Name: Die Nutzung der Teton-System, um molekulare Mechanismen bei Zebrafisch Regeneration Studieren (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-06-25T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 22 s
Description: Erfahren Sie, wie das TetON-System in Zebrafischen zur gewebespezifischen Genexpression in der regenerierenden Schwanzflosse eingesetzt wird. Diese Methode ermöglicht induzierbare und reversible Genregulation zur Untersuchung molekularer Mechanismen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Die Autoren danken Christa Haase, Doris Weber und Brigitte Korte für die technische Unterstützung. Arbeit im Labor Weidinger durch Zuschüsse von der Deutschen Forschungsgemeinschaft WE 4223 / 3-1 unterstützt, WE 4223 / 4-1 und von der Deutschen Gesellschaft für Kardiologie über eine Oskar-Lapp-Stipendium und ein Klaus-Georg-und-Sigrid- Hengstberger-Forschungsstipendium.

<ol><li>Fang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Translational+profiling+of+cardiomyocytes+identifies+an+early+Jak1%2FStat3+injury+response+required+for+zebrafish+heart+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Translational profiling of cardiomyocytes identifies an early Jak1/Stat3 injury response required for zebrafish heart regeneration.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (33), 13416-13421 (2013).</li>
<li>Tryon, R. C., Johnson, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clonal+analysis+of+kit+ligand+a+functional+expression+reveals+lineage-specific+competence+to+promote+melanocyte+rescue+in+the+mutant+regenerating+caudal+fin%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Clonal analysis of kit ligand a functional expression reveals lineage-specific competence to promote melanocyte rescue in the mutant regenerating caudal fin.</a> PloS one. 9 (7), e102317(2014).</li>
<li>Wehner, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wnt%2Fbeta-catenin+signaling+defines+organizing+centers+that+orchestrate+growth+and+differentiation+of+the+regenerating+zebrafish+caudal+fin%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Wnt/beta-catenin signaling defines organizing centers that orchestrate growth and differentiation of the regenerating zebrafish caudal fin.</a> Cell Rep. 6 (3), 467-481 (2014).</li>
<li>Huang, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conditional+expression+of+a+myocardium-specific+transgene+in+zebrafish+transgenic+lines%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Conditional expression of a myocardium-specific transgene in zebrafish transgenic lines.</a> Dev Dyn. 233 (4), 1294-1303 (2005).</li>
<li>Knopf, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dually+inducible+TetON+systems+for+tissue-specific+conditional+gene+expression+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Dually inducible TetON systems for tissue-specific conditional gene expression in zebrafish.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (46), 19933-19938 (2010).</li>
<li>Provost, E., Rhee, J., Leach, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viral+2A+peptides+allow+expression+of+multiple+proteins+from+a+single+ORF+in+transgenic+zebrafish+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Genesis%22%5BJournal%5D)">Viral 2A peptides allow expression of multiple proteins from a single ORF in transgenic zebrafish embryos.</a> Genesis. 45 (10), 625-629 (2007).</li>
<li>Suster, M. L., Abe, G., Schouw, A., Kawakami, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transposon-mediated+BAC+transgenesis+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Transposon-mediated BAC transgenesis in zebrafish.</a> Nat Protoc. 6 (12), 1998-2021 (2011).</li>
<li>Bussmann, J., Schulte-Merker, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+BAC+selection+for+tol2-mediated+transgenesis+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Rapid BAC selection for tol2-mediated transgenesis in zebrafish.</a> Development. 138 (19), 4327-4332 (2011).</li>
<li>Yuan, S., Sun, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microinjection+of+mRNA+and+morpholino+antisense+oligonucleotides+in+zebrafish+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Microinjection of mRNA and morpholino antisense oligonucleotides in zebrafish embryos.</a> J Vis Exp. (27), (2009).</li>
<li>Kim, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+cleavage+efficiency+of+a+2A+peptide+derived+from+porcine+teschovirus-1+in+human+cell+lines%2C+zebrafish+and+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">High cleavage efficiency of a 2A peptide derived from porcine teschovirus-1 in human cell lines, zebrafish and mice.</a> PloS one. 6 (4), e18556(2011).</li>
<li>Matthews, M., Varga, Z. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anesthesia+and+euthanasia+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+journal+%2F+National+Research+Council%2C+Institute+of+Laboratory+Animal+Resources%22%5BJournal%5D)">Anesthesia and euthanasia in zebrafish.</a> ILAR journal / National Research Council, Institute of Laboratory Animal Resources. 53 (2), 192-204 (2012).</li>
<li>Hyde, D. R., Godwin, A. R., Thummel, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+electroporation+of+morpholinos+into+the+regenerating+adult+zebrafish+tail+fin%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">In vivo electroporation of morpholinos into the regenerating adult zebrafish tail fin.</a> J Vis Exp. (61), (2012).</li>
<li>Meeker, N. D., Hutchinson, S. A., Ho, L., Trede, N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Method+for+isolation+of+PCR-ready+genomic+DNA+from+zebrafish+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechniques%22%5BJournal%5D)">Method for isolation of PCR-ready genomic DNA from zebrafish tissues.</a> Biotechniques. 43 (5), 610(2007).</li>
<li>Thermes, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((I-SceI+meganuclease+mediates+highly+efficient+transgenesis+in+fish%5BTitle%5D)+AND+%22Mech+Dev%22%5BJournal%5D)">I-SceI meganuclease mediates highly efficient transgenesis in fish.</a> Mech Dev. 118 (1-2), 91-98 (2002).</li>
<li>Suster, M. L., Kikuta, H., Urasaki, A., Asakawa, K., Kawakami, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenesis+in+zebrafish+with+the+tol2+transposon+system%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Transgenesis in zebrafish with the tol2 transposon system.</a> Methods Mol Biol. , 56141-56163 (2009).</li>
<li>Grabher, C., Wittbrodt, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Meganuclease+and+transposon+mediated+transgenesis+in+medaka%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Biol%22%5BJournal%5D)">Meganuclease and transposon mediated transgenesis in medaka.</a> Genome Biol. 8, Suppl 1S10. (2007).</li>
</ol>

Die Autoren haben nichts zu offenbaren.

Die erwachsenen Zebrafisch hat eine erstaunliche Fähigkeit, viele der inneren Organe und Anhänge erfolgreich zu regenerieren. Ein gründliches Verständnis der molekularen und zellulären Mechanismen erfordert gewebespezifische Analyse von Gen-Funktionen und Signalwege. Auf dem Weg zu diesem bietet die Teton-System ein effizientes Werkzeug für die raumzeitlich gesteuerte Genexpression in embryonalen und erwachsenen Zebrafisch. Die Teton System Konstrukte und Methoden in dieser Handschrift beschrieben wurden erfolgreich in ...

Der Zebrafisch ist ein gut etabliertes Wirbelmodellorganismus, um viele Aspekte der Entwicklung, der Physiologie, Krankheiten und Regeneration zu studieren. Mit der wachsenden Annahme der Zebrafisch als Modell für die post-embryonale biologische Prozesse, experimenteller Werkzeuge zur induzierbaren, gewebsspezifischen Manipulation der Genexpression oder Signalwege immer wichtiger geworden. Besonders haben Studien in Orgel und Anhängsel Regeneration im erwachsenen Zebrafisch aus einem Mangel an Tools für die Präparation der raum-zeitlichen Anforderungen von Signalwegen in diesen Regenerationsprozesse erlitten. Derzeit sind drei verschiedene Systeme verwendet worden, um bedingte, gewebespezifische Genexpression in regenerierenden Organen erwachsenen Zebrafisch zu erzielen: das Cre-lox-System, Mosaik Expression von Hitzeschock induzierbares Transposon-Transgenen mit vermittelte somatischen Transgenität und die TetOn System 1 -3. TetOn bezieht sich auf eine Variante eines Tetracyclin-contgewalzten Transkriptionsaktivierungssystems, wobei die Expression in Gegenwart des Antibiotikums Tetracyclin oder einem Derivat, beispielsweise Doxycyclin aktiviert. Die Cre-lox-System, wie es bisher in ausgewachsene Fische verwendet wurde, stützt sich auf eine Tamoxifen-gesteuert Cre-Rekombinase (CreERT2), deren Expression räumlich durch gewebespezifische regulatorische Elemente beschränkt. Cre gesteuerte Entnahme einer Stop-Kassette ermöglicht die Expression des Gens von Interesse von einem Promotor, der in allen Zelltypen 1 aktiv sein soll angetrieben. Transposon-vermittelte Erzeugung von mosaik ausgedrückt somatischen Transgenen stellt ein System für die induzierbare Expression des Transgens in den einzelnen Zelllinien. Die Injektion von Zebrafischembryonen mit einem Tol2 Transposon trägt ein Gen von Interesse unter der Transkriptionskontrolle eines Hitzeschockpromotor Ergebnisse in chimären Individuen in der Regel trägt das Transgen nur in diskreten Zelllinien aus einer regenerierenden Orgel 2. Während beide Systeme ermöglichen bedingte Gewebe spesche Genexpression ist das Cre-lox-System nicht reversibel, und die Strategie mit einem Transposon-beruhenden klonalen Kennzeichnung leidet ihre stochastische Natur. So haben wir und andere kürzlich transgenen Teton Systeme für den Einsatz in Zebrafisch, der zeitlich und räumlich gesteuerte Genexpression, die zusätzlich abstimmbaren und reversible 3-5 ist zu erleichtern angepasst. Die Teton System besteht hier aus einem transgenen Fahrer (TetActivator), in dem ein Doxycyclin (DOX) -induzierbaren Transkriptionsaktivator (verbesserte Umkehr Tetracyclin-Transaktivator, irtTA, kurze TETA) ist unter Kontrolle von gewebespezifischen genomischen regulatorischen Sequenzen. Zweitens bedarf es einer transgenen Responderlinie (TetResponder), die ein Gen von Interesse unter der Transkriptionskontrolle des Tetracyclin-Operator Häfen (Tet-Response-Element; Tetre) (Abbildung 1A). Somit ermöglicht die Verwendung von spezifischen Kombinationen von TetActivator und TetResponder Leitungen für bedingten gewebespezifischenFIC Manipulation der Genexpression. Wir haben vor kurzem nutzte die Teton-System für gewebespezifische Funktionen des Wnt / beta-Catenin-Signalweg in der erwachsenen Zebrafisch Regenerieren Schwanzflosse 3 zu untersuchen. In dem Protokoll hier skizzierten beschreiben wir einen Workflow für Aufbau und Nutzung der Teton-System in Zebrafisch, insbesondere für Studien der fin Regeneration. Dieses enthält detaillierte Anweisungen zum stabilen transgenen TetActivator und TetResponder Linien zu erzeugen, und ein Protokoll für die Induktion Transgen in Embryonen und erwachsenen Zebrafisch. Ferner beschreiben wir Verfahren zur Überprüfung der gewebespezifischen Genexpression in der Rippe Regenerat, einschließlich eines Protokolls zur Herstellung von Gefrierschnitten von adulten Zebrafischflossen. Zusätzlich diskutieren wir Überlegungen für den Entwurf des TetActivator Transgen, die Wahl eines Transgeneseverfahren und Nachweis von TetResponder Ausdruck. Daher ist das übergeordnete Ziel dieses Protokolls als Blaupause dienenfür den Aufbau einer funktionellen Teton Systems im Zebrafisch zu bedingten gewebespezifische Genexpression, die zu jedem Gewebe von Interesse angewendet werden kann, zu erreichen. Wir haben eine TetActivator der Vektor ermöglicht für I-SceI oder Tol2 vermittelte Erzeugung stabiler TetActivator Linien mit kurzen genomischen regulatorischen Sequenzen erzeugt (Enhancer Fragmente; Weidinger lab Plasmid Datenbank nicht 1247;. 1B). Dieses Konstrukt enthält eine TetActivator Kassette, bestehend aus dem M2 mutierten Variante der reversen Tet-Repressor-Domäne mit dem Herpes simplex-Virus VP16-Transaktivierungsdomäne-Derivat 3F [irtTAM2 (3F)] fusioniert. Expression des TetActivator (TETA) kann leicht überwacht werden, da es coexprimiert mit dem Fluorophor AmCyan aus demselben offenen Leserahmen; a p2a Peptid vermittelt ribosomalen Skipping, die bei der Herstellung von TETA und AmCyan als separate Proteine ​​bei einer 1 führen sollte: 1-Verhältnis 5,6. Das Konstrukt enthält auch eine poylinker 5 &#39;der TetActivator Kassette, um die Einführung der genomischen regulatorischen Sequenzen von Interesse unter Verwendung herkömmlicher Klonierungsverfahren zu erleichtern. , Der in ein bakterielles künstliches Chromosom rekombiniert werden können (BAC), die eine große genomische Region (; Zusätzlich haben wir ein Konstrukt, bestehend aus dem oben beschriebenen Kassetten TetActivator plus Kanamycin-Selektionskassette (. 1C Weidinger lab Plasmid Datenbank nicht 1180) erstellt in der Regel in dem Startcodon eines Gens, dessen Expressionsmuster ist durch das Transgen nachgeahmt werden). Beide Konstrukte sind von der Weidinger Labor auf Anfrage erhältlich.

<table><tbody><tr><td>Zuchtboxen</td><td>Aqua Schwarz</td><td>AquaBox 1</td><td></td></tr><tr><td>Zusammengesetztes Fluoreszenzmikroskop</td><td>z.B. Leica, Zeiss</td><td>variiert je nach Hersteller</td><td>zur Abbildung von fluoreszierenden Gewebeschnitten</td></tr><tr><td>Konfokales Mikroskop</td><td>z.B. Leica, Zeiss</td><td>variiert je nach Hersteller</td><td>zur Abbildung von fluoreszierenden Gewebeschnitten</td></tr><tr><td>Kryostat</td><td>z.B. Leica, Thermo-Scientific</td><td>variiert mit dem Hersteller</td><td>für Kryosektionen</td></tr><tr><td>4', 6-Diamidino-2-phenylinodol (Dapi)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D9542</td><td>verwenden 1/5.000 in PBS zur Visualisierung von Zellkernen</td></tr><tr><td>Doxycyclin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D9891</td><td>bereiten Brühen in 50% EtOH bei 50 mg/ml (97 mM) für TetResponder-Induktion</td></tr><tr><td>Paraformaldehyd (PFA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P6148</td> <td>vor4% (w/v) Paraformaldehyd in PBS, pH 7,5 zur Fixierung</td></tr><tr><td>1x Phosphatpuffer-Kochsalzlösung (PBS)</td><td></td><td></td><td>1,7 mM KH2PO4, 5,2 mM Na2HPO4, 150 mM NaCl, pH 7,5</td></tr><tr><td>1x Phosphat-Puffer Kochsalzlösung + Tween 20 (PBT)</td><td></td><td></td><td>1x PBS mit 0,1% Tween 20</td></tr><tr><td>Superfrost Ultra Plus Adhäsionsmikroskop-Objektträger</td><td>Thermo Scientific&nbsp;</td><td>1014356190</td><td>für die Entnahme von Gewebeschnitten</td></tr><tr><td>Stereo-Fluoreszenzmikroskop</td>, <td>z. B. Leica, Zeiss,</td><td>variiert mit dem Hersteller</td><td>für die fluoreszenzbasierte Genotypisierung</td></tr><tr><td>Thermocycler</td><td>, z. B. Biorad, Applied Biosystems</td><td>variiert mit dem Hersteller</td><td>für PCR-basierte Genotypisierung</td></tr><tr><td>Tissue Freezing Medium (TFM)</td><td>Triangel Biomedical Sciences</td><td>TFM-C</td><td>für die Einbettung von Gewebe Proben</td></tr><tr><td>Tricain (L-Ethyl-m-amino-benzoat-methansulfonat/MS-222)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E10521</td><td>zur Anästhesie Anwendung bei 1 mg/ml im E3-Embryomedium</td></tr></tbody></table>

die nutzung der teton-system, um molekulare mechanismen bei zebrafisch regeneration studieren

Use of the TetON System to Study Molecular Mechanisms of Zebrafish Regeneration

Der Zebrafisch ist zu einem sehr wichtigen Modellorganismus für die Erforschung der Entwicklung, Physiologie, Krankheit und Geweberegeneration von Wirbeltieren geworden. Ein umfassendes Verständnis der beteiligten molekularen und zellulären Mechanismen erfordert experimentelle Werkzeuge, die eine induzierbare, gewebespezifische Manipulation der Genexpression oder der Signalwege ermöglichen. Daher haben wir und andere das TetON-System kürzlich für den Einsatz im Zebrafisch angepasst. Das TetON-System ermöglicht die zeitlich und räumlich kontrollierte Genexpression, und wir haben dieses Werkzeug kürzlich verwendet, um gewebespezifische Funktionen des Wnt/beta-Catenin-Signalwegs während der Regeneration der Schwanzflossen von Zebrafischen zu untersuchen. Hier beschreiben wir den Arbeitsablauf für die Verwendung des TetON-Systems, um eine induzierbare, gewebespezifische Genexpression in der adulten regenerierenden Zebrafisch-Schwanzflosse zu erreichen. Dazu gehören die Generierung stabiler transgener TetActivator- und TetResponder-Linien, die Transgen-Induktion und Techniken zur Verifizierung der gewebespezifischen Genexpression im Flossenregenerat. Somit dient dieses Protokoll als Blaupause für den Aufbau eines funktionsfähigen TetON-Systems im Zebrafisch und dessen anschließende Verwendung, insbesondere für die Untersuchung der Flossenregeneration.

Um eine Funktions Teton System für gewebespezifische induzierbaren Genexpression, transgene TetActivator und TetResponder Linien etablieren müssen generiert werden (Abbildung 1A). Dies wird durch Mikroinjektion TetActivator (1B - C) erreicht oder TetResponder (1E) Konstrukte in frühen Zebrafischembryonen und anschließender Keimbahn-Integration. Funktions TetActivator Konstrukte können entweder durch Klonen von kurzen Regulationssequenzen (Enhancer-Eleme...

Hier skizzieren wir den Arbeitsablauf für die Verwendung des TetON-Systems, um eine gewebespezifische Genexpression in der adulten regenerierenden Zebrafisch-Schwanzflosse zu erreichen.

Die Nutzung der Teton-System, um molekulare Mechanismen bei Zebrafisch Regeneration Studieren

The zebrafish has become a very important model organism for studying vertebrate development, physiology, disease, and tissue regeneration. A thorough ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, ein funktionales TED-on-System in Zebrafischen zu etablieren, um eine bedingte, gewebespezifische Genexpression zu erreichen, wie in diesem Video am Beispiel der regenerierenden Schwanzflosse gezeigt. Dies wird zunächst durch die Erzeugung transgener Tet-Aktivator-Linien erreicht, die einen Tetracyclin-induziblen transkriptionellen Aktivator exprimieren, der mit Am-Cyanin in dem gewünschten Gewebe markiert ist, sowie durch Tet-Responder-Linien, die ein Ype-markiertes Gen der Interesse unter Kontrolle von Tet-antwortenden Elementen enthalten. Anschließend werden spezifische Kombinationen von doppelt transgenen Fischen mit Tet-Aktivator und Tet-Responder etabliert.Anschließend wird die gewebespezifische Expression des Tet-Antwortgens durch Gabe von Doxycyclin induziert. Abschließend wird die Expression des Tet-Antwortgens im Gewebe durch Herstellung von Schnittpräparaten von Flossenregeneraten überprüft. Letztendlich wird die gewebespezifische Expression des Tet-Antwortgens mittels Immunfluoreszenz sichtbar gemacht.Der Hauptvorteil dieser Technik gegenüber anderen Methoden, wie der durch Hitzeschock induzierten Genexpression, li

use-teton-system-to-study-molecular-mechanisms-zebrafish

Research

Forschung

JoVE Journal

Developmental Biology

Entwicklungsbiologie

Wir beschreiben ein Verfahren zur bedingten Knockdown die Expression eines Zielproteins im Erwachsenenalter Zebrafisch Flossenregeneration. Diese Technik beinhaltet Mikrospritzvorrichtung und Elektroporation Antisense-Oligonukleotid in Morpholinos Flossengewebes das Testen des Proteins Rolle in verschiedenen Stadien der Flossenregeneration, einschließlich Wundheilung, Blastembildung und regenerative Auswachsen ermöglicht.

In-vivo-Elektroporation von Morpholinos in das Regenerations Adult Zebrafisch Leitwerk

Nach Durchtrennung des Rücken, erwachsenen Zebrafisch haben die funktionelle Erholung von 6 Wochen nach der Verletzung. Um die Vorteile der Larven Transparenz und schnellere Erholung zu nehmen, stellen wir ein Verfahren zur Durchtrennung des Rückenmarks Larven. Nach Durchtrennung beobachten wir sensorischen Erholung ab 2 Tage nach der Verletzung, und C-Bogen-Bewegung um 3 Tage nach der Verletzung.

Rückenmarksdurchtrennung in der Zebrafisch-Larven

Ein anpassungsfähiges reversen genetischen Methode für Zebrafisch-Gen-Funktion während der späteren Phasen der Entwicklung und physiologischen Homöostase wie Geweberegeneration unter Verwendung intraventrikuläre Injektion von Gen-spezifischen morpholinos beurteilen.

Rückwärts Genetische Morpholino Ansatz mit Herz ventrikuläre Injektion auf mehrere Schwer zu Zielgeweben in der Zebrafisch-Larve Transfektion

Um die zellulären und molekularen Mechanismen der Neurogenese und Regeneration adulter Zebrafische zu beleuchten, haben wir ein Protokoll für invasive Operationen entwickelt, die mechanische Verletzungen im adulten Telencephalon des Zebrafisches verursachen, und die anschließende Überwachung von Veränderungen in der gestochenen Hemisphäre durch Immunhistochemie oder in situ Hybridisierung.

Stichwunde Verletzung des Zebrafisch Erwachsene Telen: eine Methode, um Wirbel Gehirn Neurogenese und Regeneration Untersuchen

Hier stellen wir eine zuverlässige Methode vor, um die Nierenregeneration bei Erwachsenen zu untersuchen, indem eine akute Nierenschädigung durch Gentamicin-Injektion induziert wird. Wir zeigen, dass die Schädigung von der Gentamicin-Dosierung und der Umgebungstemperatur abhängt, indem wir in situ Hybridisierung verwenden, um lhx1a+ zu markieren und neue Nephrone zu entwickeln.

Nieren-Regeneration im erwachsenen Zebrafisch durch Gentamicin induzierte Schädigung

Wir präsentieren ein Protokoll zur Erfassung der Dynamik der Regeneration von Schwanzflossen von Zebrafischlarven auf einer Ganzgewebeskala mit Hilfe von Hellfeld-basierter Stereomikroskopie. Diese Technik ermöglicht es, die Regenerationsdynamik mit einer Einzelzellauflösung zu erfassen. Diese Methodik kann an jedes Stereomikroskop angepasst werden, das mit einer CCD-Kamera und einer Zeitraffer-Software ausgestattet ist.

Erfassen von Gewebereparatur in Zebrafisch-Larven mit Zeitrafferhellstereomikroskopie

Die Regeneration der Skelettmuskulatur wird durch geweberesidente Muskelstammzellen angetrieben, die bei vielen Muskelerkrankungen wie Muskeldystrophie beeinträchtigt sind, was dazu führt, dass sich die Muskeln nicht regenerieren können. Hier beschreiben wir ein Protokoll, das die Untersuchung der Muskelregeneration in Zebrafischmodellen von Muskelerkrankungen ermöglicht.

Untersuchung der Muskelregeneration in Zebrafischmodellen von Muskelerkrankungen

Ein mechanisches Hirnverletzungsmodell im erwachsenen Zebrafisch wird beschrieben, um die molekularen Mechanismen zu untersuchen, die ihre hohe Regenerationsfähigkeit regulieren. Die Methode erklärt, wie eine Stichwundenverletzung im optischen Tectum mehrerer Arten kleiner Fische erzeugt wird, um die regenerativen Reaktionen mittels fluoreszierender Immunfärbung zu bewerten.

Stichwundenverletzungsmodell des adulten optischen Tektums unter Verwendung von Zebrafisch und Medaka zur vergleichenden Analyse der Regenerationsfähigkeit

Das vorliegende Protokoll beschreibt ein Verfahren zur Induktion gewebespezifischer und hochreproduzierbarer Verletzungen in Zebrafischlarven unter Verwendung eines Laserläsionssystems in Kombination mit einer automatisierten mikrofluidischen Plattform für die Larvenhandhabung.

Kontrollierte halbautomatische laserinduzierte Verletzungen zur Untersuchung der Rückenmarksregeneration bei Zebrafischlarven

Hier stellen wir ein Protokoll zur Transplantation von Zellen mit hoher räumlicher und zeitlicher Auflösung in Zebrafischembryonen und -larven in jedem Stadium zwischen mindestens 1 und 7 Tagen nach der Befruchtung vor.

Hochauflösende Zelltransplantation in embryonalen und larvalen Zebrafischen

Erfahren Sie, wie das TetON-System in Zebrafischen zur gewebespezifischen Genexpression in der regenerierenden Schwanzflosse eingesetzt wird. Diese Methode ermöglicht induzierbare und reversible Genregulation zur Untersuchung molekularer Mechanismen.

Die Nutzung der Teton-System, um molekulare Mechanismen bei Zebrafisch Regeneration Studieren

Weitere Videos entdecken