Name: Ex-situ-normothermen Maschine Perfusion von Spenderlebern (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-05-26T15:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 13 s
Description: Lernen Sie die normotherme Maschinenperfusion menschlicher Spenderlebern für die Transplantationsforschung. Diese Methode ermöglicht die Bewertung der Lebervitalität außerhalb des Körpers und reduziert ischämische Schäden.

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Diese Arbeit wurde finanziell durch Zuschüsse von Innovatief Actieprogramma Groningen (IAG-3), Jan de Cock Kornelis Stichting und Tekke Huizingafonds vorgesehen, die alle in den Niederlanden unterstützt. Wir sind dankbar für alle niederländischen Transplantation Koordinatoren für die Ermittlung der potentiellen verworfen Leber und informierte Zustimmung erhalten.

Dieses Protokoll wurde von der Medizinischen Ethikkommission (Medisch Ethische Toetsingscommissie) des University Medical Center Groningen, Niederlande zugelassen. 1. Herstellung der Perfusionsflüssigkeit Hinweis: Das Gesamtvolumen des für normothermic Maschine Perfusion gemäß diesem Protokoll hergestellt Perfusionsflüssigkeit 2.233 ml und die gezielte Osmolarität der Perfusionsflüssigkeit 302 mOsmol / l. <ol><li> Von den Komponenten der in Tabelle 1 beschrieben Perfusionsflüssigkeit, halten Sie die menschlichen Erythrozytenkonzentrat, Frischplasma und Humanalbumin getrennt. Mischen Sie die restlichen Komponenten steril und speichern Sie die Lösung in einem sterilen Beutel für den Transport in den OP (OR). Tun Sie dies in einer sterilen Umgebung (im Idealfall eine Good Manufacturing Practice Anlage) oder in einer Sterilbank in einem Kulturraum. </li></ol><table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td> Components </td><td fo:width="2in" style="width:80px"> Menge </td></tr><tr><td> Lunch roten Blutkörperchen (Hämatokrit 60%) </td><td style="text-align:right"> 840 ml </td></tr><tr><td> Fresh Frozen Plasma </td><td style="text-align:right"> 930 ml </td></tr><tr><td> Humanalbumin 200 g / L (Albuman, Sanquin) </td><td style="text-align:right"> 100 ml </td></tr><tr><td> Geändert parenterale Ernährung (Clinimix N17G35E, Baxter International Inc.) </td><td style="text-align:right"> 7,35 ml </td></tr><tr><td> Multivitamine für Infusion (Cernevit, Baxter International Inc.) </td><td style="text-align:right"> 7 ul </td></tr><tr><td> Konzentrierte Spurenelemente zur Infusion (Nutritrace, B. Braun Melsungen AG) </td><td style="text-align:right"> 7,35 ml </td></tr><tr><td> Metronidazol für die iv-Gabe (5 mg / ml) (Flagyl, Sanofi-Aventis) </td><td style="text-align:right">40 ml </td></tr><tr><td> Cefazolin 1.000 mg Kolben 5 ml Pulver zur IV-Verabreichung (Servazolin, Sandoz) </td><td style="text-align:right"> 2 ml </td></tr><tr><td> Schnell wirkendes Insulin (100 IU / ml) (Actrapid®, Novo Nordisk) </td><td style="text-align:right"> 20 ml </td></tr><tr><td> Calciumglubionat, intravenöse Lösung 10% 137,5 mg / ml (Sandoz) </td><td style="text-align:right"> 40 ml </td></tr><tr><td> Sterilem H 2 O </td><td style="text-align:right"> 51,3 ml </td></tr><tr><td> NaCl 0,9% Lösung </td><td style="text-align:right"> 160 ml </td></tr><tr><td> Natriumbicarbonat 8,4% Lösung </td><td style="text-align:right"> 31 ml </td></tr><tr><td> Heparin 5000 IE / ml für die iv-Gabe </td><td style="text-align:right"> 4 ml </td></tr><tr><td> Gesamt </td><td style="text-align:right"> 2.233 ml </td></tr></tbody></table> Tabelle 1: Components der Perfusionsflüssigkeit 16. <ol start="2"><li> Übertragungs menschlichen gepackten roten Blutkörperchen (840 ml), frisch gefrorenem Plasma (930 ml), Humanalbumin 200 g / l (100 ml) und die in Schritt 1.1 zu dem ODER hergestellten Lösung, um die Perfusionsvorrichtung verabreicht werden. </li></ol> 2. Grundierung der Perfusionsvorrichtung <ol><li> Die Komponenten der Perfusionsflüssigkeit, einschließlich der menschlichen gepackten roten Blutzellen, frisch gefrorenem Plasma, Humanalbumin und die in Schritt 1.1 hergestellten Lösung auf die Maschine über den Verbinder auf der Oberseite der Oxygenatoren und entferne alle Luftblasen aus dem Schlauch. </li><li> Schalten Sie die Venenpumpe und folgen Sie den Anweisungen des Herstellers auf dem Bildschirm. Schalten Sie dann den arteriellen Pumpe und folgen Sie den Anweisungen des Herstellers auf dem Bildschirm. </li><li> NULL Die Druckmessgeräte gegen Atmosphärendruck indem Sie die Anweisungen auf dem Bildschirm. Dies stellt sicher, daß der Druck während der perfus gemessenenIon das wirklichen Druck auf der Ebene der Pfortader und die Leberarterie. </li><li> Starten Sie die Beatmung mit Carbogen (95% O 2 + 5% CO 2) bei einer Strömungsgeschwindigkeit von 4 l / min. Der Luftstrom wird zu den beiden Oxygenatoren unterteilt werden (2 L / min pro Oxygenator), und dies sollte in einem pO 2 von etwa 60 kPa (oder 450 mmHg) in der Perfusionsflüssigkeit führen. Länger Perfusionen, ist es ratsam, getrennten Quellen von Sauerstoff und Kohlendioxid zu verwenden. Dies ermöglicht kleine Einstellungen in der O 2 / CO 2 -Verhältnis, die verwendet werden können, um den pH und pCO 2 der Perfusionsflüssigkeit einzustellen. </li><li> Nehmen Sie eine Perfusion Probe für die Blutgasmessung 15-20 Minuten, nachdem das Gerät wurde grundiert und den pH-Wert und Elektrolyten entsprechend zu überwachen. HINWEIS: Achten Sie darauf, über 3 ml Perfusionsflüssigkeit, bevor sie die Proben zu verwerfen, da diese Flüssigkeit ist in der Umfangsrohre und nicht die Perfusionsflüssigkeit im System zu repräsentieren. Fügen Sie eine 8,4% Natriumbicarbonat sÖSUNG für Pufferkapazität, mit dem Ziel für einen physiologischen pH-Wert (7,35 bis 7,45). Fügen Sie beispielsweise 25 bis 35 ml einer 8,4% Natriumhydrogencarbonat-Lösung und den pH-Wert und Bicarbonat-Spiegel in der Perfusionsflüssigkeit durch die Entnahme von Proben für die Blutgasmessung in regelmäßigen Abständen. </li></ol> 3. Beschaffung und Herstellung von Spenderlebern Hinweis: Beschaffen Sie die Orgel mit dem Standard-Technik der in situ Kühlung und spülen Sie mit kaltem Konservierungsfluid (0-4 ° C) 19. Zur Kanülierung der Arterie zu erleichtern, lassen ein Segment des supratruncal Aorta der Leberarterie (2A) befestigt ist. <ol><li> Spülen die Gallengänge mit dem Konservierungsfluid (dh, University of Wisconsin Lösung). Ligieren Cysticus mit einem chirurgischen Nahtmaterials. </li><li> Verpacken und verstauen die Orgel in einem Standard-sterile Spenderorgan Beutel und Box mit crushed ice für die anschließende Transport zum MP-Center. </li><li> Startdie Rückseite Tabelle Verfahren unmittelbar nach der Ankunft der Spenderleber in den Operationssaal. <ol><li> Nehmen Sie eine Probe von mindestens 10 ml des Konservierungsflüssigkeit für die mikrobiologische Untersuchung. </li><li> Entfernen Sie die Zwerchfell-Anhänge auf dem nackten Bereich der Leber sowie alle übrigen Herzmuskel von der oberen Manschette der Hohlvene mit chirurgischer Schere. </li><li> Präparieren Sie die Arterie und Pfortader mit Präparierscheren und Ligat Seitenäste mit chirurgischen Nähten oder Hemoclips. </li><li> Schließen des distalen Endes des supratruncal Aorta-Segment mit einem nicht resorbierbaren monofilen Faden (zB 3-0 Prolene). Legen Sie die Arterienkanüle in das proximale Ende des supratruncal Aorta und mit Nähten (2A). Verwenden der Kanüle in der Wegwerfpackung bereitgestellt, wie vom Hersteller des Perfusionsvorrichtung geliefert. </li><li> Legen Sie die Venenkanüle in die Pfortader und mit Nähten. Verwenden Sie die Kanüle in den dispos bereitgestelltLage Paket. Die Lebervenen bleibt uncannulated. </li><li> Spülen Sie die Gallengang mit der Konservierungslösung. Legen Sie eine Silizium-Katheter in den Gallengang und mit Nähten. Hinweis: Die Katheter zu tief in den Gallengang einlegen nicht, da dies zu Verletzungen der Gallen Epithels führen. </li><li> Spülen Sie die Leber mit 0,9% NaCl-Lösung über die Pfortader Kanüle wie folgt: <ol><li> Wenn das Transplantat in University of Wisconsin-Lösung als Konservierungslösung konserviert worden, spülen, die Leber mit 2000 ml kaltem (0-4 ° C) 0,9% NaCl-Lösung, gefolgt von 500 ml warmem (37 ° C) 0,9% NaCl Lösung. </li><li> Wenn das Transplantat in Histidin-Tryptophan-Ketoglutarat-Lösung als Konservierungslösung erhalten, spülen, die Leber mit 1000 ml kaltem (0-4 ° C) 0,9% NaCl-Lösung, gefolgt von 500 ml warmem (37 ° C) 0,9 % NaCl-Lösung. Der Zweck des Warm bündig ist, um einen signifikanten Abfall in der Temperatur des zu verhindernPerfusionsflüssigkeit. </li><li> Führen Sie die warme bündig unmittelbar vor dem Anschluss der Leber zum Perfusionsvorrichtung. HINWEIS: Halten Sie die Dauer zwischen warmen und bündig Beginn NMP weniger als 1-2 min. </li></ol></li></ol></li></ol><table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td> Spendereigenschaften (n = 12) </td><td> Anzahl (%) oder Median (IQR) </td></tr><tr><td> Alter (Jahre) </td><td> 61 (50-64) </td></tr><tr><td> Männlich) </td><td> 8 (67%) </td></tr><tr><td> Art des Spenders DCD, Maastricht Typ III DBD </td><td> 10 (83%) 2 (17%) </td></tr><tr><td> Body-Mass-Index (BMI) </td><td> 27 (25-35) </td></tr><tr><td> Absagegrund DCD + Alter&gt; 60 Jahre DCD + hoher BMI DCD + verschiedene Gründe * Schwere Steatose </td><td> 5 (41%) 3 (25%) 2 (17%) <br<html> /&gt; 2 (17%) </td></tr><tr><td> Konservierungslösung UW-Lösung HTK-Lösung </td><td> 6 (50%) 6 (50%) </td></tr><tr><td> Donor warme Ischämiezeit in DCD (min) </td><td> 14 (17-20) </td></tr><tr><td> Kalte Ischämie Zeit (min) </td><td> 389 (458-585) </td></tr><tr><td> Donor Risikoindex (DRI) </td><td> 2,35 (2,01-2,54) </td></tr></tbody></table> Tabelle 2: Eigenschaften * Donor Spender Geschichte der intravenöse Drogenmissbrauch für ein Transplantat und verlängerte Spender SO 2 &lt;30% nach Abzug der Lebenserhaltung für ein weiteres Transplantat.. Abkürzungen: DCD, Spende nach Kreislauf Tod; DBD, Spende nach Hirntod; UW, University of Wisconsin, HTK, Histidin-Tryptophan-Ketoglutarat <html> g2.jpg &quot;/&gt; Abbildung 2: (A) Bilder eines menschlichen Spendertransplantat, die auf der Rückseite Tisch und hergestellt worden ist, (B - D) wurde anschließend normothermically perfundiert. (A) Die Arterienkanüle wird in die Aorta eingeführt surpratruncal und die venöse Kanüle in die Pfortader eingeführt. Der Gallengang wird mit einer Siliciumgallenkatheter kanüliert. (B) Die Leber ist in der Organkammer mit seiner Vorderfläche nach unten und Kanülen sind mit den Rohrleitungen der Perfusionsvorrichtung angeschlossen positioniert. (C) 30 min nach dem Start der Maschine normothermic Perfusion. (D) 6 Stunden nach dem Beginn der Perfusion normothermic Maschine. Im Betrieb wird der Organkammer ist von einer transparenten Abdeckung bedeckt ist, um eine sterile feuchte Umgebung für die Leber (in diesen Abbildungen gezeigt) aufrechtzuerhalten.&quot;&gt; Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Figur zu sehen. 4. normothermen Maschine Perfusion <ol><li> Positionieren Sie die Leber in der Organkammer mit der Vorderseite nach unten zeigt. Sofort eine Verbindung in der Leber auf die grundierte Perfusionsvorrichtung durch Verbinden der Pfortader Kanüle zum Portal Anströmrohr der Perfusion Vorrichtung und der arteriellen Kanüle zum arteriellen Zulaufrohr des Gerätes. </li><li> Starten Perfusion sowohl auf Portal und arteriellen Seite, indem Sie den Anweisungen des Herstellers auf dem Bildschirm. Stellen Sie den mittleren arteriellen Druck bei 70 mmHg und der mittleren Portalvenendruck bei 11 mmHg. </li><li> Nehmen Perfusionsflüssigkeit Proben alle 30 Minuten für die sofortige Analyse der Blutgasparameter (pO 2, pCO 2, SO 2, HCO 2 - und pH) und biochemische Parameter (Glukose, Calcium, Lactat, Kalium und Natrium) unter Verwendung eines herkömmlichen Blutgasanalysator . Achten Sie darauf, über 3 ml Perfusion verwerfenFlüssigkeit vor der Entnahme von Proben, da diese Flüssigkeit ist in der Umfangsrohre und nicht die Perfusionsflüssigkeit in dem System darstellen. <ol><li> Zu ergreifen, diese Proben absaugen Perfusionsflüssigkeit mit einer 1-ml-Spritze aus den Stichproben Anschlüsse, die ein Teil der Einwegschlauchsatz des Perfusionsvorrichtung sind. Für jede Probe verwenden Sie eine neue Spritze und entfernen Sie sofort alle Luftblasen aus der Spritze auf Aspiration von Perfusionsflüssigkeit. Dann legen Sie die Spritze im Blutgasanalysegerät und folgen Sie den Anweisungen des Herstellers in der Bedienungsanleitung des Analysegeräts zur Verfügung gestellt. </li></ol></li><li> Sammeln von Plasma aus der Perfusionsflüssigkeit, Einfrieren und Lagerung bei -80 ° C zur Bestimmung der alkalischen Phosphatase (AlkP), Gamma-Glutamyltransferase (gamma-GT), Alanin-Aminotransferase (ALT), Harnstoff und Gesamt-Bilirubin. Sammeln Plasma nach 5 min Zentrifugation der Perfusionsflüssigkeit bei 1.500 × g und 4 ° C. </li></ol>

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Die Autoren des Manuskripts habe keinen Interessenkonflikt offen zu legen.

Dieses Video bietet eine Schritt für Schritt-Protokoll für normothermen Maschine Perfusion des menschlichen Spenderlebern mit einem Gerät, das druckgesteuerten Zwei Perfusion durch die Leberarterie und Pfortader ermöglicht. Während nach diesem Protokoll, habe technische Störungen der Perfusion Maschine nicht auf, und alle Transplantate waren gut perfundierten und gut mit Sauerstoff. Die Ex-situ perfundierten Lebern hatte stabile Hämodynamik und waren metabolisch aktiv, wie die Produktion von Gallenflüssigkeit <...

Die aktuelle Methode der Organkonservierung in Lebertransplantation ist spülen mit und anschließende Lagerung von Spenderlebern in kaltem (0-4 ° C) Konservierungsfluid (wie University of Wisconsin Lösung oder Histidin-Tryptophan-Ketoglutarat-Lösung). Dieses Verfahren wird als statisches Kühllager (SCS) bezeichnet. Obwohl die Stoffwechselrate von Lebern bei 0-4 ° C sehr gering ist, besteht immer noch die Nachfrage nach Sauerstoff 0,27 umol / min / g Lebergewebe, die bei der SCS 1 nicht bereitgestellt werden kann. Das herkömmliche Verfahren zum SCS führt daher zu einem gewissen Grad von (zusätzlichen) Verletzung des Spenderlebern. Während diese Menge an Konservierungsschaden ist nicht ein Problem in Spenderlebern von guter Qualität kann eine kritische und begrenzende Faktor bei suboptimalen Lebern, die bereits einen gewissen Grad der Schädigung im Spender erlitten werden. Aus diesem Grund werden Lebern mit suboptimaler Qualität oder sogenannten erweiterten Kriterien Donor (ECD) Leber zur Transplantation häufig das Risiko, o abgelehntf frühen Transplantatversagen wird als zu hoch zu sein. Hohe verzögerten Transplantatfunktion, primäre nicht-Funktion, und nicht-Anastomosen Gallengangstenosen (NAS) haben bei Empfängern von Lebern von der Spende nach dem Kreislauf Tod (DCD), ältere Spender oder Empfänger von Transplantaten steatotic 2 beschrieben. NAS sind eine Hauptursache von Morbidität und Mortalität nach einer Lebertransplantation. NAS kann in beiden extra- und intrahepatischen Gallengänge Spender auftreten und kann durch intraduktale Gallenschlamm und Guss Bildung 3,4 begleitet werden. Obwohl die Ätiologie von NAS wird gedacht multifaktoriell zu sein, hat Ischämie / Reperfusion Verletzungen der Gallengänge bei Transplantaterhaltung und Transplantation als eine wichtige zugrunde liegende Mechanismus 2,5 identifiziert. Transplantation eines DCD Transplantats wurde als einer der stärksten Risikofaktoren für die Entwicklung von NAS identifiziert. Die Kombination von einer Periode warmer Ischämie in einem DCD Donor Kaltischämiezeit während Organkonservierung und nachfolgende ReperfusionVerletzung im Empfänger gedacht für irreversible Schädigung der Gallenwege, die in Kombination mit einem schlechten regenerative Kapazität der Gallenwege, ergibt fibrotische Narbenbildung und Verengung der Gallengänge nach einer Lebertransplantation 2,5 verantwortlich. NAS wurden in bis zu 30% der Patienten, die eine Leber DCD 6-8 berichtet. Es ist deutlich geworden, dass die aktuelle Methode der SCS von Lebertransplantationen für eine Transplantation nicht ausreichend für preinjured ECD Lebern wie die von DCD Spender ist. Alternative Methoden nötig sind, um zu steigern und optimieren den Einsatz von ECD Lebern für Transplantationen. Maschine Perfusion (MP) ist ein Verfahren zur Organkonservierung, die eine bessere Konservierung von Spenderorganen bereitstellen kann, verglichen mit SCS. MP kann zur Konservierung von Transplantaten ECD besonders relevant sein. Ein wichtiger Vorteil der MP ist die Möglichkeit, Sauerstoff an das Transplantat während der Konservierungsdauer bereitzustellen. MP kann bei verschiedenen Temperaturen durchgeführt werden,die als hypo (0-10 ° C), subnormothermic (10-36 ° C) und normothermic (36-37 ° C), MP (NMP) klassifiziert wurden. Je nach dem für MP verwendeten Temperatur, hat die Art der Perfusionsflüssigkeit angepaßt werden und mit steigender Temperatur mehr Sauerstoff zugeführt werden sollte. Die erste klinische Anwendung von MP in menschlichen Lebertransplantation wurde am hypothermen Perfusion ohne aktive Sauerstoffversorgung des Perfusionsflüssigkeit 9,10 basiert. In Tiermodellen hat hypo oxygenierten MP (0-10 ° C) wurde gezeigt, dass schützenden Wirkungen gegen Ischämie / Reperfusion von Lebertransplantationen 11 und eine bessere Konservierung des peribiliären Gefäßplexus von den Gallengängen 12 zur Verfügung zu stellen. Subnormothermic oxygenierten MP bei 20 ° C oder 30 ° C ist auch in Tiermodellen untersucht worden, und es wurde gezeigt, um eine schnellere Genesung von Transplantatfunktion DCD Lebern bereitzustellen, im Vergleich zu 13,14 SCS. Die Machbarkeit subnormothermic Sauerstoff angereichert MP menschlicher Lebern war recständig in einer Reihe von sieben verworfen menschlichen Spenderlebern 15 gemeldet. NMP (37 ° C) ist für die Beurteilung der Transplantatüberlebensfähigkeit und Funktionalität vor der Transplantation 16,17. Darüber hinaus ermöglicht die schrittweise MP Wiedererwärmung des Transplantats vor der Transplantation, die gezeigt wurde, dass die Verwertung und Wiederbelebung des Transplantats 18 zu erleichtern. Die Perfusionsvorrichtung im aktuellen Protokolls für hepatische Perfusion Maschine verwendet ermöglicht Dual Perfusion (über die Pfortader und die Leberarterie) mit zwei Kreiselpumpen, die einen kontinuierlichen Pfortaderflusses und eine pulsierende arterielle Strömung bereitzustellen. Das System ist druckgesteuert, so dass die automatische Regulierung der Strömung durch die Leber, in Abhängigkeit von der intrahepatischen Beständigkeit. Zwei Hohlfasermembran-Oxygenatoren ermöglichen die Sauerstoffversorgung des Transplantats, als auch für die Entfernung von CO 2. Die Temperatur kann auf Basis der beabsichtigten Art der MP (Minimum temperat eingestellt werden<html> ure von 10 ° C). Fluss, Druck und Temperatur werden auf der Vorrichtung in Echtzeit, die eine kontinuierliche Kontrolle der Perfusion Vorgangs angezeigt. Eine neue sterile Einweg-Schlauchsatz, Behälter und Oxygenatoren für die Perfusion von jedem Transplantat (Abbildung 1) zur Verfügung. Das Ziel dieses Artikels ist es, Video eine Schritt für Schritt-Protokoll für ex situ normothermen Maschine Perfusion des menschlichen Spenderlebern mit dieser neu entwickelten Leberperfusion Maschine bereitzustellen. <img alt="Abbildung 1" src="/files/ftp_upload/52688/52688fig1.jpg" /> Figur 1: (A) Eine schematische Zeichnung, (B) ein Foto der Perfusion Maschine (C) eine genauere Ansicht des Oxygenators, und (D) Zentrifugalpumpe zum normothermic Perfusion von menschlichem Spenderlebern verwendet.bekommen = &quot;_ blank&quot;&gt; Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Figur zu sehen.

<table><tbody><tr><td>Leberunterstützung</td><td>Organ Unterstützung</td><td>OA. Li.Li.140</td><td>Perfusionsgerät</td></tr><tr><td>Liver Assist Einwegverpackung</td><td>Organ Assist</td><td>OA. Li.DP.540</td><td>Einweg-Set und Kanülen</td></tr><tr><td>Meredith No.8</td><td>Vygon Nederlands B.V.</td><td>1362082</td><td>Gallengangskanüle</td></tr><tr><td>Humanalbumin 200 g/L / ALBUMAN</td><td>Sanquin</td><td>15522598</td><td>100 ml</td></tr><tr><td>Modifizierte parenterale Ernährung</td><td>Baxter Nederland B.V.</td><td>N14G30E</td><td>7,35 ml</td></tr><tr><td>Multivitamine zur Infusion / CERNEVIT</td><td>Baxter International Inc.</td><td>9800927</td><td>7 &mu; l</td></tr><tr><td>Konzentrierte Spurenelemente zur Infusion / NUTRITRACE</td><td>B. Braun Melsungen AG</td><td>14811332</td><td>7,35 ml</td></tr><tr><td>Metronidazol 5 mg/ml</td><td>Baxter Nederland B.V.</td><td>98181882</td><td>40 ml</td></tr><tr><td>Cefazolin / SERVAZOLIN</td><td>Sandoz B.V.</td><td>15611337</td><td>2 ml</td></tr><tr><td>Schnell wirkendes Insulin</td><td>verschiedener Hersteller</td><td></td><td>20 ml</td></tr><tr><td>Calciumglubionat, intravenöse Lösung 10%, 137,5 mg/ml</td><td>Sandoz</td><td>97038695</td><td>40 ml</td></tr><tr><td>Steril H2O</td><td>Fresenius Kabi Nederland B.V.</td><td>98084453</td><td>51,3 ml</td></tr><tr><td>NaCl 0,9%</td><td>Baxter Nederland B.V.</td><td>15262510</td><td>160 ml</td></tr><tr><td>Heparin 5.000 IE/ml zur intravenösen Verabreichung</td><td>LEO Pharma B.V.</td><td>98026178</td><td>4 ml</td></tr><tr><td>Natriumbicarbonat 8,4%</td><td>B. Braun Melsungen AG</td><td>97973874</td><td>Die Menge hängt vom pH-Wert</td></tr><tr><td>ab Gepackte rote Blutkörperchen (in SAGM)</td><td>Blutbank (Sanquin)</td><td>N0012000</td><td>750 ml</td></tr><tr><td>Frisches gefrorenes Plasma</td><td>Blutbank (Sanquin)</td><td>N04030A0/N04030B0</td><td>900 ml</td></tr></tbody></table>

ex-situ-normothermen maschine perfusion von spenderlebern

Ex Situ Normothermic Machine Perfusion of Donor Livers

Im Gegensatz zu herkömmlichen statischen kalten Konservierung (0-4 ° C), kann ex situ-Perfusion Maschine eine bessere Konservierung von Spenderlebern. Kontinuierliche Perfusion von Organen die Möglichkeit bietet, Organqualität zu verbessern und ermöglicht ex situ Lebensfähigkeit Beurteilung der Spenderlebern vor der Transplantation. Dieses Video Artikel enthält eine Schritt für Schritt-Protokoll für Ex-situ-normothermen Maschine Perfusion (37 ° C) der menschlichen Spenderlebern mit einem Gerät, das einen Druck und Temperatur gesteuert pulsatile Perfusion der Leberarterie und kontinuierliche Perfusion der Pfortader stellt. Die Perfusionsflüssigkeit wird durch zwei Hohlfasermembran-Oxygenatoren mit Sauerstoff angereichert und die Temperatur zwischen 10 ° C und 37 ° C geregelt werden. Während der Perfusion kann die metabolische Aktivität in der Leber als auch der Grad der Schädigung durch die biochemische Analyse von Proben aus der Perfusionsflüssigkeit genommen beurteilt werden. Maschinendurchblutung ist ein sehr vielversprechendes Werkzeugum die Anzahl von Lebern, die zur Transplantation geeignet sind, zu erhöhen.

12 menschliche Lebern, die für die Transplantation aus verschiedenen Gründen abgelehnt wurden, wurden nach dem Erhalt informierte Zustimmung für die Forschung aus Spenderfamilien verwendet. Spender-Eigenschaften sind in Tabelle 2 unter Verwendung des in diesem Dokument beschriebenen Protokoll beschrieben. Die menschlichen Spenderlebern wurden normothermically 6 h perfundiert. Die Qualität der Lebertransplantate wurden durch Überwachung der makroskopische Homogenität Leberperfusion (- D 2A)</stro...

Hier präsentieren wir ein Protokoll beschreibt, sauerstoffreiches ex situ Maschine Perfusion der Spenderleber Transplantate. Dieser Artikel enthält eine Schritt für Schritt-Protokoll zu beschaffen und bereiten den Lebertransplantat für Maschinendurchblutung, bereiten Sie die Perfusionsflüssigkeit, prime die Perfusion Maschine und durchzuführen, mit Sauerstoff angereicherten normothermen Maschine Perfusion des Transplantats.

Ex-situ-normothermen Maschine Perfusion von Spenderlebern

In contrast to conventional static cold preservation (0-4 &#176;C), ex situ machine perfusion may provide better preservation of donor livers. Continuous ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, menschliche spendende Lebertransplantate ex vivo bei Körpertemperatur mittels Maschinenperfusion zu perfundieren. Dies wird erreicht, indem zunächst die notwendige Perfusionsflüssigkeit vorbereitet wird. Der zweite Schritt ist das Spülen des Perfusionssystems, bei dem die verschiedenen Bestandteile der Perfusionsflüssigkeit der Maschine zugeführt werden.Gleichzeitig wird das beschaffte Lebertransplantat am Nebentisch vorbereitet, um an die Perfusionsvorrichtung angeschlossen zu werden. Im letzten Schritt wird die Leber mit der Perfusionsvorrichtung verbunden und die normotherme Perfusion gestartet. Schließlich dienen Änderungen der arteriellen und portalen Flüsse, die auf den Bildschirmen angezeigt werden, zur Beurteilung der Hämodynamik der Leber, und die Blutgasanalyse von Proben, die aus dem arteriellen Perfusionsfluid entnommen wurden, dient zur Überwachung des pH-Werts und der Oxygenierung des Perfusionsfluids.Der Hauptvorteil dieser Technik gegenüber der herkömmlichen Methode der statischen Lagerung besteht darin, dass eine Leber bei Körpertemperatur außerhalb des menschlichen Körpers am Leben erhalten wird. Der Transplantat wird Sauerstoff und Nährstoffe zugeführt, wodurch es metabolisch aktiv bleibt. Dies trägt dazu bei, Ischämie- und Reperfusionsschäden sowie kältebedingte Verletzungen zu verringern. Und da die Leber bei 37 Grad metabolisch aktiv ist, können Sie die Vitalität des Transplantats vor der Transplantation beurteilen. Das Verfahren der exzirkierten maschinellen Perfusion eines menschlichen Lebertransplantats wird Schritt für Schritt von Alex Mehan demonstriert, einem Doktoranden in meinem Labor. Um dieses Verfahren zu beginnen, fügen Sie die Bestandteile der Perfusionsflüssigkeit über den Anschluss an der Oberseite des Oxygenators in die Maschine ein.Das Perfusionsfluid besteht aus menschlichen gepackten roten Blutkörperchen, frischem gefrorenem Plasma, menschlichem Albumin und anderen Bestandteilen. Schalten Sie die Venus- und arteriellen Pumpen ein. Befolgen Sie die Anweisungen des Herstellers auf dem Bildschirm, um die Pumpenleistung auf beiden Seiten zu erhöhen.Entfernen Sie systematisch alle Luftblasen aus dem geschlossenen System. Nullen Sie das Druckmessgerät gegenüber dem atmosphärischen Druck an, indem Sie den Anweisungen auf dem Bildschirm folgen. Dies stellt sicher, dass der während der Perfusion gemessene Druck der tatsächliche Druck auf der Ebene der Vena porta ist.Stellen Sie die Solltemperatur des Geräts auf der Portalseite auf 37 Grad ein. Stellen Sie den mittleren portalen venösen Druck auf 11 Millimeter Quecksilbersäule ein. Wiederholen Sie den Druckausgleichsvorgang auf der arteriellen Seite des Geräts.Stellen Sie die Temperatur auf 37 Grad und den mittleren arteriellen Druck auf 70 Millimeter Quecksilber ein. Beginnen Sie die Sauerstoffanreicherung unter Verwendung von Carbogen mit einer Durchflussrate von vier Litern pro Minute. Die Luftzufuhr wird auf die beiden Oxygenatoren verteilt, was einen Sauerstoffdruck von etwa 60 Kilopascal in der Perfusionsflüssigkeit bewirken sollte.Für längere Perfusionen ist es ratsam, separate Quellen für Sauerstoff und Kohlendioxid zu verwenden. Dies ermöglicht kleine Anpassungen am Verhältnis von Sauerstoff zu Kohlendioxid, die genutzt werden können, um den pH-Wert sowie den Kohlendioxidpartialdruck der Perfusionsflüssigkeit einzustellen.Überprüfen Sie den pH-Wert der Perfusionsflüssigkeit durch eine Blutgasanalyse. Vor der Probenahme müssen etwa drei Milliliter Perfusionsflüssigkeit verworfen werden, da diese Flüssigkeit im peripheren Schlauchsystem steht und nicht die Perfusionsflüssigkeit im eigentlichen System repräsentiert. Entfernen Sie alle Luftblasen aus der Blutgasprobe.Fügen Sie eine 8,4 %ige Natriumbikarbonatlösung zur Erhöhung der Pufferkapazität hinzu, wobei ein physiologischer pH-Wert angestrebt wird. Üblicherweise werden 15 bis 30 Milliliter der 8,4 %igen Natriumbikarbonatlösung zugegeben. Zu diesem Zeitpunkt wird die Spenderleber im Spenderkrankenhaus mit der Standardtechnik der in-situ-Kühlung entnommen und mit kalter Konservierungsflüssigkeit durchgespült, um die Kanülierung der Arterie zu erleichtern.Ein Segment der supra-trunkalen Aorta sollte unmittelbar nach Eintreffen der Spenderleber im Operationssaal des Maschinenperfusionszentrums am Leberarterienstamm belassen werden; beginnen Sie dann das Rücktisch-Verfahren. Entnehmen Sie eine Probe von mindestens 10 Milliliter der Konservierungsflüssigkeit zur mikrobiologischen Untersuchung. Der Ductus cysticus der Leber wurde während der Entnahme im Spenderkrankenhaus mit einer chirurgischen Schere ligiert; entfernen Sie die diaphragmatischen Anhänge im nackten Bereich der Leber sowie jegliches verbliebene Herzmuskelgewebe vom oberen Venen-Cava-Konus.Unter Verwendung von Präzisionsscheren die Arterie und die Pfortader präparieren. Die Seitenäste mit chirurgischen Nahtmaterialien oder Hemo-Clips abbinden. Das distale Ende des aortalen Supratrunksegments mit einer nicht resorbierbaren Monofilenaht, beispielsweise 3.0 Proline, verschließen.Arterielle Kanüle in das proximale Ende der Aorta supra truncal einführen und mit Nähten fixieren. Anschließend venöse Kanüle in die Pfortader einführen und mit Nähten sichern. Die Lebervene sollte ungekanüliert bleiben.Spülen Sie den Gallengang mit der Konservierungslösung aus. Führen Sie einen Silikonkatheter in den Gallengang ein und sichern Sie ihn mit Nähten. Führen Sie den Katheter nicht zu tief in den Gallengang ein, da dies eine Verletzung des bilären Epithels verursachen kann.Schließlich spülen Sie die Leber über die Portadvenenkanüle mit einer 0,9 %igen Kochsalzlösung aus. Wenn das Transplantat in Universität-von-Wisconsin-Lösung konserviert wurde, spülen Sie es mit zwei Litern kalter Kochsalzlösung und anschließend mit einem halben Liter warmer Kochsalzlösung aus. Wenn das Transplantat in HTK-Lösung konserviert wurde, spülen Sie die Leber mit einem Liter kalter Kochsalzlösung und danach mit einem halben Liter warmer Kochsalzlösung aus, um die Vorbereitung auf die Maschinenperfusion abzuschließen.Positionieren Sie zunächst die Leber in der Organkammer mit der Vorderseite nach unten. Verbinden Sie die Leber unverzüglich mit der vorgefüllten Perfusionsvorrichtung, indem Sie die Pfortader-Kanüle mit dem Pfortader-Zulaufrohr der Vorrichtung und die arterielle Kanüle mit dem arteriellen Zulaufrohr der Vorrichtung verbinden. Der kritischste Aspekt dieses Protokolls besteht darin, die Pfortader und die hepatische Arterie-Kanülen korrekt mit der Perfusionsvorrichtung zu verbinden.Die ausreichende Perfusion sollte unmittelbar danach beginnen. Starten Sie die Perfusion sowohl an der portalen als auch an der arteriellen Seite, indem Sie die Anweisungen des Herstellers auf dem Bildschirm befolgen. Im Fall einer Knickung der Schläuche und/oder eines hohen intrahepatischen Widerstands kann ein Druckalarm ausgelöst werden.Überprüfen Sie den mittleren arteriellen Druck und den mittleren portalen venösen Druck und stellen Sie diese gegebenenfalls erneut ein. Achten Sie auf die Bileproduktion des metabolisch aktiven Transplantats und auf die pulsierende Leberarterie während der normalen themischen Maschinenperfusion. Schließen Sie während der Perfusion die Organkammer mit der sterilen Abdeckung, die zu verschiedenen Zeitpunkten zur Verfügung gestellt wird.Entnehmen Sie Proben der Perfusionsflüssigkeit zur sofortigen Analyse von Blut-, Gas- und biochemischen Parametern mit einer neuen Ein-Milliliter-Spritze. Aspirieren Sie für jede Probe die Perfusionsflüssigkeit aus den Probennahmeanschlüssen, die zum Einweg-Schlauchsystem des Perfusionsgeräts gehören. Verwerfen Sie auch hier vor der eigentlichen Probenentnahme einige Milliliter Perfusionsflüssigkeit.Entfernen Sie umgehend alle Luftblasen aus der Spritze. Setzen Sie die Ein-Milliliter-Spritze in den Blutgasanalysator ein und befolgen Sie die Herstelleranweisungen zur Analyse von Blutgas- und biochemischen Parametern. Nehmen Sie Proben des Perfusionsfluids für spätere Analysen ent.Überführen Sie sie in Blutentnahmeröhrchen und lagern Sie sie auf schmelzendem Eis. Zentrifugieren Sie die Proben bei 1400 × g und vier Grad Celsius für fünf Minuten. Sammeln Sie das Plasma aus der Perfusionsflüssigkeit, gefrieren Sie es ein und lagern Sie es bei minus 80 Grad Celsius für spätere biochemische Analysen, um die Menge an Transplantatschädigung zu bewerten und die Qualität der Leber während der Perfusion zu beurteilen.Überwachen Sie die makroskopische Homogenität der Leber. Dargestellt ist eine Leber vor der Perfusion sowie 30 Minuten und sechs Stunden nach Beginn der normothermen maschinellen Perfusion. Die Hämodynamik der Lebern wurde durch die Überwachung der Veränderungen des arteriellen und portalen Flusses während der normothermen maschinellen Perfusion beurteilt.Ein anfänglicher Anstieg und anschließende Stabilisierung der Strömungen weist auf eine stabile Hämodynamik der Lebern während der Fusion hin. Die Blutgasanalyse diente der Überwachung der Sauerstoffversorgung des Perfusionsmediums und des Abtransports von Kohlendioxid. Eine Sauerstoffanreicherung mit Carbogen mit einem Durchfluss von vier Litern pro Minute führte zu einer kontinuierlichen Sauerstoffsättigung von 100 %. Die Produktion von Gallenflüssigkeit wurde als Indikator für die Leberfunktion herangezogen.Eine Zunahme der Konzentration von Gesamtbilirubin und Bicarbonat zeigte eine Verbesserung der Qualität der produzierten Galle an. Es wurde eine allmähliche Verdunkelung der Gallenfarbe beobachtet. Im Laufe der Zeit.Stabile Konzentrationen von Leberschadensmarkern wie alkalischer Phosphatase, Gamma-GT und Kalium in der Perfusionsflüssigkeit spiegelten eine minimale Schädigung der Transplantate wider. Darüber hinaus zeigten histologische Untersuchungen des Lebergewebes und des distalen Endes des extrahepatischen Gallengangs während der normothermen maschinellen Perfusion keine zusätzlichen Schäden an den Transplantaten. Die peribiliale Drüsen und die Gefäßversorgung sind gekennzeichnet.Nachdem Sie dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie man die normale maschinelle Perfusion eines menschlichen Lebertransplantats durchführt. Diese Technik bietet das Potenzial, die Vitalität des Transplantats vor der Transplantation zu verbessern und zu bewerten.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Medicine

Medizin

Rand Transplantate, wie Fettleber, Transplantate von älteren Spendern oder Lebern nach Herztod (DCD) abgerufen tolerieren herkömmlichen, Kälte statische Speicher nur schlecht. Wir entwickelten ein neuartiges Modell der subnormothermic ex vivo Perfusion der Leber für die Erhaltung, Bewertung und Instandsetzung von Randlebertransplantationen vor der Transplantation.

Technik der Subnormothermic<em&gt; Ex-vivo-</em&gt; Leberperfusion für die Lagerung, Bewertung, Reparatur von Marginal Lebertransplantate

Wir beschreiben ein Verfahren zur ex vivo-Maschine Perfusion von menschlichen Lebertransplantate in subnormothermic Temperatur (21 ° C).

Funktionale Menschliche Leber Erhaltung und Rückgewinnung mittels Subnormothermic Maschine Perfusion

Die schwere Organmangel hat zu einer erhöhten Nutzung von Grenznierentransplantate zur Transplantation geführt. Dies hat das Interesse an alternativen Speichermethoden ausgelöst, da marginal Transplantate besonders vertragen Kältespeicher schlecht. Die Technik der normothermen ex vivo Nierendurchblutung (NEVKP) stellt eine neuartige Konservierungsverfahren für Nierentransplantate vor der Transplantation.

Normothermen<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Kidney Perfusion für die Erhaltung der Nierentransplantate vor der Transplantation

Fehlt ein wichtiger Leber Geber, und Kriterien für die Leber Spender wurden erweitert. Normothermic ex Vivo Leber Perfusion (NEVLP) wurde entwickelt, um zu bewerten und Organfunktion zu ändern. Diese Studie zeigt einem Rattenmodell der NEVLP und testet, ob der pegylierten-Katalase, um Verletzungen der Leber Erhaltung zu mildern.

Ein kleines Tier Modell der Ex Vivo Normothermic Leber Perfusion

In dieser Arbeit stellen wir ein Bewertungsprotokoll eines heterotopisch implantierten Herzens nach normothermer ex situ Konservierung im Rattenmodell vor.

Rattenmodell der normothermischen Ex-situ-perfundierten heterotopen Herztransplantation

Das hier beschriebene Schweinemodell der normothermen maschinellen Perfusion (NMP) der Leber kann erfolgreich zur Untersuchung von NMP als Konservierungsstrategie, als Instrument zur Bewertung der Lebensfähigkeit und als Plattform für die Organreparatur eingesetzt werden. Es hat einen hohen translationalen Wert, ist jedoch technisch anspruchsvoll und arbeitsintensiv.

Normothermische isolierte Leberperfusion bei Schweinen

Für die Leber von Mäusen wurde ein normothermisches ex vivo Leberperfusionssystem (NEVLP) entwickelt. Dieses System erfordert Erfahrung in der Mikrochirurgie, ermöglicht aber reproduzierbare Perfusionsergebnisse. Die Möglichkeit, Mäuselebern zu verwenden, erleichtert die Untersuchung molekularer Signalwege zur Identifizierung neuartiger Perfusat-Additive und ermöglicht die Durchführung von Experimenten, die sich auf die Reparatur von Organen konzentrieren.

Normotherme ex vivo Lebermaschinenperfusion bei Mäusen

Dieses Protokoll beschreibt die Methodik zur Etablierung eines Schweinemodells unter Verwendung einer variablen temperaturgesteuerten maschinellen Perfusion (MP) zur Erhaltung der Spenderleber, gefolgt von einer orthotopen Lebertransplantation (OLTx). Ziel ist es, die Erfolgsrate von OLTx mittels Spenderspende nach Kreislauftod (DCD) Leber zu fördern und ein stabiles Modell zu etablieren.

Erhalt der Schweinespendeleber nach zirkulatorischem Tod (DCD) durch Perfusion und orthotope Lebertransplantation

Dieses Protokoll beschreibt die ex-vivo normotherme maschinelle Perfusion einer Rattenniere zur anschließenden Transplantation in eine Empfängerratte.

Normothermic Machine Perfusion der Rattennieren für Transplantationen

Hier stellen wir ein Protokoll für ein quelloffenes, modifizierbares normothermisches ex vivo-Perfusionssystem vor, das entwickelt wurde, um die hohen Kosten und die begrenzte Flexibilität bestehender Plattformen zu überwinden und einen zugänglicheren, kosteneffizienteren und iterativen Einsatz in der präklinischen biomedizinischen Forschung zu ermöglichen.

Ein Open-Source-Normotherm-Perfusionssystem, das für Forschungswissenschaftler entwickelt wurde

Lernen Sie die normotherme Maschinenperfusion menschlicher Spenderlebern für die Transplantationsforschung. Diese Methode ermöglicht die Bewertung der Lebervitalität außerhalb des Körpers und reduziert ischämische Schäden.

Ex-situ-normothermen Maschine Perfusion von Spenderlebern

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