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DOI: 10.3791/52542-v
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This article describes a technique for dual channel optical mapping in cultured HL-1 atrial cell monolayers. The protocol enables simultaneous visualization of calcium and voltage activity, facilitating detailed analysis of electrophysiological properties.
Dieser Artikel beschreibt die Technik, die zur Durchführung von optischem Zweikanal-Mapping in kultivierten HL-1-Vorhofzell-Monoschichten verwendet wird. Dieses einzigartige Protokoll ermöglicht die gleichzeitige Visualisierung der Calcium- (Ca) und Spannungsaktivität (Vm) im selben Bereich für die detaillierte Detektion und Analyse der elektrophysiologischen Eigenschaften von Kulturmonoschichten.
Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, gleichzeitig Transmembranpotentiale und Kalziumtransienten in HL one atrialen Monoschichten zu kartieren, die sowohl mit Kalzium- als auch mit Spannungsfarbstoffen beladen sind. Dies wird erreicht, indem zunächst die HL 1-Zellen auf einem Deckglas auf eine geeignete konfluente Dichte kultiviert werden. Der zweite Schritt besteht darin, das Kalzium und die spannungsempfindlichen Farbstoffe in die Zellen zu laden.
Als nächstes wird die HL-Monoschicht mit einer bipolaren Elektrode stimuliert. Der letzte Schritt ist die Aufzeichnung des Aktionspotentials und der transienten Calciumsignale durch Fluoreszenzmikroskopie. Letztendlich können das Aktionspotential und die transienten Kalziumspuren zusammengestellt werden, um die Ausbreitung der Signale über die konfluente Monoschicht im Laufe der Zeit zu zeigen.
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