Name: Küken-Herz-Invasion Assay zum Testen der Invasivität von Krebszellen und die Aktivität von Potenziell Anti-invasive Verbindungen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-06-06T15:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 16 s
Description: Lernen Sie das Küken-Herz-Invasion-Assay zur Untersuchung der Tumorzell-Invasion in embryonales Hühnerherzgewebe. Diese Methode ermöglicht die Testung potenziell anti-invasiver Verbindungen in vitro.

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Wir danken Marleen De Meulemeester für die Demonstration der Assay-Technik im Videofilm. B.I.R. ist Postdoktorand der Forschungsstiftung – Flandern (FWO – Vlaanderen). L.M.M. ist Empfänger eines Emmanuel van der Schueren Stipendiums der Flämischen Liga gegen Krebs (Vlaamse Liga tegen Kanker).

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Die Autoren erklären, dass sie keine konkurrierenden finanziellen Interessen haben.

Während der Herstellung der PHFs können die Fragmente nicht in Suspension bleiben, aber sich an der Gefäßwand; Dies kann durch Erhöhung des Volumens des Kulturmediums überwunden werden. Wenn die Anzahl der PHFs zu niedrig ist und ihre Größe zu groß ist, verringern das Volumen des Kulturmediums. Versagen der Testzellen zu aggregieren können aufgrund von Schwankungen in der Temperatur oder einer mikrobiellen Infektion. Alternativ kann eine Unfähigkeit zu aggregieren ein charakteristisches Merkmal der Zellen sein. Während ...

Invasion ist das Markenzeichen von bösartigen Tumoren. Diese Aktivität führt nicht nur zur Zerstörung der umliegenden Gewebe, aber auch bei der Metastasenbildung beteiligt. Da Krebspatienten sterben an der Invasion und Metastasierung, und effiziente anti-invasive Behandlungen sind immer noch knapp, Labortests, die die Invasion der Tumorzellen entwickelt, zu imitieren. Das Ziel des Kükens Herz Assay ist, einen relevanten Organkulturverfahren zur Tumorinvasion in drei Dimensionen zu studieren bieten. Der Assay kann zwischen invasiver und nicht-invasiver Zellen zu unterscheiden, und ermöglicht es, die Wirkungen der Testverbindungen auf das Tumorinvasion zu studieren. Das Grundprinzip hinter der Verwendung des Assays ist die eigentliche Konzept dass Tumoren Ökosysteme denen die neoplastischen Zellen kontinuierlich mit ihren Stroma (Wirtszellen und extrazelluläre Matrix) zusammenwirken, und dass durch diese molekularen Wechselwirkungen Invasion fein abgestimmt 1. So, im Test-Tumorzellen werden mit livi konfrontiertng embryonalen Hühnerherz Fragmente 2, die nicht nur als Träger für die Invasion von Tumorzellen, sondern auch als eine Quelle von verschiedenen Arten von Stromazellen und Matrixelemente zu dienen. Das Küken Herz enthält Muskelzellen, Fibroblasten und Endothelzellen, und die extrazelluläre Matrix aus Laminin, Fibronectin und verschiedene Arten von Kollagen. Auf diese Weise deckt der Organkultur-Technik dreidimensionale vielen zellulären und molekularen Wechselwirkungen in Invasion Patiententumoren beteiligt ist. Der Hauptvorteil des Kükens Herz Assay ist die Implementierung von Stromazellen Wirkungen. Dieser Aspekt ist vollständiger als in anderen Invasion in vitro-Assays, die auf Tumorzellinvasion in nicht-lebenden Gele der Basalmembran 3 oder Zwischenraummatrix 4 Molekülen basieren. Das Konzept der Konfrontation zwischen Tumorzellen und normalen Lebenswirtsgewebe als in Organkultur Experimenten gefunden wurde von mehreren eingeführtAutoren wie Wolff und Schneider in Frankreich 5, Easty und Easty im Vereinigten Königreich 6 und Schleich in Deutschland 7. Zwei technischen Vorteile der Küken Herz Invasionstest in den genannten Verfahren ist, dass das Volumen der Fragmente können leicht standardisiert werden, und dass sie Kontraktions, die funktionelle Integrität Überwachung während der Organkultur erlaubt bleiben. Weiterhin sind Vogelembryonen bevorzugt, weil sie leicht aus dem sterilen Inhalt des Eis seziert. Der Assay weist konzeptionell Ähnlichkeit mit dem Küken Chorioallantoismembran-Assay 8, indem sie eine komplexe stromal umgibt, um die Tumorzellen. Der Test ist erfolgreich angewandt worden, wie beispielsweise in der MCF-7 (Mamma) 9 und HCT-8 (Kolon) 10 Zelllinie Familien zwischen invasiver und nicht-invasiver Zellvarianten aus den gleichen menschlichen Tumoren zu unterscheiden. Das Verfahren ist nützlich, um potentiell antiinvasive Verbindungen sowie zu testen <sup&gt; 11,12. Wie weiter erläutert, kann es für die Schaffung von Struktur-Aktivitäts-Beziehungen von kleinen organischen Molekülen verwendet werden. Der Test ist jedoch nicht berücksichtigt, den Beitrag der immunologischen Zellen Krebsinvasion. Es ist zu betonen, dass die Technik nicht als Hochdurchsatz-Analyse-System aufgrund der hohen Anzahl von Manipulationen, die eine begrenzte Anzahl von Testdurchläufen (maximal 30 Kulturen) und der langen Durchlaufzeit (über 1 Monat) in Betracht gezogen werden, werden.

<table><tbody><tr><td>Ringer's salt solution</td><td>Braun</td><td>CEO123</td><td></td></tr><tr><td>Bacto-agar</td><td>Becton Dickinson</td><td>214010</td><td></td></tr><tr><td>Tris-(hydroxymethyl)-aminomethaan Analar</td><td>VWR</td><td>103157P</td><td></td></tr><tr><td>BSA : Albumin aus Rinderserum, cohn V fract.</td><td>Sigma</td><td>A4503-500G</td><td></td></tr><tr><td>MEM-Rega 3</td><td>Life Technologies&nbsp;</td><td></td><td></td>19993013</tr><tr><td>Gyrotory-Shaker</td><td>New Brunswick Scientific</td><td>G10 und G33</td><td></td></tr><tr><td>Erlenmeyerkolben 50 ml</td><td>Novolab</td><td>92717</td><td></td></tr><tr><td>Petrischalen aus Glas</td><td>Novolab</td><td>68516</td><td></td></tr><tr><td>Iridektomieschere</td><td>Rumex</td><td>11-0625</td><td></td></tr><tr><td>Makroskop mit kalibriertem Okulargitter</td><td>Wild</td><td>157702</td><td></td></tr><tr><td>Paraffinwachs</td><td>International Medical products</td><td>8599956</td><td></td></tr><tr><td>Eosin Y</td><td>Sigma</td><td>230251-25g</td><td></td></tr><tr><td>Harris' Hämatoxylin</td><td>Sigma</td><td>HHS32-1L</td><td></td></tr><tr><td>Deckharz (Tissue-Tek)</td><td>Sakura</td><td>4494</td><td></td></tr><tr><td>Paraffinschmelzgerät</td><td>GFL</td><td>1052</td><td></td></tr><tr><td>Mikrotom zum Paraffinschneiden</td><td>Reichert</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Stpper für Erlemeyer Kolben mit Gasein- und -auslass</td><td>Novolab</td><td>2602421 und 260243</td><td></td></tr><tr><td>Diaminobenzidin</td><td>Sigma</td><td>D8001</td><td></td></tr><tr><td>REAX Schaukeltisch</td><td>Heidolph</td><td>54131</td><td></td></tr><tr><td>24-Well-Gewebeschalen</td><td>VWR</td><td>NUNC142475</td><td></td></tr><tr><td>Ophtalmologische Enukleationslöffel</td><td>Rumex</td><td>16-060</td><td></td></tr><tr><td>Scharfe Pinzette</td><td>Rumex</td><td>4-111T</td><td></td></tr><tr><td>Stumpfe Pinzette</td><td>Nickel-Electro LTD</td><td>7112</td><td></td></tr><tr><td>Erlenmeyerkolben 5 ml</td><td>Novolab</td><td>211901</td><td></td></tr><tr><td>Objektträger gewaschen und entfettet</td><td>International Medical Produkte</td><td>8613908</td><td></td></tr></tbody></table>

küken-herz-invasion assay zum testen der invasivität von krebszellen und die aktivität von potenziell anti-invasive verbindungen

Chick Heart Invasion Assay for Testing the Invasiveness of Cancer Cells and the Activity of Potentially Anti-invasive Compounds

Das Ziel des Kükens Herz Assay ist, einen relevanten Organkulturverfahren zur Tumorinvasion in drei Dimensionen zu studieren bieten. Der Assay kann zwischen invasiver und nicht-invasiver Zellen zu unterscheiden, und ermöglicht Untersuchung der Wirkungen der Testverbindungen auf das Tumorinvasion. Krebszellen - entweder als Aggregate oder einzelne Zellen - sind mit Fragmenten von embryonalen Hühnerherz konfrontiert. Nach Organkultur in Suspension für einige Tage oder Wochen die gegenüberliegenden Kulturen fixiert und in Paraffin eingebettete histologische Analyse. Die dreidimensionale Wechselwirkung zwischen den Krebszellen und normalen Gewebe wird dann von Serienschnitte mit Hämatoxylin-Eosin oder nach immunhistochemischer Färbung für Epitope in das Herzgewebe oder die Krebszellen gegen gefärbten rekonstruiert. Der Test wird in Übereinstimmung mit der bisherigen Konzept, dass Krebsinvasion ist das Ergebnis der molekularen Wechselwirkungen zwischen den Krebszellen und deren Nachbar stromale Wirtselemente (Myofibroblasten endothElial Zellen, extrazelluläre Matrixkomponenten, etc.). Hier wird diese stromalen Umgebung an die Krebszellen, wie einem lebenden Gewebe Fragment angeboten. Stütz Aspekte der Relevanz des Assays sind mehrfach. Invasion in den Test ist in Übereinstimmung mit den Kriterien der Krebsinvasion: progressive Besatzung und Ersatz in Zeit und Raum des Wirtsgewebes und Invasivität und nicht-invasiven in vivo der gegenüberliegenden Zellen korreliert im allgemeinen mit den Ergebnissen des Assays. Ferner die Invasion Muster von Zellen in vivo, wie durch Pathologen definiert wird in den histologischen Bildern im Assay wider. Quantitative Struktur-Aktivitäts-Beziehung (QSAR) Analyse der mit zahlreichen potentiell anti-invasive organischen Kongeners Verbindungen erhaltenen Ergebnisse erlaubt die Untersuchung von Struktur-Aktivitäts-Beziehungen für Flavonoide und Chalkone und bekannte anti-metastatischen Medikamente in der Klinik verwendet wird (zB Mikrotubuli-Inhibitoren ) hemmen Invasion im Test als gut. However, der Test nicht berücksichtigt immunologischen Beiträge zur Krebsinvasion zu nehmen.

Die histologischen Schnitte wie in Figur 5 dargestellten Ergebnisse zeigen das Endergebnis einer Anzahl erfolgreicher Assays. Die Schall Histologie der Kulturen zeigt lebensfähige Zellen und ermöglicht, die Interaktion zwischen Tumorzellen und normalen Gewebe zu interpretieren. Es kann ausserdem nicht Immunreaktion vom normalen Gewebe beobachtet werden, was die korrekte Alter der Hühnerembryonen verwendet zB bestätigt, bevor die Immunabwehr System entwickelt. Es sind keine Bakterien sichtbar, die Abwesenheit vo...

Hier präsentieren wir ein Protokoll, um die Invasion der Tumorzellen in lebenden normalen Gewebefragmente in drei Dimensionen zu studieren. Diese Organkulturtechnik wird hauptsächlich angewendet, um potentiell antiinvasive drugs in vitro zu testen.

Küken-Herz-Invasion Assay zum Testen der Invasivität von Krebszellen und die Aktivität von Potenziell Anti-invasive Verbindungen

The goal of the chick heart assay is to offer a relevant organ culture method to study tumor invasion in three dimensions. The assay can distinguish ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, eine geeignete Organkultur-Methode zur Untersuchung der Tumorausbreitung in drei Dimensionen bereitzustellen. Dies wird erreicht, indem zunächst Gewebefragmente aus normalen Herzen von embryonalen Hühnern präpariert werden. Im zweiten Schritt werden Aggregate von Tumorzellen in Suspension hergestellt.Die Tumorzellaggregate werden dann einzeln mit den Normalgewebefragmenten auf einem halbfesten Agar-Bett zur Inkubation in einer Suspensionkultur konfrontiert. Im letzten Schritt werden die konfrontierenden Kulturen zur Paraffineinbettung und histologischen Schnittführung fixiert. Letztendlich kann die Invasion der Tumorzellen in die Gewebefragmente durch serielle mikroskopische Analyse der Gewebeschnitte sichtbar gemacht werden.Der Hauptvorteil dieser Technik gegenüber bestehenden Methoden wie Invasionstests mit Gele besteht darin, dass bei dieser Technik Tumorzellen dreidimensionalen lebenden Gewebefragmenten ausgesetzt werden. Die Bedeutung dieser Technik reicht bis in die Krebstherapie hinein, da ein ungedeckter Bedarf an antiinvasiven Wirkstoffen besteht. Im Allgemeinen haben Personen, die neu in dieser Methode sind, Schwierigkeiten, und der Grund liegt darin, dass sie die Bedeutung der Verwendung der spezifischen Abmessungen des Gewebefragments und der Tumorzellaggregate außer Acht lassen.Obwohl diese Methode Einblicke in die Invasion von Krebszellen ermöglicht, kann sie auch auf andere Systeme angewendet werden. Zum Beispiel kann damit die Invasion peripherer Gewebe durch entzündliche Zellen oder die Integration von Stammzellen in das Herzmuskelgewebe untersucht werden. In der vorbereitenden Kultur werden befruchtete Hühnereier zunächst neun Tage lang bei 37 Grad Celsius inkubiert, um Herzfragmente zu gewinnen.Am neunten Tag desinfizieren Sie die Schale mit 70 % Ethanol. Öffnen Sie anschließend in einem Zellkulturwerkbank die Schale mit einer stumpfen Pinzette. Positionieren Sie dann einen Enukleationslöffel um den Hals des Embryos und ziehen Sie den Embryo aus der Schale. Legen Sie das Embryo in eine fünf Zentimeter durchmessende Glas-Petri-Schale, die fünf Milliliter Ringer-Salzlösung enthält. Halten Sie dann mit jeder Hand eine scharfe Pinzette. Schlagen Sie die ventrale Brusthaut auf, entfernen Sie das Sternum und dissezieren Sie mit einer Iris-Schere das Herz, wobei Sie die großen Blutgefäße abtrennen. Überführen Sie das Herz in eine neue Glas-Petrischale mit fünf Zentimeter Durchmesser, die fünf Milliliter Kulturmedium enthält, ergänzt mit 5% fetalem Kälberserum, unter einem Mikroskop mit einem kalibrierten Okular-Netz. Entfernen Sie mithilfe von Mikroschere den oberen kranialen Drittel des Herzens, um die Vorhöfe und zugehörigen Gefäße zu resezieren.Verwenden Sie dann eine scharfe Pinzette, um das Perikard von den Ventrikeln zu dissezieren. Danach führen Sie einen sagittalen Halbschnitt in den Ventrikeln durch und entfernen das Blut. Überführen Sie die Ventrikel anschließend in eine weitere Petrischale mit fünf Zentimeter Durchmesser, die fünf Milliliter frisches Kulturmedium und fetalen Kälberserum enthält, und schneiden Sie das Gewebe in Stücke mit einem Durchmesser von 0,4 Millimetern.Wenn alle Ventrikel durchtrennt wurden, drehen Sie die Schale vorsichtig, um alle Fragmente in die Mitte der Schale zu befördern. Verwenden Sie dann eine Nadel aus rostfreiem Stahl, um alle Cora Eliana an den Rand der Petrischale zu bewegen. Benutzen Sie nun eine Glas-Pipette, um die Herzfragmente in einen 50-Milliliter-Erlenmeyerkolben zu überführen, der mit einem dünnen Kulturfilm bedeckt ist.Begasen Sie den Kolben mit 5 % Kohlendioxid und inkubieren Sie die Fragmente auf einem Rüttelinkubator bei 37 °C mit 70 Umdrehungen pro Minute für 24 Stunden. Übertragen Sie die Fragmente am nächsten Tag in eine Petrischale und verwenden Sie eine Nadel, um die Corpora aliena, die dunklen nekrotischen Fragmente sowie alle Gewebekonglomerate zu entfernen. Inkubieren Sie die Fragmente anschließend in einem 50-Milliliter-Erlenmeyerkolben, der sechs Milliliter Kulturmedium enthält, für weitere 60 Stunden auf dem Rüttelinkubator. Zwei Tage und zwölf Stunden später wählen Sie mithilfe des Mikroskops und von Nadeln die steroidhaltigen Fragmente aus, die eine dünne, homogene Schicht aus fibroblastischen Zellen sowie einen Durchmesser von 0,4 Millimetern aufweisen.Überführen Sie dann die vorinkubierten Herzfragmente in eine andere Petrischale mit frischem Kulturmedium. Drei Tage vor Beginn der Gegenüberkultur suspendieren Sie 100.000 Testzellen pro Milliliter in sechs Milliliter des geeigneten Kulturmediums in einem 50-Milliliter-Erlenmeyerkolben. Inkubieren Sie anschließend den Kolben auf einem Rüttelinkubator bei 37 Grad Celsius und 70 Umdrehungen pro Minute unter Zusatz des geeigneten Prozentsatzes an Kohlendioxid.Nach 72 Stunden die Aggregate unter dem Mikroskop betrachten und die steroidproduzierenden Zellaggregate mit einem Durchmesser von 0,2 Millimetern auswählen. Anschließend acht der 0,4 Millimeter großen vorkultivierten Herfragmente, die in einer minimalen Menge Kulturmedium suspendiert sind, in eine embryologische Petrischale überführen, die halbfestes Agarmedium enthält.Bewegen Sie die Fragmente zu einem Kreis und verwenden Sie ein kleines Stück Filterpapier, um das überschüssige Medium abzusaugen. Platzieren Sie 10 der 0,2 Millimeter großen steroidalen Zellaggregate in den Kreis. Nachdem das überschüssige Medium entfernt wurde, bewegen Sie ein Aggregat in Richtung jedes vorher kultivierten Herzfragments, bis sie miteinander in Kontakt kommen.Versiegeln Sie nun den Deckel des Uhrglases mit Paraffin und inkubieren Sie die Kokultur je nach Adhäsionseigenschaften der Testzellen an die vorkultivierten Herzfragmente vier bis 24 Stunden lang bei 37 Grad Celsius. Am Ende der Inkubation tauchen Sie ein Konfrontationspaar in vorgewärmtes Kulturmedium bei 37 Grad Celsius ein und übertragen mithilfe einer Pasteurpipette jedes Paar in einzelne 5-Milliliter-Erlenmeyerkolben, die jeweils 1,5 Milliliter Kulturmedium enthalten. Inkubieren Sie anschließend die Kolben auf einem Rüttelinkubator bei 37 Grad Celsius und 120 Umdrehungen pro Minute, wobei der geeignete Prozentsatz an Kohlendioxid durchgeführt wird. Zwei zusätzliche 5-Milliliter-Erlenmeyerkolben, gefüllt mit je zwei Millilitern Ringer-Salzlösung, dienen der histologischen Analyse der Konfrontationen.Am Ende der Inkubationszeit überführen Sie die Kulturen für einige Sekunden in Ringer-Salzlösung, um die Serumproteine zu entfernen. Danach überführen Sie die Gewebestücke in einzelne Petrischalen mit drei Zentimeter Durchmesser, die jeweils drei Milliliter Bowen-Holland-Lösung enthalten. Nach zwei Stunden spülen Sie die Kulturen dreimal mit jeweils drei Millilitern demineralisiertem Wasser, bevor Sie sie für zwei Stunden in Leitungswasser inkubieren, um so viel wie möglich an Fixierungslösung zu entfernen.Schließlich die Gewebepaare in jeweils drei Milliliter 70%igem Ethanol bis zu mehreren Tagen lang aufbewahren. In diesen Bildern erfolgreicher Kulturen ist keine Immunreaktion des normalen Gewebes im Tumor- oder Herdgewebe erkennbar, was bestätigt, dass die Hühnerembryonen vor der Entwicklung des Immunabwehrsystems verwendet wurden. Zudem sind keine Bakterien sichtbar, was auf das Fehlen einer groben Kontamination während der Kultivierungszeit hinweist.Außerdem bestätigt der abgerundete Rand der Schnitte, dass die Kulturen in Suspension existierten, ohne Anzeichen vorübergehender Adhärenz an die Wand des Erla-Mire-Kolbens. Viele Verbindungen wurden mit diesem Hühnerherz-Invasionsassay getestet. Bei solchen, die strukturell verwandt waren, wurde auf Grundlage der Assayergebnisse eine quantitative Struktur-Wirkungs-Beziehung etabliert, wobei die Daten eine klare Korrelation zwischen den vorhergesagten und experimentellen antiinvasiven Wirkungen aufzeigen.Tatsächlich kann diese Konfusionsmatrix verwendet werden, um die Schwächen und Stärken des Assays zusammenzufassen und einen groben Eindruck von der Genauigkeit und Reproduzierbarkeit des Experiments zu vermitteln. Bei der Durchführung dieses neuen Verfahrens ist es äußerst wichtig, sich strikt an die vorgeschriebenen Dimensionen der Gewebefragmente zu halten. Andere Methoden, wie beispielsweise die Konfrontation mit nicht-krebsartigen Zellen, können durchgeführt werden, um zusätzliche Fragen zu beantworten, etwa ob entzündliche Zellen eindringen.Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie man zwischen invasiven und nicht-invasiven Tumorzellen unterscheidet. Vergessen Sie nicht, dass die Arbeit mit Fixierungsmitteln äußerst gefährlich sein kann und Vorsichtsmaßnahmen wie eine ausreichende Belüftung getroffen werden sollten, während Sie dieses Verfahren durchführen.

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Medizin

Dieses Video zeigt, wie man Zellen Invasion durch Zellkultur-Einsätze mit einem Fluoreszenz-basierten Methoden zu messen.

Ein In-vitro- FluoroBlok Tumor Invasion Assay

Eine Echtzeit-Elektrische Impedanz basierte Technik zur Invasion von Endothelzellen Monolayer von Krebs Zellen zu messen

Interstitielle Fluidstrom wird in soliden Tumoren erhöht und modulieren kann Tumorzellinvasion. Hier beschreiben wir eine Technik, um interstitielle Flüssigkeit fließen, um Zellen in einer Matrix eingebettet zu bringen und dann die seine Auswirkungen auf Zellinvasion. Diese Technik kann leicht angepasst werden, um andere Systeme zu studieren.

Dreidimensionale Zellkultur-Modell zur Messung der Auswirkungen der interstitiellen Flüssigkeit Flow auf Tumorzellinvasion

Dieses Video beschreibt einen Invasionsassay mit einem Dreikammer-Array, das auf der elektrischen Impedanz basiert. Diese Technik misst das invasive Potenzial von Krebszellen unter dem Einfluss löslicher Faktoren, die von den residenten Stromazellen in Tumormikroumgebungen sezerniert werden.

Dreikammer-Array-basierter Impedanz-Assay: Eine Echtzeit-Analysetechnik zur Bewertung des invasiven Potenzials von Krebszellen durch Messung der elektrischen Impedanz

Häufig verwendet werden, sind sehr zugänglich Methoden zur Untersuchung der Zellmigration und Invasion in vitro beschrieben. Das erste Verfahren ist die Zelle Wundverschluss Assay misst die Zellbeweglichkeit. Die zweite Methode ist die Transwell-Migration und Invasion Assay, der die chemotaktische und invasive Kapazität der Zellen beurteilt.

In-vitro-Zellmigration und Invasion Assays

Dieser Videoartikel beschreibt eine modifizierte in vitro Methode, um die Rolle von Hormonen, Zytokinen und/oder Wachstumsfaktoren bei der Invasion von Krebszellen zu untersuchen.

Eine modifizierte<em&gt; In-vitro-</em&gt; Invasion Assay, um die mögliche Rolle von Hormonen, Cytokinen und / oder Wachstumsfaktoren bei der Vermittlung der Invasion von Krebszellen fest,

Diese Methode bewertet die Invasion von Krebszellen von Sphäroiden in eine umgebende 3D-Matrix.  Sphäroide werden über die Methode der hängenden Tropfenkultur erzeugt und dann in eine Matrix eingebettet, die aus Basalmembranmaterialien und Kollagen vom Typ I besteht.  Die Invasion aus den Sphäroiden wird anschließend überwacht.

Eine Krebszelle Spheroid Assay zur Invasion in einem 3D-Rahmen Beurteilen

Dieses Protokoll beschreibt einen umgekehrte vertikale Invasion-Assay, der verwendet werden könnten, um die Migration und Invasion Funktionen von Zellen in einer dreidimensionalen Umgebung unter Beibehaltung der Zelle Mikroumgebung zu quantifizieren. Dieser Test eignet sich für seltene und/oder empfindliche Zellen.

Nach oben bewegen: Eine einfache und Flexible In-vitro- dreidimensionale Invasion Assay Protokoll

Der In-vitro-Zellinvasionstest wird verwendet, um das Potenzial von Krebsmetastasen zu messen, indem das zelluläre Potenzial für Invasion und Migration mithilfe von Zellkultureinsätzen, die Proteinmatrix enthalten, quantifiziert wird. Die Zellen werden herausgefordert, durch die Proteinmatrix und eine poröse Membran in Richtung eines Chemoattractants zu wandern und dann durch Lichtmikroskopie quantifiziert zu werden.

Die Verwendung von Maus-Mammary-Tumorzellen in einem In-Vitro-Invasions-Assay als Maß für das onkogene Zellverhalten

Dies ist eine effektive Methode, um nach Suppressoren oder Treibern von Krebsmetastasen zu suchen. Zellen, die mit einer Expressionsbibliothek transduziert werden, werden in das Gefäßsystem der Chorioallanto-Membran des Huhns injiziert, um metastatische Kolonien zu bilden. Kolonien mit verminderter oder erhöhter Invasivität werden herausgeschnitten, erweitert, neu injektiert, um ihren Phänotyp zu bestätigen, und schließlich mit Hochdurchsatzsequenzierung analysiert.

Entdeckung metastasierender Regulatoren mit einem schnellen und quantitativen intravitalen Chick Chorioallantoic Membrane Model

Wir beschreiben einen Ansatz zum Nachweis und zur Erfassung invasiver Zellsubpopulationen in Echtzeit. Das experimentelle Design verwendet die Echtzeit-Zellanalyse, indem Änderungen in der elektrischen Impedanz von Zellen überwacht werden. Invasive Krebs-, Immun-, Endothel- oder Stromazellen in komplexen Geweben können eingefangen und die Auswirkungen von Kokulturen beurteilt werden.

Echtzeit-Detektion und Erfassung invasiver Zellsubpopulationen aus Co-Kulturen

Lernen Sie das Küken-Herz-Invasion-Assay zur Untersuchung der Tumorzell-Invasion in embryonales Hühnerherzgewebe. Diese Methode ermöglicht die Testung potenziell anti-invasiver Verbindungen in vitro.

Küken-Herz-Invasion Assay zum Testen der Invasivität von Krebszellen und die Aktivität von Potenziell Anti-invasive Verbindungen (Video) | JoVE Journal

Küken-Herz-Invasion Assay zum Testen der Invasivität von Krebszellen und die Aktivität von Potenziell Anti-invasive Verbindungen

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