Name: Demonstration der Ratte ischämische Hautwunde Modell (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-04-01T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 35 s
Description: Erfahren Sie die Erstellung eines ischämischen Hautwundenmodells bei Ratten mit Biopsiestanze und Silikonplatte. Diese reproduzierbare Methode ermöglicht die Untersuchung der Pathophysiologie chronischer Wunden und unterstützt die Entwicklung neuer Therapiestrategien.

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Die Autoren möchten sich für die finanzielle Unterstützung durch die University of South Florida, Department of Surgery (Mack Wu, MD, PhD) bedanken.

HINWEIS: Zulassung für alle nachfolgend dargestellt Tierverfahren wurde von der University of Animal Care Committee Südfloridas (IACUC) erhalten und sich an den Anforderungen des Tierschutzgesetzes und des Leitfadens für Pflege und Verwendung von Labortieren. 1. Herstellung der Silikon Bettwäsche und chirurgische Instrumente <ol><li> Vorgeschnittene Streifen (10.5 cm x 3.0 cm) von unverstärkten 0,01 Dicke, medizinischem Silikon-Folien und sterilisieren Verwendung eines Autoklaven. </li><li> Reinigen und zu sterilisieren geeignete chirurgische Instrumente (Scheren, Pinzetten und Gardinen oder Handtücher, einen sterilen Bereich während der Operation zu erstellen). </li></ol> 2. Versuchstiere <ol><li> Verwenden Sie die männlichen oder weiblichen Ratten mit einem Gewicht im Bereich von 250 bis 350 g von einem kommerziellen Züchter erhalten. Bei alten Ratten eingesetzt werden, sollten sie ≥350 g, um bessere Überlebenschancen nach der Operation zu gewährleisten. Vor Beginn jeder Experimenten akklimatisieren alle Tiere für mindestens7 Tage unter Standardbedingungen von 12 Stunden Licht-Dunkel-Zyklus mit Futter und Wasser ad libitum. </li></ol> 3. Anästhesie, präoperative Analgesie und operative Vorbereitung <ol><li> Induzieren eine Vollnarkose mit Hilfe Isofluran bei 3% -4% über eine Induktionskammer und zu warten (über die Verwendung eines Nasenkegel) bei 1% bis 2% mit O 2 während der Vorbereitung der Haut und Chirurgie. Überwachung der Narkosetiefe durch Beobachtung der Frequenz und Tiefe der Atmung, Inter Prise oder Augenlidblinkreflex. HINWEIS: Zu diesem Zeitpunkt kann ein Tierarzt Salbe auf den Augen platziert werden, um Trockenheit zu verhindern, während das Tier unter Narkose ist. </li><li> In einem Ort entfernt von dem sterilen OP-Bereich, legen Sie die Ratte in der Bauchlage und rasieren der Rücken mit Schermaschinen von der Basis des Halses nach unten ca. 11 cm. Schablone mit Permanent-Marker, der Entwurf für die 3,0 cm x 10,5 cm Klappe (siehe Abbildung 1A). </li><li> Bewegen Sie die Ratte auf einem sauberen, bezeichnet surgical-Bereich mit einem zugelassenen Heizkissen und sterile OP-Abdeckungen und Handtüchern ausgestattet. Injizieren Sie 5 mg / kg subkutan Ketoprofen vor den ersten chirurgischen Einschnitten für die Schmerztherapie. Zusätzliche Flüssigkeiten (Kochsalzlösung) kann je nach Bedarf gegeben werden (bis zu 5 cc) subkutan. </li><li> Weitere Bereiten Sie die Haut durch Abtupfen zunächst mit 70% igem Isopropylalkohol und zweiten mit 0,2% Chlorhexidin, gelten sterilen Tüchern um ein steriles Feld zu erstellen. 10% Povidon-Iod (Betadine) können ebenfalls verwendet werden. HINWEIS: Ein Antibiotikum (Ampicillin, bei 15 mg / kg) subkutan verabreicht werden, aber wenn gute aseptische Techniken verwendet werden, dies nicht erforderlich ist. </li></ol> 4. Erstellen Exzisionswunden und Bipedicled Flap <ol><li> Mit einem sterilen Einweg 6 mm Biopsie Stanzwerkzeug, erstellen Sie zwei Kreis &quot;ischämische&quot; Wunden in der Mitte der bezeichneten Klappenbereich (1B). Die Tiefe der Wunde sollte auf (nicht über) die zugrunde liegende Faszie des Panniculus Carno seinsus Muskel (1B kleines Bild). </li><li> Mit einer Pinzette heben Sie die Haut in der Mitte der Wunde Umrisse, die durch die Stanzbiopsie und verwenden Sie dann Iris Schere (mit gebogenen Spitzen), um das kreisförmige Stück Gewebe (einschließlich der Panniculus carnosus Muskel) herauszuschneiden. Das Ergebnis ist eine volle Dicke der Fascia als Base der Wunde gewickelt werden. HINWEIS: Der herausgeschnittene Gewebe (Wund Stecker) können in flüssigem Stickstoff schockgefroren und in 10% gepuffertem Formalin-O / N für die spätere Verarbeitung als Kontrolle normaler Haut befestigt werden. </li><li> Erstellung einer bipedicled Klappe durch Einschnitte mit einem sterilen Skalpell auf jeder Seite der ischämischen Wunden entlang der vorgezeichneten Linien (1C), die 10,5 cm in der Länge und 3,0 cm auseinander liegen. Die Tiefe der Einschnitte vorzusehen, um den paraspinous Muskeln. Mit Iris Schere, trennen die Panniculus carnosus Faszie aus den paraspinous Muskeln, dabei darauf achten, die Faszie intakt wie der &quot;Basis&quot; der 6 mm Stempeln zu halten (Fild 1D). </li><li> Nehmen Sie 1 sterile vorgeschnittenen Silikonfolie und legen Sie es in zwischen der Panniculus carnosus Verkleidung und die paraspinous Muskeln (1E) zu gewährleisten, dass das Blatt nicht wellt oder aussteigen. Mit schwarzen, nicht-resorbierbares Nahtmaterial (Größe 4,0) schließen Sie beide Einschnitte durch die Verankerung der Silikonfolie auf der Haut mit mindestens 8 unterbrochen Maschen auf jeder Seite, die entlang der Länge der Klappe (1F und 1G). </li><li> Verwendung eines sterilen Einweg-Biopsie Stanzwerkzeug werden zwei interne Kontrolle &quot;nicht-ischämischen&quot; Wunden (bis zu den vorderen Faszie des Panniculus carnosus Muskel) 1 cm seitlich der ischämischen Wunden auf beiden Seiten der Klappe (Figur 1G). </li><li> Legen Sie ein Lineal unter den Wunden und digitale Fotos für die Wundmesszwecken (siehe 3A). Zu diesem Zeitpunkt kann die Durchblutung (Perfusion) unter Verwendung von Laser-Doppler oder andere Manipulationen (topisches Arzneimittel placement) ausgeführt überwacht werden.</li><li> Tragen Sie eine genehmigte flüssigen Klebstoff sowohl kranialen und kaudalen auf die Wunden und eine transparente Folienverband, die feuchten Wundmilieu und sauber (steril) zu halten. Ein zusätzlicher Verband kann am kaudalen Ende der Klappe angeordnet sein, um das Tier vor dem Entfernen der kaudalsten Nähte zu verhindern. </li></ol> 5. Postoperative Verfahren <ol><li> Zeigen Tiere in Käfigen (Einzelhaltung) mit flachen Feedern, um die Operationsstelle von Reibung an der Zuführung zu verhindern. Die Tiere sollten nicht unbeaufsichtigt gelassen oder an die Firma von anderen Tieren zurückgegeben, bis sie ausreichend Bewusstsein Brustlage erhalten und weisen gezielte Bewegung wieder werden. Heizmatten sollte die Hälfte des Käfigs für bis zu 2 Tage während der Wiederherstellung platziert werden. </li><li> Um Schmerzen nach der Operation zu verwalten, zu verwalten Ketoprofen (5 mg / kg) subkutan an Tieren am nächsten Morgen und 1x pro Tag für bis zu 48 Stunden nach der Operation. Tiere sollten täglich überwacht werdenlängere Anzeichen von Schmerzen, Gewichtsverlust oder postoperativen Wundinfektionen. </li></ol> 6. Nachfolgende Messungen und Wundverbandwechsel <ol><li> Messen Sie ischämischen und nicht-ischämischen Wunden häufig unter Vollnarkose mit Isofluran bei 3% -4% über eine Induktionskammer und (über einen Nasenkegel) bei 1% bis 2% mit O 2, wie in Schritt 3.1 erhalten. </li><li> Entfernen Sie den Verband vorsichtig, um den Klebstoff von der Haut nicht ziehen. Zu diesem Zeitpunkt zusätzliche digitale Fotos werden zur Wund Messungen, topische Behandlungen wieder angewendet, Laser-Doppler-Bildgebung (LDI) oder andere Manipulationen durchgeführt, um den Prüfer Bedürfnisse. </li><li> Klebstoff und einem sauberen Verband und bieten, damit sie wie in Schritt 5.1 wiederherstellen. </li></ol> 7. Wund Sammlung und Euthanasie <ol><li> Ernte ischämischen und nicht-ischämischen Wunden (an den Tagen der Ermittler für angemessen hält) während sich das Tier in Narkose mit Isofluran bei 3% -4% über einen induction Kammer und auf 1% bis 2% mit O 2 gehalten (über einen Nasenkegel), wie in Schritt 3.1. </li><li> Mit einem Skalpell einen quadratisch Exzision um die Wunde herum, um etwas gesundes Gewebe um die Wunde schließen. Legen Sie die Entfernung in ein 1,5-ml-Schnappdeckel Rohr und Schnapp Einfrieren in flüssigem Stickstoff (bei -80 ° C) für zukünftige molekulare Analyse oder Inkubation in 10% gepuffertem Formalin O / N bei RT zur histologischen Verarbeitung. HINWEIS: Die Wunde Exzisionen kann auch in zwei Hälften geschnitten werden, um mehr Proben für die Analyse zur Verfügung. </li><li> Nach dem Wundgewebe Entfernung, einschläfern das Tier mit dem zugelassenen Verfahren der CO 2 Inhalation. </li></ol>

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</ol>

Die Autoren haben nichts offenzulegen.

<html> Die Wundheilung bei Ratten war oft das Thema der Debatte durch ihre Fähigkeit, infizierten Wunden und hohe Variabilität interanimal 5 heilen. Einer der ursprünglichen Zielen des Modells während der Entwicklung war es, diese Schwankung zu verringern. Modifikationen an der Breite der Verschlußklappe, die Verringerung der Anzahl der Wunden, die mit bestimmten Platzierungs (zentriert auf der Klappe mit konsistenten kraniokaudale location) und Einführung einer Silikonfolie wurde dieses Ziel erreicht. Wundhei...

Effektive Medikamentenentwicklung und anderen Wundheilungstherapeutika erfordern geeignete In-vivo-Modelle, trotz bekannter Probleme bei der Übersetzung Befunde in Tiermodellen für die menschliche Therapien ein. Was folgt, ist eine Beschreibung eines detaillierten Protokolls für die Verwendung von einem Rattenmodell der Ischämie die Wundheilung der Haut zu Mechanismen, die weiter das Verständnis der pathologischen Wundheilung zu untersuchen. Die Rattenarten aufgrund seiner breiten Verfügbarkeit, Größe häufig eingesetzt, und fügsam Natur ist für Wundheilungsstudien verwendet, da sie groß genug, um eine geeignete Hautstelle für incisional und excisional Verwundung, Imaging und Gewebesammlung 2 zu liefern. Es sollte jedoch sorgfältig prüfen, die die Haut einer Ratte und einem Menschen unterschiedlich sind anatomisch genommen werden, mit Ratten, die als lose-gehäutet genannten Tiere. Diese ausgeprägte Merkmal ermöglicht Wundkontraktion statt Epithelialisierung signifikant zur Schließung der Rattenhaut w beitragenounds 2. Zusätzlich kann die Gegenwart eines subkutanen Panniculus carnosus Muskel in Ratten, trägt zur Heilung sowohl Kontraktion und Kollagenbildung 3,4. Diese sehr wichtige anatomische Unterschiede in der Entwicklung der ischämischen Hautwunde Modell Ratte betrachtet und spezifische Änderungen wurden implementiert, um Wundkontraktion verringern und den Einfluss der Panniculus carnosus Muskel-5. In diabetischen Fußgeschwüren, Ulcus cruris und Dekubitus wird die Heilung verzögert und diese Wunden gelten als chronisch. Die Wunden werden durch übermäßige Entzündung, das die Wunde vom Weiterkommen in die nächsten Phasen der Wundheilung 6 verhindert wird. Einer der wichtigsten Faktoren bei der Entwicklung einer chronischen Wunde lokalisiert Gewebeischämie (reduzierte Blutfluss) 5, die zur Unfähigkeit, eine Entzündung zu löschen. Zu dem Zeitpunkt, in dem dieses Modell wurde entwickelt und validiert (in 2003-4), Gab es keine standardisierten Tiermodellen, die genügend Gewebe zur Induktion von Angiogenese im Wundbett, einer Schlüsselphase während der normalen Wundheilung und die Motivation für die Entwicklung dieses Modells 5 testen bieten könnte. Das heißt, die hier vorgestellte Modell ist eine Modifikation des ischämischen Wundmodell ursprünglich von Schwartz et al. 7 und in der Folge beschrieben, in modifizierter Form von Chen et al. 8 In der modifizierten ischämischen Wundmodell wurden Änderungen vorgenommen, um die oben genannten anatomischen Eigenschaften des Ratten, die Heilung durch Kontraktion statt Epithelialisierung führt zu umgehen: (1) zwei Voll Dicke Exzisionswunden innerhalb eines bipedicled dorsale Hautlappen und die erstellte Panniculus carnosus Muskel aus der Wunde durch Sezieren knapp über dem Muskelfaszie Bett entfernt. (2) Die Klappe selbst engeren Dimensionen, um sicherzustellen, dass die Blutversorgung ist zufällig und die Wunden in der Mitte des t gelegener Klappe sind ischämische. Unter der Klappe (3) Ein Silikonfolie eingesetzt, verhindert readherence und Reperfusion der Klappe vom darunterliegenden Gewebe. Wundkontraktion wird durch Verankerung oder Vernähen der Klappe an der Silikonfolie 5 begrenzt (nicht ausgeschaltet). Das Modell wurde kürzlich in Studien von hyperbare Sauerstoff Auswirkungen auf ischämischen Wundheilung 9,10 ischämischen Wundheilung bei jungen gegenüber alten Ratten 11 eingesetzt und hat sich als ein zuverlässiges Modell der verlängerten Gewebeischämie sein. Die Abmessungen der Klappe bipedicled haben auch zu verschiedenen Rattenstämmen, einschließlich Sprague Dawley (11 cm lang und 2 cm breit) und F344-Ratten (10,5 cm lang und 3,0-3,5 cm breit) und anderen Spezies, einschließlich Schweine 12 und Mäusen angepaßt 13,14. Dieses Video nutzt die F344 Inzuchtrattenstamm in der Demonstration der ischämische Hautwunde Modell. Zulassung für alle nachfolgend dargestellt Tierverfahren war zu erhaltened an der University of Animal Care Committee Südfloridas (IACUC) und sich an alle Anforderungen des Tierschutzgesetzes und des Leitfadens für Pflege und Verwendung von Labortieren.

<table><tbody><tr><td>Sil-Tec medizinische Bleche</td><td>Technical Products Inc.</td><td>500-3</td><td>unverstärkt, 0,01 Zoll dick</td></tr><tr><td>Mini Iris Schere, 8 cm, gebogen, SS</td><td>World Precision Instruments</td><td>#503671</td><td></td></tr><tr><td>Ethilon Nylon Nähte</td><td>Ethicon</td><td>1964G</td><td>schwarz, Größe 4,0, PC-3 16&nbsp; mm Nadeln (3/8 Kreis)</td></tr><tr><td>Laser Doppler Imager</td><td>Moor Instruments</td><td>moorLDI2-IR</td><td>Standard Blutfluss-Imager: http://us.moor.co.uk/product/moorldi2-laser-doppler-imager/8</td></tr><tr><td>ImageJ</td><td>NIH</td><td>kostenloser Download</td><td>http://rsb.info.nih.gov/ij/</td></tr> <tr><td>Mastisol</td><td>Henry Schein</td><td>Cat # 7289210</td><td>Fisher Scientific NC9774929</td></tr><tr><td>Tegaderm</td><td>Medical Specialties&nbsp;</td><td>3M1624W</td><td>Fisher Scientific NC9922128</td></tr></tbody></table>

demonstration der ratte ischämische hautwunde modell

Demonstration of the Rat Ischemic Skin Wound Model

Die Neigung für chronische Wunden bei Menschen erhöht die mit dem Altern, Krankheiten wie Diabetes und beeinträchtigten kardiovaskulären Funktion und unrelieved Druck aufgrund Unbeweglichkeit. Tiermodelle wurden, die versuchen, diese Bedingungen für den Zweck, das Verständnis für die Komplexität von chronischen Wunden nachahmen entwickelt. Das hier beschriebene Modell ist eine Ratte ischämische Hautlappen-Modell, das eine anhaltende Verringerung des Blutflusses, was zu Verletzungen, die ischämischen geworden und ähneln einer chronischen Wunde Phänotyp (reduzierte Durchblutung, erhöhte Entzündung und verzögerten Wundverschluss) ermöglicht. Es besteht aus einem bipedicled Dorsallappen mit 2 ischämischen Wunden zentral platziert und 2 nicht-ischämischen Wunden seitlich an der Klappe als Kontrollen. Eine neuartige Neben dieser ischämischen Hautlappen Modell ist die Platzierung einer Silikonfolie unter der Klappe, die als Barriere und einer Schiene an Revaskularisierung Verhinderung und Verringerung Kontraktion, wie die Wunden zu heilen funktioniert. Trotz derDiskussion der Verwendung von Ratten für Wundheilungsstudien aufgrund ihrer sehr unterschiedlichen anatomischen und physiologischen Unterschieden im Vergleich zum Menschen (das heißt, das Vorhandensein eines Panniculus carnosus Muskel, kurze Lebensdauer, erhöhte Anzahl der Haarfollikel und ihre Fähigkeit, infizierten Wunden zu heilen) die in diesem Modell verwendeten Modifikationen machen es eine wertvolle Alternative zu bisher entwickelten ischämische Hautlappen Modelle.

Die Ratte ischämischen Wundheilung Musterprotokoll sollte etwa 20 Minuten pro Tier zu nehmen, wenn effizient durchgeführt. Vor dem Aufbringen eines Verbandes sollte das Modell angezeigt, wie in Figur 1G dargestellt ist. Es wird wichtig sein, um sicherzustellen, dass die bipedicled Klappe und Wunden darin sind ischämische. Die subkutane Sauerstoffpartialdruck (PSCO 2) auf der Ebene der Wunden wurde bei der Validierung des Modells 5, indem Sie einen polarographischen Elektrode in das...

Die Ratte, aufgrund seiner Größe, Verfügbarkeit und eher fügsam Verhalten hat als Forschungsmodell für viele Jahre in Anspruch genommen. Das Ziel des Protokolls ist es, die Ratte als ischämische Haut Wundheilung Modell zu verwenden, um einen wertvollen Einblick in die Pathophysiologie von chronischen Wunden bereitzustellen.

Demonstration der Ratte ischämische Hautwunde Modell

The propensity for chronic wounds in humans increases with ageing, disease conditions such as diabetes and impaired cardiovascular function, and ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, ein reproduzierbares ischämisches Wundmodell zu erstellen. Dies wird erreicht, indem zunächst ein steriler Stanzbiopsie-Tool verwendet wird, um zwei exzisionelle ischämische Wunden innerhalb der vorgegebenen Klappe entlang der Markierungslinie auf dem Rücken der Ratte anzulegen. Anschließend wird ein bikaudaler Lappen durch zwei Inzisionen entlang der zuvor eingezeichneten Linien lateral zu den beiden ischämischen Wunden geschaffen.Dann wird der bikostale Lappen angehoben und ein steriles Silikonblatt zwischen Faszie und Muskulatur platziert, um die Wunden zu stützen und das Nachwachsen von Blutgefäßen zu verhindern. Schließlich werden beide Inzisionen verschlossen, und zwei exzisionelle, nicht-ischämische Kontrollwunden werden lateral zu den Nähten angelegt. Abschließend wird mithilfe der digitalen Fotografie die Veränderung der Wundgröße über die Zeit dargestellt.Die Laser-Doppler-Methode wird verwendet, um Veränderungen der Durchblutung darzustellen, und abschließend werden Wundgewebe für die histologische und molekulare Analyse entnommen. Der Hauptvorteil dieser Technik im Vergleich zu bestehenden Methoden wie dem McFarland-Lappen besteht darin, dass sie ein reproduzierbares Modell einer anhaltenden Ischämie mit offenen Wunden darstellt, dem topische Wirkstoffe zugegeben werden können und das sowohl mittels Histologie als auch molekularer Analyse untersucht werden kann. Die visuelle Darstellung dieser Methode ist entscheidend.Die Schritte zur Exzision der Wunde und zur Nahtplatzierung sind etwas schwierig zu erlernen. Es ist leicht, die Wunden zu tief anzulegen, und die Naht muss platziert werden, ohne die Wunden zu verzerren. Zur Vorbereitung vorgeschnittene Streifen aus nicht verstärktem medizinischem Silikon der Dicke 0,01 schneiden und autoklavieren, um sie zu reinigen und zu sterilisieren. Geeignete chirurgische Instrumente einschließlich Schere, Pinzette sowie sterile Tücher oder Abdecktücher zur Schaffung eines sterilen Feldes während der Operation reinigen und sterilisieren.Nach Einleitung einer Vollnarkose an einer erwachsenen männlichen oder weiblichen Ratte mit einem Gewicht von 250 bis 300 Gramm gemäß dem Textprotokoll. Führen Sie einen Zehenquetschtest durch, um die Tiefe der Sedierung zu überprüfen, und applizieren Sie eine Nasenkonusanästhesie mit 1 bis 2 % Isofluran in Sauerstoff, um die Narkose aufrechtzuerhalten. Platzieren Sie die Ratte in Bauchlage und verwenden Sie einen Elektrorasierer, um den Rücken vom Halsansatz aus etwa 11 Zentimeter nach kaudal abzurasieren. Umreißen Sie mit einem dauerhaften Markierstift die Kontur des 3,0 cm mal 10,5 cm großen Hautlappens.Bringen Sie die Ratte in einen sauberen, dafür vorgesehenen chirurgischen Bereich, der mit einer zugelassenen Heizplatte sowie sterilen chirurgischen Tüchern oder Abdeckungen ausgestattet ist. Injizieren Sie fünf Milligramm pro Kilogramm Ketoprofen subkutan vor dem ersten chirurgischen Einschnitt. Zur Schmerztherapie.Desinfizieren Sie die Haut mit 70 % Isopropylalkohol. Anschließend verwenden Sie 0,2 % Chlorhexidin und legen steriles Abdecktuch an, um ein steriles Feld zu schaffen, wobei ein steriles, Einweg-Biopsiepunch-Werkzeug mit sechs Millimeter Durchmesser zum Einsatz kommt. Erzeugen Sie zwei kreisförmige ischämische Wunden in der Mitte des vorgesehenen Lappenbereichs, die bis zur darunterliegenden Faszie des Musculus panus carno reichen.Mit einer Pinzette wird die Haut in der Mitte der Wundkontur angehoben und anschließend mithilfe einer Iris-Schere mit gebogenen Spitzen das kreisförmige Gewebestück einschließlich des Musculus panus carno ausgeschnitten. Das Ergebnis ist eine vollständig durch die Hautschichten verlaufende Wunde mit der Faszie als Wundgrund. Danach wird mit einem sterilen Skalpell ein bikompartimenteller Lappen durch Inzisionen entlang der Tron-Linien, die 10,5 Zentimeter Länge und einen Abstand von 3,0 Zentimetern aufweisen und bis zur Tiefe der paraspinalen Muskulatur auf beiden Seiten der ischämischen Wunden reichen, präpariert.Danach mit Iris-Scheren die Panus-carno-Faszie von den paraspinalen Muskeln ablösen, wobei darauf zu achten ist, dass die Faszie als Basis der sechs Millimeter großen Stanzen intakt bleibt. Ein steriles, vorgeschnittenes Silikonblatt zwischen die Panus-carno-Faszie und die paraspinalen Muskeln legen und sicherstellen, dass das Blatt mit schwarzen, nicht resorbierbaren 4.0-Nähten weder knickt noch faltet. Beide Inzisionen verschließen, indem das Silikonblatt mit mindestens acht Einzelstichen pro Seite entlang der Länge des Lappens an der Haut verankert wird.Danach mit dem sterilen, wegwerfbaren Biopsiestanzer zwei interne Kontrollwunden ohne Ischämie anlegen, jeweils einen Zentimeter seitlich der ischämischen Wunden auf beiden Seiten des Lappens. Legen Sie ein Lineal unter die Wunden und machen Sie digitale Fotos zur Wundvermessung. Überwachen Sie den Blutfluss mittels Laser-Doppler oder führen Sie topische Arzneimittelbehandlungen nach Bedarf durch.Tragen Sie einen zugelassenen flüssigen Klebstoff sowohl kranial als auch kaudal auf die Wunden auf und bedecken Sie diese mit einem transparenten Filmsverband, um ein feuchtes und sauberes Wundmilieu zu erhalten. Legen Sie einen zusätzlichen Verband an der kaudalen Endseite des Lappens an, um zu verhindern, dass das Tier die am kaudalsten liegenden Nähte entfernt. Stellen Sie das Tier nach der Operation allein in einen Käfig mit einem flachen Futterbehälter, um zu vermeiden, dass die Operationsstelle am Futterbehälter reibt.Platzieren Sie eine Heizplatte unter die Hälfte des Käfigs für bis zu zwei Tage während der Erholungsphase. Wenn das Tier ausreichend bei Bewusstsein ist, um die Brustlage beizubehalten, und zielgerichtete Bewegungen zeigt, bringen Sie es wieder zu den anderen Tieren zurück. Zur postoperativen Schmerzbehandlung verabreichen Sie am Morgen nach der Operation fünf Milligramm pro Kilogramm Ketoprofen subkutan und führen Sie einmal täglich eine Nachsorge für bis zu 48 Stunden nach der Operation durch. Das Tier sollte außerdem täglich auf anhaltende Anzeichen von Schmerzen, Gewichtsverlust oder Wundinfektionen überwacht werden, um ischämische und nicht-ischämische Wunden zu beurteilen.Nach der Anästhesie des Tieres gemäß der zuvor im Video beschriebenen Methode entfernen Sie vorsichtig den Verband, um den Klebstoff nicht von der Haut zu ziehen. Machen Sie digitale Fotos zur Wundvermessung und führen Sie eine Laser-Doppler-Bildgebung durch. Falls gewünscht, tragen Sie anschließend topische Behandlungen einschließlich Klebstoff und sauberen Verband erneut auf und lassen Sie das Tier wie zuvor zur Entnahme ischämischer und nicht-ischämischer Wunden auskurieren.Nach der Anästhesie des Tieres verwenden Sie ein Skalpell, um einen viereckigen Einschnitt um die Wunde herum vorzunehmen, der auch gesundes Gewebe einschließt; entfernen Sie die Wunde zusammen mit dem gesunden Gewebe, geben Sie die Exzision in ein 1,5-Milliliter-Schnappverschlussröhrchen und schockfrieren Sie es in flüssigem Stickstoff für zukünftige molekularbiologische Analysen oder überführen Sie es in 10 % gepuffertes Formalin und inkubieren Sie über Nacht bei Raumtemperatur zur histologischen Aufarbeitung. Seit der Entwicklung dieses Modells wurde die Laser-Doppler-Bildgebung zunehmend zur Messung der Durchblutung eingesetzt, und diese Technik liefert ausreichende Informationen über den ischämischen Zustand des bikaudalen Lappens. Diese Abbildung zeigt ein Doppler-Bild eines dorsalen bikaudalen Lappens mit einem durchbluteten und einem nicht durchbluteten Bereich.Für die Zwecke dieser Demonstration wird der Fortschritt der Wundschließung als Prozentsatz der anfänglichen Wundfläche über einen Zeitraum von 28 Tagen dargestellt. Wie hier in Image J gezeigt, wurde ein digitales Bild geöffnet und die Skala auf 10 Millimeter festgelegt. Auf dem Lineal entspricht eine 10 Millimeter lange Linie einer bestimmten Anzahl von Pixeln, die in eine gewünschte Einheit – in diesem Fall Millimeter – umgerechnet werden kann.Dann wird der Umfang der Wunde abgezeichnet, und durch Befehl der Messfunktion wird die Fläche in Millimetern angezeigt, wie zu sehen ist. In diesem Diagramm können die Daten als Prozentsatz der anfänglichen Wundfläche auf der Y-Achse und Tage auf der X-Achse dargestellt werden. Wenn die Technik einmal beherrscht ist, kann sie bei richtiger Anwendung in etwa 20 Minuten durchgeführt werden. Fertig.Während des Durchführens dieses Verfahrens ist es erneut wichtig, daran zu denken, die Klappe zu nähen, ohne die Wunden zu dehnen. Wenn die Wunden zu einer ovalen Form verzerrt werden, heilen sie schneller als runde Wunden, was zu einer Variabilität der Heilergebnisse führt.

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Forschung

JoVE Journal

Medicine

Medizin

Wir haben eine minimal-invasive Technik, ein Kaninchen ischämischen Wunde Ohr-Modell, indem die zentrale Arterie und Nerven und der Schädelbasis Gefäßnervenbündels erstellen entwickelt. Einen subkutanen Tunnel dann schneidet alle subkutanen Gewebe. Dieses Verfahren verursacht minimale Störung der Haut und kann sicher in diabetischen Tieren verwendet werden.

Eine vereinfachte Methode zur Herstellung eines ischämischen Wundmodell

Ein Mausmodell von kutanen Wundheilung, die zur therapeutischen Verbindungen in physiologischen und pathophysiologischen Einstellungen beurteilen kann.

Mausmodell der Wundheilung

Kostenloser Transfer Gewebe ist weit verbreitet in der rekonstruktiven Chirurgie eingesetzt, um Form und Funktion nach onkologischen Resektion und Trauma wiederherzustellen. Vorbehandlung dieses Gewebe vor der Operation verbessern kann Ergebnis. Dieser Artikel beschreibt...

In situ Quer Bauchmuskel myokutane Flap: Eine Ratte Modell myokutane Ischämie Reperfusion Injury

Das Fenster des murinen Rückenhautkammer dargestellt visualisiert eine Zone von akuter Ischämie persistent eines muskulokutanen Klappe. Intravital Epifluoreszenzmikroskopie Genehmigungen für direkte und wiederholte Bewertung der Mikrogefäß und Quantifizierung der Hämodynamik. Morphologische und hämodynamische Ergebnisse kann weiter mit histologischen und molekularen Analysen korreliert werden.

Ischämischen Gewebeschädigung des Rückenhautkammer der Maus: Ein Hautlappen Modell zu Akute Persistent Ischämie Untersuchen

Wir beschreiben eine nicht-invasive in Vivo imaging-Protokoll, das schlanke und kostengünstige, Verwendung von L-012, eine Chemolumineszenz Luminol-Analog, zu visualisieren und reaktive Sauerstoffspezies (ROS) erzielte eine excisional Wunde Mausmodell zu quantifizieren.

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Hier beschreiben wir ein präklinisches Tiermodell zur Untersuchung der Pathophysiologie der Ischämie-Reperfusionsverletzung in der rekonstruktiven Mikrochirurgie. Dieses freie Hautklappenmodell, das auf den oberflächlichen kaudalen epigastrischen Gefäßen in der Ratte basiert, kann auch die Bewertung verschiedener Therapien und Verbindungen ermöglichen, um Verletzungsschäden durch Ischämie-Reperfusion entgegenzuwirken.

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Ziel dieser Studie war es, ein murines Modell der Verbrennungswundung zu entwickeln. Eine thermische Verbrennung wurde auf der rückenden Haut von Mäusen mit einer vorgeheizten Messingschablone induziert. Verbranntes Gewebe wurde entbraut und mit einem Hauttransplantat überzogen, das vom Schwanz einer genetisch ähnlichen Spendermaus geerntet wurde.

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Das Streptozotocin-induzierte diabetische Wundmodell bei männlichen SD-Ratten ist derzeit das am weitesten verbreitete Modell zur Untersuchung der Wundheilung bei Diabetes mellitus Typ I. Dieses Protokoll beschreibt die Methoden, die zum Erstellen dieses Modells verwendet werden. Darüber hinaus werden mögliche Herausforderungen vorgestellt und adressiert, und es werden die Progression und die angiogenen Eigenschaften diabetischer Wunden untersucht.

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Dieses Protokoll beschreibt die Entnahme, das Nähen und die Überwachung von fasziokutanen Lappen bei Ratten, die eine gute Visualisierung und Manipulation des Blutflusses durch die oberflächlichen unteren epigastrischen Gefäße durch Klemmen und Ligieren der Oberschenkelgefäße ermöglichen. Dies ist entscheidend für Studien mit ischämischer Präkonditionierung.

Der oberflächliche axiale Lappen der Arteria epigastrica inferior zur Untersuchung ischämischer Präkonditionierungseffekte in einem Rattenmodell

Ein Rattenhaut-Wundmodell wird beschrieben, das die Bewertung verschiedener therapeutischer Wirkstoffe unter physiologischen oder pathologischen Bedingungen über die verschiedenen Heilungsphasen hinweg ermöglicht. Darüber hinaus wird ein Protokoll zur manuellen Planimetrie zur Überwachung der Wundkontraktionsrate während der gesamten Gewebereparatur detailliert beschrieben.

Ein chirurgisches Ratten-Hautwundmodell: Ein Ansatz für Wundheilungsstudien und Biomaterialbewertung

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Demonstration der Ratte ischämische Hautwunde Modell

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