Morris Wasser-Labyrinth-Test: Optimierung für Mausstamm und Testumgebung

Das Ziel dieses Verfahrens ist es, kognitive Defizite in einem Mausmodell der Alzheimer-Krankheit durch die Verwendung eines Morris-Wasserlabyrinth-Protokolls zu identifizieren, das auf die Verwendung mit dem 1 2 9 6 FBB-Hintergrundstamm zugeschnitten ist. Dies wird erreicht, indem die Mäuse zunächst an die Aufgabe gewöhnt werden, stressbedingte Leistungsdefizite zu lindern. Der zweite Schritt besteht darin, die visuelle Plattformaufgabe zu verwenden, bei der eine Plattform einen Zentimeter über die Wasserlinie angehoben wird, um die visuelle und motorische Funktion zu beurteilen.

Als nächstes werden die Versuche mit versteckten Plattformen durchgeführt, bei denen die Plattform fünf Millimeter unter die Wasseroberfläche getaucht wird. Der letzte Schritt besteht darin, Testversuche zu verwenden, bei denen die Plattform entfernt wird, um den Raumbezugsspeicher zu bewerten und die Art der verwendeten Suchstrategie zu bestimmen. Letztendlich ermöglicht dieses maßgeschneiderte Wasser-MAs-Verfahren die Beurteilung des räumlichen Lernens und des Gedächtnisses in einem häufig verwendeten Mausmodell der Alzheimer-Krankheit.

Im Allgemeinen werden Personen, die neu in dieser Methode sind, Schwierigkeiten haben, da sie die Testverfahren optimieren müssen, wie z. B. die Anzahl der Trainingsversuche und Sonden, die basierend auf der Hintergrundbelastung der Mauslinie und der Umgebung, in der die Mäuse getestet werden, verwendet werden. Dieser Teil des Verfahrens gewöhnt die Mäuse an das Ein- und Ausziehen des Ziehens. Stellen Sie zunächst die Box so auf, dass sie auf eine angenehme Höhe angehoben ist, und füllen Sie sie mit zwei Litern Wasser bei einer Temperatur von 21 Grad Celsius und einer Höhe von etwa einem Zentimeter.

Nachdem Sie die Mäuse in den Testraum gebracht haben, nehmen Sie eine Versuchsperson aus dem Käfig, überprüfen Sie die Identifizierung der Versuchsperson und markieren Sie dann den Schwanz mit einem ungiftigen Permanentmarker, um ihn von Mäusen zu unterscheiden, die das Verfahren nicht durchlaufen haben. Legen Sie eine Maus etwa fünf Sekunden lang in das Transferbecherglas. Gießen Sie dann die Maus vorsichtig aus dem Becherglas in das Vorbehandlungsbecken und halten Sie die Maus 20 Sekunden lang in das Becken.

Legen Sie nach Ablauf der Zeit vorsichtig eine Schaufel vor die Maus, ohne sie anzuwinkeln. Lassen Sie die Maus in die Schaufel eindringen und erkunden Sie sie. Ermutigen Sie die Maus bei Bedarf, auf die Schaufel zu steigen, indem Sie die Schaufel vorsichtig unter die Maus schieben, während Sie sie langsam anheben. Achten Sie darauf, die Mäuse nicht mit der Schaufel zu erschrecken.

Wiederholen Sie diese Verfahren für jede Maus im Käfig 10 Tage lang einmal täglich. Nehmen Sie nach jedem Tier Kotboli und Einstreu aus dem Pool, wobei Sie ein Netz verwenden, das als Transferbecher zwischen den Käfigen dient. Führen Sie an den Testtagen eins, zwei und drei sichtbare Schulungen mit sechs Versuchen pro Tag und ca. 10 Minuten zwischen den einzelnen Versuchen durch.

Richten Sie zunächst die Software zur Überwachung der Mausleistung ein und erstellen Sie die Lauftabellen gemäß den Anweisungen im Textteil des Protokolls. Sobald die Software konfiguriert ist, richten Sie den Raum ein, indem Sie zuerst Vorhänge aufhängen, so dass alle räumlichen Hinweise verdeckt werden. Stellen Sie anschließend die Wanne auf, indem Sie sie mit 21 Grad Celsius heißem Leitungswasser füllen.

Stellen Sie mit einem Thermometer sicher, dass die Wassertemperatur innerhalb eines Grades dieser Temperatur bleibt. Während des gesamten Tests. Platzieren Sie die Plattform, auf der eine Flagge montiert ist, die eine Höhe von 13 Zentimetern erreicht und 4,5 x 4,5 Zentimeter groß ist und auf der ein fettes S-förmiges Zeichen eingeprägt ist, an der ersten vorgegebenen Stelle der Wanne, so dass sie sich etwa einen Zoll über der Wasseroberfläche erhebt.

Nimm nun die erste Maus aus dem Käfig. Überprüfen Sie die Identifizierung des Motivs, markieren Sie den Schwanz mit einem Permanentmarker in der richtigen Farbe und legen Sie ihn in ein Transferbecherglas. Setzen Sie die Maus vorsichtig in die Wanne.

Starten Sie den Timer und stellen Sie sicher, dass die Ortungssoftware das Tier verfolgt. Warten Sie bis zu zwei Minuten, bis die Maus die Plattform gefunden hat. Sobald die Maus die Plattform lokalisiert hat, lassen Sie die Maus 20 Sekunden auf der Plattform.

Wenn das Tier die Plattform innerhalb von zwei Minuten nicht findet, schaufeln Sie die Maus und platzieren Sie sie 20 Sekunden lang auf der Plattform. Entfernen Sie die Maus nach 20 Sekunden auf der Plattform von der Plattform, wie es beim Akklimatisierungstraining der Fall ist, und legen Sie sie in einen beheizten Käfig, der mit Papiertüchern ausgekleidet und mit einem Heizkissen und einer Wärmelampe 30 Sekunden lang auf ca. 31 Grad Celsius erwärmt wird. Bringen Sie dann die Maus in den Käfig, mit nur einem Heizkissen, aber ohne Wärmelampe, um sich zwischen den Versuchen zu erholen.

Nachdem Sie die Wanne mit einem Netz von Schmutz gereinigt haben, wiederholen Sie diese Schritte für jede Maus in der Gruppe. Wenn jede Maus abgeschlossen ist, bewegen Sie die Plattform an die zweite vorher festgelegte Position. Führen Sie von Tag vier bis 10 nach dem Aufhängen von Vorhängen Schulungen für versteckte Plattformen durch.

Platzieren Sie die Hinweise wie zuvor strategisch auf den Vorhängen. Stellen Sie sicher, dass die Queues groß sind und kontrastierende Farben für eine bessere Sichtbarkeit enthalten, und dass sie auf Entfernung und Höhe eingestellt sind, wo sie für Mäuse aus der Wanne sichtbar sind. Konfigurieren Sie die Software gemäß den Anweisungen im schriftlichen Teil des Protokolls.

Sie dann die Wanne auf, indem Sie sie zuerst mit Wasser füllen, so dass sich die Plattform etwa fünf Millimeter unter der Wasseroberfläche befindet. Platzieren Sie die Plattform an der vorgegebenen Stelle. Der Standort der Plattform bleibt derselbe, da sie fast an allen Tagen und in der Testphase getestet wird.

It.It ist wichtig, den Startort so zu variieren, dass die Tiere keine nicht-räumliche, nicht hippocampus-motorische Strategie entwickeln. Um das Labyrinth zu lösen, verwende ungiftige weiße temperierte Farbe, um das Wasser undurchsichtig zu machen. Tun Sie dies, um sicherzustellen, dass die Oberseite der Plattform beim Schwimmen für die Augenhöhe des Tieres unsichtbar ist.

Nachdem Sie die Mäuse zuvor identifiziert und markiert haben, gießen Sie die Maus vorsichtig in das Labyrinth, so dass der HNO zur Wand zeigt. Jede Maus wird für eine einzigartige Testversion am selben Startort platziert. Starten Sie bei der ersten Freigabe der Maus den Timer und stellen Sie sich in einen Bereich, in dem der Tester für die Mäuse nicht leicht sichtbar ist.

Sobald das Tier die Plattform erreicht hat, lassen Sie es 15 Sekunden lang auf der Plattform bleiben, um seine räumliche Position im Raum auszurichten. Wenn die Maus die Plattform nicht innerhalb von 60 Sekunden findet, nehmen Sie die Maus vorsichtig und platzieren Sie sie auf der Plattform. Nach 15 Sekunden auf der Plattform nimmst du die Maus aus dem Labyrinth und bringst sie in den beheizten Käfig zurück.

Nachdem Sie das Labyrinth zuvor von Schmutz gereinigt haben, wiederholen Sie diese Verfahren für die verbleibenden Mäuse in der Gruppe. Führen Sie daher für die Testtage vier bis neun pro Tag vier Versuche mit Schulungen für versteckte Plattformen durch, wobei zwischen den einzelnen Versuchen etwa 20 Minuten liegen. Führen Sie Probe-Versuche vor dem Plattformtraining am sechsten, siebten und achten Tag und dem abschließenden Probe-Test durch.

Führen Sie an Tag 10 die Sondenversuche auf ähnliche Weise wie beim Training mit versteckten Plattformen durch, mit der Ausnahme, dass sich keine Plattform im Labyrinth befindet. Lassen Sie eine Maus von einem vorher festgelegten Auslösepunkt los und lassen Sie die Maus 60 Sekunden im Labyrinth schwimmen Nach dem Sondenversuch an Tag 10 werden während der Sondenversuche keine weiteren Versuche durchgeführt. Verwenden Sie die Tierverfolgungssoftware, um die Weglänge des Tieres, den Prozentsatz der Zeit, die das Tier in jedem Quadranten des Labyrinths verbringt, und die Häufigkeit, mit der ein Tier über den zuvor auf der Plattform angezeigten Bereich schwimmt, zu verfolgen.

Öffnen Sie die Registerkarte "Versuchsliste" und rufen Sie die Messwerte aus der Registerkarte "Datenanalyse" und der Registerkarte "Wasserlabyrinth" ab. Exportieren Sie sie direkt in eine Excel-Tabelle. Analysieren Sie dann die Daten gemäß den Anweisungen im schriftlichen Teil des Protokolls.

41 TP 3 0 1 L-Mäuse, die das humane P 3 0 1 LTL-Gen enthielten, und 46 Kontrollen wurden im Alter von etwa 6,5 Monaten unter Verwendung dieses Protokolls getestet. Dies entspricht einer dreimonatigen Expression von Tau P 3 0 1 L in den Transgenen. Jede Gruppe enthielt ungefähr die gleiche Anzahl von Männchen und Weibchen auf Weglänge.

Das Training der unsichtbaren Plattform unterschied sich nicht zwischen Kontrollen und TP 3 0 1 L-Mäusen. Dieser fehlende Unterschied deutet darauf hin, dass sich Kontrolle und Tau P 3 0 1 LM nicht in der visuellen oder lokomotorischen Leistungsfähigkeit unterscheiden und dass Leistungsdefizite bei versteckten Versuchstests daher auf Gedächtnisstörungen zurückzuführen sein können. Während des Trainings mit versteckten Plattformen zeigte TP 3 0 1 LM jedoch signifikant längere Weglängen über alle Trainingsblöcke hinweg.

Schließlich verbesserten sich die Kontrollen in den vier Sondenversuchen. Während Tau P 3 0 1 L Mäuse nicht kontrollierten, waren Mäuse besser in der Lage, eine räumliche Strategie zur Lösung der Aufgabe zu verwenden und hatten besser gelernt, die Plattform in der Zielzone zu lokalisieren. Bei der Anpassung dieses Verfahrens für die Verwendung mit anderen Mauslinien ist es wichtig, die Lernrate der Kontrollen zu bewerten, die Anzahl der erforderlichen Schlagtrainingsversuche zu ermitteln und zu bestimmen, wann der erste Sondenversuch eingefügt werden sollte.