Name: Der modifizierte Loch Board - Mess Verhalten, Kognition und Sozialinteraktion an Mäusen und Ratten (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-04-08T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 16 s
Description: Lernen Sie die modifizierte Loch Board-Methode zur Messung von Verhalten und Kognition bei Mäusen und Ratten. Dieses Verfahren reduziert Tierzahlen und ermöglicht präzise Analysen kognitiver Flexibilität.

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Die Autoren möchten die Arbeit von Annemarie Baars und José Lozeman-van 't Klooster bei der Durchführung, Unterstützung und Lehre von Experimenten mit dem mHB-Aufbau würdigen.

HINWEIS: Die Experimente wurden von der Tierversuchskommission der Universität Medical Center Utrecht und der Universität Utrecht in den Niederlanden zugelassen. Darüber hinaus verfolgt die Tierversuche die Prinzipien der Versuchstierpflege und beziehen sich auf die Leitlinien für die Pflege und Verwendung der Säugetiere in Neurowissenschaften und Verhaltensforschung. 25 1. Versuchsaufbau HINWEIS: Die Standard mHB Gerät besteht aus einem grauen PVC Versuchsfeld (100 x 50 x 50 cm) von einem Zusatzfach (50 x 50 x 50 cm), in der die Gruppenmitglieder des Versuchstieres während des Testzeitraums gestellt werden getrennt durch eine transparente, perforierte Trennwand 1. Wenn das Vorhandensein von Gruppenmitgliedern unerwünscht ist oder wenn Tiere individuell untergebracht sind getestet, bringen Sie die transparente Trennwand durch eine Trennwand aus grauem PVC (Abb. 1; siehe auch Ohl et al (2001) 1). Die mHB (with verschiedenen Messungen) für kognitive Tests verwendet wird in Abschnitt 5 des Protokolls beschrieben. <ol><li> Legen Sie die Platine (60 x 20 x 0,5 cm, grauer PVC) in der Mitte der Box. HINWEIS: Die Karte kann 20 Zylindern (ᴓ 1,5 cm) enthalten 14 gestaffelt in zwei Zeilen oder 23 Zylindern (ᴓ 3 cm) 8 gestaffelt in drei Zeilen. </li><li> Teilen Sie den Bereich um das Brett durch schwarze Linien in 10 Rechtecke (20 x 15 cm) und 2 Plätzen (20 x 20 cm). </li><li> Positionieren Sie eine Bühnenlicht über der Platine, um eine größere Kontrast in der Lichtintensität zwischen dem Bord (was einem ungeschützten Bereich vergleichbar mit der Mitte ein offenes Feld oder die Lichtraum eines Hell-Dunkel-Übergangstest) und die Box (Naturschutzgebiet) zu erstellen um die aversiven Charakter des Vorstands 4,8 zu erhöhen. </li><li> Haus die Tiere unter einem 12 Stunden rückgängig Tag-Nacht-Zyklus (zB Licht aus um 7:00 Uhr und Licht an um 7.00 Uhr). HINWEIS: Es können auch die mHBunter der herkömmlichen Lichtplan eingesetzt werden (siehe Diskussion über potenzielle Mängel) 1,6. </li><li> Führen Sie die Verhaltenstests in der aktivsten Phase der Tiere (zB von 10.00 bis 02.00 Uhr) 4,15. </li><li> Achten Sie auf eine Gewöhnung Frist von 2 Wochen nach der Ankunft der Tiere in den Einrichtungen. Während dieser Zeit haben die gleiche Person, die das Verhandlungsexperiment zu behandeln die Tiere vier Mal pro Woche und beinhalten alle Handhabungsvorgänge, die während der eigentlichen Prüfung durchgeführt werden. Gehen Sie mit den Tieren ausschließlich während der Zeit des Tages, wenn die Tiere dem Test später ausgesetzt werden. </li><li> Notieren Sie die Experimente für die Datenspeicherung auf Video und, um die Ergebnisse zu optimieren und die inter Beobachtervariabilität zu reduzieren, die Praxis der Verhaltensanalyse mit einer Videoaufzeichnung von früheren Experimenten 2. Achten Sie darauf, alle Maßnahmen und Verfahren von dem Beobachter ausgeführt standardisieren. </li></ol> 2. Behavioral Testing - ohne die Anwesenheit von Gruppen Mates <ol><li> Führen Verhaltenstests im Raum werden die Tiere regelmäßig untergebracht (um mögliche Auswirkungen der Transport zu einer Prüfstelle zu vermeiden) und alle Testgeräte zu installieren, bevor der Ankunft der Tiere in den Einrichtungen (die Tiere auf das Vorhandensein der Geräte zu gewöhnen). </li><li> Nehmen Sie das Tier von der Basis des Schwanzes aus seinem Käfig und setzen Sie ihn direkt in der mHB. </li><li> Platzieren jedes Tier in der Vorrichtung im gleichen Winkel gegenüber der Wand (wie in Figur 1 angedeutet). </li><li> Lassen Sie das Tier frei erkunden die mHB für einen bestimmten Zeitraum (meist 5 min 1,6,16-18). </li><li> Haben ein erfahrener Beobachter Live Score die Verhaltensparameter mittels Verhaltensanalyse-Software. Verwenden Sie die in Tabelle 1 aufgeführten Parameter. HINWEIS: Einige Verhaltensparameter (zB Motor- und Erkundungsverhalten) kann automatisch, beispielsweise erzielt werden, </em&gt; Nach der notwendigen Anpassung der mHB von Henry et al (2010) 19.. </li><li> Reinigen Sie das Gerät mit Leitungswasser und einem Papiertuch nach jedem Versuch, um eine Vorspannung auf Basis von olfaktorischen Signale zu vermeiden. HINWEIS: Mögliche Test Ordnung Effekte bei der Prüfung in Gruppen gehalten Tiere sollten im Hinterkopf 17,20 gehalten werden. </li></ol> 3. Behavioral Testing - in Anwesenheit von Gruppe Mates <ol><li> Im Fall der Gruppenhaltung, messen Sie die Interaktion mit dem Versuchstier und ihre Käfiggenossen während der Prüfung. <ol><li> Legen Sie die Gruppenmitglieder in der Gruppe Raum vor der Prüfung des Versuchstieres, um Gewöhnung (vor allem 10 bis 30 min 1,12) ermöglichen. HINWEIS: Die Prüfung unter sozial-Stress-Bedingungen ist, indem Sie einen dominanten Käfig Kollegen in der Gruppe Fach beim Testen einer sozial besiegt Einzel 13 möglich. </li><li> Stellen Sie das Versuchstier in der Testkammer und lassen Sie ihn freily erkunden Sie die mHB wie in Kapitel 2 beschrieben. HINWEIS: Mögliche Test Ordnung Effekte bei der Prüfung in Gruppen gehalten Tiere sollten im Hinterkopf 17,20 gehalten werden. </li><li> Haben ein erfahrener Beobachter Live Score die Verhaltensparameter mittels Verhaltensanalyse-Software. Verwenden Sie die in Tabelle 1 aufgeführten Parameter. </li><li> Reinigen Sie das Gerät mit Leitungswasser und einem Papiertuch nach jedem Versuch, um eine Vorspannung auf Basis von olfaktorischen Signale zu vermeiden. </li></ol></li></ol> 4. Neue Objekterkennung und Nahrungsaufnahme Inhibition <ol><li> Machen die Tiere mit einem Objekt (zB einem Würfel oder einem Futterpellet) in ihren Heimatkäfig 2 Tage vor dem Experiment. </li><li> Legen Sie das Objekt vertraut in der Vorrichtung 2 cm von einem Roman Objekt (zum Beispiel ein Bolzen oder ungewohnte Lebensmittel) in der Ecke gegenüber der Ausgangspunkt. </li><li> Messen Sie die Zeit das Tier braucht, um die neuen und vertrauten Gegenstand / Essen nähern. Mit den Parametern in &lt;strong&gt; Tabelle 1. </li><li> Reinigen Sie das Gerät mit Leitungswasser und einem Papiertuch nach jedem Versuch, um eine Vorspannung auf Basis von olfaktorischen Signale zu vermeiden. </li></ol> 5. Kognitive Tests <ol><li> Legen Sie eine kleine Platine (35 x 22 x 1 cm) mit 10 Zylindern in der Mitte des Kastens (Abbildung 1) zum Testen von Ratten 3,22. Reduzieren Sie die Box in der Größe 50 x 50 cm für den Test-Mäuse 21 durch Einfügen einer Trennwand aus grauem PVC. </li><li> Duft alle Zylinder mit einem Geschmack Tiere werden (zB Vanille) angezogen und alle Köder mit einer Belohnung (zB ein Stück Mandel, einer sehr schmackhaften Belohnung für Mäuse und Ratten) unter einem Raster so können die Tiere nicht entfernen. </li><li> Cue Zylinder (häufig drei) mit einem farbigen Ring (im Gegensatz zu den grauen PVC) und Köder sie mit einem abnehmbaren Belohnung (zB 0,05 g Stück Mandel). </li><li> Machen die Tiere mit der Belohnung täglich in den 2 Tage vor dem Experiment inihren eigenen Käfig, indem sie es mit einer Pinzette und dafür sorgen, dass die Tiere essen. </li><li> Haben ein erfahrener Beobachter Live Score die Verhaltensparameter mittels Verhaltensanalyse-Software. Messen Sie die in der Tabelle 2 zusätzlich zu den in Abschnitt 2 (Tabelle 1) genannten Verhaltensparameter aufgeführten Parameter mit Ausnahme der Parameter im Zusammenhang mit der Anerkennung oder der Nahrungsaufnahme-Hemmung widersprechen. </li><li> Schritt 1: Mit jedem Tier, führen vier Studien täglich mit einer konstanten Zwischenprobeintervall (zB 30 bis 60 min), bis eine konstante Zeit, einen Versuch zu beenden erreicht ist (dh, wenn alle drei Mandelstücke gesammelt wurden). </li><li> Stufe 2: Cue und Köder drei Zylindern und legen Sie die Tiere in der Einrichtung für vier Studien, um die Umkehrung Lernfähigkeit zu testen. </li><li> Reinigen Sie das Gerät mit Leitungswasser und einem Papiertuch nach jedem Versuch, um eine Vorspannung auf Basis von olfaktorischen Signale zu vermeiden. </li></ol>

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</ol>

Die Autoren haben nichts offenzulegen.

Die mHB Paradigma können mehrere Dimensionen der unbedingten Verhalten zu messen. Das Protokoll kann in Abhängigkeit vom Zweck des Experiments leicht verändert werden. In diesem Protokoll diskutiert, die Einstellungen, Zeiten und Messungen in der Regel in unserem Labor verwendet. Jedoch sind geringe Abweichungen für die Messungen der Vorrichtung in der Vergangenheit verwendet wurden, und auch die Menge der Zylinder auf der Platte können 3 variieren. Oft Studien beschäftigen eine Testzeit von 5 min pro Versuch, aber auch andere Testzeiten kann auch sinnvoll sein, das heißt, die Beendigung der Prüfung, sobald eine kognitive Studie wurde erfolgreich oder bei der Verlängerung Testzeit abgeschlossen, wenn die Tiere sind extrem ängstlich oder körperlich beeinträchtigten. Die Zeit der Testtag wurde ausgewählt, um unter Rotlicht Zustand sein, da Nager sind nachtaktive Tiere und sind am aktivsten in der frühen Dunkelphase. Roedel et al. (2006) zeigt die Wirkung von Licht oder Dunkelphase Tests auf Verhaltens- und kognitive Leistungin DBA-Mäusen im mHB 16. Andere Studien haben mHB Versuche unter Weißlichtbedingungen 1,6 durchgeführt, jedoch ist zu beachten, dass die Prüfung unter Weißlichtbedingungen Verhaltenshemmung und kognitive Störungen (wie im DBA-Mäusen gezeigt) 16 zu induzieren. Tabellen 1 und 2 enthalten eine große Menge von Verhaltensparametern zu messen. Bei der Datenanalyse kann auf einige Parameter, die einen deutlichen Anstieg von beispielsweise &quot;Latenz erste Eintrag Bord&quot; führen, aber nicht in anderen Parametern desselben Motivationssystem (in diesem Fall &#39;Vermeidung&#39;). In einigen Fällen kann dies zu einer ergebnislosen Ergebnissen. Guilloux et al. (2011) eingeführten integrierten Verhaltens Z-Scores mit dem Verhaltens Phänotypisierung von Mäusen 24. Mit der Verwendung von integrierten Verhaltens Zkerben die mehreren Parameter auf eine einzige Z-Score Beschreibung einer besonderen motivatio kombinierbarnal-System. Die nachfolgenden Z-Scores können ihrerseits leichter im Vergleich über Verhaltenstests und Experimente. Neben den beschriebenen Eigenschaften dieses Paradigma zu einem tieferen Verwendung offensichtlich bei der Untersuchung der Salomons et al. (2012). Die Gewöhnung an Neuheit der beiden Mausstämmen (BALC / cJ und 129P3 / J) im mHB verglichen wurde, zeigen einen Unterschied in der Verhaltensflexibilität, die eine nicht-adaptive Verhaltensprofil des 129P3 / J-Mäusen 4 Mirroring beeinträchtigt Anpassungsfähigkeit und wahrscheinlich sogar pathologische Angst. Abschließend kann das mHB Messung mehrerer Verhaltensmaße in einem einzigen Experiment. Durch die Kombination von Merkmalen von einem traditionellen Lochbrett und offenen Feldtest, unbedingte Verhalten, soziale Interaktion, Kognition und Anpassungskapazitäten, also kann das Wohlergehen untersucht werden. Dieser Test kann beispielsweise verwendet werden, um Verhaltensänderungen aufgrund bewertet werden kann, pharmacological- und / odergenetische Manipulationen, selektive Zucht und Anpassungsfähigkeit. Im Vergleich zu klassischen Testbatterien wird die Anzahl der Tiere benötigt deutlich reduziert und Stresses der Tiere während der Prüfung ist extrem niedrig.

Die modifizierte Lochplatte (MHB) wird verwendet, um mehrere Dimensionen der unbedingten Verhalten zu bewerten, vor allem bei Mäusen und Ratten ein. Eine Reihe von weit verbreiteten Tests messen eine einzelne Verhaltensparameter, der die gesamte Phänotyp einer Verhaltensdimension nicht vollständig umfasst. Die mHB wurde basierend auf dem Konzept, dass Nagetiere können ihre reiche Verhaltensrepertoire nur in einem reichen Testumgebung 2 zeigen auf und ermöglicht einen komplexen ethologische Beobachtungen entwickelt. Die Einrichtung umfasst die Merkmale des traditionellen Lochplatte und der offenen Feldtest, was in einem einzigen Komplex Paradigma, das die Nachteile einer Testbatterie überwindet (dh bei der Verringerung der Zahl der verwendeten Tiere 1,3,4, unter Umgehung der mögliche Auswirkungen der Test um 5, und die Verringerung der Zeit-Effekt und Kosten 6). Anders als die meisten Verhaltenstests (zB Hanell &amp; Marklund, 2014) 7 &lt;/ Sup&gt;, ist ein Vorteil der mHB, dass Tiere nicht brauchen, um Nahrung, um die Motivation, um die Aufgabe zu lösen, erhöhen beraubt werden. Darüber hinaus können soziale Isolation während des Tests, indem Gruppenmitglieder des Versuchstieres in einem (Gruppen-) Fach aus dem Testraum durch eine transparente Lochwand getrennt, so dass für visuelle, Hör- und Riechkontakt 8,9 umgangen werden. Die mHB wurde (pharmakologisch) validiert für beide Mäuse und Ratten 1,6. Eine breite Palette von Verhaltensweisen gemessen werden kann, wie zum Beispiel Vermeidungsverhalten, Risikobewertung, Erregung, Exploration, Bewegungsaktivität, Gewöhnung, soziale Affinität und Kognition 2,8-10. Zusätzlich kann das mHB mit Nahrungsaufnahme-Hemmtest, sowie neue Objekt-Wiedererkennungstest 10,11 kombiniert werden. Schließlich kann die mHB auch zur sozialen Stress Experimente durch Testen sozial besiegt Tieren beim Platzieren eine dominante Person in zuführendie Gruppe Fach 12,13. Dieses Protokoll für Mäuse und Ratten wird ein Überblick über die vielfältigen Anwendungen des mHB.

<table><tbody><tr><td>Kognitives mHB-Gerät</td><td></td><td></td><td>Die Box für kognitive Tests ist 50x50 cm groß, indem eine Trennwand aus grauem PVC in das Standard-mHB eingesetzt wird. Ein kleineres Brett (35x22x1 cm) mit 10 Zylindern wird in die Mitte der Box gelegt. Alle Zylinder sind mit einem Geschmack parfümiert, von dem die Tiere angezogen werden (z. B. Vanille), und alle werden mit einer Belohnung (z. B. einem Stück Mandel) unter einem Gitter geködert, damit die Tiere es nicht entfernen können. Die Zylinder (oft drei) sind mit einem farbigen Ring (im Kontrast zum grauen PVC) versehen und mit einer abnehmbaren Belohnung (z.B. 0,05 g Mandelstück) beködert.</td></tr><tr><td>Vanillegeschmack</td><td></td><td></td><td>In Wasser aufgelöster Vanillegeschmack (0,02 %)</td></tr><tr><td>Kamera</td><td></td><td></td><td>Kamera, die eine ausreichende Ausgabequalität erzeugt, um das Verhalten von Videos zu untermalen.&nbsp;</td></tr><tr><td>Bühnenlicht</td><td></td><td></td><td>Eine Theaterleuchte, mit der die Lichtintensität und die Abmessungen der beleuchteten Fläche eingestellt werden können.</td></tr><tr><td>Verhaltensbewertungssoftware</td><td></td><td></td><td>Verhaltensbewertungssoftware.</td></tr></tbody></table>

der modifizierte loch board - mess verhalten, kognition und sozialinteraktion an mäusen und ratten

The Modified Hole Board - Measuring Behavior, Cognition and Social Interaction in Mice and Rats

Dieses Protokoll beschreibt die modifizierte Lochplatte (MHB), die Funktionen von einem traditionellen Lochbrett und Freiland verbindet und ist so konzipiert, um mehrere Dimensionen der unbedingten Verhalten in kleinen Laborsäuger (zB Mäuse, Ratten, Spitzhörnchen und kleine Primaten) zu messen. Dieses Paradigma ist eine wertvolle Alternative für die Verwendung eines Verhaltenstestbatterie, da ein weites Spektrum von Verhaltensverhaltensprofil des Tieres kann in einem einzigen Test untersucht werden. Die Vorrichtung besteht aus einer Box, die &quot;geschützten&quot; Bereich, die aus einer Gruppe Raum getrennt darstellt. Ein Brett, auf dem kleinen Zylinder in drei Zeilen versetzt, befindet sich im Zentrum der Schachtel, die &quot;ungeschützten&quot; Bereich der Set-up vertreten. Die kognitiven Fähigkeiten der Tiere können durch Hetze einige Zylinder auf dem Brett und Messung der Arbeits- und Referenzspeicher gemessen werden. Andere unbedingte Verhalten, wie activity-Bezogen, Angst-Bezogen und Sozialverhalten, können mit diesem Paradigma zu beachten. Verhaltensflexibilität und die Fähigkeit, sich auf eine neue Umgebung gewöhnen kann zusätzlich, indem die Tiere auf mehrere Studien in den mHB, aufschlussreichen Einblick in die Anpassungsfähigkeit der Tiere beobachtet werden. Durch die Prüfung, um Effekte in einem Verhaltenstest Batterie, sollte naiven Tieren für jedes einzelne Experiment verwendet werden. Durch Testen mehrerer Verhaltensmaße in einem Paradigma und dadurch Umgehung dieses Problems wird die Anzahl der Versuchstiere verwendet wird, reduziert. Darüber hinaus kann durch die Vermeidung sozialer Isolation während der Tests und ohne die Notwendigkeit, Lebensmittel, die Tiere zu nehmen, die mHB eine Verhaltenstestsystem, zu induzieren, wenn überhaupt, sehr geringe Menge an Stress.

Die große Menge von Parametern, die in der mHB gemessen werden kann machen diese Einrichtung besonders geeignet für zahlreiche Verhaltensdimensionen messen. Ein Beispiel ist die Identifizierung von Verhaltens Anpassung an eine neue Umgebung durch wiederholte Einwirkung der Test. . Salomons et al (2010) untersuchten die Gewöhnung von zwei Inzuchtstämme von Mäusen (BALB / cJ und 129P3 / J) auf die mHB unter zwei verschiedenen Lichtverhältnissen (rotes Licht: Kontrast zwischen Box und Pension: 45 lux gegen weißes Licht: Kontrast zwischen Box und Verpflegung: 115 lux (siehe auch Protokoll Abschnitt 1.3)) 4. BALC / cJ Mäuse zeigen eine abnehmende (Gewöhnung) Latenzzeit bis zum ersten Bord-Eintrag (siehe Tabelle 1) unter Rotlicht Bedingungen wie in 2A gezeigt. Im Gegensatz dazu 129P3 / J-Mäuse zeigen keine Anzeichen einer Gewöhnung über Studien. 2B zeigt das Experiment unter Weißlichtbedingungen. BALB / cJ Mäusen zeigen wiederum eine abnehmende Latenz auf der ersten Platte Eintrag über Versuche allerdings, dass der einenimals zeigen im Vergleich zu den roten Lichtverhältnissen eine langsamere Gewöhnung Muster. 129P3 / J-Mäuse nicht nur zeigen wieder beeinträchtigt Gewöhnung, aber auch ein Trend zur Sensibilisierung unter dem weißen Lichtverhältnissen. Ähnlich wird in einer Studie von Salomons (2012) 129P2 / OlaHsd Mäuse zeigten eine beeinträchtigte Verhaltens Flexibilität in Reaktion auf die Neuheit gegenüber BALB / cOlaHsd Mäusen 23. Der Unterschied in der Fähigkeit Gewöhnung so zeigt sich, zwischen zwei Inzuchtstämme von Mäusen, wenn in der mHB 4 getestet. Die kognitive Version der mHB kann beispielsweise verwendet werden, um kognitive Beeinträchtigungen bei Mäusen zu messen. Van der Kooij et al. (2010) verwendet, diese Einrichtung, um die kognitiven Funktionen von C57BL / 6J Mäusen mit milden zerebrale Hypoxie-Ischämie zu messen (45 min Hypoxie; HALLO-45), schwere HALLO (75 min Hypoxie; HALLO-75) und schein Kontrollmäuse 9. Die Fähigkeit, die Studien zu vervollständigen (dh finden Sie die beköderten Löcher innerhalb von 5 Minuten) ist in 3A gezeigt. </strong&gt; Die Zahl der Kurzzeitgedächtnis Fehler (erneut besucht, um einen Köder Loch), das Langzeitgedächtnis Fehler (Besuche in einem nicht-beköderten Loch) und Auslassungsfehler (kein Besuch in einen Köder Loch) in 3B-D gezeigt, jeweils. Um zu bestätigen, dass die HALLO-45-Gruppe hatte keine kognitive Beeinträchtigung, wurde diese Gruppe gegen die Sham-Kontrollen in einer Umkehrung Aufgabe getestet. Die drei beköderten Löcher wurden zu drei verschiedenen Zylindern ausgestattet und die Tiere wurden 4 Studien getestet. Der Umkehreffekt wird deutlich, wenn man die letzte Prüfung der ersten Stufe mit dem ersten Versuch der Umkehrung der Bühne. Die Dauer, die vier Studien Umkehr zu vervollständigen gibt einen Hinweis auf die Gesamtleistung. Abbildung 4 zeigt die Latenzzeit, das Verfahren für beide Gruppen und eine klare Gesamtbehandlungseffekt ist offensichtlich abzuschließen. Das bedeutet, dass in der Auflösung Aufgabe es ist in der Tat eine Wertminderung in der kognitiven Flexibilität (Re-Learning) in der HALLO-45-Gruppe, die sein<html> kam nachweisbar mit dem mHB 9. <img alt="Abbildung 1" src="/files/ftp_upload/52529/52529fig1.jpg" /> Abbildung 1. Schematische Darstellung des modifizierten Lochbrett. (A) Der Aufbau besteht aus einem Testraum (box) mit in der Mitte der (ungeschützten) Board mit Zick-Zack-Linien und der Gruppe Fach ein. <img alt="Abbildung 5" src="/files/ftp_upload/52529/52529fig5.jpg" /> = Neue Objekt, <img alt="Figur 6" src="/files/ftp_upload/52529/52529fig6.jpg" /> = Vertrauten Gegenstand, <img alt="7" src="/files/ftp_upload/52529/52529fig7.jpg" /> = Ausgangspunkt. (B) Schematische Darstellung des kognitiven Version des modifizierten Lochbrett für Mäuse. (C) Seitenansicht eines Zylinders, wie in der kognitiven Version des modifizierten Lochplatte verwendet. Ein Stück Mandel ist unter dem Gitter aus allen Zylindern platziert.target = &quot;_ blank&quot;&gt; Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieses Bild anzuzeigen. <img alt="Abbildung 2" src="/files/ftp_upload/52529/52529fig2.jpg" /> Abbildung 2. Rotlicht oder Weißlichtbedingungen. (A) Latenz bis zum ersten Brett Eintrag (Mittelwert ± SEM) von BALB / cJ und 123P3 / J-Mäuse unter Rotlicht Bedingungen (Box 0-5 Lux und Platte 45 lux) gemessen. Eine ANOVA mit wiederholten Messungen mit Huyn-Feldt Anpassung ergab eine Belastung (p = 0,025), Studie (p &lt;0,001) und Probe x Dehnungs Interaktion (P &lt;0.001) Effekt Post-Hoc-Analysen:. Zwischen den Stämmen: * = p &lt;0,0026, zwischen zwei aufeinander folgenden Studien: $ = P &lt;0,0026 (BALB / cJ) (B) Die Latenz der ersten Platte Eintrag (Mittelwert ± SEM) unter Weißlichtbedingungen (Box 0-5 Lux und Platte 120 Lux).. Eine ANOVA mit wiederholten Messungen mit Huyn-Feldt Anpassung ergab eine Belastung (p = 0,031), Studie (p &lt;0,001) und Probe x Dehnungs Interaktion (P &lt;0,001) effe. ct Post-Hoc-Analysen: zwischen den Stämmen: * = p &lt;0,0026, zwischen zwei aufeinanderfolgenden Studien: $ = P &lt;0,0026 (BALB / cJ) und T = P &lt;0,0026 (123P3 / J). Diese Zahl hat sich von Salomons et al. 2010 4 geändert. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52529/52529fig2highres.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieses Bild anzuzeigen.</a> <img alt="Figur 3" src="/files/ftp_upload/52529/52529fig3.jpg" /> Abbildung 3. Kognitive Tests im mHB (Stufe 1). Alle Abbildungen zeigen Mittelwert ± SEM. (A) Die Latenzzeit, um die Testversion (sec) der Sham-Kontrollmäusen zu vervollständigen, HALLO-45 und HALLO-75. (B) Anzahl der Auslassungsfehler, (C) Nicht beköderten Loch Besuche und (D) greift für Köder Löcher. * = P &lt;0,05, ** = p &lt;0,01, *** = p &lt;0,001 vs. Sham HALLO-75, # = p &lt;0,05, ## = P &lt;0,01, ### = p &lt;0,001HALLO-45 vs. HALLO-75. Diese Zahl wurde von Van der Kooij et al modifiziert. 2010 9. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52529/52529fig3highres.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieses Bild anzuzeigen.</a> <img alt="4" src="/files/ftp_upload/52529/52529fig4.jpg" /> Abbildung 4. Reversal Lernaufgabe (Stufe 2). Latenz, einen Versuch (s) in der Auflösung Lernaufgabe (Mittelwert ± SEM) zu vervollständigen. Test Wirkungen: # = p &lt;0,05, ## = P &lt;0,01 (erste Studie Umkehr Aufgabe gegen vorherige Testversion). Behandlungseffekt: * = p &lt;0,05, ** = p &lt;0,01 (HALLO-45 vs. Sham). Diese Zahl wurde von Van der Kooij et al. 2010 9 modifiziert. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td> System </td><td> Aktivität </td><td> Messgröße </td></tr><tr><td> Avoich tanze </td><td> Foren-Eintrag </td><td> Frequency, Latenz (n), Dauer (%) und die durchschnittliche Laufzeit (en) auf dem Brett </td></tr><tr><td> Risikoabschätzung </td><td> Stretched Attends </td><td> Frequenz und Latenz (n) des gestreckten Körperhaltung (einschließlich Hinterbeine) </td></tr><tr><td> Erregung </td><td> Grooming </td><td> Frequency, Latenz (n), Dauer (%) und die durchschnittliche Dauer (n) Selbstpflege </td></tr><tr><td></td><td> Defäkation </td><td> Frequenz und Latenz (en) der Boli erzeugten </td></tr><tr><td></td><td> Urinieren </td><td> Frequenz und Latenz (en) der urinations </td></tr><tr><td> Regie Exploration </td><td> Loch Besuche </td><td> Frequenz und Latenz (en) des Zylinders Abfragen </td></tr><tr><td></td><td> Novel Objekt Exploration </td><td> Frequency, Latenz (n), Dauer (%) und die durchschnittliche Laufzeit (en) die Erkundung der neuartigen Objekt </td></tr><tr><td> Ungerichteten Exploration </td><td> Aufzucht Feld &lt;/ Td&gt; <td> Frequenz und Latenz (n) des rearings in das Feld (Vorderpfoten die Wand nicht berühren) </td></tr><tr><td></td><td> Aufzucht Bord </td><td> Frequenz und Latenz (n) des rearings auf dem Brett </td></tr><tr><td></td><td> Loch Exploration </td><td> Frequenz und Latenz (en) des Zylinders Erkundungen </td></tr><tr><td> Speicher </td><td> Vertrauten Gegenstand Exploration </td><td> Frequency, Latenz (n), Dauer (%) und die durchschnittliche Laufzeit (en) die Erkundung der vertrauten Gegenstand </td></tr><tr><td> Soziale Affinität </td><td> Interaktion in der Gruppe </td><td> Frequency, Latenz (n), Dauer (%) und die durchschnittliche Laufzeit (en) die Interaktion mit der Gruppe Fach </td></tr><tr><td> Bewegungsaktivität </td><td> Linienfahrt </td><td> Frequenz und Latenz (n) des Leitungskreuzungen </td></tr></tbody></table> Tabelle 1: Liste der Verhaltensparameter <table border="0" cellpadding="0" cellspacing = &quot;0&quot;&gt; <tbody><tr><td> Speichersystem </td><td> Parameter </td><td> Beschreibung </td></tr><tr><td> Langzeitgedächtnis </td><td> Falsche Auswahl </td><td> Besuchen Sie den nicht-beköderten Zylinder; Nase unter dem Rand </td></tr><tr><td> Auslassen Fehler </td><td> Das Auslassen einer geködert Zylinder </td><td> Kein Besuch in einem Köder Zylinder </td></tr><tr><td> Das Kurzzeitgedächtnis </td><td> Mehrfachauswahl </td><td> Erneut, um Köder Zylinder; Nase unter dem Rand </td></tr><tr><td> Gesamtleistung </td><td> Gesamttestzeit </td><td> Zeit, bis alle Köder Zylinder besucht wurden </td></tr></tbody></table> Tabelle 2: Liste der kognitiven Parameter

Dieses Protokoll beschreibt das modifizierte Lochbrett, bei dem es sich um einen Verhaltenstestaufbau handelt, der die Eigenschaften eines offenen Feldes und eines traditionellen Lochbretts umfasst. Dieser Aufbau ermöglicht die differentielle Analyse des unkonditionierten Verhaltens kleiner Laborsäuger sowie die Analyse kognitiver Fähigkeiten.

Der modifizierte Loch Board - Mess Verhalten, Kognition und Sozialinteraktion an Mäusen und Ratten

This protocol describes the modified hole board (mHB), which combines features from a traditional hole board and open field and is designed to measure ...

Das übergeordnete Ziel der folgenden Experimente besteht darin, das unkonditionierte Verhalten kleiner Laborsäuger zu messen und ihre kognitiven Fähigkeiten zu analysieren. Dies wird erreicht, indem die Tiere in das modifizierte Lochbrett gebracht werden, um ihr unkonditioniertes Verhalten mit oder ohne Anwesenheit ihrer Käfiggenossen zu beobachten und zu bewerten. Zusätzlich kann ein neues oder vertrautes Objekt oder ein Futterpellet vor der Testung in die Versuchsanordnung platziert werden, um die Objekterkennung oder die Hemmung der Nahrungsaufnahme zu messen.Eine dritte Anwendung dieser Methode besteht darin, das Tier in die kognitive Version des modifizierten Gesamtbretts zu setzen, bei der die Belohnung mit einem kontrastierend gefärbten Kennzeichner versehen ist, um die kognitiven Fähigkeiten des Versuchstiers zu messen. Die Ergebnisse zeigen ein Spektrum unbedingten Verhaltens. Da die Methode mehrere Verhaltensdimensionen in einem einzigen Paradigma kombiniert, das Merkmale aus einem traditionellen Lochbrett- und Freifeldtest enthält, liegt der Hauptvorteil dieser Technik darin, dass sie die Nachteile einer Testbatterie überwindet, indem die Anzahl verwendeter Tiere reduziert, mögliche Reihenfolgeeffekte bei Tests umgangen sowie Zeit und Kosten gesenkt werden. Die Tests sollten im regulären Aufzuchtraum während der Dunkelphase durchgeführt werden, also in der aktivsten Phase des Tieres; für die Zwecke dieses Videos erfolgt die Durchführung jedoch unter hellen Lichtbedingungen.Die Verhaltensuntersuchung sollte an Tieren durchgeführt werden, die an ihre Umgebung und an die Handhabung durch den Versuchsleiter gewöhnt sind. Stellen Sie die Platte mit den Zylindern in die Mitte der Versuchsbox. Positionieren Sie dann eine Scheinwerferleuchte über der Platte, um einen Kontrast in der Lichtintensität zwischen Platte und Box zu erzeugen und den abschreckenden Charakter der Platte zu verstärken.Platzieren Sie zunächst das bekannte Objekt im Versuchsaufbau zwei Zentimeter vom neuen Objekt entfernt in der Ecke gegenüber dem Ausgangspunkt. Danach entfernen Sie das zu testende Tier aus dem Heimkäfig und setzen es in einer bestimmten Ecke des Apparats mit dem Gesicht zur Wand. Lassen Sie das Tier anschließend etwa fünf Minuten lang frei erkunden.Lassen Sie einen erfahrenen Beobachter die Verhaltensparameter mithilfe einer Verhaltensauswertungssoftware bewerten. Verwenden Sie die in dieser Tabelle aufgeführten Parameter und messen Sie zusätzlich die Zeit, die das Tier benötigt, um dem neuen und vertrauten Objekt beziehungsweise der neuen und vertrauten Nahrung zu nähern. Reinigen Sie die Versuchsanordnung nach jedem Durchlauf mit Leitungswasser und einem Papiertuch.Um eine Verzerrung aufgrund olfaktorischer Reize zu vermeiden, platzieren Sie die Gruppenmitglieder 10 bis 30 Minuten vor dem Testen des Versuchstieres im Gruppenfach, um eine Gewöhnung zu ermöglichen. Danach platzieren Sie das Versuchstier in das Testfach und lassen es die modifizierte Gesamtanlage fünf Minuten lang oder entsprechend der Dauer Ihres eigenen Protokolls frei erkunden. Lassen Sie erneut einen erfahrenen Beobachter die Verhaltensparameter mithilfe einer Verhaltensauswertungssoftware live bewerten, wobei die in Tabelle eins aufgeführten Parameter wie zuvor verwendet werden.Bevor Sie dieses Experiment beginnen, gewöhnen Sie die Tiere an eine besonders schmackhafte Belohnung. Hier wird ein Stück Mandel verwendet. Bieten Sie die Belohnung mithilfe einer Pinzette im Heimkäfig einmal täglich an zwei aufeinanderfolgenden Tagen vor dem Experiment an und setzen Sie eine Trennwand ein, um die Größe des Kastens auf 50 mal 50 Zentimeter zu verkleinern.Platzieren Sie für den Test bei Mäusen ein kleineres Brett in der Mitte der Box. Dieses Diagramm zeigt den Aufbau des modifizierten Lochbretts. Duften Sie anschließend alle 10 Zylinder mit einem für die Tiere attraktiven Aroma, wie Vanille, und ködern Sie alle Zylinder mit der Belohnung, die unter einem Gitter platziert wird, sodass sie nicht entfernt werden kann.Q3-Zylinder mit einem farbigen Ring, der sich vom PVC-Kunststoff abhebt, und locken Sie diese Zylinder mit einem entfernbar belohnten Köder. Stellen Sie das Tier erneut in dieselbe Ecke der Vorrichtung und lassen Sie von einem erfahrenen Beobachter die Verhaltensparameter live bewerten. Die Verhaltensparameter werden mithilfe einer Software zur Verhaltensauswertung erfasst.Messen Sie die in Tabelle zwei aufgeführten Parameter zusätzlich zu den zuvor in Tabelle eins gezeigten, mit Ausnahme der Parameter, die mit der Objekterkennung oder der Hemmung der Nahrungsaufnahme zusammenhängen. Führen Sie täglich vier Trainingsdurchgänge mit einem konstanten Intervall zwischen den Durchgängen durch, bis eine konstante Zeit für das Einsammeln aller drei Mandelstücke erreicht ist. Reinigen Sie die Versuchsanordnung nach jedem Durchgang mit Leitungswasser und einem Papiertuch, um eine Verzerrung durch olfaktorische Hinweise bei der Prüfung des umgekehrten Lernverhaltens zu vermeiden.Nachdem das Tier vollständig trainiert ist, geben Sie drei unterschiedliche Zylinder vor oder so viele verschiedene Zylinder, wie es Ihr eigenes Protokoll vorschreibt, platzieren Sie den Köder und testen Sie das Tier in der erforderlichen Anzahl von Versuchen. Die ersten vier Bilder zeigen Ergebnisse aus dem kognitiven Testparadigma, das die kognitive Funktion von C57BL/6J-Mäusen mit leichter zerebraler Hypoxie-Ischämie, gekennzeichnet als HI 45, schwerer Hypoxie-Ischämie, gekennzeichnet als HI 75, und Schein-behandelten Kontrollmäusen misst. Dieses Diagramm zeigt die mittlere Latenzzeit, um die vier Versuche eines Testtages abzuschließen.Dieses Diagramm zeigt die Anzahl der Wiederbesuche eines präparierten Lochs an jedem Testtag. Eine Messgröße für Fehler im Kurzzeitgedächtnis. Hier sind die Besuche an nicht präparierten Löchern dargestellt.Dies ist ein Maß für Fehler im Langzeitgedächtnis. Hier werden die Daten zur Anzahl der Auslassungsfehler gezeigt. Ein Auslassungsfehler ist definiert als die Anzahl der nicht aufgesuchten belockten Zylinder.Um zu bestätigen, dass die I 45-Gruppe keine kognitive Beeinträchtigung aufwies, wurde diese Gruppe mit den Sham-Kontrollen verglichen. In einer Umkehraufgabe wurden die drei bestückten Löcher drei verschiedenen Zylindern zugewiesen, und die Tiere wurden über vier Versuche hinweg geprüft. Der Umkehrungseffekt zeigt sich beim Vergleich des letzten Versuchs der ersten Phase mit dem ersten Versuch der Umkehrungsphase.Dieses Bild zeigt die Latenz, mit der beide Gruppen den Versuch abschlossen, und ein deutlicher Behandlungseffekt ist erkennbar. Dies bedeutet, dass die kognitive Flexibilität in der HI-45-Gruppe beeinträchtigt war, was mithilfe des modifizierten Whole-Board-Tests mit der Umkehraufgabe nachgewiesen werden konnte. Nach dem Anschauen dieses Videos sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie das modifizierte Whole-Board-Verfahren sowohl in der allgemeinen als auch in der kognitiven Version angewendet wird.

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Research

Forschung

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