Effiziente Erzeugung von hiPSC Neural Lineage Spezifische Knockin Reporter Mit den CRISPR / Cas9 und Cas9 Doppel Nickase-System

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14:46 Min.

28. Mai 2015

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Genom-Editing-Tools wie das CRISPR-System (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)/Cas (CRISPR-associated) haben die Effizienz des Gen-Targetings in humanen induzierten pluripotenten Stammzellen (hiPSCs) erheblich verbessert. Dieses Manuskript beschreibt ein Protokoll zur Generierung eines linienspezifischen hiPSC-Reporters unter Verwendung der CRISPR/Cas-System-unterstützten homologen Rekombination.

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Generierung von Knockin-Reportern

Chapters in this video

0:05

Titel

1:54

Design von Targeting-Vektoren

2:41

Design und Vektorkonstruktion von sgRNAs für das CRISPR/Cas9-System

5:20

Design und Konstruktion von Cas9n-Double-Nickase-sgRNA

8:06

Evaluierung von sgRNAs mittels T7-Endonuklease 1

11:03

In-silico-Vorhersage potenzieller Off-Target-Stellen

12:32

Ergebnisse: Der T7E1-Assay wird zur Evaluierung von sgRNAs vor der Transfektion von hiPSCs verwendet

13:56

Fazit

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