Name: Isolierung von mononukleären Zellen aus dem zentralen Nervensystem von Ratten mit EAE (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-12-04T04:23:00.000+00:00
Duration: 20 min 51 s
Description: Erfahren Sie die Isolierung mononukleärer Zellen aus dem ZNS von Ratten mit EAE. Diese Methode nutzt Herzkatheter-Perfusion und Dichtegradientenzentrifugation für immunologische Analysen.

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<ol><li> Tief betäuben Ratten. Spray mit 70% Ethanol und machen Sie einen kardialen Perfusion mit PBS für 10 min, um Zellen aus den Blutgefäßen (cut dem rechten Vorhof und perfuse durch den linken Ventrikel) zu entfernen. </li><li> Entfernen Sie die Gehirn und Rückenmark und in ein 50 ml Röhrchen mit eiskaltem PBS. Schneiden Sie die Gehirn und Rückenmark in einem 70 mm Zellsieb in einer 10 cm Petrischale mit 10 ml eiskaltem PBS gelegt. Drücken Sie jedes Stück Orgel durch die Zelle Sieb mit der Rückseite einer sterilen 1 ml Spritzenkolben. Sammeln Sie die einzelnen Zellsuspension in ein 50 ml Röhrchen auf Eis. Waschen Sie die Zell-Sieb mit PBS und fügen Sie die Röhre, bis die Lösung klar ist. </li><li> Zentrifuge für 8-10 min bei 390 g. </li><li> Resuspendieren der Zellen in 20 ml PBS + 30% Percoll und Overlay auf 10 ml PBS + 70% Percoll. </li><li> Zentrifugation bei 390 g für 20 min bei Raumtemperatur. </li><li> Entfernen Sie das Fett am oberen Ende der Röhre. Sammeln Sie die Zellen aus der Schnittstelle und zwei Waschgänge mit PBS. Count. </li></ol>

<ol><li>Beeton, C., Chandy, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+and+clinical+scoring+of+chronic-relapsing+experimental+autoimmune+encephalomyelitis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Induction and clinical scoring of chronic-relapsing experimental autoimmune encephalomyelitis.</a> Journal of Visualized Experiments. 5, Forthcoming.</li>
</ol>

Dieses Verfahren, da alle Verfahren mit lebenden Tieren, muss von Ihrer Institution Tier Nutzung und Pflege Ausschuss genehmigt werden. Wir empfehlen, einen Tierarzt oder eine tierärztliche Techniker anwesend sein bei der Durchführung der ersten Herz-Infusionen auf ein ausreichendes Niveau der Anästhesie zu gewährleisten ist, um das Tier vor und während des Verfahrens gegeben, und dass die Tiere nicht unterziehen unnötige Schmerzen oder Leiden.

<table><tbody><tr><td>PBS, 1x, steril</td><td>Reagenz</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>14190-250</td><td></td></tr><tr><td>Zellsieb, 70 µm</td><td>Werkzeug</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-771-2</td><td></td></tr><tr><td>Percoll</td><td>Reagenz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1644</td><td></td></tr></tbody></table>

isolierung von mononukleären zellen aus dem zentralen nervensystem von ratten mit eae

Isolation of Mononuclear Cells from the Central Nervous System of Rats with EAE

Ob das Studium eine Autoimmunerkrankung gerichtet an das zentrale Nervensystem (ZNS), wie experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis (EAE, 1), oder die Immunantwort auf eine Infektion des ZNS, wie Kinderlähmung, Lyme Neuroborreliose oder Neurosyphilis, ist es oft notwendig, um die ZNS-infiltrierenden Immunzellen zu isolieren. In diesem Video-Protokoll zeigen wir, wie man mononukleären Zellen (MNC) aus dem ZNS der Ratte mit EAE zu isolieren. Der erste Schritt dieses Verfahrens erfordert eine kardiale Perfusion der Nager mit einer Kochsalzlösung, um sicherzustellen, dass kein Blut in den Blutgefäßen Bewässerung des ZNS bleibt. Jede Kontamination mit Blut wird künstlich erhöhen die Anzahl der scheinbaren ZNS-infiltrierenden multinationalen Unternehmen und kann die scheinbare Zusammensetzung des Immunsystems zu infiltrieren ändern. Wir haben dann zeigen, wie das Gehirn und das Rückenmark der Ratte für nachfolgende Kanalkrümmung entfernen, um ein Single-Cell-Suspension herzustellen. Diese Suspension wird auf einem Zwei-Schicht-Percoll-Gradienten getrennt, um die Multis zu isolieren. Nach dem Waschen werden diese Zellen dann bereit, alle erforderlichen Verfahren zu unterziehen. Mononukleären Zellen isoliert mit diesem Verfahren sind lebensfähig und können für die Elektrophysiologie, Durchflusszytometrie (FACS), oder der Biochemie eingesetzt werden. Wenn die Technik unter sterilen Bedingungen durchgeführt wird (unter Verwendung von sterilen Instrumenten in einer Gewebekultur Haube) können die Zellen auch in Gewebekultur gezüchtet werden. Eine bestimmte Zellpopulation kann weiter gereinigt werden entweder mit magnetischen Trennverfahren oder eine FACS.

In diesem Video zeigen wir, wie man mononukleären Zellen aus dem zentralen Nervensystem von Ratten mit experimenteller autoimmuner Enzephalomyelitis isolieren.

Isolierung von mononukleären Zellen aus dem zentralen Nervensystem von Ratten mit EAE

Ob man nun eine gegen das Zentralnervensystem (ZNS) gerichtete Autoimmunerkrankung untersucht, wie die experimentelle autoimmune Enzephalomyelitis (EAE, 1), oder die ...

Okay. Hallo, ich bin Christine Beaton. Ich bin wissenschaftliche Mitarbeiterin im Labor von George Chen am Department für Physiologie und Biophysik der University of California Irvine. Heute zeige ich Ihnen, wie man mononukleäre Zellen aus dem zentralen Nervensystem von Ratten isoliert.Bei diesem Verfahren wird die Ratte tief anästhesiert, um eine Herzperfusion durchzuführen, sodass keine kontaminierenden Blutbestandteile im zentralen Nervensystem verbleiben. Danach entnehmen wir das Gehirn, isolieren das Rückenmark und stellen eine Einzelzell-Suspension mithilfe eines Zellsiebs her. Anschließend werden wir die mononukleären Zellen mittels eines zweilagigen Percoll-Gradienten isolieren. Beginnen wir also.Ich bin nun bereit, die Herzperfusion durchzuführen, daher werde ich nun alle Materialien zeigen, die ich dafür benötige. Das Erste, was wir brauchen, ist ein Bell-Glas, und darunter haben wir mit flüchtigem Anästhetikum getränkte Papiertücher platziert. Sie können Halan oder Isofluran verwenden.Als Nächstes benötigen wir etwas, um die Ratte zu halten, und etwas, um das Blut zu sammeln. Dazu verfügen wir über diese provisorische Vorrichtung zur Perfundierung der Ratten. Sie verwend

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Forschung

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Biology

Biologie

Der aktuelle Artikel beschreibt eine schnelle Protokoll zur effizienten Isolierung mononukleärer Zellen aus Gehirn und Rückenmark Gewebe, die effektiv für den durchflusszytometrischen Analysen genutzt werden können.

Isolierung von Brain and Spinal Cord mononukleären Zellen mit Percoll Gradienten

In diesem Video führen wir die Isolierung von mononukleären Zellen aus dem Gehirn einer Maus mit Hilfe der Dichtegradientenzentrifugation durch. Die isolierte mononukleäre Zellsuspension kann für weitere nachgelagerte Analysen verwendet werden.

Isolierung mononukleärer Zellen aus dem Gehirn von Mäusen: Eine Dichtegradienten-Zentrifugationstechnik zur Isolierung von im Gehirn ansässigen mononukleären Zellen

Dieses Video zeigt den Prozess der Isolierung von Gehirn-Mikrogefäßen von euthanasierten Ratten. Es umfasst die Dissektion des Gehirns, die Reinigung des Gewebes und die mechanische Verdauung, gefolgt von einer wiederholten Zentrifugation, um die reine Fraktion der Mikrogefäße zu isolieren.

Eine Methode zur Isolierung neurovaskulärer Einheiten aus dem Gehirn von Ratten

Dieses Manuskript beschreibt die Methoden zur Induktion und Bewertung des experimentellen Modells der autoimmunen Enzephalomyelitis (EAE), zusammen mit der Beurteilung der Immunzellverteilung und der mRNA-Zytokinspiegel in Lymphknoten, Milz, Blut und Rückenmark mittels Durchflusszytometrie bzw. quantitativer PCR in verschiedenen Krankheitsstadien.

Die Induktion der experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis bei Mäusen und die Auswertung des Krankheitsabhängige Verteilung von Immunzellen in verschiedenen Geweben

Bemühungen, Mikroglia-Funktion im Detail zu verstehen haben durch das Fehlen von Mikroglia Kultur Modelle behindert worden, die die Eigenschaften der Reifen in Vivo Mikroglia rekapitulieren. Dieses Protokoll beschreibt einen Isolation und Kultur Ansatz entwickelt, um robuste überleben stark verzweigten Reife Ratte Mikroglia Bedingungen definiert-Mittel zu erhalten.

Isolation und Kultur von Nagetier Microglia zur Förderung einer dynamisches verzweigt Morphologie in serumfreien Medium

Ziel dieses Protokolls ist es, Mikrogefäße aus mehreren Regionen des zentralen Nervensystems von lissenzephalischen und gyrencephalen Wirbeltieren zu isolieren.

Zuverlässige Isolierung von Mikrogefäßen des zentralen Nervensystems über fünf Wirbeltiergruppen hinweg

Wir bieten ein Protokoll zur Isolierung von Mikroglia aus verschiedenen sezierten Regionen einer erwachsenen Maushirnhälfte, gefolgt von halbautomatischer Bibliotheksvorbereitung für die tiefe einzelzellige RNA-Sequenzierung von Transkriptomen in voller Länge. Diese Methode wird dazu beitragen, die funktionelle Heterogenität von Mikroglia bei Gesundheit und Krankheit aufzuklären.

Isolierung von regionsspezifischer Mikroglia von einer Erwachsenenmaus Gehirnhälfte für tiefe einzellige RNA-Sequenzierung

Dieses Manuskript stellt ein Protokoll zur Induzieren von aktiver experimenteller Autoimmunenzephalomyelitis (EAE) bei Mäusen dar. Eine Methode zur Isolierung und Charakterisierung der infiltrierten Lymphozyten im Zentralnervensystem (ZNS) wird ebenfalls vorgestellt, um zu zeigen, wie Lymphozyten an der Entwicklung einer CNS-Autoimmunerkrankung beteiligt sind.

Flow Cytometric Analyse der Lymphozyteninfiltration im Zentralnervensystem während der experimentellen Autoimmunenzephalomyelitis

Eine Methode zur Isolierung von neuralen Stammzellen und Oligodendrozyten-Vorläuferzellen aus dem Gehirn lebender Ratten wird hier experimentell detailliert vorgestellt. Es ermöglicht die mehrfache Entnahme dieser Zellen von denselben Tieren, ohne ihr Wohlbefinden zu beeinträchtigen.

Die "Brain Milking"-Methode zur Isolierung von neuralen Stammzellen und Oligodendrozyten-Vorläuferzellen aus lebenden Ratten

Diese Forschung skizziert zwei Techniken zur Isolierung reichlich neutrophiler extrazellulärer Fallen (NETs) aus dem Knochenmark von Ratten. Eine Methode kombiniert ein kommerzielles Neutrophilen-Isolationskit mit einer Dichtegradientenzentrifugation, während die andere nur eine Dichtegradientenzentrifugation verwendet. Beide Ansätze liefern funktionelle NETs, die die von peripheren Blutneutrophilen übertreffen.

Einzigartiger Ansatz zur Isolierung von Neutrophilen im Knochenmark von Ratten mit vergleichbarer Kapazität

Bis heute sind Protokolle für die gleichzeitige Isolierung aller wichtigsten Zelltypen des Zentralnervensystems aus derselben Maus ein ungedeckter Bedarf. Das Protokoll zeigt ein Verfahren, das in naiven und experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis-Mäusen angewendet werden kann, um komplexe zelluläre Netzwerke während der Neuroinflammation zu untersuchen und gleichzeitig die erforderliche Anzahl von Mäusen zu reduzieren.

Gleichzeitige Isolierung der wichtigsten Zelltypen des Zentralnervensystems aus adulten Autoimmun-Enzephalomyelitis-Mäusen

Erfahren Sie die Isolierung mononukleärer Zellen aus dem ZNS von Ratten mit EAE. Diese Methode nutzt Herzkatheter-Perfusion und Dichtegradientenzentrifugation für immunologische Analysen.

Isolierung von mononukleären Zellen aus dem zentralen Nervensystem von Ratten mit EAE

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