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DOI: 10.3791/52803-v
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
Es besteht ein allgemeiner Mangel an Wissen darüber, wie Impfstoffe wirken. Hier schlagen wir die kombinierte Verwendung von reverser Genetik und chimären Knochenmarkmäusen vor, um Einblicke in die frühen Immunantworten des Wirts auf Impfstoffe zu erhalten, mit besonderem Fokus auf dendritische Zellen und T-Zell-Immunität.
Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, ein System zur Bewertung der physiologischen Initiierung der impfstoffspezifischen adaptiven Immunität zu beschreiben. Dies wird zunächst durch die Verwendung von reverser Genetik erreicht, um lebende, abgeschwächte Influenza-Impfstoffe zu erzeugen, die ein spezifisches immunogenes Peptid enthalten, und dann durch die Verwendung eines Hühnerembryos, um das Virus zu vermehren. Als nächstes werden Zellen aus den Lymphknoten geimpfter Mäuse entnommen und die Faxanalyse verwendet, um die Migration der dendritischen Zellen zu verfolgen.
Im nächsten Assay werden acht positive T-Zellen, die auf das immunogene Peptid reagieren, markiert und in geimpfte Mäuse injiziert, gefolgt von einer Faxanalyse, um die Proliferation dieser Zellen zu messen und die Immunantwort detaillierter zu analysieren. Ein kompetitiver Knochenmark-Glockenspielspiegel wird hergestellt, indem diptherie-rezeptor-exprimierende Knochenmarkzellen in bestrahlte kongene Mäuse infundiert werden, die dann diptherie-toxin ausgesetzt werden. Nach erfolgreicher Depletion wird die Maus geimpft und markierte Antikörper und Tetramere werden verwendet, um Zöliakie-8-positive T-Zellen zu identifizieren.
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