitete Bio-Konjugat-Systemen über Festphasen-Resin-basierte Methodik

Early detection is a key to successful treatment of most diseases, and is particularly imperative for the diagnosis and treatment of many types of cancer. ...

Das übergeordnete Ziel des folgenden Experiments besteht darin, asymmetrische Ferne-Biotin-Bio-Konjugate herzustellen, die auf einer Goldoberfläche immobilisiert werden können. Dies wird durch die Synthese des Ferne-Biotin-Bio-Konjugats an einer festen Trägersharf erreicht. In einem zweiten Schritt wird das Konjugat vom Harz abgetrennt, wodurch die Isolierung und Charakterisierung der Verbindung ermöglicht wird.Anschließend wird das Bio-Konjugat mit einer Goldoberfläche inkubiert, um die Adhäsion der Thalate an das Gold zu ermöglichen. Die Ergebnisse zeigen, dass ein ferne-Bio-Konjugat in guter Ausbeute und Reinheit hergestellt und anschließend auf einer Goldoberfläche immobilisiert werden kann. Der Hauptvorteil dieser Technik im Vergleich zu bestehenden Methoden wie lösungsbasierten Verfahren besteht darin, dass die Reinigung einfach und unkompliziert ist.Neben der Vermeidung von Nebenprodukten, die bei Lösungsmittel-basierten Methoden entstehen, kam uns die Idee zu dieser Methode, als wir über die Effizienz und Praktikabilität der Glucosesensoren nachdachten, die zur Überwachung von Diabetikern eingesetzt werden. Die Demonstration dieses Verfahrens wird von Sean Rodich aus meinem Labor sowie von Paulina Gonzalez, einer Bachelor- und einer Masterstudentin aus meinem Labor, durchgeführt. Zunächst werden 250 Milligramm Biotin-beladene Harz in eine mit Sinterplatte ausgestattete Spritze gegeben.Quellen Sie das Harz, indem Sie fünf Milliliter Dimethylformamid aufziehen und die Spritze 20 Minuten lang auf einem Labor-Schüttler schütteln. Danach entsorgen Sie die Lösung und wiederholen die Quellung mit Dimethylformamid. Entfernen Sie anschließend die FOC-Schutzgruppe, indem Sie vier bis sechs Milliliter einer 20 %igen Papin-Lösung in Dimethylformamid zur Spritze geben und dann 10 bis 15 Minuten schütteln. Nach erneuter Wiederholung des Entschützens waschen Sie das Harz dreimal abwechselnd mit Dimethylformamid, einem Gemisch aus gleichmäßigen Teilen Dimethylformamid und Methanol, einem Gemisch aus gleichmäßigen Teilen Methanol und Dichlormethan sowie reinem Dichlormethan.Nach dem Ausstoßen der Lösung führen Sie einen Hyn-Test an einer kleinen Probe der Kügelchen durch, um den erfolgreichen tiefen Schutz durch das Auftreten von Blau beim Erhitzen zu bestätigen. Mischen Sie anschließend eine Lösung, die ein primäres FM-Aminofarin, eine Carbonsäure, HOBt-Hydrat, DIC-Di, Isopropylethylamin und ein Vier-zu-eins-Gemisch aus Dichlormethan und Dimethylformamid enthält. Ziehen Sie diese Lösung in die gefrittete Spritze auf und schütteln Sie sie vorsichtig sechs Stunden lang auf einem Labor-Schüttler.Nach dem Waschen des Harzes den Hyran-Test wie zuvor beschrieben durchführen, um zu bestätigen, dass die Kopplung stattgefunden hat. Danach die FM o-Gruppe entfernen, indem 20 %ine in Dimethylformamid zum Harz in der Spritze zugegeben wird, nachdem wie zuvor durch Schütteln gewaschen wurde. Eine Lösung herstellen, die aus fmm cyst trit till O-H-O-B-T-Hydrat, DIC di, Isopropyl eth lamin und einem Vier-zu-eins-Gemisch aus Dichloromethan und Dimethylformamid besteht.Fügen Sie dieses Cystin-Kupplungscocktail der gefritteten Spritze hinzu und schütteln Sie sie sechs Stunden lang vorsichtig. Nach Bestätigung der Kupplung mittels HYN-Test entfernen Sie die F-MOC-Komponente mit 20 %ine. Sobald das Waschen abgeschlossen ist, überprüfen Sie das freie terminale Amin mittels Hydrant-Test.Zu diesem Zeitpunkt eine Lösung aus Trichloressigsäure, Wasser, 1,2-Dichlorethan und Triisopropylsilan herstellen. Anschließend die Lösung in die Spritze geben. Nach vierstündigem Schütteln die entstandene rotbraune Lösung in einem Erlenmeyerkolben sammeln und die Trichloressigsäure langsam unter Einwirkung eines Luftstroms verdampfen lassen.Fügen Sie danach etwa 15 Milliliter kaltes Diethylether zur Eppendorf-Röhre hinzu, um das Produkt auszufällen, das sich unter leichtem Schütteln bildet. Isolieren Sie das Produkt durch Zentrifugation. Wiederholen Sie anschließend Zyklen aus Diethylether, Waschungen und Zentrifugation.Um das Ferne-Biotin-Bio-Konjugat als rotbraunen Feststoff zu erhalten. Bestätigen Sie die Identität des Ferne-Biotin-Bio-Konjugats mittels Protonen- und Kohlenstoff-NMR-Spektroskopie sowie ESI-MS-Analyse. Führen Sie HPLC und Elementaranalyse durch, um die Zusammensetzung der isolierten Verbindung zu bestätigen.Nach der vollständigen Charakterisierung des Produkts schneiden Sie die polymerbeschichteten Goldplättchen in Quadrate von etwa 0,25 Quadratzoll. Füllen Sie dann einen 50-Milliliter-Becher mit einer einmillimolaren wässrigen Lösung des Ferne-Biotin-Bio-Konjugats. Geben Sie eines der Goldplättchen in den Becher und bedecken Sie diesen mit einem Uhrglas.Lassen Sie die Probe über Nacht bei Raumtemperatur ohne Rühren inkubieren. Nach der Inkubation entfernen Sie die Goldprobe aus der Lösung und waschen sie mit entionisiertem Wasser. Sobald die Probe trocken ist, fertigen Sie Aufnahmen mittels Rasterelektronenmikroskopie unter Verwendung eines Rasterelektronenmikroskops an, um den immobilisierten Ferne-Biotin-Bio-Konjugat zu beobachten.Die harzgebundene Form des Ferne-Biotin-Bio-Konjugats 1 ist hier dargestellt. Die kovalente Anbindung der Ferne-Komponente verleiht den Harzperlen eine orangerote Färbung, die auf einen immobilisierten eisenhaltigen Komplex hinweist, im Gegensatz zur Eisenabsorption durch die PEG-Komponente der Harzperle. Nach der Entfernung der Verbindung von den Harzperlen ist die resultierende Reinheit und Ausbeute deutlich höher als bei typischen Lösungsmethoden.Wenn man dieses Verfahren einmal beherrscht, kann es bei korrekter Durchführung innerhalb von drei Tagen durchgeführt werden. Vergessen Sie nicht, dass das Arbeiten mit chlorsaurem Säure und F sowie mit Diät äußerst gefährlich sein kann; es sollten stets äußerst sorgfältige Vorsichtsmaßnahmen getroffen werden, wie beispielsweise die Verwendung persönlicher Schutzausrüstung und die Durchführung des Verfahrens im Abzug.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Chemistry

Chemie

Die effiziente Festphasen-Peptid-Synthese eines funktionalisierten Bis-Peptid Trimer Verwendung eines "Safety-catch" Spaltung Verfahren aus HMBA Harz beschrieben.

Festphasensynthese eines funktionalisierten Bis-Peptids unter Verwendung von &quot;Safety-Catch&quot;-Methodik

Dieses Protokoll beschreibt die wichtigsten Schritte für die Biokonjugation eines Cysteins erforderlich Proteins an ein Maleimid enthalten, einschließlich Reagenz Reinigung, Reaktionsbedingungen Biokonjugat Reinigung und Charakterisierung Biokonjugat.

Synthese von Protein Biokonjugate<em&gt; über</em&gt; Cystein-maleimid Chemie

Ein mögliches allgemeines Verfahren zur Synthese von wasserlöslichen multimetallischen peptidischen Arrays, die eine vorgegebene Sequenz von Metallzentren enthalten, wird vorgestellt.

Synthese eines wasserlöslichen Metall-organische Komplexe Array

Wir präsentieren ein Protokoll für den Bau von Thioether/Vinyl sulfid angebunden spiralförmige Peptide mit Foto-induzierte Thiol-ene/Thiol-Yne Hydrothiolation.

Bau von Thioether/Vinyl-sulfid-angebunden spiralförmige Peptide über Foto-induzierte Thiol-ene/Yne Hydrothiolation

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Synthese und Biokonjugaten der Thiol-reaktive Reagenzien für die Erstellung der Website selektiv geändert Immunokonjugate

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Synthese von informationstragenden Peptoiden und deren sequenzgesteuerter dynamischer kovalenter Selbstmontage

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Die Hochdruck-Saphirzelle Gerät ist ein einzigartiges Werkzeug, um unter einem weiten Druckbereich zu studieren, ohne Probenahme, Phasenverhalten. Mit einem Kathetometer können sehr genaue Volumenmessungen aufgezeichnet werden, um Flüssigkeitsausdehnung und Phasenzusammensetzung zu messen. Somit ermöglicht dieses Syntheseverfahren die Untersuchung (1) Phasengleichgewichte von Mehrkomponenten-Gemischen und (2) das Verteilungsverhalten des Katalysators oder Modellverbindungen in Abhängigkeit vom...

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