Verwenden der Funktion zur Elektroretinogramm im Nager Retina und die schützende Wirkung des Fern Limb ischämischen Präkonditionierung bewerten

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, die Sehfunktion bei normal lichtgeschädigten und fernischämisch vorkonditionierten und lichtgeschädigten Ratten mit dem ERG zu testen und dadurch die schützende Wirkung der Fernischämie der Gliedmaßen auf die Netzhaut zu demonstrieren. Dies wird erreicht, indem die Ratten zuerst dunkel werden und sich 12 Stunden lang anpassen. Der zweite Schritt besteht darin, das dunkeladaptierte ERG der Grundlinie mit LED-Lichtreizen und einem digitalen Verstärker aufzuzeichnen.

Als nächstes setzen Sie die Ratten einer Netzhautbelastung aus, indem Sie sie einem hellen, kontinuierlichen Licht aussetzen. Der letzte Schritt besteht darin, die ERG-Aufzeichnungen der lichtgeschädigten Ratten mit denen zu vergleichen, die mit einer ferngesteuerten Ischämie der Gliedmaßen präkonditioniert sind, und die Photorezeptorreaktionen zu messen, wie sie in der A-Welle zu sehen sind, und die inneren Netzhautreaktionen, wie sie in der B-Welle zu sehen sind. Letztendlich wird das dunkeladaptierte ERG verwendet, um die skotopische Sehfunktion zu beurteilen.

Diese Methode kann also Einblicke in die ischämische Fern-basierte Neuroprotektion geben. Es kann auch bei anderen Formen von Netzhautverletzungen und -krankheiten, pharmakologischen Tests und beim Screening von Tieren mit Sehfehlern angewendet werden. Um dieses Verfahren zu beginnen, passen Sie die Ratte 12 Stunden lang im Dunkeln an und betäuben Sie sie dann mit der Injektion eines Ketamin-Xylazin-Cocktails.

Sobald das Tier bewusstlos ist, überprüfen Sie die Narkosetiefe, indem Sie seinen Fuß leicht einklemmen, um sicherzustellen, dass die Reflexreaktion nicht vorhanden ist. Tragen Sie anschließend einen Tropfen Atropin und einen Tropfen Prox-Methan auf die Hornhaut auf. Schneiden Sie auf einen schwarzen Faden von 10 Zentimetern Länge.

Machen Sie dann mit dem Faden eine Schlaufe und schieben Sie die Schlaufe über den Äquator des Auges, stricken Sie sie leicht fest, um den Augapfel leicht nach vorne zu ziehen und die Hornhaut vom Augenlid frei zu halten. Tragen Sie anschließend Carmer-Augentropfen auf die Hornhaut auf. Positionieren Sie die Ratte auf der saugfähigen Einstreu auf der beheizten Plattform, wobei Sie ihren Kopf in die Öffnung des Ganzfeldes stecken.

Führen Sie dann den internen Temperaturfühler in das Rektum ein, um sicherzustellen, dass die Körpertemperatur bei 37 Grad Celsius gehalten wird, und befestigen Sie den Temperaturfühler in Position, indem Sie sein Kabel an den Schwanz der Ratte kleben. Führen Sie anschließend die Referenzelektrode subkutan in die hintere Extremität ein. Platzieren Sie die negative Elektrode sicher im Mund, um zu verhindern, dass die Elektrode aus dem Mund rutscht.

Befestigen Sie das Verbindungskabel auf einer stabilen Unterlage. Positionieren Sie dann die positive Elektrode über der Mitte der Hornhaut und achten Sie mit einem Mikrom-Manipulator darauf, dass die Elektrode die Hornhaut sanft berührt. Sobald die Elektroden an Ort und Stelle sind, drapieren Sie das Loch, einschließlich des Ganzfelds und des Tieres, mit einem undurchsichtigen Material, um die Dunkeladaption zu erhalten.

In der Akquisitionssoftware. Stellen Sie zwei Kilohertz als Abtastrate mit fünf Millisekunden für die Probenahme vor der Entnahme und einer Entnahmezeit von 100 bis 1000 Millisekunden ein. Stellen Sie dann die Bandpassfilter auf eins bis 1000 Hertz ein und stellen Sie sicher, dass die Abtastung nach einem Blitz für einen Zeitraum von 100 Millisekunden ausgelöst wird.

Überprüfen Sie nun die Aufzeichnungsbaseline. Er sollte frei von Fremdgeräuschen sein, aber das Verstärkerrauschen und die Atemschwingungen anzeigen. Führen Sie dann einen Test-Flash aus.

Dies ist eine typische ERG-Wellenform als Reaktion auf den Testblitz. Wenn dies erledigt ist, lassen Sie das Tier 10 Minuten lang wieder an die Dunkelheit gewöhnen. Überprüfen Sie dann erneut die Basislinie auf ein stabiles Signal.

Starten Sie anschließend die Aufzeichnung Am Ende der Aufnahmesitzung überprüfen Sie die Stabilität der Körpertemperatur des Tieres. Entfernen Sie die Elektroden und tragen Sie dann das Carmerpolymer erneut auf die Hornhaut auf. Lassen Sie das Tier anschließend auf einem Wärmekissen ruhen, bis es vollständig beweglich und aktiv ist, bevor Sie in den Tierstall zurückkehren.

Diese Abbildung zeigt die Messung einer Welle und einer B-Welle von einem dunkeladaptierten ERG. Die hier gezeigte Spur ist von der Hornhaut eines dunklen, adaptierten Auges bis zu einem hellen Lichtblitz aufgezeichnet, der zu der angegebenen Zeit als T Null angegeben wurde. Die Amplitude einer Welle wird von der Basislinie bis zur ersten Talsohle gemessen.

Die Amplitude der B-Welle wird vom Tal der A-Welle bis zum folgenden positiven Peak gemessen. Die Latenz wird vom Stimulusartefakt bis zum Point of Interest auf der Spur gemessen, z. B. dem Tal der A-Welle. Das roh dominierte ERG-Signal nimmt mit dem zunehmenden Lichtreiz zu.

Eine Welle wird bei etwa 0,4 logarithmischen Candelasekunden pro Quadratmeter sichtbar, und das Twin-Flash-Paradigma wurde verwendet, um das gemischte ERG-Signal in Kegel- und Stäbchenantworten zu unterteilen. Einmal gemeistert. Diese Technik kann innerhalb von 30 Minuten durchgeführt werden.